两种体外细胞毒性检测方法的比较研究
《上海生物医学工程》杂志２００５年第２６卷第４期 ·２０５·
两种体外细胞毒性检测方法的比较研究＊
黄哲玮 孙皎孟爱英
上海交通大学医学院附属第九人民医院／上海生物材料研究测试中心 （上海２０００２３）
【摘要】 目的 比较两种常用的细胞毒性检测方法在医疗器械生物学评价中的相关性。方法 分别采
用Ｍ，ｒｒ比色法和细胞增殖度法，在３７℃条件下，将五种医疗器械／生物材料的浸提液分别与小鼠成纤维细胞
（Ｌ一９２９）接触２天和２，４，７天，比较材料对细胞的毒性影响。结果５种不同的材料浸提液分别表现出不同
程度的细胞毒性反应（０～２级）。将ＭＴＴ比色法与细胞增殖度法（２天）的实验数据进行相关性分析，显示两
者之间具有良好的相关性（Ｒ＝０．９７７）。结论ＭＴＴ比色法由于其检测所需的细胞量相对较少，试验步骤相
对简便、检测周期短，因此具有一定的优越性，是个值得推荐的细胞毒性检测方法。 【关键词】 体外 细胞毒性ＭＴＴ比色法细胞增殖度法
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｔｗｏ ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｔｅｓｔｓ
Ｈｕａｎｇ Ｚｈｅｗｅｉ Ｓｕｎ Ｊｉａｏ Ｍｅｎｇ Ａｉｙｉｎｇ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊｉａｏ Ｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ—Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｎｏ．９ ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｔｅｓｔ Ｃｅｎｔｅｒ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｉｔｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ ｗｈｉｃｈ ｕｓｅｄ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅ—
ｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｄｉｃａｌ ｄｅｖｉｃｅ．ＭｅｔｈＯｄ Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｆ ５ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｌ ｄｅｖｉｃｅｓ／ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｔａｃｔｅｄ ｗｉｔｈ
ｔｈｅ Ｌ一９２９ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ２ｄａｙｓ ａｎｄ ２，４，７ｄａｙｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ａｔ ３７℃ｂｙ ｔｈｅ ＭＴＴ ａｓｓａｙ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ，ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｈｅ ｃｙ—
ｔｏｔｏｘｉｃ ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ，５ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｌ ｄｅｖｉｃｅｓ／ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｇｒａｄｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ（０２ｇｒａｄｅｓ）．ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＭＴＦ ａｓｓａｙ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｉｔ ｏｆ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ（２ ｄａｙｓ）ｓｈｏｗｅｄ
