博莱霉素诱导大鼠肺纤维化过程中羟脯氨酸及氧化应激指标
博莱霉素诱导大鼠肺纤维化过程中羟脯氨酸及氧化应激指标
【摘要】 目的:观察博莱霉素诱导的肺纤维化模型中组织羟脯氨酸(Hyp)及各氧化应激指标的变化,探讨氧化抗氧化失衡在该病发生发展中的作用. 方法:二级SD大鼠40只,随机分为模型组与对照组,每组20只. 气管内注入博莱霉素A5(BLMA5)溶液,建立肺纤维化模型. 分别于3,7,14和28 d每组随机抽出5只,处死后取肺脏行HE, Masson染色鉴定模型并测定Hyp含量. 同时分别以八木国夫荧光法测定肺组织脂质过氧化产物(MDA);改良盐酸羟胺法测定组织总超氧化物歧化酶(SOD)的酶活力;改良荧光法测定还原型谷胱甘肽(GSH)含量;荧光法测定氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量. 并计算GSH/GSSG值. 结果:成功建立博莱霉素诱导的肺纤维化模型. 各指标在不同时间点出现变化. 模型组Hyp含量于7 d时高于对照组,28 d达到最高(P<). 模型组MDA含量随时间延长而增加,其中14 d时显着高于对照组(P<),但在28 d时有下降. SOD活力在7 d, 14 d均降低,28 d时上升. 模型组GSH/GSSG在3 d, 7 d显着低于对照组(P<),14 d, 28 d又回升.
结论:Hyp可作为博莱霉素诱导的肺纤维化的一个指标. 博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化伴有氧化损伤,且在不同阶段细胞内、外的氧化抗氧化出现失衡.
【关键词】 肺纤维化;羟脯氨酸;氧化应激
0引言
肺纤维化是一组由多种病因所引起的肺破坏性疾病,目前的治疗方法尚不能改善其不良的预后,加强对肺纤维化机制的研究,并在此基础上发展新的治疗策略已成为更加迫切的现实需要. 一般认为,在肺部,损伤组织及激发纤维化的主要病理机制在于炎症和免疫反应,但是大量研究表明,氧自由基在炎症和免疫介导的组织损伤中扮演了重要角色. 故本研究通过建立博莱霉素诱导的肺纤维化模型,观察各氧化指标在此过程中的变化,从自由基理论的角度,深入探讨氧化抗氧化失衡在该病发生发展中的重要作用.
1材料和方法
材料
博莱霉素A5,天津太河制药有限公司产品(批号:030305),8 mg/支. 丙二醛(MDA)标准品(Merk公司);2Thiobarbituric acid(Merk公司);磷钨酸(中国医药集团上海化学试剂公司);盐酸羟胺(AR, 天津化学试剂一厂);氯化硝基四氮唑蓝,NBT,NEMI(华美公司);Triton X100(上海试剂一厂); 7210分光光度计(上海分析仪器厂虹桥分厂);970CRT荧光分光光度计(上海分析仪器总厂);GL20A全自动高速冷冻离心机(湖南仪器仪表离心机厂).
二级SD大鼠40只,雄性,体质量180~240 g,由第四军医大学实验动物中心提供. 随机分为模型组与对照组,每组20只.
方法
制备模型以10 g/L戊巴比妥钠(10 mg/kg, ip)麻醉大鼠,取仰卧固定位,常规消毒,行颈部正中切口,钝型分离暴露气管,于气管软骨环间隙穿刺注入BLMA5生理盐水溶液~ mL(5 mg/kg),立即将动物直立并行旋转,缝合皮肤,待动物自然清醒后置笼内常规饲养. 对照组(假手术组)以等容量生理盐水(NS)注入气管代之.
模型鉴定分别于气管内滴药后第3,7,14和28日处理. 每批每组随机抽出5只,麻醉处死. ①剖开胸腔及颈部,分离气管和肺脏,结扎后取出肺脏,洗去血渍,去除结缔组织,吸干水分;②从气管插管至左主支气管,结扎固定. 分离结扎右主支气管后离断,取右上叶置体积分数为40 g/L甲醛中固定1 wk,行HE和Masson染色.
肺脏羟脯氨酸(hydroxyproline, Hyp)含量测定参考杨陟华等的方法,将肺组织样品剪碎,置于磨口试管中,用6 mol/L HCl (W∶V=1∶4)水解(125℃) 3
h后,稀释至10 mL,过滤. 取滤液 mL(空白管和标准管分别用蒸馏水和标准Hyp代替)加蒸馏水到 mL,充分氧化,加入 mL柠檬酸缓冲液( mol/L,pH )和 mL氯胺T溶液( mol/L)后6 min,用过氯酸( mol/L, mL)终止反应(静置5 min). 加入100
g/L PDMAB mL,于80℃水浴中保温10 min,显色完全后,自来水(25℃)冷却5 min.
