根瘤菌剂在大豆上应用效果
２ ０ １ ３年第 ５期 （ 总第 ４ ０ ６期 ）
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根 瘤 菌 剂在 大 豆 上 应 用 效 果
岳 萍 ， 尚秀 菊。
（ １ ． 北 大 荒 垦 丰 种 业 股份 有 限 公 司 庆 丰 农 场 分 公 司 ， 黑龙 江 虎 林 １ ５ ８ ４ ２ １ ； ２ ． 黑龙 江 北 大 荒 农 业 股份 有 限 公 司 庆 丰 分 公 司）
０ ． ５个 （ ６月 ２ ０ 日） 和 ３ ． ７ 、 １ ． ８个 （ ７月 １ ５ 日） ， 根 长分 别 增加 ０ ． ４ 、 ０ ． ６ ｃ ｍ（ ６月 ２ ０ 日） 和 ０ ． １ 、 ０ ． ３ ｃ ｍ（ ７月 １ ５
日） ， 根 系 发育较 好 。 ２ ． ２ 根瘤 菌剂 对大 豆产 量性 状 的影 响
摘要 ： 经 试验 示 范表 明， 玉 米 施 用 氮 肥 与 常 规 施 肥 相 比 确 有 增 产 作 用 ， 其 中 氮 肥 １ ０ ０ 处理， 公 顷 产 量
１ ２ １ ｏ ５ ｋ ｇ ， 增产率 ６ ． ３ ， 公顷增收 ９ ９ ６元 ； 氮肥 ８ ５ ％处理 ， 公 顷产 量 １ １ ８ ９ ５ ｋ ｇ ， 增产率 ４ ． ５ ， 公顷增收 ７ ５ ５元 。
麦， 秋 翻春 整地 ， 春起 垄 ， ５月 １ ３日人 工播 种 ， 播 后苗 前化 学封 闭灭 草 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 大豆 生育 期 间 中耕 ３遍 ， 拿 大草 １次 。 试 验采 取大 区对 比法 ， 不设 重 复 ， 每 大 区面积 ３ ３ ３ ． ３ ｍ 。处理 １每 公 顷用 大豆 根 瘤菌 剂 Ａ 型 ３ ０ ｋ ｇ ＋常 规施 肥 中氮 肥减半 ； 处 理 ２每公 顷用 大豆 根瘤 菌剂 Ｂ型 ３ ０ ｋ ｇ ＋常规 施肥 中氮肥减 半 ； 处理 ３为对 照 ， 采 取 常
１ 试 验 材 料 与 方 法
试 验地 于 ２ ｏ １ ２年 设 在 八 五 四分 公 司 旱 田科 技 园 区 ， 土质 为 岗地 白浆 土 ， 耕层 １ ８ ～２ ０ ｃ ｍ， 前 茬 玉米 ， 秋
摘要 ： 大豆 根 瘤 菌 剂 可提 高 大 豆 的 结 瘤 固氮 能 力 ， 减 少 氮肥 的 施 用 量 ， ２ ｏ １ ２年 通 过 施 用 Ａ、 Ｂ 两 种 型 号 的 根 瘤
菌 剂 减 氮 试验 ， 结 果 表 明 大 豆根 瘤 菌 剂 Ａ 型 比 对 照 增 产 ８ ． ７ ％， 大 豆根 瘤 菌 剂 Ｂ型 比 对 照 增 产 ７ ． ２ 。
效果 较好 ， 现将 结果 总结 如下 。
１ 试 验 材 料 与 方 法
试 验 地于 ２ ０ １ ２年设 在庆 丰分公 司农业科 技 园 区旱 田试验 区 ， 土壤 为草 甸 白浆 土 ， 土壤 肥力 中等 ， 土 壤 中
含碱解 氮 １ ６ ７ ． ９ ｍｇ ／ ｋ ｇ 、 速效磷 ２ ７ ． ８ ｍｇ ／ ｋ ｇ 、 速 效钾 １ ３ ６ ． ９ ｍｇ ／ ｋ ｇ ， 有 机质 含量 ４ ． ５ ％， ｐ Ｈ值为 ４ ． ９ １ 。前 茬大
关键 词 ： 常规 施 肥 ； 氮 肥
氮肥 是 由农 垦浩 良河 化肥 厂 ， 近年 来根 据玉 米生 长规 律及需 肥 特 点 ， 研 制 开 发 的一 种 新 型添 加肥 料 生 物活 化剂 的肥 料 ， 其 特 点是提 高氮 肥利 用率 、 延 长氮 肥肥效 、 减 少氮 肥 挥发 损 失等 ， 为研 究氮 肥 对 玉米 生 育 及 产量 的影 响 ， 特做 如 下试验 。
（ ０２ ２）
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现 代 化 农 业
２ ０ １ ３ 年第 ５ 期（ 总第 ４ ０ ６期 ）
氮 肥＋ 在玉米上应用效果
张 秀芳 ， 姚宏牧， 张长勇， 刘建 民 ， 王 芳
（ 黑 龙 江北 大 荒农 业 股 份 有 限 公 司 八 五 四 分 公 司 ， 黑龙 江 虎 林 １ ５ ８ ４ ０ ３ ）
表 １ 产 量 结 果
从 室 内考 种及 产量 调查 结果 可 知 （ 见表 １ ） ， 施 用 大豆 根 瘤 菌剂 的处 理 １和处 理 ２ ， 各 项 产量 指 标 均 高 于
对照 ， 与 对照 相 比 ， 株荚 数分 别多 ０ ． ９ 、 ０ ． ４个 ， 株 粒数 分别 多 ５ ． ３ 、 ３ ． ４ 个， 百粒 重分 别 高 ０ ． ３ 、 ０ ． ３ ｇ ， 分 别 比对
关键词 ： 增施根瘤 茵； 减氮； 增 产
大 豆根 瘤菌剂 增加 了大豆 的根瘤 数量 和重 量 ， 改善 大 豆根 系 发育 ， 提高 了大 豆 的结 瘤 固 氮能 力 ， 从 而 在 满足 大豆 生 长需要 的 同时可 适 当减少 氮肥 的施 用量 。２ ０ １ ２年是 庆 丰分公 司对根 瘤 菌 剂进 行 的第 ３年试 验 ，
照增 产 ８ ． ７ 、 ７ ． ２ 。
２ ． ３ 经 济 效 益 分 析
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ３ － ０ ３ — １ ８
平和快 速 反应 能力 ， 在不 断提 高航 化作 业能 力 的 同时 ， 增 配 玉米 中后期 病 虫 害 防控 药 械 ， 建立 专 业 化 防 治 队 伍， 大力 推进绿 色 防控 和专业 化统 防统 治 ， 确保 玉米 生产 安全 。
规施 肥 ， 每公 顷施 磷 酸 二铵 １ ８ ０ ｋ ｇ 、 尿素 ６ ０ ｋ ｇ 、 硫酸钾 ６ ０ ｋ ｇ 。试 验 材 料 ： 大 豆根 瘤 菌剂 Ａ 型 和 Ｂ型 ， 由卫 星
生 物科技 有 限公 司提供 ， 供 试大 豆 品种为 垦丰 １ ６号 。
２ 试 验 结 果 与 分 析
２ ． １ 根 瘤菌 剂对 大豆 生长 发育 的影 响 大豆 生育 期 间在 ６月 ２ ０日、 ７月 １ ５日分别 对 植株 地 上 部 、 地下 部 性状 调 查 ２次 ， 结 果 表 明施 用 根瘤 菌 剂 的处理 １ 、 处理 ２ 株高、 根长 、 单株 有效 瘤数 、 根瘤 干重 和 根 重均 比对照 有 所增 加 ， 根瘤 数 量分 别 增 加 ０ ． ３ 、
富思德大豆根瘤菌剂应用效果试验
收 稿 日期 ： Ｏ １ｌ 一 ７ ２ ｌ－Ｏ２
这个 密 度产 量都 有所 下 降 。随着 密度 的增 加株 数在 增加 ， ７ ５万 株／ ｍ 和 ８ ５万 株／ ｍ 有 空秆 现 象 ， 在 ． ｈ ． ｈ 没
ｌ Ｏ万株 ／ ｍ。 空秆 率 １ ９ ， ｈ 有 ． ％ 穗数 低 于种植 密 度 。随着 密度 的增 加穗 行数 没 有变 化 ， 穗长 、 粒数 和百 粒 重 行
（ ０ ～ ３ ） 量 不 会 对 大豆 造 成 减 产 作 用 。 １ Ｏ 用
关 键 词 ： 思 德 大 豆 根 瘤 茵剂 ； 豆 ； 产 效 果 富 大 增
富思德 大 豆根 瘤菌 剂是 由秦 皇岛领 先科技 发 展有 限公 司生产 ， 菌剂具 有结 瘤 固氮 性能 强 ， 该 能够 有效 地 增 加大 豆根 瘤数 量 ， 从而 大 大减少 生 产 中的氮 肥使 用量 ， 到肥 地养 地 的作用 ， 起 是一 种 能 有 效 提高 土 壤 综 合 肥力 的生物 菌剂 ， 强作 物抗 病 、 增 抗逆 性 ， 可提 高作 物 品质 和产 量 。２ １ ０ ０年在 密 山地 区进行 该 肥 料 的效 应 试 验， 对不 同施 肥 量下 的大 豆 生物学 特 征值 及最 终产 量结 果 进行统 计 分析 ， 定该 肥料 在密 山地 区 大豆 上 的作 确
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２ ・ ０
根瘤菌肥在大豆栽培中的应用效果初报
根瘤菌肥在大豆栽培中的应用效果初报万玉萍;向往;万勇【摘要】在大豆生产栽培中采用常规施肥、常规施肥加根瘤菌肥等方法，结果表明，施用根瘤菌肥（粉剂）的大豆平均产量为174.3 kg/667m2，与空白对照比较，增产22.7 kg/667m2，增产率为15.0%，处理间产量差异达显著水平；比对照增加纯收入65.88元/667m2，经济效益显著。