ａ ｇｏｏｄ ｒｅｌａｔｉｖｉｔｙ（Ｒ＝０．９７７）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ｗｈｅｎ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ，ＭＴＴ ａｓｓａｙ ｎｅｅｄ ｌｅｓｓ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ，ｂｅ ｍｏｒｅ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｓｈｏｒｔｅｒ，ｉｔ ｉｓ ｗｏｒｔｈ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｅｄｉｃａｌ ｄｅｖｉｃｅｓ／ｂｉｏｍａ—
ｔｅｒｉａｌｓ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｉｎ ｖｉｔｒｏ；Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ；ＭＴＴ ａｓｓａｙ；ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ
生物医用材料及制品已被大量应用于临床 各
个学科。由于这些生物医用材料及制品在应用中都
会与人体的组织和细胞发生直接接触，因此它们不
仅需要有良好的理化性能，而且还必须具备有良好 的生物相容性…。保证这些医用生物材料的安全性
问题已越来越受到各国政府的重视。１９９２年国际 标准化组织发布的ＩＳＯ １０９９３医疗器械的生物学评
价等系列国际标准＿２ Ｊ，我国在７０年代后期开始研究
生物材料和医用装置的生物学评价方法，从而保证
上海市重点学科（特色学科）建设项目资助（Ｔ０２０２） 了我国医用生物材料和医疗器械在研究、生产和临 床使用中的安全性，促进了医用生物材料研究的发
展和水平的提高。在众多的生物相容性试验中，细
胞毒性试验以其简便、快捷、灵敏性高、节省动物等 优点均被列为首选试验项目，作为评价材料毒性的
重要指标。 细胞毒性试验是一种在离体状态下模拟生物体
生长环境，检测生物医用材料及制品或其浸提液对
细胞溶解（细胞死亡）、抑制细胞生长和其他毒性作
用的方法。在Ｉ
ＳＯ １０９９３—５：１９９９中该项试验可分 维普资讯 http://www.cqvip.com ２０６· 《上海生物医学工程》杂志２００５年第２６卷第４期
为浸提液方式法、直接接触法和间接接触法三种＿３］。
目前绝大多数医疗器械及材料是通过浸提液来进行 检测的＿４ Ｊ。其中细胞增殖度法和ＭＴＴ比色法是目
前最为常用的浸提液试验，通过材料的浸提液与培
养的细胞广泛接触，可分析材料中各组成成分及其
浓度对细胞的毒性影响。本次试验试图通过运用这 两种方法对同种材料检测所得到的结果进行相关性
分析，探讨这两种方法之间是否具有相关性，为今后
医疗器械／生物材料体外细胞毒性检测方法的选择
及标准化提供一定的依据。
１材料
１．１试验材料 本次试验选用了５种医疗器械／生物材料，其名 称和来源见表１： 表１材料的名称及来源
１．２试验用细胞系
小鼠成纤维细胞Ｌ一９２９，购自中国科学院上海
生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所。
１．３主要试验用试剂
ＭＴＴ，Ｆｌｕｋａ公司；细胞培养液ＭＥＭ，ＧＩＢＣＯ公司；
胎牛血清，上海生物制品研究所；ＤＭＳＯ；结晶紫罗兰等。
１．４仪器 ｗｅｌｌｓｃａｎ ＭＫ３酶标仪，Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ中国集团制造；
