研究生酶学1
为什么酶能有效地降低反应的活化能呢？这是因为 （1）酶与底物的邻近效应（Proximity）和定向效应（Orientation）。邻近效应是指A和B两个底物分子结合在酶分子的活性部位上，使得反应基团相互靠近，从而降低了进入过渡态所需的能量，这种效应称为邻近效应。邻近效应大大增加了反应物的有效浓度。底物有效浓度大，自然反应速度加快。定向效应是指当底物结合在酶活性中心时，反应基团沿一定的方向相互靠近，使反应基团的分子轨道发生交叉，进入过渡态。定向效应给反应基团分子轨道交叉提供了良好的条件。这是在溶液中由于分子随机接触而进入过渡态所不能比拟的。 （2）酶与底物相互诱导的扭曲变形（strain或distortion）以及构象变化。我们知道过渡态分子是不稳定的，其中某些化学键是处于伸展或变形之中。反应物要达到过渡态的化学键状态是需要能量的。酶活性部位与底物结合，可使底物的某些敏感键发生变形，从而使底物分子更接近于过渡态。底物分子的变形可能是发生在底物与酶结合时，为了很好地契合，底物的构象有了小的变化，也可能是由于底物诱导酶改变构象之后随之而得的一个结果。总之，酶活性部位的某些基团或离子，使底物敏感键的某些基团的电子云发生改变，即底物发生构象改变，形成互相契合的酶底物复合物。 （3）广义的酸碱催化，共价催化以及酶活性中心微环境的影响。酶活性中具有相互的催化基团，这些基团可以参与催化反应，其具体的催化机理后面章节会专门讲到的。此外，酶活性中心的微环境有利于特定的催化翻译能够进行。 在一个具体的酶催化反应中，上述因素往往是同时起作用，从而表现出酶催化功能的高效性，这是一般化学催化剂所无法比拟的。 酶特异性的类型 一般来讲，一种物质能否成为某种酶的底物，必须具备两个条件，一是分子上具有被酶作用的化学键，二是该分子应具有一个或多个结合基团与酶活性中心结合，并使其敏感键对准酶的催化基团。 一般来说，酶的底物特异性一般可分为下列类型 （A）反应特异性（reaction specificity）：指酶只催化某一特定类型的反应，如氧化作用（oxidation），转氨作用（transamination）等。 （B）底物特异性（substrate specificity）：指酶通常只选择性地与一组化学上相似的分子中一种或一对分子发生有效地结合，如谷氨酸脱氨酶与氨基酸中谷氨酸有效地结合，麦芽糖酶只作用于麦芽糖，脲酶只作用于尿素。后两者又称绝对专一性结合（absolute specificity） （C）立体化学特异性（stereochemical specificity或stereospecificity） 如果底物分子存在多种立体异构体（stereoisomers），它们中仅一种立体构性分子能有效地与酶活性中心结合。如精氨酸酶只水解L-Arg，而不作用于D-Arg，乳酸脱氨酶只作用于L-乳酸。葡萄糖代谢中的酶仅作用于D-葡萄糖残基分子。反丁烯乙酸酶只作用于反丁烯二酸，而不作用于顺反丁烯二酸等。反应特异性通常是由于酶活性位点内特异催化基团的特殊性质决定的。底物特异性则是由酶活性位点内的接触残基和结合基团的作用决定的。而立体特异性则需要酶活性部位的基团与底物分子在各个位置上相互作用。 生命现象表现了其内部反应过程的有序性，这种有序性是受多方面因素调节和控制的。而酶活性的调控又是代谢调节作用的主要方式。酶活性调节主要有7种方式： 1）、酶浓度调节 酶浓度调节主要表现在两个方面：一是诱导或抑制酶的合成，另一是调节酶的降解。例如，β-半乳糖苷酶的合成，平时是处于被阻遏状态，当乳糖存在时，半乳糖苷酶基因活化，诱导酶的合成。另一个方面各种酶在细胞内都有一定的寿命，最后都能被蛋白酶降解掉，酶的降解也是对酶作用的一种调节方式。 2）、信号诱导调节 当外界信号分子与细胞膜上的受体作用后，可调节细胞内的酶蛋白的合成。比如乳糖合成酶有两个亚基：催化亚基和修饰亚基，催化亚基本身不能合成乳糖，但当它与修饰亚基结合后，则可催化半乳糖和葡萄糖反应生成乳糖。修饰亚基的水平则是由激素控制的妊娠时，修饰亚基在乳腺中生成，分娩时，由于激素水平急剧地变化，修饰亚基大量地合成，与催化亚基结合后，即合成大量的乳糖。 