%The study used conventionalfertilization and conventionalfertilization w ith rhizobia fertilizerin the soybean production.W ith 4 treatm ents w hich repeated 3 tim es,the experim entof 12 plots cultivation show ed thatafter the application of soybean rhizobia fertilizer (pow der),the average yield was340.5 kg/hm 2,w hich w as339.0 kg/hm 2 higherthan thatofthe controlw ith an increasing rate of14.9% .The difference ofthe yield am ong treatm entsreached significantlevel.C om pared w ith the control,the netincom e increased by 988.2 yuan/hm 2, and the ratio ofinputto outputwas1∶2.92,w hich indicated obviouseconom ic benefits.【期刊名称】《湖南农业科学》【年(卷),期】2015(000)006【总页数】2页(P56-57)【关键词】大豆;根瘤菌肥;栽培;产量;效果【作者】万玉萍;向往;万勇【作者单位】永顺县农技推广中心湖南永顺 416700;永顺县首车镇农技服务站湖南永顺 416714;永顺县农技推广中心湖南永顺 416700【正文语种】中文【中图分类】S565.1目前市场对大豆的需求量越来越大，为了稳定大豆的种植面积，提升耕地地力，提高大豆的产量和效益，于2014年4～8月对大豆进行了根瘤菌肥（粉剂）田间肥效小区试验，旨在探明根瘤菌肥对大豆的增产效果，指导永顺县大豆高效优质生产。
丛枝菌根真菌和根瘤菌双接种对大豆生长的影响的开题报告
丛枝菌根真菌和根瘤菌双接种对大豆生长的影响的开题报告1. 研究背景丛枝菌根真菌（AMF）和根瘤菌（Rhizobia）是土壤中普遍存在的两种共生微生物，分别和植物的根系形成菌根和根瘤。
AMF能够增加植物对土壤中养分的吸收效率，促进植物生长，而根瘤菌则能够固氮，为植物提供氮源。
因此，双接种AMF和根瘤菌被认为是一种有效的生物肥料，可提高农作物生产力，降低化肥的使用量和环境污染。
在大豆生长过程中，AMF和根瘤菌的共生能力很强，但是双接种对大豆生长的影响还未完全明确。
因此，本研究旨在探究双接种AMF和根瘤菌对大豆生长的影响，为大豆生产提供有益的参考。
2. 研究内容和方法本研究选取大豆（Glycine max L.）作为研究对象，比较单接种和双接种对大豆生长的影响。
实验分别设置四组处理：CK（不接种微生物菌根或根瘤菌）、AMF单接种（Gigaspora margarita接种）、Rhizobia单接种（Bradyrhizobium sp. NCACG3接种）、AMF和Rhizobia双接种。
具体实验步骤如下：2.1. 材料准备选取生长健壮的大豆种子，清洗后在室温下催芽，种苗生长至两片叶子时进行接种。
AMF和Rhizobia菌株分别由微生物实验室提供，存储在20℃的琼脂培养基中。
2.2. 处理设置将大豆幼苗分别移植至土壤中，分别进行CK、AMF单接种、Rhizobia单接种和AMF和Rhizobia双接种四组处理。
每组处理设置六个重复，共计24个小组。
处理10天后，在幼苗地下部分分别测定根长、根重、干重和根系形态等生长指标，并进行数据分析。
2.3. 数据处理通过SPSS统计软件进行数据分析，采用方差分析（ANOVA）和卡方检验进行数据处理。
3. 预期结果和意义本研究预计通过比较单接种和双接种对大豆生长的影响，得出以下结论：（1）接种AMF和Rhizobia双菌种能够显著促进大豆生长，提高根长、根重、干重等生长指标；（2）不同接种处理对大豆根系形态的影响不同，双接种处理能够增加根系表面积，提高根系空间占比；（3）利用AMF和Rhizobia双接种能够有效提高大豆生产力，降低化肥的使用量和环境污染，具有重要的实践意义。
俄罗斯根瘤菌对大豆黑河17号的增产效果
俄罗斯根瘤菌对大豆黑河17号的增产效果张 雷(黑龙江省农科院黑河农科所 164300)摘 要 利用从俄罗斯引进根瘤菌2号及18号,进行了田间试验研究,研究其在大豆上的增产效果,结果表明,施用根瘤菌肥后,单株鲜重、根瘤数、根瘤鲜重及其干重都有增加的趋势;在生育后期使百粒重增加,增产幅度均达10%以上,以根瘤菌18号应用效果最好。
关键词 大豆 根瘤菌 产量俄罗斯全俄大豆研究所大豆根瘤菌研究室提供的根瘤菌在俄罗斯已广泛应用,用以提高大豆自身的固氮能力,减少化学氮肥的使用量,提高大豆产量,改善产品品质。
大豆是黑河地区主栽作物之一,而根瘤菌在生产上应用极少。
为此,于2001—20022号及18号,研究其在大豆上的增产效果,进行了田间试验研究。
1 材料与方法111 试验材料根瘤菌2号,根瘤菌18号(俄罗斯提供)。
试验用品种为黑河17号。
112 试验地点试验于2001—2002年在黑河农科所试验地进行。
供试土壤为粘质中层草甸暗棕壤,0～20cm土壤有机质含量3176%、全氮为01185%、全磷为01148%、水解氮为6418mg/kg、速效磷为2410mg/kg、速效钾为128mg/kg,肥力中等。
113 试验设计与方法试验处理:根瘤菌2号,根瘤菌18号,对照(不拌根瘤菌)。
根瘤菌肥的使用剂量为3g/m2(即公顷施菌肥30kg)。
采用小区试验,随机区组,3次重复,5m垅长,4行区, 6617cm垅距。
114 根瘤菌培养模式培养基:蔗糖10g,甘露醇2g,K3PO4011g,KH2PO40137 g,MgSO4・7H2O0118g,NaCl0106g,(NH4)2HPO4011g,Ca2 SO4・2H2O0104g,CaCO30125g,酵母1g,加入1000ml水,搅拌至完全溶解,分装入8个250ml三角瓶中,加棉塞。
把上述8瓶培养基在高温高压灭菌锅中灭菌后,取出,凉至常温后,在接菌室内接菌,写上标记,在28～30℃的培养箱内培养5d。
大豆根瘤菌示范总结报告
大豆根瘤菌示范总结报告9月8日，在定远县桑涧镇的大豆根瘤菌示范田调查，地势：向阳，坡地。
肥力状况：中等，（缺钾）品种：巨峰，项目|数目处理1 处理2 处理3 CK1 CK2 CK3根瘤菌数（个）45 60 49 23 16 28株高（厘米）86 92 85 78 72 85分枝数（个）9 12 10 7 7 9结荚数（个）68 77 70 59 58 64 通过对数据的分析：使用大豆根瘤菌的豆株根瘤菌数目比对照增加明显，平均达到了51.3个，空白平均数22.3个，增加130%。
株高和分枝数也有明显增加。
直接反映产量的结荚数是71.7个比60.3个，增加19%。
现在距收获还有一个月时间，具体的产量数据有待完善。
在定远县桑涧镇的大田示范数据：Ding Yuan (AnHui) 27/Sep/2006参数\项目处理 inoculado 空白cm79 高度（厘米）altura 94mm 12茎基部直径（毫米）diametro 158 分枝数（个）ramas 9113 结荚数（个）chauchas 219百荚重（克）peso de 100 semillas 130 gramos 120这是两棵在田间随意拔的大豆株，由于当地已有二十多天没有下雨，土壤板结严重，根系无法保持完整，根瘤数难以测得。
而且叶片已经开始发黄。
在10.9日在定远县桑涧镇的现场测产数据： 9/Oct/2006项目面积（亩）产量（公斤）亩产（公斤）使用过 5.2 968 186.2未使用 6.3 995 157.9 通过对这一组数据分析：产量有明显的增长，亩增产幅度17.92%。
达到极显著的效果。