二氧化碳培养箱，日本ＳＡＹＡＮ公司；９６孔细胞培养
板等。 ２实验方法 ２．１材料浸提液的制备 根据ＩＳＯ １０９９３—５和ＩＳＯ １０９９３—１２［ ，按一定
比例含小牛血清的细胞培养液，置于３７℃培养２４ｈ。
２．２细胞悬液的制备
将传代培养４８ｈ的Ｌ一９２９细胞，用细胞培养液
分别制备成４×１０５个／ｍｌ和１×１０５个／ｍｌ的细胞悬
液备用。 ２．３细胞增殖度法 将４×１０５个／ｍｌ细胞悬液分别注于试管内 （１ｍｌ／管），置３７℃二氧化碳培养箱中培养２４ｈ。
２４ｈ后，每管舍弃原培养液，各对照组分别用相应 的对照液进行交换，试验组用含５Ｏ％（Ｖ／Ｖ）浸提
液的新鲜培养液进行交换，置３７℃二氧化碳培养
箱中继续培养。分别于２、４、７天将对照组和试验组 各６管取出，丢弃原细胞培养液，用磷酸盐缓冲液
（ＰＢＳ）洗涤，甲醛溶液固定后，加结晶紫罗兰染色。 最后加入十二烷基硫酸钠，用分光光度计在波长为
５８８ ｎｍ下测定吸光度值，并根据其吸光度按公式计
算细胞的相对增殖度（ＲＧＲ）。
ＲＧＲｃ％ ＝弓三 彗 拿 矗 ｛ × ｏｏ％
２．４ ＭＴＴ比色法 将１×１０ 个／ｍｌ细胞悬液接种于９６孔细胞培
养板（１００ｔＡ／￣Ｌ），置３７℃二氧化碳培养箱中培养２４
ｈ。等细胞贴壁生长后，去除上清液，加入相应的对
照液，试验组用含５Ｏ％（Ｖ／Ｖ）浸提液的新鲜培养 液进行交换，置３７℃二氧化碳培养箱中继续培养。
于２天后取出，加入ＭＴＴ液继续培养４小时。吸除
原液，加入ＤＭＳＯ，振荡１０ｍｉｎ。用酶联免疫检测仪
在波长为６３０ｎｍ下测定其吸光度值，根据上述公式 计算细胞的相对增殖度（ＲＧＲ）。
２．５ 根据细胞相对增殖度来评定细胞的毒性反
应＿６ Ｊ，见表２： 表２细胞毒性反应评定．
反应 相对增殖度ＲＧＲ（％） ０级 １级 ２级 ３级 ４级 ５级 ≥１００ ７５—９９ ５０—７４ ２５—４９ ｌ一２４ ０
２．６相关性分析
将ＭＴＴ比色法与２天时的细胞增殖度法结果
进行相关性分析。 ３ 结果 两种检测方法对５种材料细胞毒性试验的检测
结果见表３：
将两种检测方法（２天）的细胞相对增殖度结果
进行相关性分析，得出相关系数Ｒ＝０．９７７，显示两
种方法之间存在良好的相关性（见表４）。
维普资讯 http://www.cqvip.com 《上海生物医学工程》杂志２００５年第２６卷第４期 ．２０７．
表３细胞增殖度法和ＭＴｒ比色法测得的细胞相对增殖度 结果（ＲＧＲ）
表４两种方法检测结果的相关性比较
４讨论 根据目前国内外医疗器械生物学评价的标准，
利用体外细胞毒性试验从细胞水平去观察材料是否
具有细胞毒性即材料对细胞的数量、形态及分化的 影响是检测材料生物相容性的一项重要指标ｌ＿＿ 。
其中浸提液试验因具备材料的浸提液容易获得、便
于过滤灭菌，并且浸提液与细胞接触广泛等优势被
大量运用于生物医用材料及制品的细胞毒性检测。
细胞增殖度法是我国自八十年代就开始运用的
细胞毒性试验，已广泛应用于目前医疗器械的生物
安全性评价中。该方法的原理主要是将细胞接触材
料浸提液后，对存活细胞的数量进行测定，细胞增殖 率来推断材料对细胞的毒性作用Ｅｓ］。ＭＴＩ＂比色法的
原理是活细胞中的线粒体脱氢酶将３—２（４，５一二
甲基噻唑一２）一２，５一二苯基四氮唑溴盐还原，产
生紫色结晶物，用二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）溶解，用酶联 免疫检测仪测定其光密度，通过与对照组的比较得
到实验组的增殖率，从而评价受试样品的细胞毒 性。ＭＴＩ＂是一种淡黄色唑氮盐，１９８３年Ｍｏｓｒｏａｎｎ根
据活细胞在能量代谢中，线粒体内琥珀酸脱氢酶将
Ｍ＇ＩＴ还原产生甲瓒，而在毒性环境中，其琥珀酸脱
氢酶活性会降低的原理，利用Ｍ＇ＩＴ比色分析法测定 细胞的活性和代谢功能。该方法简便、灵敏，已广泛 用于多种学科领域。近几年来也有报道用于医疗器
械的细胞毒性检测。 在医疗器械的生物学评价中，有关细胞毒性试
验国内外基本上都参照ＩＳ０１０９９３．５的标准，其中浸
提液试验方法我国以往比较多的是采用细胞增殖度
法，近年来ＭＴＩ＂比色法也逐渐用于生物材料的细胞 毒性的检测，然而，这两种方法获得的结果是否存在