3）、酶活力的调节 细胞内新合成的新生酶许多是无活性的前体（即酶原）形式存在。一旦生理需要，才通过限制性水解作用使酶原转变为具有生物活性的酶。这个过程也称为酶原激活。例如胰蛋白酶原在小肠里被其它蛋白水解酶作用，切除一个六肽后，活化成胰蛋白酶。 4）、共价修饰调节 共价修饰调节本身也是通过酶催化来进行的，即在一个酶分子上，共价地引入一个基团从而改变它的活性，引入的基团又可能被另一个酶催化除去。例如磷酸化酶的磷酸化和去磷酸化；大肠杆菌谷氨酸胺合成酶的腺苷酸化和去腺苷酸化都是以这种方式来调节它们的活性。 5）、抑制剂的作用 酶活性可受到大分子或小分子抑制剂的抑制，从而影响酶活力。如抑肽酶可抑制胰蛋白酶的活性，2，3-二磷酸甘油可抑制磷酸变位酶的活性。 6）、反馈作用 在许多合成反应系列中，催化第一步反应的酶活性往往可被终端产物抑制。这种对自我合成的抑制称为反馈抑制。这在生物合成代谢中是常见的现象。例如，异亮氨酸可抑制异亮氨酸合成代谢通路中的第一个酶-苏氨酸脱氢酶的活性。当异亮氨酸的浓度降低到一定的水平时，抑制作用解除，合成反应又重新开始。 7）、金属离子的调节作用 一些酶需要K+活化，而Na+则不能活化，有时还有抑制作用。例如L-高丝氨酸脱氢酶，丙酮酸激酶，天门冬氨酸激酶，丙酮酸羧化酶。 另一些酶则需要Na+活化，K+起抑制作用。如蔗糖酶。 酶蛋白有三种组成形式 单体酶（monomeric enzyme）一般是由一条多肽链组成，但有的单体酶则是多条肽链组成，如胰凝乳蛋白酶是由三条肽链组成，肽链间由二硫键相连构成一个整体。这类含有几条肽链的单体酶往往是由一条无活性的前体多肽链（酶原）经活化断裂后形成的。 寡聚酶（oligomeric enzyme）是由两个或两个以上亚基组成的酶，这些亚基可以是相同的，也可以是不同的。 多酶复合体（multienzyme complex）是由两个或两个以上的酶，靠非共价键连接在一起而成。其中每一个酶催化一个反应，所有的反应依次连接，构成一个代谢途径或代谢途径的一部分。由于这一串的反应是在一个高度有序的多酶复合体内完成，所以反应效率非常高。 多酶融合体（multienzyme conjugate）是指一条多肽链上含有两种或两种以上催化活性的酶。这往往是基因融合的产物。它们可以是单体酶的形式，也可以是寡聚酶或多酶复合体的形式存在。 所有的酶被分为六大类（1）氧化还原酶类，（2）转移酶类，（3）水解酶类，（4）裂合酶类，（5）异构酶类，（6）连接酶类。 活性部位的含义 从结构上看，生物大分子内与酶催化活力直接相关的一个小区域我们称之为活性部位或活性中心。它是酶分子中与底物结合并催化反应的场所。活性部位是由酶分子中极少数的几个氨基酸残基的侧链基团组成。它们在一级结构上的位置可能相距很近，可能分别位于同一肽链或不同肽链的不同位置。由于肽链的折叠和盘转，使得它们在空间位置上很接近，构成一个特定的活性区域结构。 就功能而言，活性中心的几个氨基酸侧链基团又可分为底物（包括辅酶，金属离子等）结合部位和催化部位。底物结合部位是与底物特异性结合的有关部位，因此也叫做特异性决定部位。催化部位直接参与催化，底物的敏感键在此部位被切断或形成新键，并生成产物。底物结合部位和催化部位之分并不是绝对的，有的基团兼有结合底物和催化底物的功能。 催化部位和底物结合部位都是活性部位的组成部分，但两者的功能有所不同。 催化部位是由催化反应中直接参与电子转移的氨基酸残基组成，一般来讲，没有辅酶的酶蛋白的催化部位，仅涉及某几个特定的氨基酸残基侧链基团。而有辅酶的酶，由于辅酶直接参与电子转移。当然与辅酶结合的酶蛋白的特定氨基酸残基也是不可缺少的。另外，有些酶含有某些金属，这些金属与催化反应直接相关。而这些金属都是通过与酶蛋白特定的氨基酸侧链相互作用后，与底物之间进行电子转移。不管那种情况，酶的催化部位总是要涉及几个特定的氨基酸残基的侧链基团的。 底物结合部位 每种酶都有自己独特的专一性。只有与酶活性中心结构相适应的底物分子才能被酶结合。（适应是多方面的，如分子大小、形态、电荷）。应该说底物专一性主要是由底物结合部位决定的。