功能性食品配方

改善睡眠的功能性食品配方设计

摘要

目的研究酸枣仁功效成分的含量以及基于酸枣仁的功能食品配方的设计。方法用化学方法测定酸枣仁粗多糖、总黄酮和总皂苷的含量，高效液相色谱法测定酸枣仁皂苷 A 的含量。通过直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下催眠剂量实验和巴比妥钠睡眠潜伏期实验，比较低、中、高3个剂量（570 ，1 000 及2 000 mg/kg）酸枣仁粉剂对小鼠睡眠的影响，并且用荧光法测定小鼠脑中 5-羟色胺含量。结果酸枣仁粉剂总皂苷的含量为0.96 g/100 g，酸枣仁皂苷A的含量为0.41 g/100 g，总黄酮的含量为0.62 g/100 g。中剂量样品（1 000 mg/kg）具有改善睡眠的作用，酸枣仁改善睡眠与小鼠脑中5-羟色胺含量具有相关性。结论酸枣仁粉剂功效成分的含量较高，具有改善睡眠的作用，改善睡眠与小鼠脑中5-羟色胺含量有关。

关键词酸枣仁；功效成分；改善睡眠

酸枣仁Semen ziziphi spinosae为中医传统安神药材，《中国药典》2000版第Ⅰ部记载为鼠李科植物酸枣Ziziphus jujuba Mill.Var. spinosa(Bunge) Hu ex H.F. Chou的干燥成熟种子，其味酸性平，归肝、胆、心经主要用于治疗虚烦不眠，惊悸多梦，体虚多汗，津伤口渴等症。酸枣仁的药理作用主要有镇静、催眠、镇痛、抗惊厥、降温、降压、降脂、抗缺氧、增强免疫功能以及对心脏的保护作用。

随着社会的发展，失眠已经成为困扰人们生活的重要因素。改善睡眠的研究很多集中在西药如安定等以及褪黑素等方面，虽然具有一定的效果，但长期服用会产生一定的依赖性与副作用。酸枣仁为药食同源的保健食品原料，文献记载具有改善睡眠的作用，将其加工成具有改善睡眠功能的保健食品，不仅食用安全可靠，而且功效显著。但现有酸枣仁改善睡眠的研究主要集中在有关酸枣仁的主要成分（如皂苷、黄酮）、酸枣仁汤剂改善睡眠以及与其它药物合剂改善睡眠的作用、酸枣仁超临界萃取有效成分、酸枣仁皂苷和褪黑素合剂改善睡眠的效果等方面［1，2］，采用酸枣仁纯粉剂进行改善睡眠的研究国内外尚未见详细报道。对酸枣仁纯粉剂改善睡眠效果的研究，可以使其作为改善睡眠保健品原料的主要成分，并为进一步合理组方提供重要依据

性状鉴别

种子扁圆形或扁椭圆形，长5-9mm，宽5-7mm，厚约3mm。表面紫红色或紫褐色，平滑有光泽，有的具纵裂纹。一面较平坦，中间有1条隆起的纵线纹；另一面稍凸起。一端凹陷，可见线形种脐；另端有细小凸起的合点。种皮较脆，胚乳白色，子叶2，浅黄色，

富油性。气微、味淡。以粒大、饱满、有光泽、外皮红棕色、种仁色黄白者为佳。

药理作用

1、镇静催眠作用：酸枣仁水溶性提取物，每ml相当于7.5g生药，将原液稀释为1：1，l：0.5，1：0.25 3种浓度，pH=9，用量每20g用1.0ml。

对小白鼠一般活动的影响：

直接观察法试验：取体重18.0±1.0g小白鼠，各半，给药前先观察其正常活动情况，然后给予不同浓度酸枣仁水溶性提取物1.0ml/20g ig。

光电镇静法试验：用十字交叉光束的二个光导管串联组成光电镇静器，用积数器记录10分钟内小鼠自发活动次数。在药物浓度为1：1与1：0.7组小鼠活动显著减少。

排水量法试验：参考Komlos等的抖笼排水装置用单位时间内的排水量表示小白鼠的活动情况。小白鼠分为大剂量组（1 ：0.5），小剂量组（1 ：0.25）和对照组，1次ig给药，30分钟后开始观察15、30分钟内排水量，1：0.5药物组比对照组排水量显著减少（P<0.01）。

抖笼法试验：选体重18±1.0g小鼠，随机分两组，每组10只，给药组用1：1酸枣仁水溶液ig 1.0ml/20g体重，30分钟后放入抖笼内观察10分钟内活动情况。结果给药组自发活动明显降低。酸枣仁石油醚提取液、正丁醇萃取液、乙酸乙酯萃取液（以上的提取液每1ml相当原生药10g）水煎剂（浓度为每1ml相当原生药1g），pinosin配成每1ml相当原生药1mg。采用抖笼法自身对照试验。结果见表4，除石油醚提取液无效外，均显示明显的降低自发活动。