差异？两者的相关性究竟如何？这是目前医疗器械
／生物材料的细胞毒性评价中尚无法回答的问题。
本研究通过对五种材料进行ＭＴＩ＂比色法与细胞增 殖度法两种方法的直接比较，显示了两者之间存在
良好的相关性（Ｒ＝０．９７７），这为今后医疗器械／生物 材料的细胞毒性试验的方法选择和标准化工作提供
了重要的科学依据。研究结果提示：ＭＴＴ比色法因
其检测所需的细胞量相对较少，试验步骤相对简便， 误差小、检测周期短等优点，比细胞增殖度法更具有
定的优越性，值得推荐（Ｒ＝０．９７７）。
参考文献
１ Ｈａｒｍａｎｄ ＭＦ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏ Ｃｒ ａｌｌｏｙ ｕｓｉｎｇ ａ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｍｏｄｅ．Ｊ Ｂｉｏｍａｔｅｒ Ｓｃｉ Ｐｏｌｙｍ Ｅｄ，１９９５，６（９）：８０９．
２ ＩＳ０ １ ０９９３—１：２００３，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｌ
药物毒性测试的新技术与应用
药物毒性测试的新技术与应用
随着社会的发展，人们的健康意识越来越高，药物的使用变得越来越普遍。但是，随着人们对药物的需求增加，药物的不良反应也越来越多。虽然药品在上市前会经过大量和严格的临床试验，但它们还是存在一些潜在的危险。因此，在研发和上市之前，必须对药物进行毒性测试以确保其安全性。本文将探讨药物毒性测试的新技术和应用。
1. 传统的药物毒性测试
传统的药物毒性测试是通过动物体内试验来评估药物的毒性。譬如，常用的方法是将药物投入动物体内，之后进行观察、取样、检测相关的器官和细胞功能。然而，这种测试方法存在局限性，主要有以下两点：
1.1 测试成本高
进行动物实验需要花费巨大的成本。在进行批量制药时，开发和生产一个新药可能需要多年时间，而动物实验则需要大量动物和材料。因此，整个实验过程对于研究人员来说是一个巨大的投入，而这些投入往往会使新药的研究成本和价格变得越来越高。
1.2 结果可信性不高
动物实验的另一个局限性是结果可信性不高。动物和人类的生物学特征存在明显的差异，例如代谢方式、生理结构和代谢动力学等，因此，动物实验的结果对于人类的安全性评估具有局限性。这一点也是造成很多药物在进行临床前测试时仍然会出现不良反应的原因。
2. 新技术在药物毒性测试中的运用
随着科学技术的不断发展，新的、更先进的技术已广泛运用于药物毒性测试。由此，一种新的药物毒性测试方法——体外毒性测试，应运而生。体外毒性测试是利用人类组织细胞和组织工程学技术，在人工环境下评估药物毒性的能力。它包括细胞和靶部位的测试。
2.1 细胞毒性测试
细胞毒性测试的目的是评估药物在细胞水平上的影响。这种方法将药物暴露在一些与人类组织相关的细胞系中，然后评估药物的毒性。由于这种方法具有以下优点，如：
2.1.1 可以通过自动化大规模检测多样性对象；
2.1.2 简单易用，需要的时间较短（通常只需24／96小时）；
2.1.3 精度较高，数据比较客观准确，并减少了操作人员对于药物评估的主观判断。
探讨医用胶细胞毒性试验方法的选择
.
58中国医疗器械信息 | China Medical Device Information标准检测Standard and Testing
细胞毒性试验具有简便、快速、敏感性高的特点，是医疗器械进行临床安全性评价前的首选和必选试验项目。GB/T 16886.5-2003规定了三类体外细胞毒性试验：浸提液试验、直接接触试验、间接接触试验[1]。GB/T 16886.12-2005也规定了细胞毒性试验所要遵循的样品制备和参照样品的选择要求，指出不同物理形态的医疗器械应按照以上两份标准要求选择合适的样品制备方法和细胞毒性试验方法[2]。对于以α-氰基丙烯酸酯类粘合剂为代表的原位聚合类产品，和以多糖纤维素医用胶液为代表的液态产品，如何按照标准要求，选择合适的试验方法才能科学合理地评价其细胞毒性？本文做了一系列对比实验，并对如何选择这两类产品的细胞毒性试验方法进行了探讨。