但有些催化基团也参与底物的结合。酶与底物的特异结合是多点结合，需要几个或更多的氨基酸残基参加（可以是残基侧链，也可以是主链骨架），而且要求这些残基在三维空间中的正确排布。如果正确的位置受到干扰或破坏，不仅丧失识别底物和非底物的能力，底物不能正确地结合在活性中心。由此导致酶活性降低，乃至完全失活。 催化部位与底物结合部位的关系 虽然从功能上讲可以把活性部位分为催化部位和底物结合部位，但这两个部位并不是各自独立存在的，而是相互关联的。作为一个酶来讲。底物的结合部位的作用，不单单是识别，固定底物分子，而且要求底物处于被催化的最优位置。构成底物结合部位的氨基酸残基的空间位置，不但要适合底物的结合，同时也要求适合于催化底物反应。 别构部位（Allosteric site） 许多酶除了活性部位之外，还有所谓的别构部位。一般讲来别构部位是独立于活性部位之外的另一个别构配体结合部位。别构配体与酶底物毫无共同之处。当一个别构配体分子与配体部位结合后，会引起酶分子构象上的变化，从而导致活性部位构象的改变。这种改变可能增加催化能力，也可能降低催化能力。前者称为正协同作用，后者称为负协同作用。与活性部位的底物结合不同，别构配体与别构部位结合后，配体本身并不发生任何化学变化，只是间接地影响酶活力。 确定酶活性部位的研究方法 化学修饰法 酶分子中可以被修饰的基团很多，凡是可解离的或带有极性的侧链基团如羟基、巯基、咪唑基、氨基、羧基等都是修饰的对象。在化学修饰法中，常常使用酶失活的特异性来确定活性基团。此法是以竞争性抑制保护酶活性，因为抑制剂结合的部位是活性部位，所以在竞争性抑制剂存在下，共同标记使酶失活的程度就会远远底于无抑制剂存在时的情况。 （1）使用非特异性试剂对特殊基团的标记 如酶的活性中心含有活性部位以外没有的氨基酸残基时，则可使用一般非特异性试剂（即不能区分活性部位内和外的基团的试剂）进行化学修饰。 （2）差示标记法 这类方法是非特异性试剂标记法的发展。此法主要是利用竞争性抑制作
一株高产低温纤维素酶南极细菌的筛选、鉴定及酶学性质初步研究
５［ （Ｆ２０２ ｓｕｏｌｒｍ ｎｓ ｉｅ ８ － Ａ ５９６） ｅｄａｅ ｏａ ｔａ ＂ Ｐ ｔｏ ｃｒ
统 发 育 分 析 采 用 Ｍｅ ａ． ｇ ３ １软 件 的邻 接 法 （ ｉｈ ｏ— Ｎｅｇ ｂ ｒ
ｊｉｉｇｍｅｈ ｄ 进 行 。 ｏｎｎ ｔ ｏ ） １ ５ 菌 株 产 酶 条 件 的 研 究 ．
１ ４ 菌 株 的 鉴 定 ．
将南 极 嗜冷菌 Ｎ ６ Ｊ ４的 １ Ｓｒ ＮＡ 的 Ｐ Ｒ克 隆子 ６ Ｄ Ｃ 进行 测序 ， 获得 长度 为 １ ９ ｐ的 １ Ｓ ｒ ＮＡ 序列 ， ３ ０ｂ ６ Ｄ 将
Ｄ ＮＡ 模板 的制 备［ ： ５ Ｌ菌体 培养液 加入 到 ３将 Ｏ ］ １ ０肚 ０ Ｌ预冷 的蒸 馏水 中 ， 冰 上放 置 １ｈ以上 或 者 ３ 在
酶 液 ， 别 在 ０ ｏ 、０ｏ ２ ３ 分 １ Ｃ Ｃ、 ０ｏ ０℃ 、 ０℃ 、０ ℃ 及 Ｃ、 ４ ５
： ：＝ ： ：＝ 二二 ＝
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（Ｂ ｏ３ ９ 翻出 ｆ Ａ ０ ０ ８） 删
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图 １ Ｎ６ Ｊ ４系 统 发 育 树
Ｆ ｇ １ Ｐ ｙｏ ｅ ｅｉ ｒ ｅ ｏ ｔ ａｎ Ｎ ６ ｉ． ｈ ｌ ｇ ｎ ｔｃｔ ｅ ｆｓｒ ｉ Ｊ ４
温 纤 维 素 酶 菌 株 Ｎ ６ ， 过 １ Ｓ ｒ ＮＡ 序 列 进 行 鉴 Ｊ４ 通 ６ Ｄ
定， 并对 其 产酶 条件 及酶 学性 质进 行初 步研 究 ， 以期 为
南 极低 温纤 维 素酶 的开 发利用 奠 定基 础 。
基 金 项 目 ： 家 自然 科 学基 金 资助 项 目（０ ７ １ ７ 国 ４８６０）
胨 ５ｇ 酵母 粉 １ｇ 用 过 滤陈海 水定 容至 １ ０ 、 ； ０ ０ｍＬ， Ｈ ｐ
以儿茶素为底物水蜜桃多酚氧化酶的酶学特性
