EBV特异性细胞毒性T淋巴细胞体外诱导培养及杀伤效果鉴定
Epstein-Barr病毒与其相关疾病研究进展
- 1 -Epstein-Barr病毒与其相关疾病研究进展
邓路瑶1，2
黄鹤1，2
贺琼1，2
徐兰1，2
王月丹1，2
1 北京大学医学部基础医学院，北京（100083）
2 北京大学医学部生物医学实验教学中心病原与免疫综合实验室，北京（100083） Email: wangyuedan@
摘要：长期以来，Epstein–Barr病毒（简称EB病毒）一直被认为是人类某些严重疾病以及
肿瘤的致病因子。它与许多疾病的发生都有着密切的关系，威胁着人类的健康，因而受到医
学研究工作者的广泛重视，本文旨在对EBV与其相关疾病的研究进展情况进行初步的总结。
关键词：EB病毒；潜伏基因；淋巴瘤
中图分类号：R392.9
1. 引 言
1964年，Epstein-Barr首先从Burkitt淋巴瘤细胞中成功培养出两株淋巴瘤细胞系，在电
镜下观察到这些细胞含有形态上与疱疹病毒相同的颗粒，血清学及生物学研究证明其是一种
独特的疱疹病毒，简称为EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）。EBV在人群中感染率较高，
在世界范围内，约95％的人群感染过EBV ，并与许多淋巴及上皮源性的肿瘤密切相关[2]
。
EBV感染人体后，可以在体内终身潜伏存在，有时还能引起感染细胞的溶解和死亡，并可
能导致感染的宿主细胞发生恶性转化，导致肿瘤的发生。
2. EBV的基本情况
EB病毒(EBV)属疱疹科病毒，是一种特异性嗜人类淋巴细胞性疱疹病毒，属γ－疱疹病
毒亚科[2]
，病毒的基因组是线性双链DNA分子基因组大小为172kb[2]
，病毒主要通过其包膜
糖蛋白gp350/220结合B细胞上表达的CD21分子（补体受体CR2）[3,4]
，感染B淋巴细胞，
受感染的B细胞可以被转化为类淋巴母细胞系（lymphoblastoid cell lines，LCLs）。上皮细
胞不表达CD21，EBV是通过另外的三种包膜糖蛋白形成复合体（即gH、gL和gp42[2]
微量淋巴细胞毒试验原理
微量淋巴细胞毒试验原理
微量淋巴细胞毒试验（Microcytotoxicity Assay）是一种常用的体外细胞毒性试验方法，用于评估各种细胞毒性物质对淋巴细胞的毒性作用，以及测定血清中的细胞毒性抗体水平。本文将详细介绍微量淋巴细胞毒试验的原理、步骤以及相关应用。
原理：
微量淋巴细胞毒试验是通过观察淋巴细胞在体外与毒性物质作用后的死亡情况来评估其毒性作用。该试验通常使用杀伤细胞（如大鼠淋巴瘤细胞线T-Lymphoma Cell line）和靶细胞（如人的白血病细胞）进行共培养，并加入待测物质，观察细胞死亡情况，从而判断待测物质对细胞的毒性作用。
步骤：
1.准备试验样本：收集待测物质（如药物、化合物、血清等）和细胞悬液。 2.划定试验板：将细胞悬液和待测物质依次加入96孔板的对应孔中，以确保每个孔的浓度相同。
3.孵育混合物：将孔板孵育在合适的温度下，通常是37℃，并充分孵育一定的时间（如2小时）。
4.加入染色剂：在每个孔中加入染色剂，如溴化乙啶（Ethidium
Bromide，EtBr），以染色活细胞和死细胞区分开。
5.观察和记录：使用荧光显微镜观察细胞的存活情况，根据染色剂的染色情况，可以判断待测物质的细胞毒性作用。
应用：
1.评估药物的细胞毒性：微量淋巴细胞毒试验可用于评估药物对淋巴细胞的毒性作用，帮助药物研发人员选择合适的候选药物。
2.检测细胞毒性抗体：通过微量淋巴细胞毒试验，可以检测血清中的细胞毒性抗体水平，用于诊断和监测某些自身免疫性疾病，如溶血性贫血和自身免疫性甲状腺炎等。 3.评估环境毒性：微量淋巴细胞毒试验也可用于评估环境样品（如水源、土壤和空气）中的毒性物质，帮助判断环境污染的严重性和对人体健康的影响程度。
4.评估化妆品安全性：微量淋巴细胞毒试验可用于评估化妆品中添加的化学物质对细胞的毒性作用，以确保化妆品的安全性。
优势和限制：
微量淋巴细胞毒试验具有以下优势：
EB病毒检测及其临床应用的研究进展
EB病毒检测及其临床应用的研究进展
张旭
【摘 要】Diseases caused by Epstein-Barr virus (EBV) infection are
increasing,such as organ transplantation-associated EBV infection.