1.材料与方法1.1材料试验样品：α-氰基丙烯酸酯快速医用胶（1号）；α-氰基丙烯酸酯医用粘合剂（2号）；多糖纤维素医用胶液（3号）。细胞：ATCC CCL1小鼠成纤维细胞（中科院上海细胞与生物化学研究所）。主要试剂：RPMI-1640培养基（美国Hyclone公司），小牛血清（Gibco），琼脂培养基，中性红染色液。1.2方法1.2.1浸提液法：①样品浸提液制备：成膜后浸提法。将样品均匀的滴在直径9 cm平板上，按6 cm2/mL的比例充入不含血清的RPMI-1640培养基，（37±1）˚C下浸提（24±2）h备用。直接浸提法。将样品分别按0.2g/mL或0.1g/mL的比例滴入不含血清的RPMI-1640培养基，静置10 min后，（37±1）˚C下浸提（24±2）h备用；②空白对照液：RPMI-1640培养基；③阴性对照液：高密度聚乙烯；④阳性对照：5g/L苯酚溶液。⑤试验方法：按照GB/T 14233.2-2005规定的MTT试验方法进行。将1×104/mL细胞悬液接种于96孔板，每孔100 μL[3]。置CO2培养箱37˚C培养24h后，弃去原培养液。加入样品浸提液，每孔收稿日期：2017-02-23基金项目：快速医用胶生物安全耐受性检测方法研究（广东省科技计划项目，项目编号：2012B061700112
药物肝毒性评价方法研究
药物肝毒性评价方法研究
肝脏是人体最重要的器官之一，主要负责药物代谢和排泄。许多药物是通过肝脏进行代谢，其代谢产物可以再分解成无害的物质，也可以成为有害物质，引起肝脏毒性反应。肝毒性是目前药物临床使用中常见的不良反应之一，特别是在长期药物使用的情况下更加容易发生。因此，研究和评价药物在肝脏中的代谢和毒性机制，对于药物安全性的评价和临床应用具有重要的意义。
当前针对药物肝毒性评价常用的方法主要包括离体实验、动物试验和体外测试等方式。
一、离体实验
离体实验是指将人体肝脏组织或细胞与药物反应，在人体肝脏中模拟药物代谢和毒性的过程。这种方法可以模拟人体在代谢药物过程中的情况，比较贴近实际情况，同时可以更加准确地评价药物在肝脏中的代谢毒性。但是，离体实验存在许多局限性，比如无法考虑整个生物体内药物代谢的复杂性和个体差异性等问题，同时受限于肝细胞来源和细胞状态等因素，也有可能得出偏离实际的结果。
二、动物试验
动物试验是将药物注入动物体内，观察药物代谢，测试血清生化参数、肝功能等来评估药物肝毒性。动物试验的优点在于测试的结果可以考虑整个生物体内药物代谢的复杂性和个体差异性，但是也存在许多问题，如人体肝代谢与动物肝代谢机制存在差异，试验结果与人体的风险并不一定相关，此外动物试验还涉及到动物使用环境的伦理问题等。
三、体外测试
体外测试是针对药物肝毒性评价的一种比较新的方法，该方法基于细胞、组织或人体内的生物液的分析，来研究药物的代谢和毒性反应。相比离体实验和动物试验，体外测试更加环保，不涉及动物使用和血清人体形态的过程，同时具有快速和经济的优势。但是，这种评价方法目前还缺乏足够的临床数据支持，并有时存在一些偏移或误判的风险。
总结：不同的药物肝毒性评价方法都有各自的优势和局限性，依据具体情况选择相应的方法进行评价是必要的。未来随着技术的发展，基于人类肝脏的三维培养和微流控技术的改进等，将有助于提高药物肝毒性评价的准确性和可靠性。
三种方法检测和评价美洲商陆叶和果的急性毒性
三种方法检测和评价美洲商陆叶和果的急性毒性
张鹏1
，
李煜1
，
尤育洲1
，
冯颖1
，
滕仁明1
，
马蕊1
，
高珊1
，
宁钧宇1，2
，
敬海明1
，
李国君1，2
，
谭壮生1
，
马
玲1，2
( 1．
北京市预防医学研究中心 北京市食物中毒诊断溯源技术重点实验室，
北京 100013;
2．
首都医科大学公共卫生学院，
北京 100069)
摘 要:
目的 分别使用经典的小鼠急性经口毒性试验、
体外细胞毒性试验及线虫毒性试验三种方法对美洲商陆
叶子和果实进行急性毒性检测和评估。
方法 小鼠急性经口毒性试验中，
美洲商陆叶使用一次最大限量法，
美洲 商
陆果使用霍恩氏法;
体外细胞毒性试验使用 CHL(
中国仓鼠肺细胞)
中性红染色法;
线虫毒性试验采用 96