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 年 第 卷 第 期
以儿茶素为底物研究 水蜜桃多酚氧化酶的酶学特性
龚森康，刘 亮*，武萌萌，郑世博 (浙江医药高等专科学校生物与食品系，宁波 315100)
摘要：以水蜜桃中主要的酚类物质儿茶素为底物，研究水蜜桃多酚氧化酶的酶学特性。研究结 果表明，该酶的最适反应温度为40 ℃、最适反应pH值为6.5；PPO的热稳定性结果表明，60 ℃ 以下时，水蜜桃中PPO较稳定，高于70 ℃，其稳定性迅速下降；pH值稳定性研究结果表明，酶 在pH 6.0以下及9.0以上时不稳定，pH为6.0～8.0时稳定；酶抑制学研究表明，谷胱甘肽和L-半 胱氨酸在较低浓度时就能对此酶促反应产生较好的抑制作用，而氟化钠和氯化钠要在高浓度下 才能对酶促氧化产生抑制作用，其抑制作用由强到弱的顺序为：L-Cys>GSH>NaF>NaCl。 关键词：水蜜桃；多酚氧化酶；儿茶素；酶学特性 中图分类号：TS 201.2+5 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2012)07-0030-05
桃原产我国，栽培历史悠久，种质资源丰 富，居核果类果树首位，在果树生产中占有重要 地位。水蜜桃是浙江省地方名特优产品，果实皮
薄汁多，味甜质糯，口感细腻，具有较强的市场 竞争力。被誉为中国四大桃传统产区之一的宁波 奉化是国务院命名的“中国水蜜桃之乡”，现有
*通讯作者 收稿日期：2011-12-15 基金项目：浙江省大学生科技创新项目(ZJPCKJCXБайду номын сангаас01004)。 作者简介：龚森康(1982—)，男，湖北荆州人，博士研究生，讲师，研究方向为果蔬贮藏加工及天然产物化学。
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食品科技
微生物溶菌酶酶学性质及抑菌特性研究
酵液 中往往存在许多溶菌 作用相关 因子 ， 由于彼此之 间的协 同作用使其对 细胞壁 的溶菌 能力增 强 。微 生物溶 菌酶 纯 品为 白色、 微黄或黄色晶体或不定型粉末 ， 无臭 ， 味甜 ， 易溶 于 水， 不溶于丙酮 、 乙醚等有 机溶剂 。本试 验采用 微生 物来 源的溶菌酶 ， 通过对溶菌酶酶学性质的研究及体外抑菌试验 ， 为溶菌酶在畜禽疾病治疗 、 促进生长等方面的应用提供参考 。
２ ２ 微 生 物 溶 茵 酶 的 最适 作 用 温度 ．
调整各个微生物溶 菌酶溶液 ｐ Ｈ值 为 ７ ０ 在不 同温度 下 ．，
测得 的酶活变化情况见图 ２ 。由图 ２可以看 出， 生物溶菌酶 微
的酶活随着反应体系温度的上升， 了一个先上升后下降的 呈现
趋势 ， 因是起初温度的上升加快 了分子运 动 ， 原 使反应 速度随
液； 以无菌水配 制 １ｇ Ｌ的微 生物溶 菌酶 溶液 ， 行酶 活测 ／ 进 定 。以其中的最高酶活为 １０ ， ０ ％ 其他条件 下 的酶活 占最高 酶活的百分数即为相对酶活 。 １２ ２ 微生物溶菌酶 的最适 反应温度筛选 ．． ． 调 节恒 温水浴
清溶菌酶年产量 不足 ５ ， ０ｔ特别是 高活性 的溶菌 酶供应还 不
．－—
—
２ ６． ８ － — —
江苏农业科学 ２ １ ０ ２年第 ４ ｜ Ｄ卷第 ９期
费 国琴 ， 李晓晖， 宁喜斌 ， 等．微生物溶菌酶酶 学性质及抑菌特性研 究［ ］ Ｊ ．江苏农业科学 ， １ ， （ ）２ ６ ２ ７２ ９ ２ ２４ ９ ： — ８ ， ０ ０ ８ ８
微生物溶菌酶酶学性质及抑茵特性研究
∞ ∞ ∞ 如∞ 如 Ｏ
别取 １０ 菌液 与 １ ｍ ５ ５ Ｌ固体培养基制成倾注平板 ， 贴上灭 菌的圆滤 纸 片。各取 ５ｔ ｔ Ｌ浓度 分别 为 ０ ０ ５ ０ ０ 、 ． ２ ．０ 、． １ ０ ０ 、
米曲霉HDF-7蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究
（ 黑龙 江大学 ａ 生命科 学学院 ； ．微 生物黑龙 江省重点 实验 室 ， 尔滨 １０ ８ ） ． ｂ 哈 ５ ０ ０