总结：在整个生长的中前期，使用过的大豆叶片颜色深，在植株高度，分枝数，结荚数上均有提高，但到了后期叶片表现缺钾，籽粒不够饱满。
分析：使用后，已经可以给予大豆充足的氮素养份，根据木桶效应原理，还必须加大其他肥料的施用量。
特别是钾肥（在大豆开花期，该农户忙着防治水稻飞虱，没有时间用药）的施用量。
大豆应用根瘤菌试验总结
Ｃｎ Ｆ ｎｇ ｄｏｅ 嵋 蛆 ■ ■■ ●■ ｈ ｒｈ—ｅｎＰｕ瞄回囫图 囫冒圈 ｉＮ ｏｉａ ｄｔ 篮 ■ ■ ａ ｅ ｌｓ ｒ ｓ ｃｏ ●
大豆应用 根瘤 菌试 验 总结
曹 明 波 李 涛 任德 亮
（ 龙 江 省 八 五 一一 农 场 ， 黑 黑龙 江 密 山 １８ ０ ） ５ ３ ７
２ 症状
发生 前 胃积 沙的 病牛 ，病 初呈 现 前 胃迟 缓 症状 ， 食欲 减巡 ， 刍嗳 气减 少 。继而 精神 反 沉郁 ， 鼻镜 干 燥 ， 胃蠕 动音 减 弱 ， 粪 次数 瘤 排 减少 ， 粪便 质软 色 黑 。后期 反 刍嗳 气停止 ， 排 粪 迟滞 ， 结膜 发绀 ， 眼 ｍ液粘 稠 ， 鼻镜 Ｆ 裂 ， 流 向色粘性 鼻液 。 部分病 牛触 诊 网 、 胃区有 瓣 疼 痛感 。 ２２病理 刘检 － 胃 内容物 少但 胃底有 大量 积 沙 ，胃黏膜 充 血水 肿 ， 干涸 的 沙粒附 于 黏膜 上 ， 的 积聚 有
Ｃｌ ｎ 数 片 数 个 一 ｇ ｔ 鲜 ｇ ｇ 币ｇ
单位 ： 株
地 １ 地 Ｆ １ 鲜 地 ｊ Ｉ ．
雨 ｇ
绥 农 １ ＋ 瘤 淆 １ ２ ｌ ¨ ０ ７ ０５ ４根 Ｏ １２ ４
绥 农 １ＣＫ ４ ９ ８３ ９５ ５ ０５ ９０ ０
８ ｌ０
８ Ｏ３
１ ６ ０ ８
ｌ２ ＇ ８
７４ ６
６９ ０
２ ４ ５
２ ０ ４
丰 １ ＋ 瘤茼 ８ ９４ ５ ０３ ６根 ６４ ５２ ６
丰 １ＣＫ ６ ８ ４４ ９２ ４ ０３ ８８ ４
６） （５
１ 试验 方法 ． ４ 小 区 试验 ， 随机 区组 排 列 ， ｊ次 重 复 ， 小 区 长 １ 米 ， 行 区 ， ｉ ０ ６ 行距 ６ 厘 米 ， ５ 采用 ｊ垄 栽培技 术 ， Ｔ 垄上 开 沟施肥 播 种 ， 人 常规施 肥 量为 二铵 ８ 公 斤 ， ． ９ 尿素 ２ ． ６公斤 ， 化 钾 １ 氯 ． ８ 公斤 ， 根瘤 菌 处理 不施 尿 素 ， 铵 和氯 化钾 施 二
大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及其对大豆植株的促生效应
浙江农业学报!"#$!%&'"()#(&$*+,*-'$.%*./'/!!"!#!#$"%#$&$#!)&$'&*++,$--.../012345/62孙秀娟!徐伟慧!王志刚/大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及其对大豆植株的促生效应&7'/浙江农业学报!!"!#!#$"%#$&$#!)&$'&/89:$&";#(<(-1/=>>2/&""'?&$!';!"!!&&!"收稿日期 !""C?"!基金项目 黑龙江省重点研发计划项目"Z O !&i ""%!Z e !"!&""<%#作者简介 孙秀娟"&((C +#!女!黑龙江鸡西人!硕士研究生!主要从事根际微生物研究,D ?E F =G $&$C$!C('C$IJJ/6H E !通信作者!王志刚!D ?E F =G $.F 2S 0*=S F 2S IJJ*]V/W ^V/62大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及其对大豆植株的促生效应孙秀娟 徐伟慧 王志刚!"齐齐哈尔大学生命科学与农林学院!黑龙江齐齐哈尔&<&""<#摘K 要 为探究大豆根瘤内生细菌对大豆的促生效应!以大豆根瘤为实验材料!分离筛选根瘤内生细菌!测定其分泌植物激素能力及其对大豆株高%茎粗%干重%鲜重和根系生长方面的促生能力,结果表明$共筛选出&%株根瘤内生细菌!经生理生化和&<N ]8T O 鉴定!有&"株为芽孢杆菌属"Q $"'))(/#!#株为巨大普里斯特氏菌属"G &'*/#'$#!其余'株分别为肠杆菌属"M .#*&1S $"#*&#%克雷伯氏菌属"U )*S /'*))$#%不动杆菌属"!"'.*#1S $"#*&#和农杆菌属"!%&1S $"#*&'(C #,通过溶血试验和&<N ]8T O 鉴定筛选出&"株促生能力强的菌株!其中!U )*S /'*))$NC 的吲哚乙酸":O O #分泌量最高!为&'%;$$E S -P )&(赤霉素"Z O >#分泌量最高的为!%&1S $"#*&'(C N&"!分泌量达#(;#'E S -P )&(Q $"'))(/N#的铁载体活性最高!为%";$%L (&"株菌株处理的大豆株高%根长%干鲜重和茎粗均显著高于对照,综上所述!筛选的大豆根瘤内生细菌!对大豆具有较强的促进作用,关键词根瘤(内生细菌(大豆(溶血试验(促生能力中图分类号 N&'';#(N$<$;&文献标志码 O 文章编号&""'?&$!'"!"!##"%?&$#!?&"K &'0,%)'+,+()(#+%)")$,%)'+'"#+('-./%)$8,$%#*),"*'6&'/8#,++'(30#,+(%.#)*#""#$%&'+&'/8#,+-0,+%NX TQ =V1VF 2!Q XR W =*V=!R O T Ze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`=+3H BQ $"'))(/N#.F >+*W *=S *W >+F +%";$%L/[*W ,G F 2+*W =S *+!]H H +G W 2S +*!^]3B ]W >*.W =S *+F 2^>+W E^=F E W +W ]H B >H 35W F 2+]W F +W ^53+*W >W &">+]F =2>.W ]W >=S 2=B =6F 2+G 3*=S *W ]+*F 2+*H >W H B +*W 6H 2+]H G /:26H 26G V>=H 2!+*W W 2^H ,*3+=65F 6+W ]=F >6]W W 2W ^=2+*=>W 4,W ]=E W 2+*F ^>+]H 2S S ]H .+*?,]H E H +=2S W B B W 6+H 2>H 35W F 2S ]H .+*/Copyright ©博看网. All Rights Reserved.9#/:'*(&$]H H+2H^VG W(W2^H,*3+=65F6+W]=VE(>H35W F2(*W E H G3>=>+W>+(S]H.+*?,]H E H+=2S F5=G=+3KK大豆"H)8"'.*C$5#是主要的油料和高蛋白质农作物!种植面积和用途非常广泛!它的营养价值高!在国家粮食战略安全和农产品国际贸易中占有重要地位&&',为保证大豆产量!采取的主要措施是大量施用化肥&!',过度使用化肥会导致化肥利用率降低和土壤状态恶化%作物减产%环境污染等问题&#'!这迫使人们寻找一种高效的%绿色的施肥方法,内生菌"W2^H,*3+W#的概念是由德国科学家%植物病理学之父8W i F]3于&CC<年提出!其认为凡是在植物体内的微生物均为内生菌&'',随着研究者们对植物内生细菌的不断深入研究!发现内生细菌能与宿主植物形成长期相互依存%相互促进的共生关系!通过产生植物激素类物质直接促进宿主植物的生长!如产生吲哚乙酸":O O#%赤霉素"Z O>#等!因此!内生细菌在农业%医药%食品等方面具有重要的应用价值&$',植物与多种促进植物生长的内生微生物共同生活,根瘤菌与豆科植物建立共生关系!最终形成共生体根瘤!除了结瘤细菌外!根瘤中还定居着许多与根瘤菌不同的细菌!单独接种植物多数不会结瘤!称为非结瘤细菌&<)C',根瘤内生细菌进入根瘤的途径很多!可以通过根%茎和叶等组织或器官进入植物体内!在宿主体内移动!对植物有广泛的生物学作用&(',钟宇舟等&&"'研究表明!大豆根瘤内生细菌8O&<?$对大豆表现出较好的促生效果,赵龙飞等&&&'从大豆根瘤内分离出的溶磷菌株对大豆生长有促进作用,尽管人们对内生细菌及其在可持续农业中用作生物肥料的研究越来越感兴趣!但与植物其他组织内生菌相比!大豆根瘤内生菌的研究甚少,因此!本研究通过分离和鉴定大豆根瘤内生细菌!