Epithelial cell source tumor is correlated with EBV infection,and it is
characterized by recessive infection and is often ignored in clinic. With the
development of determination methods for EBV infection,especially
quantitative determination of EBV DNA,combined with the results of
immunological determination,pathogens could be timely determined in
early infection period. It is potential for the dynamic monitoring and
prognosis evaluation of EBV-related tumors. This review focuses on the
determination methods of EBV from home and abroad and the
relationship between EBV-related determination and tumors.%目前临床上由EB病毒(EBV)感染引起的疾病越来越多,如器官移植伴EBV感染.上皮细胞源肿瘤与EBV感染密切相关,常表现为隐性感染,易被临床忽视.随着检验技术的不断成熟,尤其是EBV DNA的定量检测,结合常规的免疫学检测结果,不仅有利于在感染初期及时检出致病原,而且对EBV相关肿瘤的动态监测、预后评估也有积极的意义.文章就国内外EBV的检测方法和EBV相关肿瘤的研究进展作一综述.
EBV感染的一个特殊病例
. -
-
. 可修编- 患儿女，6岁，因皮疹1个月余，间断发热10余天于2011年7月22日入院。入院前1个月余，患儿四肢出现散在红色疱疹，疱液清亮，周围皮肤红肿，伴疼痛及瘙痒感，疱疹破溃后结痂，结痂长时间不易脱落，脱落后留有牛痘样瘢痕，无明显色素沉着，入院前10余天出现发热，体温最高39.5 度，热型无明显规律，期间最长间隔3d体温正常，退热药处理可降至正常，发热时偶有头痛、恶心，无寒战、抽搐，不伴腹胀、腹泻，无乏力、盗汗等，自发病以来患儿精神反应好，食欲可，尿便正常。
自3岁起，每年春夏交替时，四肢及头颈部出现散在红色丘疹，继之出现局部水疱，周围组织红肿，水疱破溃后结痂，最后留有直径小于2 mm浅凹陷圆形痘样瘢痕；患儿自5岁起子夏季蚊虫叮咬后出现皮肤过敏，叮咬部位局部皮肤出现水疱坏死，周围组织红肿围较大，同时伴随低热，体温<38℃。患儿曾多次在皮肤科就诊，以“脓疱疮，丘疹样荨麻疹”，予外用药物治疗有所减轻。无日光下皮疹加重现象。常规预防接种无不良反应。
入院查体：体温38．7℃，呼吸18次／min，血压100／70mm Hg(1 mm Hg=0．133 kPa)，脉搏：100次／min。发育正常，神志清，精神反应好，呼吸平稳。面部少许丘疱疹和牛痘样凹陷瘢痕，颈部、躯干及四肢皮肤散在数枚红色皮疹，部分破溃，周围组织红肿，部分已结痂，可见皮疹愈后留有的牛痘样凹陷瘢痕(图1-3)。浅表淋巴结无明显肿大。咽充血，上颚可见数枚红色溃疡，双扁桃体未见肿大。双肺呼吸音粗，心音有力，律齐；腹部不胀，肝右肋下1 cm，质软，边锐，脾肋下未触及，四肢活动自如。
细胞毒性实验
未知驱动探索，专注成就专业
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细胞毒性实验
简介
细胞毒性实验是一种常用的生物学实验方法，用于评估物质对生物体的细胞毒性。通过测量物质对细胞的影响，可以判断其是否对细胞产生有害作用。细胞毒性实验常被应用于药物研发、化学品评估以及毒性测试等领域，旨在确保物质的安全性和对生物体的可接受性。
实验步骤
1. 细胞培养