摘 要 ：对米曲霉 Ｈ Ｆ７ Ｄ － 所产蛋白酶进行分离纯化，经硫酸铵沉淀和凝胶过滤层析得到电泳纯的蛋 白酶，经
Ｓ ＳＰ ＧＥ电泳测 定其相对分子质量约为 ３ Ｄａ Ｄ －Ａ ０Ｋ 。该 酶的最适 反应温度为 ５ Ｏ℃ ，最适作 用 ｐ 值为 ７ ０ Ｈ ． ，该酶 在 ２ Ｏ℃时具有 良好 的热稳定性 ，在 ｐ ． ～８ ０的条件下酶 是相对稳 定 的，Ｍｎ 对该 蛋 白酶有 明显 的激 活作 Ｈ６Ｏ ． 。 用 ，Ｃ 对该蛋 白酶有强烈的抑制作用 ，Ｋｍ值为 ７ ，／ ｕ ８／ ｍＬ，最大反应 速度 ｇ 为 ６ ２ ｌ ／ ｎ ． ９／ ｍｉ。 ｇ
第 ２卷第 ２期
２１ 年 ５ ０１ 月
黑
龙
江
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Ｍａ ｙ， ２０ １１
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆ ｎ ｉｅｒ ｇｏ ｉ ｎ ｊ ｎ ｉｅｓ ｙ ｏ ｒａ ｇｎ ｅｉ ｆ ｏＥ ｎ Ｈｅ ｏ ｇｉ ｇＵｎｖ ｒｉ ｌ ａ ｔ
米 曲霉 Ｈ 一 ＤＦ ７蛋 白酶 的 分 离 纯 化 及 酶 学 性 质 研 究
ＹＵ ｎ ｙｎ Ｙａ － ｉ ｇ ～，ＤＯＮＧ ｉ ｉ Ｈａ— ｌ ～，Ｐ ＮＧ ｅ — ｉｎ Ｉ Ｗ ｎ ｘａ ｇ ～，ＧＥ Ｊｎ — ｉｇ ， ｉｇ ｐｎ
（ ｉ ｎｊ ｎ ｒｖｎｅＫｅ ａ ｏａｏｙｏ ｃｏ ｉ ｏ ｙ ｏｌ ｅｏ ｉ ｃ ｎｅ Ｈｅｏ ｇｉ ｇＰ ｏ ｉｃ ｙ Ｌ ｂ ｒｔｒ ｆＭｉ ｂｏ ｇ ，Ｃ ｌ ｇ ｆ ｆ Ｓ ｉ ｃ，Ｈｅｏ ｇｉ ｇ Ｕｎｖｒｉ ，Ｈａｂｎ１ ０８ ， ｌ ａ ｒ ｌ ｅ Ｌｅ ｅ ｉｎｊｎ ｉ ｓｙ ｌ ａ ｅ ｔ ｒｉ ５ ０ ０
ww内切β 葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质
第25卷第2期2006年3月 食品与生物技术学报Journal of Food Science and Biotechnology Vol.25 No.2Mar. 2006 文章编号:167321689(2006)022******* 收稿日期:2005210213; 修回日期:2005212220. 基金项目:国家“十五”科技攻关专项项目(2001BA706B 218);南京市科学技术局项目(2003010145).作者简介:孟广荣(19752),女,山东德州人,生物化学博士研究生;3为通讯作者.内切β2葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质孟广荣, 杨树林3, 曾亮亮, 李新柱, 蔡凤(南京理工大学生物工程研究所,江苏南京210094)摘 要:利用¨A KTA U PC 2900快速蛋白液相色谱系统(FPL C )从黑曲霉发酵粉中分离纯化出内切β2葡聚糖苷酶。
分离纯化后的酶比活力提高了8.1倍,回收率为7.5%。
经SDS 2PA GE 电泳分析该内切酶的相对分子质量为26400。
酶学试验研究表明:该酶的最适反应温度为55℃,最适p H 为4.8,Lineweaver 2Burk 法求得动力学参数,K m 和V max 分别为6.838×1023mg/mL 、2.906×1022(mL ・min )/mg 。
并确定了FPL C 层析缓冲液的离子强度为4.8mmol/L 时分离效果达到最佳。