研究其植物激素分泌情况和对大豆的促生效果!旨在为大豆专化型微生物肥料开发利用提供技术支持,&K材料与方法&;&K大豆根瘤采集大豆样地位于黑龙江省齐齐哈尔市黑土区,将大豆根系轻轻从土壤中分离出来!取附着在&"株大豆根系的根瘤!立即包在硫酸纸里!'c储存!备用,&;!K培养基配方酵母甘露醇"@g O#培养基"&P#$甘露醇&" S!酵母浸粉&S!U!Y_9'";$S!g S N9'";!S!T F\G";&S!琼脂!";"S!,Y值<;C M%;"(液体培养基不加琼脂&&!',牛肉膏蛋白胨"T i#培养基"&P#$琼脂!"S!牛肉膏$S!T F\G C S!蛋白胨&"S!,Y值%;"(液体培养基不加琼脂,铁载体"g U i#培养基"&P#$酪蛋白氨基酸$;"S!甘油&$;"E P!U!Y_9'!;$S!g S N9'-%Y!9";!S!琼脂!";"S!,Y值%;"(液体培养基不加琼脂,淀粉培养基"&P#$蛋白胨&"S!T F\G$S!牛肉膏$S!可溶性淀粉!S!琼脂&$M!"S&&#',油脂培养基"&P#$蛋白胨&"S!T F\G$S!牛肉膏$S!香油或花生油&"S!&;<L中性红水溶液&E P!琼脂&$M!"S!,Y值%;!&&#',蛋白胨水培养基"&P#$蛋白胨&"S!T F\G$S!,Y值%;<&&#',糖发酵培养基$蛋白胨水培养基&P!&;<L 溴甲酚紫乙醇溶液&M!E P!,Y值%;<!另配!"L乳糖和葡萄糖溶液各&"E P&&#',&;#K根瘤内生细菌的分离&;#;&K菌株筛选挑选个大%饱满%粉红色的&"个大豆根瘤置于试管内!用无菌水清洗#次!用质量分数!;$L 的Y S\G!表面消毒!E=2!再用无菌蒸馏水冲洗$次!并用无菌研磨机磨碎根瘤,为确保充分的表面消毒!取最后一次漂洗后的&""!P无菌蒸馏水!涂抹在@g O平板上!!C c培养'^后!没有发现细菌生长,用根瘤浸渍液在@g O培养基上划线!在!C c培养'^!根据菌落大小%形态和颜色分离出不同的菌落!反复划线纯化&&!',将纯化后的菌株接种于T i液体培养基!#"c!&!"]-E=2)&振荡培养过夜!&!"""f%离心!E=2后保留沉淀!)C"c冷藏备用,&;#;!K溶血试验将菌株点样接种于血平板培养基!置于#"c-##$&-孙秀娟!等/大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及其对大豆植株的促生效应Copyright©博看网. All Rights Reserved.恒温培养&C M!'*后!观察菌落周围有无溶血圈,&;#;#K&<N]8T O菌种鉴定将保存的细菌于牛肉膏蛋白胨液体培养基中活化!'*后!取&E P菌液!&!"""f%离心&E=2!倒掉上清液!用细菌基因组8T O提取试剂盒提取细菌8T O,选择细菌通用引物!%A"$o?O Z O Z[[[Z O[\\[Z Z\[\O Z?#o#和&'(!a"$o?Z Z[[O\\[[Z[[O\Z O\[[?#o#进行&<N]8T O序列的扩增,_\a扩增产物经&;"L琼脂糖凝胶电泳检测后!送至生工生物工程"长春#有限公司测序,获得测序结果后在T\i:数据库中进行序列比对,使用g D Z O$;"软件构建系统进化树,&;#;'K菌株生理生化特性测定淀粉水解试验$将灭菌淀粉培养基制成平板!把菌株接种在平板上!#%c培养!'*!观察菌株的生长情况!滴入少量卢戈氏碘液!旋转平板!使碘液均匀铺满平板,如菌苔周围出现无色透明圈!说明淀粉已被水解!为阳性!即产生胞外淀粉酶活力,油脂水解试验$将菌株接种在灭菌油脂培养基所制的固体平板上!#%c培养!'*!如出现红色斑点!说明脂肪水解!为阳性反应,糖发酵试验选乳糖和葡萄糖,将蛋白胨水培养基分装于试管!每管内放&个倒置的德汉氏小管!使充满液体,每管在无菌条件下分别加入!"L无菌糖溶液";$E P,将菌株接种在试管内!#%c培养!'M'C*!观察试管颜色变化!以及德汉氏小管中有无气泡!如黄色无气泡和黄色有气泡!为阳性&&#',&;'K菌株分泌激素和产铁载体能力测定&;';&K:O O分泌量测定采用分析纯:O O制备标准曲线!将!""!S-E P)&的:O O标准液梯度稀释为"%!$%$"%%$%&""%&!$%&$"和&%$!S-E P)&!采用NF G dH.>d=显色法测定吸光度"@$'"#&&'',标准曲线方程为8h";"&<$5b";""(<!J!h";((C$,将冻存的菌株接种到T i液体培养基中!培养!'*制作种子液,按&L的接种量将种子液分别接入含有!""E S-P)&色氨酸的液体T i培养基中!#"c!&!"]-E=2)&振荡培养'C*,根据标准曲线计算:O O分泌量,每组#个平行,&;';!K铁载体能力测定吸取&E P种子液接种于g U i液体培养基中!#"c!&!"]-E=2)&振荡培养'C*,将上清液与\O N检测液各#E P均匀混合!反应&*!<#" 2E处测定吸光值"@<#">#&&$',对照组为不接菌的g U i液体培养基!测定方法同上"@<#"]#!每组#个平行实验,按照以下公式计算铁载体活性"I#&&$',I h"@<#"])@<#">#-@<#"],"&#&;';#KZ O>分泌量测定将分析纯Z O>溶于%"L乙醇中!配制成&"" !S-E P)&的Z O>标准液!梯度稀释为"%&"%!"% #"%'"和$"!S-E P)&!取各浓度的Z O>溶液";$ E P!分别与';$E P(CL硫酸混匀并定容至!"E P!于'&!2E处测定吸光度"@'&!#,标准曲线方程为8h";"<"$5b";""#!J!h";(('%,按&L的接种量将种子液转接T i培养基中!#"c!&!"]-E=2)&振荡培养'C*,取";$E P 上清液测定菌株Z O>浓度!以确定各菌株最大Z O>分泌量&&<'!每组#个平行实验,&;$K植物促生长试验&;$;&K浸种促生试验将筛出的根瘤内生细菌发酵液接种于T i液体培养基中!#"c!&!"]-E=2)&培养至@<""h&!用";(L T F\G溶液分别稀释&"倍%!"倍和#"倍!以";(L T F\G溶液为对照,挑选大小一致的大豆种子置于底部铺!M#层滤纸的培养皿中!每个培养皿放<粒大豆种子!每个处理重复#次!共计#"颗,置于!%c恒温人工气候箱培养!&<*光照%C*黑暗,观察记录大豆发芽情况!直到连续#^无新的发芽种子出现!测量根长&&%',&;$;!K温室条件下的植物接种试验大豆种子首先用水洗净!放在体积分数%$L 乙醇中浸泡#E=2!再转至";&L次氯酸钠中浸泡!E=2!然后用无菌水冲洗<M&"次!将消毒好的种子播种到盛有灭菌蛭石的塑料盆中!#M'^后种子即发芽&&C',将根瘤内生细菌接种在T i培养基上活化!然后转接在T i液体培养基中!!C c!&!"]-E=2)&振荡培养'C*!用无菌";(LT F\G溶液将菌体浓度调至&f&"C\A X-E P)&,将大豆幼苗移栽到蛭石里!并在大豆根附近-'#$&-浙江农业学报K第#$卷K第%期Copyright©博看网. All Rights Reserved.接种&"E P 根瘤内生细菌混悬液!&周浇&次g N 营养液和菌液,将植株置于白天!$M #"c %夜间&$M !"c %每天光照C *的温室中培养,培养'"^后收获,以不接种根瘤内生细菌为全空白对照&&('!每处理设#次重复,每天随机调换花盆位置,&;<K 数据处理用N_NN !!;"软件对数据进行方差分析!并用8V26F 2法进行多重比较(采用Z ]F ,*_F ^_]=>E C;";!软件统计分析相关数据和制图,!K结果与分析!;&K根瘤内生菌的筛选与鉴定从大豆根瘤中共分离到&%个菌株!经&<N ]8T O序列分析!有&"株为芽孢杆菌属"Q $"')N )(/#!#株为巨大普里斯特氏菌属"G &'*/#'$#!其余'株分别为肠杆菌属"M .#*&1S $"#*&#%克雷伯氏菌属"U )*S /'*))$#%不动杆菌属"!"'.*#1S $"#*&#和农杆菌属"!%&1S $"#*&'(C #"图&#,溶血试验结果显示!有'株细菌的菌落周围产生了溶血圈!判断这'株菌株具有溶血性,通过&<N ]8T O 鉴定最终确定了&"株内生细菌!其中芽孢杆菌属$株"编号N&M N$#!其余$株菌分别为G &'*/#'$属"N<#%M .