在进行细胞毒性实验之前，首先需要培养细胞。选择适当的细胞系，如人类肺癌细胞株A549，将其放入细胞培养皿中，并添加培养基（常用的培养基包括DMEM、RPMI 1640等）。将细胞培养在恒温恒湿的培养箱中，通常培养温度为37°C，CO2含量为5%。
2. 细胞处理
将待测试物质加入培养基中，与细胞一同培养。通常会设置不同浓度的待测物质组，以便研究其剂量依赖性毒性效应。同时，还需设置一个阴性对照组（仅含培养基）和阳性对照组（含有已知毒性的物质，如阿霉素）。 未知驱动探索，专注成就专业
2
3. 细胞存活率检测
根据细胞系的不同，可以选择合适的方法检测细胞的存活率。常用的方法包括MTT法、SRB法和细胞计数法等。
- MTT法
MTT法是一种测定细胞代谢活性的方法。MTT（3-(4,5-二甲基-2-噻吩基)-2,5-二苯基-2H-四唑）是一种黄色溶液，可以被活细胞中的代谢酶还原为紫色的形式。使用MTT溶液处理细胞后，将细胞溶胀后的产物溶解，通过分光光度计测量溶液的吸光度，间接反映细胞存活率。
- SRB法
SRB法是通过测量细胞中蛋白质含量来评估细胞数量的一种方法。在SRB实验中，细胞在培养皿中固定后，使用SRB染色剂染色。待染色剂固定后，通过溶解并测量其吸光度，可以间接反映细胞存活率。
- 细胞计数法
细胞计数法是直接计数细胞数量来评估细胞存活率的方法。将细胞用适当的缓冲溶液（如PBS）稀释后，使用血细胞计数器或显微镜进行细胞计数。通过对细胞数量的统计，可以计算出细胞存活率。
4. 数据分析
EB病毒的研究进展
BE病毒的研究进展
EB病毒（epstein-barr virus,EBv），又称人类疱疹病毒（Human herpesvirus 4 (HHV-4)）。是epstein和barr于1964年首次成功地将burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，故名。
病毒简介
EB病毒是Epstein和Barr于1964年首次成功地将Burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，认为该病毒是多种恶性肿瘤（如鼻咽癌）的病因之一，它主要感染人类口咽部的上皮细胞和B淋巴细胞。在中国南方鼻咽癌患病人群中检测到有EB病毒基因组存在。本病分布广泛，多呈散发性，亦可引起流行。病毒携带者和病人是本病的传染源。经口密切接触为主要传播途径，飞沫传播虽有可能，但并不重要。发病以15～30岁的年龄组为多，6岁以下多呈不显性感染。全年均有发病，似以晚秋初冬为多。一次得病后可获较持久的免疫力。
形态特征
EB病毒的形态与其他疱疹病毒相似，圆形、直径180nm，基本结构含核样物、衣壳和囊膜三部分。核样物为直径45nm的致密物，主要含双股线性DNA，其长度随不同毒株而异平均为17.5×104 bp分子量108。衣壳为20面体立体对称，由162个壳微粒组成。囊膜由感染细胞的核膜组成，其上有病毒编码的膜糖蛋白，有识别淋巴细胞上的EB病毒受体，及与细胞融合等功能。此外在囊膜与衣壳之间还有一层蛋白被膜。
传播途经
1、经口密切传播
2、飞沫传播
3、输血传播
引发病症 EB病毒感染引起的相关疾病：
非肿瘤性疾病
1．传染性单核细胞增多症
患者感染EBV后多数表现为IM。1968年首次发现该病毒是引起IM的病源
，后经血清流行病学等研究得到证实。该病是目前所知道的由EBV直接引起的唯一疾病，有以下理论依据：(1)此种病毒只能在淋巴网状系统的细胞中生长增殖；(2)培养过程中该病毒能刺激淋巴细胞的增生；(3)急性期周围血淋巴细胞可培养出EBV；(4)患者血清中具有高滴定度EBV的特异抗体，并可长期存在；(5)无此特异抗体者对此病易感,而抗体阳性者则不发病。IM主要症状表现为：发热、咽痛、皮疹、肝脾淋巴结肿大，血液系统改变可以累及三系，但主要以白细胞改变较多，大多白细胞总数增高，可出现异常淋巴细胞。
γδT细胞的体外扩增与活性检测
γδT细胞的体外扩增与活性检测