关键词:黑曲霉;纤维素酶;内切β2葡聚糖苷酶;分离纯化;酶学性质;动力学中图分类号:Q 814.1文献标识码:APurif ication and Properties of an E ndo 2β2glucanaseM EN G Guang 2rong , YAN G Shu 2lin 3, ZEN G Liang 2liang , L I Xin 2zhu , CA I Feng(Biotechnology Institute ,Nanjing University of Science and Technology ,Nanjing 210094,China )Abstract :An endo 2β2glucanase was isolated and p urified f rom a commercial p reparation ofA s per gill us ni ger by means of FPL C (¨A KTA U PC 2900).The specific activity of t heendoglucanase increased 8.12fold ,and recovery coefficient reached 7.5%.The molecular weight was estimated as 26400by SDS 2PA GE.The optimal reaction temperat ure and p H of t he endoglucanase 55℃and 4.8,respectively.The values of Km and Vmax calculated from Lineweaver 2Burk plot s were 6.8381023mg/ml and 2.9061022(ml min )/mg ,respectively.The endoglucanase was p urified effectively under t he buffer io nic st rengt h of 4.8mmol/L.K ey w ords :A s per gill us ni ger ;cellulase ;endoglucanase ;p urification ;enzyme property ;kinetics 纤维素酶是起协同作用的多组分酶系,可广泛应用于医药、食品、纺织、酿酒等领域[1]。
蛋白酶和淀粉酶产生菌的筛选及酶学性质分析研究
33.26 22.29 143.45 45.25 19.6
注“: -”表示没有酶活
从表 2 中可以看出，L16 在 48 h 产淀粉酶酶活 性较高可达 143.45 U/mL，但蛋白酶活性较低，并且 在重复试验中，酶活力不太稳定。L15 号菌株蛋白酶 酶活较高，淀粉酶活力较低，但在重复试验中酶活力 较稳定。综合考虑，选择 L15 号菌株作为出发菌株， 对其进行细菌学鉴定、产酶曲线和酶学性质的初步 研究。 2.3 L15 菌株的特性 形态特征是菌落为乳白色， 不透明，菌落中间圆泡状突起且表面光滑，边沿不整 齐，呈锯齿状。镜检观察为直杆状，芽孢端生或近中 生，形状椭圆。革兰氏染色及 V- P 反应均呈阳性，接 触酶反应阳性，厌氧条件下不生长，葡萄糖发酵产酸 阳性，酪素水解、淀粉水解、柠檬酸盐试验均呈阳 性，同时都耐受 7 %NaCl 。 2.4 培养时间对 L15 号菌产蛋白酶和淀粉酶酶活 力 的影响 将 L15 号 菌 株 按 1.3.4 的 方 法 操 作 ，以 时间为横坐标，以酶活为纵坐标作图，得出该菌株的 产酶活力随时间变化的曲线。由图 1 可以看出，该菌 株产蛋白酶的酶活力在 12 h 时较低，12 h 以后酶活 迅速升高，到 48 h 时酶活最高为 221.57 U/ mL，72 h 以后迅速下降；而淀粉酶的酶活力在 48 h 时以后迅 速上升，在 96 h 时酶活达到最高为 54.06 U/ mL。 2.5 不同温度处理对蛋白酶和淀粉酶酶活力的影响
0.4 mmol/L I2- KI 溶液显色，620 nm 下测光密度。1 个 酶活力单位定义为 5 min 内水解 l mg 淀粉的酶量。 A（U/mL）＝ D ×（R0- R）/R0× 100。 其中，A 为酶活，R0 为底物加碘液的光吸收值，R 为 反应物加碘液的光吸收值，D 为酶的稀释倍数。 1.5 细菌的特性研究 参照文献[10]中的操作方法 对菌株的形态及生理生化特性进行研究。 1.6 统计分析 利用 SAS 6.12 数据处理软件对所 有的试验数据进行统计分析，借助最小显著极差法 对组间数据进行差异显著性检验。
自然界中产淀粉酶菌株分离纯化及酶活测定.