孔板对 同
步化的秀丽隐杆线虫 L4
期幼虫进行 24 h
染毒。
结果 小鼠急性经口毒性试验表明美洲商陆叶的小鼠经口最大 耐
受剂量( MTD)
≥20. 00 g / kg BW，
为无毒级，
而果的 LD
50 ＞ 10. 00 g / kg BW，
为实际无毒，
果的小鼠急性毒性大于
叶的毒性;
在细胞毒性试验中，
叶和果的 IC
50 分别为 7. 4
和 5. 6
μg / ml;
在线虫毒性试验中，
经 215. 0 mg / ml
的美洲
商陆叶染毒 24 h
后，
仍未出现死亡，
而果的 LC
50 = 16. 5 mg / ml。
结论 经典小鼠和线虫染毒模型均显示果的毒性 大
于叶的毒性;
在细胞毒性试验中，
虽然果的细胞毒性略大于叶的毒性，
但差别比较微弱。
提示线虫模型比细胞模 型
更具有毒性预筛的潜在应用价值。
关键词:
美洲商陆; 急性毒性; 体外细胞毒性; 秀丽隐杆线虫; 细胞毒理学; 毒理学试验; 毒性
中图分类号: Ｒ155; Q7; Q291
文献标志码: A
文章编号: 1004-8456( 2014) 04-0332-05
DOI: 10. 13590 / j． cjfh． 2014. 04. 007
3T3细胞中性红摄取光毒性试验方法研究进展
3T3细胞中性红摄取光毒性试验方法研究进展
×××综述
（广东省疾病预防控制中心）
关键词：3T3，光毒性，体外替代试验
前言：光毒性是指一次接触化学物质后的皮肤继而暴露于紫外线照射下所引发的的一种皮肤毒性反应，亦或者全身应用化学物质后，暴露于紫外线照射下发生的类似反应。而近年来的临床应用过程中，很多不同类型的药物均出现了光毒性反应。当中包括了临床上常用的氟喹诺酮类抗菌药、非甾体消炎药物、抗组胺药物、抗抑郁药物、抗惊厥药物、利尿剂、抗真菌药物和抗高血压药物等[1-4],引起了人们对药物光毒性的关注。而目前对于药物光毒性的检测，传统的光毒性检验以动物试验为主，光毒性动物试验简单，方法成熟，但试验周期长，成本高，某些反应会给动物造成极大的痛苦，存在一定的伦理问题，且结果外推存在差异[1，9]。而3T3中性红光毒试验（3T3 NRU Test）作为动物皮肤光毒性试验的一种体外替代方法，已通过欧洲的欧洲体外替代试验有效性验证中心（ECVAM）验证并收录进OECD化学物质毒性试验指南[10]，具有试验操作简单，费用低，重现性好，试验周期短，且与体内试验结果的相关性好等特点，该方法目前已广泛应用于化妆品、新药、化学品的光安全性评价[1]。本综述目的是对3T3细胞中性红摄取光毒性试验方法的研究进展做归纳。
一、3T3细胞中性红摄取光毒性实验方法
1.实验原理
许多类型化学物质可以引起光毒性反应，其简单的特征为能够吸收阳光中的能量。根据光化学和光反应的第一定律，要求能够充分地吸收光量子。因此，在进行生物学实验之前，必须确定化学物质的紫外线吸收光谱。如果这种物质的摩尔消光系数/吸收系数小于10L/mol·cm，那么这种物质则没有潜在的光反应，同样不必进行体外3T3光毒性实验，以及其他光化学毒性反应的生物学实验。
正常状态下，细胞能够吸收生物活性染料（如中性红），当细胞受到损伤后，吸收生物活性染料的能力降低；细胞膜受到伤害后，吸收的生物活性染料很容易泄露等。因此，体外3T3细胞光毒性实验是根据比较化学物质的光化学细胞毒性而进行的，即细胞暴露和非暴露于无细胞毒性剂量下紫外线（UVA）或光线，验证待测化学物质是否具有光毒性。在该实验中，细胞毒性表现为，细胞吸收生物活性染料中性红的能力降低。
浸提方法对药用卤化丁基橡胶塞体外细胞毒性评价的影响
浸提方法对药用卤化丁基橡胶塞体外细胞毒性评价的影响
邝辉;曹苹;王晓炜
【摘 要】目的:研究不同浸提方法对药用卤化丁基橡胶塞体外细胞毒性评价的影响.方法:采用不同的浸提方法制备了浸提液,以MTT 法评价药用卤化丁基橡胶塞浸提液对小鼠成纤维细胞L929活性与增殖的影响.结果:通过不同的浸提方法制备的浸提液,11批中的9批样品体外细胞毒性实验出现了有统计学意义的差异.结论:破坏原有样品的正常形态即改变表面积与体积比对于评价卤化丁基橡胶塞的体外细胞毒性实验(MTT)是有影响的.