#*&1S $"#*&属"N%#%U )*S N /'*))$属"NC #%!"'.*#1S $"#*&属"N(#和!%&1S $"#*&'N (C 属"N&"#,&"个菌株的生理生化特性如表&所示!N&%N!%N#%N$和N<具有水解淀粉能力!说明$株菌株均产生淀粉酶(N'%N%%NC %N(和N&"具有水解图;<基于&<N ]8T O 序列的内生细菌进化树=)1>;K_*3G H S W 2W +=6+]W W H B W 2^H ,*3+=65F 6+W ]=F 5F >W ^H 2&<N ]8T O>W JVW 26W >-$#$&-孙秀娟!等/大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及其对大豆植株的促生效应Copyright ©博看网. All Rights Reserved.表;<内生细菌的部分生理生化特性,80#;K_*3>=H G H S=6F G F2^5=H6*W E=6F G6*F]F6+W]=>+=6>H B W2? ^H,*3+=65F6+W]=F菌株编号N+]F=2 T H/淀粉水解试验N+F]6**3^]H G3>=>+W>+油脂水解试验9=G*3^]H G3>=>+W>+乳糖发酵试验P F6+H>WB W]E W2+F+=H2+W>+葡萄糖发酵试验Z G V6H>WB W]E W2+F+=H2+W>+N&b)b bN!b)b bN#b)b bN')b)bN$b)b)N<b)))N%)b b bNC)b b bN()b)bN&")b b))b*表示阳性!))*表示阴性,)b*=>,H>=+=`W!))*=>2W S F+=`W/油脂能力!说明细胞外存在脂肪酶(N&%N!%N#% N$%N%%NC和N&"具有分解乳糖的能力(N&%N!% N#%N'%N%%NC和N(具有分解葡萄糖的能力,!;!K菌株分泌激素和产铁载体的能力由图!?O可知!根瘤内生细菌均具有分泌:O O的能力!其中NC分泌量最高!为&'%;$$E S-P)&(N'%N%和N&"也具有较高的:O O分泌量!分别为'&;('E S-P)&%&"";"!E S-P)&和<";'!E S-P)&!且经过多次传代后产:O O特性稳定,通过铁载体活性测定筛选出<个菌株产生铁载体(其中!N#的铁载体活性最高!为%";$%L(N&%N!% N'%N<和NC的铁载体活性分别为&;C(L%$&;<CL%!&;!'L%'(;%&L和';C'L"图!?i#,由图!?\可知!Z O>分泌量最高的为N&"菌株!达#(;#'E S-P)&!其余菌株分泌量在&';#C M#!;C& E S-P)&,!;#K植物促生试验图#?OM图#?D显示!浸种%^后有$个菌株在稀释#"倍时大豆的根最长!分别是N&"$;<<% 6E#%N!"%;$$"6E#%N$"(;<%$6E#%NC"C;&#"6E#和N&""<;!!"6E#,由图#?A%图#?Z可知!有!个菌株在稀释!"倍时大豆的根最长!分别是N#"<;'%$6E#和N("$;C##6E#,有#个菌株在稀释&"倍时大豆的根最长!分别是N'"$;"## 6E#%N<"<;(##6E#和N%"%;#<%6E#"图#?Y%图#?:%图#?7#,综上所述!筛选得到的&"个菌株均柱上无相同小写字母表示差异显著"G k";"$#,下同,8F+F H2+*W5F]>E F]dW^.=+*H V++*W>F E W G H.W]6F>W G W++W]=2^=6F+W^>=S2=B=6F2+^=B B W]W26W>F+G k";"$/[*W>F E W F>5W G H./图@<供试菌株分泌:O O Z O>和铁载体的能力=)1>@KO5=G=+3H B+*W+W>+W^>+]F=2>+H>W6]W+W:O O S=55W]? W G G=2F2^>=^W]H,*H]W>可以促进大豆幼苗根系发育,通过盆栽试验!进一步确认植物的生长促进特性!结果如图'所示,接种&"个菌株的大豆株高%根长%地上部鲜重%地下部鲜重%地上部干重均显著高于对照组!接种N&%N<和NC的大豆植株株高比对照组分别高#!L%&(L%!'L!接种N$的大豆根长比对照组显著增加#(L!接种N#%N(和N&"的大豆植株地上部鲜重分别比对照组显著增加(CL%C&L%C<L!接种N!%N'%N%和N&"的大豆植株地下部鲜重分别比对照组显著增加&#"L%&$%L%&!<L%&$&L!接种N&%N#%N'%N$%N(和N&"的大豆植株地上部干重分别比对照组显著提高C$L%(CL%(#L%%%L%((L和&!!,除接种N&%N<%N%%NC%N(的大豆幼苗地下部干重与-<#$&-浙江农业学报K第#$卷K第%期Copyright©博看网. All Rights Reserved.对照无显著差异外!接种其他菌株的大豆地下部干重均显著大于对照组!其中!接种N'的大豆植株地下部干重比对照组显著提高&''L ,除接种N<%NC 菌株的大豆茎粗与对照组差异不显著外!接种其他菌株的大豆茎粗均显著大于对照组!其中!接种N#%N'%N&"的大豆植株茎粗与对照相比显著增加!CL %#&L %#"L ,综上!如图'?A 所示!与对照组相比!加入根瘤内生菌的大豆各项指标都有所提高!说明菌株对大豆具有促生效果,#K讨论根瘤中同时定居着很多与根瘤菌不同的内生菌!其中非共生细菌也生活于根瘤中!但不引起植物病害!即根瘤内生细菌&!"',目前!豆科植物有&C""多种!在豆科植物根瘤中常见的内生细菌有假单胞菌属"G /*(A1C 1.$/#%肠杆菌属%芽孢杆菌属%克雷伯氏菌属%农杆菌属!由于所有这些属的物种在土壤中都很常见!因此!内生细菌可以看成是根际细菌的一个亚种群&!&)!!',本研究分离的&"株菌包括芽孢杆菌属%巨大普里斯特氏菌属%克雷伯氏菌属%肠杆菌属%农杆菌属和不动杆菌属!均不具有溶血性,芽孢杆菌由于其优良的抗菌%对植物种子发芽与根系生长的促进作用!能提高作物产量!已成为中国种植业中使用最普遍抗菌剂之一&!#)!'',克雷伯氏菌分布于植株的根部和土壤中!在长期进化和系统发育过程中与植物建立了紧密的合作关系!对植物的生长与代谢起间接促进作用&!$',克雷伯氏菌能够定殖在玉米植株内!为内生固氮菌!对幼苗期玉米具有显著的促生长作用&!<'!本研究通过溶血试验证明克雷伯氏菌属具生物安全性,豆科植物根瘤内生菌在体外表现出不同的植幼苗生长图#个为&个处理!从左至右依次是\U %稀释&"倍%!"倍和#"倍,[*W +*]W W >W W ^G =2S S ]H .+*,G H +>F ]W H 2W +]W F +E W 2+!B ]H EG W B ++H ]=S *+F ]W \U !^=G V+W ^&"+=E W >!!"+=E W >F 2^#"+=E W >/图A<内生细菌对大豆种子的促生作用=)1>A KZ ]H .+*,]H E H +=2S W B B W 6+H B W 2^H ,*3+=65F 6+W ]=F H 2>H 35W F 2>W W ^-%#$&-孙秀娟!等/大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及其对大豆植株的促生效应Copyright ©博看网. All Rights Reserved.A!综合能力评价,A!D`F G VF+=H2H B6H E,]W*W2>=`W F5=G=+3/图B<菌株对大豆植株促生影响与综合能力评价=)1>B KD B B W6+H B W2^H,*3+=65F6+W]=F H2S]H.+*,]H E H+=H2H B>H35W F2,G F2+>F2^6H E,]W*W2>=`W F5=G=+3W`F G VF+=H2物生长促进机制!包括植物激素的产生!如吲哚乙酸%固氮和磷酸盐溶解&!%',本研究获得的所有菌株都能够以色氨酸为前体合成:O O!同时分泌Z O>!并且超过一半的菌株能产生铁载体!对大豆植株的生长有不同程度的促进效果,赵晓妍等&!C'从大豆叶片中分离得到产:O O的内生菌菌株@8Q&'!该菌株可以促进小麦幼苗的生长,作为植物生命进程的开始!种子萌发在农业上很重要,用本试验筛选的内生细菌浸种处理大豆种子!可以明显促进大豆根的生长!说明筛选的菌株对大豆幼苗生长有较好的促进效果!