自然界中产淀粉酶菌株分离纯化及酶活测定淀粉酶（Amylase ）又称糖化酶，是指能使淀粉和糖原水解成糊精、麦芽糖和葡萄糖的酶的总称。
淀粉酶一般作用于可溶性淀粉、直链淀粉、糖元等α-1, 4-葡聚糖，水解α-1, 4-糖苷键的酶。
根据作用的方式可分为α-淀粉酶（EC 3. 2. 1. 1.）与β-淀粉酶（EC 3. 2. 1. 2. ）。
α-淀粉酶广泛分布于动物（唾液、胰脏等）、植物（麦芽、山萮菜）及微生物；β-淀粉酶与α-淀粉酶的不同点在于从非还原性末端逐次以麦芽糖为单位切断α-1, 4-葡聚糖链。
主要见于高等植物中（大麦、小麦、甘薯、大豆等），但也有报告在细菌、牛乳、霉菌中存在。
淀粉酶是一种用途极广的生物催化剂，广泛应用于造纸、食品、医药工业。
如饴糖、啤酒、黄酒、葡萄糖、味精、抗生素等行业；用于高质量的丝绸、人造棉、化学纤维退浆；制成不同品种的工业酶、医用酶、诊断酶等；在洗涤剂工业中，作为洗涤剂酶与碱性蛋白酶、脂肪酶一起添加于洗衣粉中制成多酶洗衣粉等具有极广泛的用途。
随着社会需求的增大，工业生产对淀粉酶的需求量越来越大，其在各领域应用广泛，急需寻找更高酶活的产酶菌株满足生产需要。
生淀粉酶是指对不经过蒸煮糊化的生淀粉颗粒能够表现出强水解活性的酶类。
70年代由于两次石油危机，引起各国学者从节能和有效利用天然资源出发，重视对生淀粉酶的研究。
研究大致分两个方面：一是探讨对生淀粉不经蒸煮，直接用于酒精发酵的可能性；另一则是从自然界中分离筛选能产生生淀粉酶的微生物，并进而研究生淀粉酶的酶学特性及其产生菌的徽生物学特性[1, 2]。
除动物自身的消化道可分泌一些淀粉酶外，淀粉酶的另外两大来源是植物和微生物能产生生淀粉酶的微生物较多。
Ueda [3, 4]，Mizokami [5]，Tamiguchi [6]，Kainuma [7]先后报道了Aspergillus awaraori，Rbizopus . sp．，Strepiococcus boris，Bacillus circulans，Chalara paradoxa等菌种均有产淀粉酶能力。
currentresearchinfoodscience文献
currentresearchinfoodscience文献您好！以下是一些关于当前食品科学研究的文献，包括正文和拓展:1. "Current perspectives on food science and technology" by K. B. Lettinga, F. G. M. ter Haar, and J. A. M. van der Star. This book covers a wide range of topics including food chemistry, nutrition, processing, and safety.拓展：这本书是食品科学领域最新和最全面的著作之一，涵盖了食品化学、营养、加工和安全等各个方面。
作者们来自不同的国家和领域，他们的论文反映了当前食品科学研究的最新进展。
2. "Food science and technology: An overview" by H. F. Dannert. This book provides a general introduction to food science and technology, including topics such as food chemistry, nutrition, processing, and safety.拓展：这本书是一本介绍食品科学和技术的入门读物，涵盖了食品化学、营养、加工和安全等各个方面。
作者们都是食品科学的知名专家，他们的文章提供了对食品科学研究的全面认识。