【期刊名称】《中国医疗器械信息》
【年(卷),期】2011(017)007
【总页数】3页(P45-46,57)
【关键词】浸提液;医疗器械;生物学评价;药用卤化丁基橡胶塞;体外细胞毒性
【作 者】邝辉;曹苹;王晓炜
【作者单位】深圳市药品检验所,深圳,518057;深圳市药品检验所,深圳,518057;深圳市药品检验所,深圳,518057
【正文语种】中 文
【中图分类】R197.39
卤化丁基橡胶塞因其具有优良的化学惰性以及气密性而广泛用于药品包装。卤化丁基橡胶塞与内装药物的相容性自始就是各生产企业关注的重点，同时其生物安全性也逐渐引起人们的注意。体外细胞毒性实验是生物安全性评价的重要组成部分，是评价直接或间接接触人体组织和细胞的医疗器械和药品包装材料的通用方法[1]。目前我国药品包装材料相关标准推荐的方法有：相对增殖度法、琼脂扩散法、直接接触法、浸提法[2]。浸提液实验是目前用于检测药品包装材料细胞毒性的比较广泛的一种方法，选择不同的浸提方法可能对实验结果有着直接的影响。本实验遵循药品包装材料的生物学评价相关标准，经不同的浸提方法制备相应的浸提液，以MTT 比色法[3]作为主要检测手段评价卤化丁基橡胶塞浸提液对细胞的毒性，重点考察不同的浸提方法对各企业生产的卤化丁基橡胶塞细胞毒性评价的影响。
1 材料与方法
1.1 主要试剂与仪器
栀子、连翘等中药配方颗粒体外肝细胞毒性研究
栀子、连翘等中药配方颗粒体外肝细胞毒性研究
任艳青;李葆林;田宇柔;牛丽颖;甄亚钦;王鑫国
【摘 要】目的:对栀子、连翘、大黄、续断、首乌藤、麻黄、淫羊藿、丹参、地黄、陈皮10种中药配方颗粒的体外肝细胞毒性进行研究评价.方法:以人正常肝细胞LO2为研究对象,设定一系列浓度梯度,MTT法观察不同浓度配方颗粒对LO2细胞的细胞毒作用;Hoechst 33258荧光染色法观察细胞核形态.结果:100、1 000
mg/L栀子配方颗粒对LO2细胞呈现明显毒性作用(P＜0.05或P＜0.01),荧光染色可见明显的核荧光强度增强、固缩等凋亡表现;连翘等其他9种配方颗粒在0.001 ～1 000 mg/L范围内,对LO2细胞无明显毒性作用(P＞0.05),也未观察到明显的细胞核形态学改变.结论:本研究以中药配方颗粒作为体外实验的载体,对栀子、连翘等10种常用中药配方颗粒的早期肝毒性进行了评价,提示栀子配方颗粒若在较大剂量下使用,可能会存在明显的肝脏毒性,其他9种中药配方颗粒对人正常肝细胞LO2无明显毒性,为上述中药配方颗粒的临床应用提供了参考.
【期刊名称】《河北中医药学报》
【年(卷),期】2017(032)001
【总页数】4页(P43-46)
【关键词】中药配方颗粒;栀子;连翘;大黄;续断;首乌藤;麻黄;肝细胞毒性;安全性评价;LO2细胞
【作 者】任艳青;李葆林;田宇柔;牛丽颖;甄亚钦;王鑫国
【作者单位】河北中医学院 河北省中药配方颗粒工程技术研究中心 石家庄050091;河北中医学院 河北省中药配方颗粒工程技术研究中心 石家庄050091;河北中医学院 河北省中药配方颗粒工程技术研究中心 石家庄050091;河北中医学院
河北省中药配方颗粒工程技术研究中心 石家庄050091;河北中医学院 河北省中药配方颗粒工程技术研究中心 石家庄050091;河北中医学院 河北省中药配方颗粒工程技术研究中心 石家庄050091
苯甲酸钠与糖精钠_柠檬黄对L_929细胞联合毒性的研究
中图分类号：R994.4文献标识码：A文章编号：1002－3127（2010）01－0047－04·实验研究·
苯甲酸钠与糖精钠、柠檬黄对L-929细胞联合毒性的研究
付佳1，吴赤蓬2，邹志飞3
（1.中山大学生命科学学院，广东广州510275；2.暨南大学医学院；
3.广东出入境检验检疫局技术中心）
【摘要】目的采用体外细胞毒性检测方法，初步研究食品添加剂是否具有联合毒性作用，为食品添加剂的安全性评估提供更为可靠的依据。方法体外培养L-929细胞，用噻唑蓝（MTT）法检测各受试物对细胞的毒性作用；并采用效应相加模型评价受试物对细胞的联合毒性作用。结果①各受试物单独对L-929细胞的毒性作用有明显的剂量效应关系，其中苯甲酸钠的细胞毒性最强，IC50达到（6.47±0.07）g/L，其次糖精的IC50为（19.50±0.37）g/L，柠檬黄IC50为（33.09±0.81）g/L。②苯甲酸钠与柠檬黄对L-929细胞的毒性具有相加作用（P>0.05）；苯甲酸钠与糖精钠的细胞毒性也为相加作用（P>0.05）。结论在本试验条件下，苯甲酸钠分别与糖精钠、柠檬黄联合作用L-929细胞，表现出毒性相加作用。【关键词】细胞毒性；MTT；联合作用；食品添加剂
基金项目：广东省科技计划项目（2007B060401077）作者简介：付佳，硕士研究生，研究方向：食品毒理学。通讯作者：邹志飞，副主任医师，硕士生导师，研究方向：食品毒理学。食品添加剂作为一种化学物质，其潜在危害是不
容忽视的。近年来，随着毒理学及检测技术的发展，一
些添加剂因存在致癌和致畸的危险性已陆续从食品添