降低协调运动：选取体重18±1.0g 小白鼠，在滚笼上转1h，不落下者为合格。取40只，按体重性别随机分4组，给予不同剂量酸枣仁水提物（每1ml相当7.5g生药，并稀释为1：1，1 ：0.5,1 ：0.7）与生理盐水对照，用滚笼法进行实验，滚笼转速为 6.5wk/分钟，每次放入10只小白鼠，ig给药30分钟后放入滚笼，连续转60分钟，观察动物落下只数，结果见表5。3种浓度均落下60%以上，与盐水组对照有非常显著差异。

对动物睡眠的影响：

酸枣仁水溶性提取物与戊巴比妥钠作用的影响：取18.0±1.0g小白鼠20只，按体重、性别随机分为二组。一组给酸枣仁水溶提取物（每ml 相当7.5g生药，稀释为1：1）；另一组给等容量生理盐水作对照，ig给药后30分钟，每只小鼠ip 0.2%戊巴比妥钠0.1ml/10g，每5分钟进行一次翻正反射试验直至翻止反射消失，记录30分钟内消失只数，酸枣仁水

溶性提取物能加强戊巴比妥钠催眠作用。酸枣仁水溶性提取物还能显著延长戊巴比妥钠对小白鼠的睡眠时间（P<0.05），但不及氯丙嗪（P<0.01）。

炒枣仁煎剂对大鼠睡眠的影响：Wistar大鼠18只，体重160-240g。随机分为实验组与对照组，置于有机玻璃圆筒内单独饲养，活动不受限制，自由摄食和饮水，保持自然光照，在戊巴比妥钠麻醉下安装皮层电极，用于记录脑电。在两侧颞肌和颈肌内分别插入银丝电极以记录肌电，连续记录6小时，每只大鼠在ig前记录3天，ig后记录3天。炒枣仁煎剂每1ml相当于原生药0.5g。实验组用炒枣仁煎剂ig，每次1ml，每日2次，自记录睡眠的d3晚上开始给药，共3天。对照组用等量生理盐水。睡眠资料分析采用目测法，每30秒为一分段时间。睡眠觉醒周期分为：

1）觉醒期以额-顶叶引导出的低幅快波脑电和明显的肌电活动为特征；

2）慢波睡眠（Slow wave sleep，SWS）以梭形波（10-15Hz）和高幅慢波（Q波。0.5-5Hz）为特征，该期肌电活动明显减少。其中Q波少于50%者为慢波睡眠第1期（SWS1），相当于浅睡阶段；Q波超过50%者为慢波睡眠第2期（SWS2），相当于深睡阶段；

3）快波睡眠（Paradoxical sleep，PS）以低幅快波（6-9H2）的脑电为特征、除偶尔有肌肉抽动外无明显的肌肉活动；

4）总睡眠时相（TS）包括SWS1、SWS2和PS。全部实验资料以均值±标准误（X±SD 表示，用t检验统计处理。

结果：实验组大鼠ig后TS和SWS2持续时间明显增长，与ig前相比，6小时内TS 持续时间平均增加51.0分钟（26.O%），SWS2持续时间平均增加41.4分钟（116.3%），差异均非常显著（P<0.001）。SWS1和PS持续时间无明显变化。对照组ig生理盐水前后未见明显变化。实验组ig后TS与SWS2的发作频率与发作持续时间均有明显变化。与ig 前相比，6h内TS发作频率平均减少22.7次（-36.3%），每次发作持续时间增加3.5分钟（+95.6%）；6小时内SWS2发作频率平均增加28.3次（+89.O%），均有非常显著的意义（P<0.001），而SWS2每次发作的持续时间延长0.3小时（+31.6%），有统计学意义（P<0.05）。对照组ig前后对发作频率和发作的持续时间则无显著变化。在实验中还发现ig后多数大鼠的脑电图波型有明显变化，主要表现在慢波睡眠阶段高幅慢波增多，波幅增大，频率变慢，尤其是ig前睡眠量较少的大鼠更为明显。对照组在ig前后未见明显变化。

酸枣仁有效成分对大鼠多导睡眠描记的影响：酸枣仁用石油醚脱脂后加水抽提，再加硫酸铵至一定饱和度，析出沉淀，加水溶解，并滤去不溶物，清液调pH至3.O后，用阳离子交换柱层析，先用水洗至中性，然后用NH4OH洗脱并分部收集得两部分，分别为