3. "Enzymology: A practical approach" by W. A. F. Idso. This book focuses on the biochemistry of enzymes and their role in metabolism and digestion.拓展：这本书是一本介绍酶学理论和实践的经典之作。
溶菌酶的研究进展
溶菌酶 (Lysozyme)是水解酶的一种 ,又称为胞壁质 酶 (muram idase)或 N 2乙酰 胞 壁质 肽 聚 糖水 解 酶 (N acetylmuram ideglycanohydrlase) 。溶 菌 酶 是 一 种 碱 性 蛋 白质 ,在酸性环境下 ,溶菌酶对热的稳定性很强 , pH 值 310时 96℃加热处理 15m in 仍能保持 87%的酶活性 。 在自然条件下 ,大多数溶菌酶化学性质稳定 ,即使当 pH 值在 112 ～1113 范围内剧烈变化 , 其酶结构仍维持不 变 ,活性也不受影响 。但碱很容易使酶活性遭到破坏 , 当处于碱性 pH 值范围时 ,溶菌酶的热稳定性就很差 [2 ] 。 溶菌酶在干燥条件下 ,室温可长期保存 ,其纯品为白色 或微黄色结晶体或无定型粉末 ,无嗅 ,味甜 ,易溶于水 , 不溶于丙酮 、乙醚 。 112 空间结构
2024年研究生考试《西医综合》预测题(含答案)
2024年研究生考试《西医综合》预测题（含答案）学校:________ 班级:________ 姓名:________ 考号:________一、单选题(35题)1.类固醇激素作用的受体是（）A.酪氨酸激酶受体B.核受体C.G蛋白偶联受体D.鸟苷酸环化酶受体2.女性，35岁。
反复皮肤紫癜1年。
半月来月经量较前明显增多。
查体：四肢可见出血点、紫，心肺检查未见异常，肝脾肋下未触及。
血常规：Hb100g/L，WBC 7.6×109/L，血小板24×109/L。
骨髓检查在2cm×1.5cm 片膜上见巨核细胞45个，未见产板型巨核细胞。
该患者最可能的诊断是（）。
A.再生障碍性贫血B.原发免疫性血小板减少症C.过敏性紫癜D.骨髓增生异常综合征3.持续性心房颤动用洋地黄治疗的主要目的是A.加强心肌收缩力B.抑制迷走神经C.恢复窦性心律D.减慢心室率4.男性，55岁，1天来出现上腹痛，向腰背部放射，进行性加重，曾呕吐1次，为胃内容物，呕吐后腹痛未减轻，大便2次，稍稀，无脓血和里急后重，既往有胆囊结石病史5年，查体，体温37.4℃，血压120/80mmHg，巩膜无黄染，心肺未见异常，肝脾未及，腹平软，上腹轻压痛，移动性浊音阳性，肠鸣音4次/分。
该患者最可能的诊断是（）。
A.急性胃炎B.胃溃疡C.急性胰腺炎D.急性心肌梗死5.尿素容易通过的部位（）。
A.近端小管B.髓袢C.远曲小管D.集合管髓段6.女性，25岁，宫内孕38周，1周来心悸，平卧位明显气促，双下肢水肿来院，既往有心肌炎病史。
查体：P 120次/分，R 18次/分，BP 140/90mmHg。
高枕卧位，双肺叩诊清音，听诊正常，心尖动点位于第四肋间左锁骨中线外1.0cm，闻及第三心音，未闻及杂音，肝脾脏触诊不满意，宫底位于剑突下4cm，下肢凹陷性水肿（＋＋）。
该孕妇体检诊断，不正确的是（）。
A.心动过速B.高血压C.心脏扩大D.正常第三心音7.女性，45岁，2个月来无诱因出现双上肢关节疼痛伴晨僵，每于早晨起床后两手指关节僵硬，持续约一个多小时后逐渐缓解，未诊治，三天来加重来诊，诊后饮食好，大小便正常，既往体健，查体：双侧前臂伸面对称部位各触及两个皮下结节，直径约5mm，活动，质硬，无压痛，心肺腹查体未见异常，双上肢近端指间关节，掌指关节和腕关节肿胀，有压痛，下肢不肿。