加剂的使用目录中被删除。许多调查研究表明，人类
罹患的许多癌症较大程度与所吃食物有关，因此，食品
添加剂的毒理学研究意义重大。目前，食品添加剂安
全评估标准往往是基于单独添加剂的毒性效应建立起
来的，而人们每天摄入的食物种类繁多，一种食品中也
存在多种食品添加剂联合使用的情况，食品添加剂在
细胞毒性实验总结
细胞毒性实验总结
一、 抗HBV药物细胞毒性实验背景知识 .................................................................................. 1
二、 细胞毒性实验方案的确立 ..................................................................................................... 3
三、 细胞毒性实验方法稳定后的部分数据 ................................................................................. 4
四、 细胞毒性实验质量评价指标 ................................................................................................. 5
五、 细胞毒性实验SOP ................................................................................................................ 6
（一） 目 的 ................................................................................................................................. 6
（二） 适用范围 ........................................................................................................................... 6
中药免疫调节剂体外细胞毒性测定
山东农业大学学报（自然科学版），２００７，３８（２）：２２５～２２９ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ）
中药免疫调节剂体外细胞毒性测定
刘翠艳 ，赵宏坤ｈ，韩春杨
（１．山东农业大学动物科技学院，山东泰安２７１０１８；２．中国农业大学动物医学院，北京１０００９４）
摘要：采用形态学观察和ＭＴＹ两种方法，测试了中药免疫调节剂（ＴＪＪ）在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和小鼠纤维母细 胞（Ｌ９２９）体外培养中的最大安全浓度。结果表明：（１）ＴＪＪ的细胞毒性很低，对ＣＥＦ和Ｌ９２９的最大无毒浓度分别达 ３．１２ Ｌ和１．５６ｓ／Ｌ；（２）两种细胞比较，Ｌ９２９对药物毒性的反应性较ＣＥＦ更敏感；（３）两种方法比较，ＭＴＹ法更灵敏、 更客观；（４）在同一种细胞的不同生长状态下（形成单层前后）加入ＴＪＪ，药物对细胞的毒性结果无变化，说明药物对 细胞的毒性与细胞种类有关，而与细胞的生长状态关系不明显。 关键词：中药免疫调节剂；鸡胚成纤维细胞；小鼠纤维母细胞；安全浓度 中图分类号：Ｑ３１；￥９６５．３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００—２３２４（２００７）０２—０２２５一ｏ５
ＣＹＴｏＴｏＸＩＣ ＡＳＳＡＹ ｏＦ ＴＨＥ ＣＨ ＥＳＥ ＭＥＤＩＣ ＡＬ ＨＥＲＢⅡ ＭＵＮｏＭｏＤＵＬＡ１’ｏＲ。Ｉ ＶＩ’Ｉ’Ｒｏ ＬＩＵ Ｃｕｉ—ｙａｎ ，ＺＨＡＯ Ｈｏｎｇ—ｋｕｎ ’，ＨＡＮ Ｃｈｕｎ—ｙａｎｇ
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ａ ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉａｎ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２７ １０１８，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００９４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｗｏ ｍｅｔｈｏｄｓ，ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ＭＴＩ＂ａｓｓａｙ，ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ｓａｆｅ