但是不同浓度菌液和不同菌种对大豆种子的促生作用效果不同!有的菌液浓度反而抑制种子根的伸长!出现这种情况的原因可能是不同浓度内生细菌的代谢产物量不一样或者不同细菌的生长规律%特性不同!需进一步研究,内生菌与其宿主植物这种互利共生的关系!是在长期的协同进化过程中形成的!通过内生菌自身代谢产物来促进植物生长&!(',所筛选的&"株菌株均对大豆植株的株高%根长%茎粗和地上-C#$&-浙江农业学报K第#$卷K第%期Copyright©博看网. All Rights Reserved.地下部生物量具有较强的促生作用!可能是与菌株分泌:O O和Z O>等有密切关系,有研究表明!芽孢杆菌U\?&和g8&!?!具有产生:O O的能力!并且对大豆的株高和生物量有显著促生效果&#"'!这与本研究结果一致,从大豆中分离出的'"株芽孢杆菌中!巨大芽孢杆菌NT&"D&能够使豆芽长度提高'&L&#&',衡楠楠等&#!'将从大豆根瘤中分离的内生菌株N\O X>C接种大豆植株!不仅植株的株高%鲜重等指标显著提高!而且大豆植株产量比不接种也增产了!&;'L M!(;%L,丁玮&##'用(株泡桐根瘤内生细菌接种泡桐幼苗!结果显示!其中地下生长量平均提高&(;%L%苗高生长量平均提高!#;'L,e*F2S 等&#''分离鉴定的&种内生细菌高地芽孢杆菌对不同植物的生长有促进作用,何建清等&#$'筛选出的菌株Na&"?<能显著促进黑青稞株高%根长等的生长!可作为开发和推广黑青稞专用生物肥料的优良菌种,本研究结果表明!从大豆根瘤中分离到的内生细菌在体外具有植物生长促进特性!是一种很好的微生物肥料候选材料,综上所述!本文从大豆根瘤中筛选了&%株根瘤内生细菌!通过&<N]8T O和溶血试验最终确定了&"株根瘤内生细菌!它们均产生:O O和Z O>!有<株产生铁载体(这&"株菌株对大豆的萌发!以及大豆植株的株高%根长等有促进作用,参考文献 H#"#*#+$#&&&'K杨红旗!郝仰坤/我国大豆产业回顾%现状与发展对策&7'/广东农业科学!!"&"!#%"&#$&CC)&(&/@O T ZYn!Y O9@U/Y=>+H]=6F G]W`=W.!6V]]W2+>=+VF+=H2F2^^W`W G H,E W2+6H V2+W]E W F>V]WH B\*=2W>W>H35W F2&7'/H($.%A1.%!%&'"()#(&$)4"'*."*/!!"&"!#%"&#$&CC)&(&/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&!'K黄国东!宋清晖!王晓慧!等/含枯草芽孢杆菌肥料对大豆叶片光合作用及土壤酶活性的影响&7'/土壤与作物!!"!&!&""&#$(()&"%/Y X O T ZZ8!N9T ZnY!R O T ZQY!W+F G/D B B W6+>H B B W]?+=G=0W]>6H2+F=2=2S Q$"'))(//(S#')'/H2,*H+H>32+*W>=>H B>H35W F2G W F`W>F2^>H=G W203E W F6+=`=+=W>&7'/41')/$.A9&1O/!!"!&!&""&#$(()&"%/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&#'K柏琼芝!肖石江!王晓瑞!等/化肥减量配施生物有机肥对秋马铃薯产量的影响&7'/土壤与作物!!"&(!C"!#$&$C)&<$/i O:ne!Q:O9N7!R O T ZQa!W+F G/D B B W6+H B]W^V6W^6*W E=6F G B W]+=G=0W],G V>5=H G H S=6F G B W]+=G=0W]H2F V+VE2,H+F+H3=W G^&7'/41')/$.A9&1O/!!"&(!C"!#$&$C)&<$/"=2\*=?2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&''K刘江苇!刘颖!徐婷!等/水稻内生菌研究进展及展望&7'/生命科学研究!!"!&!!$"##$!#!)!#(/P:X7R!P:X@!Q X[!W+F G/O^`F26W>F2^,]H>,W6+>H B]=6W W2^H,*3+W>&7'/V'2*4"'*."*J*/*$&",!!"!&!!$"##$!#!)!#(/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&$'Kj O a8Y O a O7X P ON!NU eO!U a:NY T O_a O NO8j X a X U9T?8ON N!W+F G/_G F2+S]H.+*,]H E H+=2S W2^H,*3+W>F2^+*W=]=2+W]?F6+=H2.=+*,G F2+>+H F G G W`=F+W F5=H+=6>+]W>>&7'/9(&&*.#Q'1#*",N.1)1%8!!"&%!<"##$!$!)!<#/&<'K_D:QO!a O g v a D e?i O Y D T Og Y!j D P w e n X D eD!W+F G/i F6+W]=F G F>>H6=F+=H2>.=+*G W S VE W>&7'/9&'#'"$)J*7'*R/'.G)$.#4"'*."*/!!"&$!#'"&-!-##$&%)'!/&%'Ke Y O9PA!Q X@7!NX Ta!W+F G/:^W2+=B=6F+=H2F2^6*F]F6?+W]=0F+=H2H B+*W W2^H,*3+=6,G F2+S]H.+*,]H E,+W]Q$"'))(/9*N&*(/>+]F=2E J!#=>H G F+W^B]H E41O,1&$O G H,W6V]H=^W>]H H+2H^?VG W>&7'/Q&$:')'$.L1(&.$)123'"&1S'1)1%8!!"&&!'!"!#$$<%)$%$/&C'Ke Y O9PA!8D T ZeN!@O T ZR n!W+F G/8=`W]>W]*=0H5=FF>>H6=F+W^.=+*41O,1&$$)1O*"(&1'A*/S]H.2=2^=B B W]W2+]W S=H2>H B P H W>>_G F+W F V=2\*=2F&7'/48/#*C$#'"$.A!O O)'*A3'"&1S'N1)1%8!!"&"!##"C#$'<C)'%%/&('K赵龙飞/我国大豆根瘤内生菌资源多样性研究&7'/广东农业科学!!"&'!'&"(#$&$)&(/e Y O9P A/a W>W F]6*H2]W>H V]6W^=`W]>=+3H B>H35W F2&H)8"'.*C$5"P/#g W]]'2H^VG W W2^H,*3+W>=2\*=2F&7'/H($.%A1.%!%&'"()#(&$)4"'*."*/!!"&'!'&"(#$&$)&(/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&&"'K钟宇舟!余秀梅!陈强!等/四川盆地大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及促生效果&7'/应用与环境生物学报!!"&%!!#"&#$'<)$#/e Y9T Z@e!@XQg!\Y D Tn!W+F G/:>H G F+=H2!=^W2+=B=?6F+=H2F2^,G F2+S]H.+*,]H E H+=H2F5=G=+3W`F G VF+=H2H B+*W W2?^H,*3+=65F6+W]=F=>H G F+W^B]H E>H35W F2]H H+2H^VG W=2N=6*VF2i F>=2&7'/9,'.*/*L1(&.$)12!O O)'*A$.A M.7'&1.C*.#$)Q'N1)1%8!!"&%!!#"&#$'<)$#/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5?>+]F6+#&&&'K赵龙飞!徐亚军!曹冬建!等/溶磷性大豆根瘤内生菌的筛选%抗性及系统发育和促生&7'/生态学报!!"&$!#$"&##$''!$)''#$/e Y O9P A!Q X@7!\O987!W+F G/N6]W W2=2S!]W>=>+F26W!,*3G H S W23F2^S]H.