发布时间：2022-07-26T08:33:43.120Z 来源：《医师在线》2022年3月6期 作者： 谢海涛 薛卫巍 王乃会 方晓 庞实锋[导读]
谢海涛1 薛卫巍1 王乃会1 方晓1庞实锋 *1,2
（1广东先康达生物科技有限公司；广东东莞 523808；2广东医科大学生物学教研室；广东东莞523808）
摘要: 目的 建立一种通过外周血单个核细胞在体外扩增为γδT细胞的方法。方法 采用Ficoll密度梯度离心法分离人体外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,用含1200U.mL-1白介素-2（IL-2）、1μg.ml-1的唑来膦酸的RPMI1640 (含10%自体血浆)细胞培养基进行培养，用流式细胞仪分析γδT的纯度及表型，用MTT法检测γδT细胞对K562细胞的杀伤作用。结果 用唑来膦酸和il-2诱导的γδT细胞表达率为86.65%，在γδT细胞与K562细胞的比例为25：1时，杀伤率达到了79.3%（P<0.05）。结论 唑来膦酸和il-2可以用于外周血单个核细胞诱导为γδT的体外培养与扩增，并对K562肿瘤细胞具有关良好的杀伤作用，这对临床应用开发打下了一定的研究基础。
关键词 γδT细胞 单核细胞 肿瘤细胞
Expansion and activity detection of γδT cells in vitro
Xie Hai-tao1 Xue Wei-wei1 Wang Nai-hui1 Fang Xiao1 *Pang Shi-feng1，2
1 Guangdong Xiankangda Biotechnology Co., Ltd., Dongguan 523808
2 Department of Biotechnology,Guangdong Medical University,Dongguan,China 523808
2022-2023学年山西省太原市五中高二5月月考生物试题
2022-2023学年山西省太原市五中高二5月月考生物试题
1. 研究人员利用火龙果鲜果制作果酒果醋，在提升利用价值的同时缓解了水果滞销问题。下列叙述正确的是（ ）
A．制作果酒和果醋利用的是同种微生物
B．酒精在微生物的细胞质基质中形成
C．果酒制作过程中培养液pH稳定不变
D．果酒和果醋的制作都需要无氧条件
2. 进行土壤中尿素分解菌的选择培养时，利用的培养基组分及含量如表所示。下列分析错误的是（ ）
组分 KH 2 PO
4 Na 2
HPO 4 MgSO
4 ·7H 2 O 葡萄糖 尿素 琼脂 H
2 O
含量 1．4g 2．1g 0．2g 10．0g 1．0g 15．0g 定容1000mL
A．KH 2 PO 4 和Na 2 HPO 4 既可为菌体提供无机盐，又可调节培养基的pH
B．尿素既可为尿素分解菌提供氮源，又可对培养基中的微生物起选择作用
C．琼脂一般不可以为尿素分解菌提供碳源，只起到凝固剂的作用
D．蒸馏水既可进行定容，又可对培养液进行稀释以便于计数
3. 营养缺陷型菌株的代谢过程中，某些酶被破坏会导致某些合成反应不能进行。下图是实验人员利用影印法初检氨基酸缺陷型菌株的过程，其中基本培养基仅能满足野生型菌株生长的营养需求，完全培养基可满足一切营养缺陷型菌株的营养需求。下列叙述错误的是（ ）
A．图中基本培养基与完全培养基存在差异的成分是氨基酸
B．根据用途分，图中基本培养基属于选择培养基
C．进行过程②培养时，应将丝绒布先转印至完全培养基上，后转印到基本培养基
D．直到各类菌落数目稳定，挑取菌落A即为所需的氨基酸缺陷型菌株
4. 下列有关实验的描述中，正确的有（ ）
①显微镜直接计数法易计数活菌数目
②利用果酒生产果醋时全程需要通入氧气，排出二氧化碳
③一个菌落是在液体培养基表面以母细胞为中心形成的子细胞团
④纤维素分解菌鉴定时在培养基中加入酚红指示剂，如果指示剂变红则能初步鉴定
北京市海淀区2023-2024学年高三上学期期中考试 生物含解析
海淀区2023—2024学年第一学期期中练习
高三生物学（答案在最后）
2023.11
本试卷共10页，100分。考试时长90分钟。考生务必将答案答在答题纸上，在试卷上作答无
效。考试结束后，将本试卷和答题纸一并交回。
第一部分
本部分共15题，每题2分，共30分。在每题列出的四个选项中，选出最符合题目要求的一
项。1.孟德尔通过豌豆杂交实验研究遗传规律运用了假说-演绎法，下列叙述不属于假说的是（）
A.体细胞中遗传因子成对存在
B.成对的遗传因子在形成配子时彼此分离
C.受精时，雌雄配子随机结合
D.杂合子F₁自交后代出现3：1的性状分离比
2.鸡的性别决定方式为ZW型，其胫色浅、深为一对相对性状，由I/i基因控制。研究人员将纯种藏鸡与纯
种白来航鸡进行了杂交实验，统计结果如下表所示。下列分析，不正确的是（）
杂交组合亲本F₁性状表现和数目
父本母本深色雄深色雌浅色雄浅色雌
I藏鸡白来航鸡01421560
Ⅱ白来航鸡藏鸡004235
A.亲本白来航鸡的胫色为隐性性状
B.Ⅰ和Ⅱ为正反交实验，控制胫色基因位于Z染色体上
C.I中父本和母本的基因型分别为ZiZi和ZIW
D.Ⅱ中F₁雌雄交配所得F₂理论上为深色雌∶浅色雄∶浅色雌=1∶2∶1
3.下列关于遗传学史上重要探究活动的叙述，错误的是（）
A.摩尔根等通过果蝇眼色杂交实验证明基因在染色体上
B.赫尔希和蔡斯通过肺炎链球菌转化实验证明DNA是遗传物质
C.梅塞尔森和斯塔尔运用同位素标记技术证实DNA半保留复制方式D.沃森和克里克通过建构物理模型的方法研究DNA的结构
4.下列关于真核细胞中DNA复制的叙述，正确的是（）
A.仅发生在有丝分裂间期
B.先解旋后复制
C.DNA聚合酶解开DNA双链
D.子链延伸时游离的脱氧核苷酸添加到3′端
5.人类胚胎干细胞分化存在下图所示的调控机制：H基因甲基化抑制其表达，从而促进胚胎干细胞分化。
H基因转录产物为H-RNA，H-RNA上甲基化的腺嘌呤可与Y蛋白结合，使Y蛋白能够结合H基因的启动
EpsteinBarr病毒感染机制
中华临床实验室管理电子杂志2019年2月 第7卷 第1期 Chin J Clin Lab Mgt (Electronic Edition), February 2019, Vol. 7, No.1·2·
•专家论坛•
Epstein-Barr病毒感染机制
孟硕 王昭
【摘要】 爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus，EBV)是一种感染人类的γ疱疹病毒。其生命周期包括潜伏期和裂解期。EBV主要靶点是B淋巴细胞，也可感染上皮细胞、T淋巴细胞和自然杀伤细胞。感染宿主后，EBV在淋巴细胞或上皮细胞中潜伏，同时产生多种潜伏感染相关蛋白，以协助免疫逃逸，参与多种恶性肿瘤及非感染性的淋巴增殖性疾病的发生。本文将在EBV感染途径、感染后病毒的生命周期以及易感性等方面进行综述。【关键词】 EB病毒； 感染机制； 潜伏期
DOI：10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2019.01.002基金项目：北京市医院管理局“杨帆”计划临床医学发展专项(ZYLX201702)；北京市科委首都特色项目(Z151100004015172)；首都卫生发展科研专项项目(首发2016-2-2017)；首都医科大学基础-临床科研合作基因(重点-16JL02)；北京市自然科学基金(7172058)作者单位：100050 北京，首都医科大学附属北京友谊医院血液科通信作者：王昭，Email：
wangzhao@The mechanism of Epstein-Barr virus infection Meng Shuo, Wang Zhao. Beijing Friendship Hospital, Capital Medical University, Beijing 100050, ChinaCorresponding author: Wang Zhao, Email: wangzhao@