+*,]H E H+=2SH B,*H>,*H]V>>H G V5=G=0=2S5F6+W]=F=>H G F+W^B]H E>H35W F2]H H+2H^VG W>&7'/!"#$M"1)1%'N"$4'.'"$!!"&$!#$"&##$''!$)''#$/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&&!'KA D a\Y:\Y:T![9X U O i a:R!i9X P O a D NN g!W+F G/:?>H G F+=H2!=^W2+=B=6F+=H2F2^,G F2+S]H.+*,]H E H+=H2F5=G=+3H BW2^H,*3+=65F6+W]=F F>>H6=F+W^.=+*G V,=2W]H H+2H^VG W S]H.2-(#$&-孙秀娟!等/大豆根瘤内生细菌的分离鉴定及其对大豆植株的促生效应Copyright©博看网. All Rights Reserved.=2[V2=>=F2>H=G&7'/!&",'7*/123'"&1S'1)1%8!!"&(!!"&"&"#$&###)&#'(/&&#'K黄秀梨!辛明秀/微生物学实验指导&g'/!版/北京$高等教育出版社!!""C/&&''K李培根!要雅倩!宋吉祥!等/马铃薯根际产:O O芽孢杆菌的分离鉴定及促生效果研究&7'/生物技术通报!!"!"!#<"(#$&"()&&</P:_Z!@O9@n!N9T Z7Q!W+F G/:>H G F+=H2F2^=^W2+=B=?6F+=H2H B:O O?,]H^V6=2S Q$"'))(/>,H2,H+F+H]*=0H>,*W]W F2^=+>S]H.+*?,]H E H+=2S W B B W6+&7'/Q'1#*",.1)1%8Q())*#'.!!"!"!#<"(#$&"()&&</"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5?>+]F6+#&&$'K徐伟慧!吕智航!史一然!等/西瓜复合根际促生菌剂构建与促生效应研究&7'/浙江农业学报!!"&C!#""$#$%%C)%C</Q XR Y!P@Xe Y!NY:@a!W+F G/D>+F5G=>*E W2+H B6H E?,G W4S]H.+*?,]H E H+=2S]*=0H5F6+W]=FB H].F+W]E W G H2F2^,]H?E H+=2S W B B W6+H2.F+W]E W G H2]H H+>&7'/!"#$!%&'"()#(&$*+,*N-'$.%*./'/!!"&C!#""$#$%%C)%C</"=2\*=2W>W.=+*D2S?G=>*F5>+]F6+#&&<'K徐伟慧!刘泽平!符春敏!等/根际芽孢杆菌对水稻根系的促生效应&7'/河南农业科学!!"&C!'%"'#$$()<#/Q XR Y!P:Xe_!A X\g!W+F G/_]H E H+=2S W B B W6+H B Q$N"'))(/]*=0H5F6+W]=F H2]=6W]H H+&7'/L1(&.$)12[*.$.!%&'N"()#(&$)4"'*."*/!!"&C!'%"'#$$()<#/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&&%'K陈峥!刘波!邓文琼!等/&'株芽孢杆菌菌株的分子鉴定及其促生机理分析&7'/热带作物学报!!"!&!'!"##$%C()%((/\Y D Te!P:Xi!8D T ZR n!W+F G/g H G W6VG F]=^W2+=B=6F?+=H2F2^S]H.+*,]H E H+=2S E W6*F2=>E>H B&'Q$"'))(/>+]F=2>&7'/9,'.*/*L1(&.$)12D&1O'"$)9&1O/!!"!&!'!"##$%C()%((/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&&C'K薛晓昀!冯瑞华!关大伟!等/大豆根瘤菌与促生菌复合系筛选及机理研究&7'/大豆科学!!"&&!#""'#$<&#)<!"/KQ X DQ@!A D T ZaY!Z X O T8R!W+F G/N6]W W2=2S F2^F?2F G3>=>B H]W B B=6=W2+6H?=2H6VG F+=H2>3>+W E H B>H35W F2]*=0H5=FF2^,G F2+S]H.+*?,]H E H+=2S]*=0H5F6+W]=F&7'/418S*$.4"'N*."*!!"&&!#""'#$<&#)<!"/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&&('K李晶!蔡少丽!林金新/高效紫云英根瘤菌的选育&7'/南方农业!!"&C!&!"&C#$&C')&C$/P:7!\O:N P!P:T7Q/i]W W^=2S H B]*=0H5=F=>H G F+W^B]H E\*=2W>W E=G d`W+6*.=+**=S*W B B=6=W263&7'/41(#,9,'.$!%N&'"()#(&*!!"&C!&!"&C#$&C')&C$/"=2\*=2W>W#&!"'K邱并生/根瘤内生细菌&7'/微生物学通报!!"&#!'""##$$''/n:XiN/T H^VG W W2^H,*3+=65F6+W]=F&7'/3'"&1S'1)1%89,'N.$!!"&#!'""##$$''/"=2\*=2W>W#&!&'K张淑婷!周利华!赵文卓/植物内生细菌对植物健康的作用&7'/植物医生!!"!"!##"&#$<)&&/e Y O T ZN[!e Y9XP Y!e Y O9R e/[*W]H G W H B,G F2+W2?^H,*3+W>=2,G F2+*W F G+*&7'/G)$.#@1"#1&!!"!"!##"&#$<)&&/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&!!'K刘杰!汪恩涛!陈文新/豆科植物根瘤内生细菌的发现及其研究进展&7'/微生物学报!!"&&!$&"C#$&""&)&""</KP:X7!R O T Z D[!\Y D T R Q/8=>6H`W]3F2^]W>W F]6*,]H S]W>>H B W2^H,*3+=65F6+W]=F=2+*W]H H+2H^VG W>H B G W S?VE W>$F]W`=W.&7'/!"#$3'"&1S'1)1%'"$4'.'"$!!"&&!$&"C#$&""&)&""</"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&!#'K张翠绵!贾楠!马佳!等/番茄根际多功能益生芽孢杆菌的筛选与鉴定&7'/河北农业科学!!"&(!!#"'#$'%)$!/Ke Y O T Z\g!7:OT!g O7!W+F G/N6]W W2=2S F2^=^W2+=B=6F?+=H2H B E VG+=B V26+=H2F G5W2W B=6=F G Q$"'))(/=2+H E F+H]*=0H?>,*W]W>H=G&7'/L1(&.$)12[*S*'!%&'"()#(&$)4"'*."*/!!"&(!!#"'#$'%)$!/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&!''Kg:P7O U9j:\8!g O a:T U9j:\7![O g:T8x:\Z!W+F G/D B B W6+H B,G F2+S]H.+*,]HE H+=2S Q$"'))(/>,,/H2S W]E=2F+=H2F2^>W W^G=2S S]H.+*H B>H35W F2&7'/V*%(C*J*/*$&",N$.0.N#*&.$#'1.$)L1(&.$)!!"!!!'$"'#$'C%)'(&/&!$'K李梦娇!彭晟!徐绍忠!等/克雷伯氏菌在农业与环境治理上的应用&7'/生物技术进展!!"&'!'"<#$'&$)'!"/P:g7!_D T ZN!Q XN e!W+F G/O,,G=6F+=H2H B U)*S/'*))$>,,/=2F S]=6VG+V]W F2^W2`=]H2E W2+F G E F2F S W E W2+&7'/9(&N&*.#Q'1#*",.1)1%8!!"&'!'"<#$'&$)'!"/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&!<'K韩梅!罗培宇!肖亦农!等/玉米内生固氮菌的分离鉴定及其促生长作用研究&7'/沈阳农业大学学报!!"&"!'&"&#$(')(%/Y O Tg!P X9_@!Q:O9@T!W+F G/:>H G F+=H2H B W2^H,*3+?=6T!?B=4=2S5F6+W]=F H B6H]2]=6W F2^+*W=]B V26+=H2B H],]H E H?+=2S S]H.+*&7'/L1(&.$)124,*.8$.%!%&'"()#(&$)6.'7*&/'#8!!"&"!'&"&#$(')(%/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&!%'KZ O a\v O?A a O:P D_!\O a a9P!a9i P D89g!W+F G/J,'N :1S'(C,]H E H+W>2H2?G W S VE W>S]H.+*F2^JVF G=+3=2>W`W]F G,]H^V6+=H2>+W,>$+H.F]^>F5=H B W]+=G=0F+=H2H B W^=5G W]F.`W S W?+F5G W>*W F G+*3B H]*VE F2>&7'/G V14?.*!!"&!!%"$#$W#C&!!/K&!C'K赵晓妍!曹越!董芮萌!等/一株野生大豆内生细菌@8Q&'菌株的分离%鉴定及促生效应研究&7'/大豆科学!!"!&!'""!#$!!')!#&/e Y O9Q@!\O9@!89T Zag!W+F G/:>H G F+=H2!=^W2+=B=?6F+=H2F2^S]H.+*,]H E H+=2S W B B W6+H B F2W2^H,*3+=65F6+W]=F@8Q&'=2.=G^>H35W F2&7'/418S*$.4"'*."*!!"!&!'""!#$!!')!#&/"=2\*=2W>W.=+*D2S G=>*F5>+]F6+#&!('K丁文珺!王珊珊!任婧祺!等/植物内生菌研究进展&7'/生物技术进展!!"&$!$"<#$'!$)'!C/-"'$&-浙江农业学报K第#$卷K第%期Copyright©博看网. 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黑龙江省北部地区（孙吴）大豆根瘤菌的使用
Z i x u n t a i1孙吴县基本情况与大豆生产现状1.1基本情况：孙吴县地处小兴安岭北麓、黑河市中部，与俄罗斯康斯坦丁诺夫卡区隔黑龙江相望，总面积4319平方公里，辖区内总人口10.5万人，其中农业人口5.5万人。
全县耕地176万亩，农民人均耕地32亩，是黑龙江省重要的大豆生产区。
孙吴县属大陆性季风气候，年平均气温－1.5℃，有效积温1900℃－2300℃，年均降水量450－550毫米，无霜期90－125天，年日照2450－2800小时。
耕地以暗棕壤、黑土、草甸土为主，有机质含量在2%—6%，雨热同季。
1.2大豆生产现状：1985年至2010年，面积保持在100万亩以上。
2009年达到最高138.7万亩，占总播种面积的80%。
2011年面积开始下降。
2013年达到最低72.8万亩，占总播种面积的41.4%。
2014年播种79.9万亩,2015年播种89.9万亩，开始恢复性增长。
种植品种有黑河38号、黑河46号、金源55、黑河52号、黑河43号、黑河45、黑河50号、黑河53号、华疆4号、黑河49号、黑河44、黑河49、华疆2号等。
大豆单产平均130公斤/亩（中国大豆平均亩产115公斤，世界平均亩产为170公斤）。
大豆施肥以尿素、磷酸二胺、含氯化钾的钾肥为主，施肥水平在250-275公斤/公顷，其中尿素50公斤，磷酸二胺150公斤，钾肥50-75公斤。
2大豆根瘤菌在国内外的使用根瘤菌剂在巴西、阿根廷、加拿大、美国等主要大豆种植国的应用十分普遍，接种面积占大豆播种面积的50%--90%。
大豆根瘤菌在中国的使用始于建国初期，后来由于化学肥料使用，没有在生产上大面积铺开。
进入21世纪后，大豆根瘤菌再次引起了大豆生产者和科研人员的重视。
目前全国有两家大型的根瘤菌生产厂家，秦皇岛领先科技和哈尔滨华龙科技。
为了推进大豆根瘤菌的使用，国家和地方政府都出台了相关政策支持。
目前黑龙江省已把大豆根瘤菌剂拌种技术确定为大豆标准化种植的重点技术。
大豆根瘤菌剂应用效果试验
试 验采 用 随机 区组排 列 ， ３次 重复 ， 小 区面积 每 １ ． ｍ ５行 区 ， 长 ６ ９５ ， 行 ｍ。供 试大 豆 品 种 为垦 农 １ ８ 号 ， 品种 由种 子公 司统 一供 种 ， 衣 剂包 衣 。５月 该 种 １ ９日播种 ， 深 ５ｍ， 播 ｃ 播后 镇 压 ， 顷 保苗 ３ 公 Ｏ万 株 。 供 试菌 剂 由秦皇 岛领 先科 技发 展有 限公 司生产 。
Hale Waihona Puke 大豆根瘤菌剂 应用效 果试验
刘新 军 。 许庆 峰 。 国忠 褚
（ 龙 江北 大荒 农 业 股 份 有 限公 司 江 滨 分 公 司 ， 龙 江 萝 北 １４ ４ ） 黑 黑 ５ ２ ３
由于多 年化肥 的连续作 用 ， 尤其 是氮肥 的施 用 ， 使 水体 受到 污染 ， 成 了土 壤 板 结 。大 豆 根 瘤 菌剂 造 作 为一种 土 壤微 生物 菌肥 ， 可减 少氮 肥施用 量 ， 能够 改 善土壤 微 生态 环 境 ， 于 土 壤 结 构改 良。江滨 分 利 公 司生产 部进 行 了 大 豆根 瘤 菌 剂 应用 效 果 试 验 ， 现
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现 代 化 农 业 ‘ ２ ０ 年 第 ７ （ 第 ３ ４期 ） ０６ 期 总 ２
Ｃ ＡＲＢ一 ＯＭ 一 其 有 效 态形 态［ ］ 在 土 壤 中是 植 、 是 ２ ， 。 物 吸 收利用 的有 效形 态 。土 壤 Ｆ 、 、 ｕ Ｚ ｅ Ｍｎ Ｃ 、 ｎ有效 态与各 形 态 相 关 分 析 表 明 ， 壤 Ｅ 土 Ｘ—Ｆ 、 Ｍ —Ｆ ｅＯ ｅ
曲成 民 李 子 波
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水稻应用圣丹生物肥效果试验
曲成 民 ． 李子 波
富思德大豆根瘤菌剂应用效果
茎粗影 响 较大 。 ２ １ ３ 大 豆 不 同 生 育 时 期 的 地 上 部 干 重 、 下部 千 ． ． 地
重 比 较
１ 试 验 材 料 与 方 法
试验 于 ２ １ ０ ０年设 在七 星分 公 司 第一 管 理 区 ３ ６
从 试 验 结果 可 知 ， 豆 出苗 至 分 枝期 处 理 ｌ与 大 对照地 上 部干重 无 明 显 差异 ， 花 期 时大 豆 地 上 部 开 干重 高于 对照 ， 这说 明大 豆 根 瘤 菌 剂对 大 豆 地 部
作业 站 ４号地 ， 壤类 型为 白浆 土 ， 茬 为玉米 。土 土 前
肥料 利用 率 ， 善作 物 品质 。该 试 验 旨在通 过 对 富 改 思 德大 豆根 瘤菌 剂 的 实施 ， 到 高产 、 达 高效 的 目的。
探讨 富思 德 大豆根 瘤 菌剂在 大 豆上 的应用 效果 。
时没有 差 异 ， 出苗 期 以后 ， 直 到 成 熟 期 ， 瘤 菌 在 一 根
重 ｇ ｋ ／ｍ ｇห้องสมุดไป่ตู้
１ ．１ ６ ｌ ．７ ５ ３１ ４ ．３ ７ ３ ０３ ０ ．０
２ 试 验 结 果 与分 析
２ １ 生 物 性 状 分 析 ．
２ １ １ 大 豆 不 同生 育 时期 根 瘤 数 量 ． ．
从 试 验结果 可 知 （ 表 １ ， 理 １的结 荚 层 数 、 见 ）处 单株 荚数 、 单株 实粒 数 、 百粒 重 分 别 高 于 对 照 ， 瘪 空
尿 素 ６ ｋ 、 酸 二铵 ２ ５ ｇ 氯 化钾 ９ ｋ ； 理 ２为 ０ ｇ磷 ２ｋ 、 ０ｇ处 对 照 ， 公 顷施尿 素 ６ ｋ 、 酸 二铵 ２ ５ ｇ 氯 化 钾 每 ０ｇ磷 ２ｋ 、