最后用7210分光光度计在560 nm波长比色,测量其吸光度A值,用下式计算Hyp含量:肺组织Hyp含量(mg/g)=(×A样/A标)/m. 其中,A样为样品管吸光度,A标为标准管吸光度,m为肺重.
氧化损伤指标的测定剪取左肺,称质量,按1∶5加入生理盐水制备匀浆.
3000 r/min离心10 min,取上清,冻存备用. 分别以八木国夫荧光法测定肺组织脂质过氧化产物(MDA);改良盐酸羟胺法测定组织总SOD的酶活力;改良荧光法测定还原型谷胱甘肽(GSH);荧光法测定氧化型谷胱甘肽(GSSG). 并计算GSH/GSSG值.
统计学处理:数据均以x±s表示. 采用SPSS 统计软件包进行分析,采用成组t检验,方差不齐时用t′检验. P<为有显着性差异.A: Control groupHE
×100; B: BLM groupHE ×100; C: Control groupMasson ×100; D: BLM
groupMasson ×100.
2结果
大体形态观察对照组双肺呈粉红色,表面光滑,弹性良好. 模型组3 d未见有明显改变,而7 d见双肺有点状出血、灶状瘀斑. 14 d双肺色泽暗淡,局部见大小不等结节样改变,仍有陈旧出血点. 28 d双肺呈灰白色,硬度增加,体积缩小. 表面有条索样凹沟.
光镜观察对照组各观察点均未出现明显病变. 模型组3 d时出现炎性细胞浸润等急性肺泡炎改变;7 d时肺泡间隔增厚,大量炎性细胞浸润,成纤维细胞开始增多;14 d时肺泡炎仍较重,纤维组织进一步增加;28 d炎症较前减轻,肺纤维化程度加重,部分肺泡腔消失,为大量胶原纤维、成纤维细胞、淋巴细胞所占据(Fig 1).
肺脏Hyp含量(Fig 2)模型组Hyp含量于7 d时高于对照组,28 d达到最高(P<).
肺组织匀浆MDA含量、SOD活力、GSH/GSSG比值变化(Tab 1~3)各指标在不同时间点出现变化. 模型组MDA含量随时间延长而增加,其中14 d时显着高于对照组(P<),但在28 d时有下降. SOD活力在7 d和14 d均降低,28 d时上升.
模型组GSH/GSSG在3 d和7 d显着低于对照组(P<),14 d和28 d又回升.表1两组大鼠肺组织匀浆MDA含量变化(略)表2两组大鼠肺组织匀浆SOD活力变化(略)表3两组大鼠肺组织匀浆GSH/GSSG比值变化(略)
3讨论
活性氧(ROS, Reactive oxygen species) 如超氧阴离子及过氧化氢是多种疾病的重要介质,包括肺纤维化. 在正常的生理条件下,自由基引发的组织损伤可被内源性抗氧化物质所抑制. 然而,当这些抗氧化物不足以对抗大量的氧化物即氧化抗氧化系统失衡时,组织就会发生不可逆性损伤. 博莱霉素与铁离子反应可以产生ROS从而损伤蛋白、脂质和DNA,其诱导的肺纤维化包括两个阶段.
早期的炎症阶段,大量的炎性细胞如巨噬细胞、中性粒细胞及淋巴细胞浸润到间质或肺泡中. 在随后发生的纤维化阶段,炎症细胞转移到肺部后,因被激活释放过量的氧自由基,除直接引起肺组织的脂质过氧化,启动PF前的炎症反应,尚可能通过激活核因子κB(NFκB)上调细胞因子的产量,间接促进纤维化的形成;同时,肺纤维化的动物模型或患者中抗自由基的保护系统功能也有所降低. 据此,提出抑制自由基的产生,清除已产生的自由基及加强抗自由基系统的策略.
本实验应用博莱霉素复制大鼠肺纤维化模型,观察发现7 d时肺泡炎明显,28 d形成纤维化,且模型组28 d时羟脯氨酸含量显着高于对照组(P<). 主要病变与指标都与文献一致,说明动物模型复制成功. Hyp是机体胶原蛋白的主要成分之一,约占其氨基酸总量的13%,其他除弹性蛋白含有少量Hyp(约1%)外,均不含Hyp. 因此组织中Hyp含量可作为其胶原组织代谢的重要指标[11]. 本研究还发现作为体内脂质过氧化指标的MDA 14 d时与对照相比较显着增高(P<),而GSH/GSSG比值在3 d和7 d时有显着降低,其他时间组未见明显变化. 对照组、模型组总SOD活力在7 d和14 d时都有所降低. 以上结果提示,肺组织氧化与抗氧化指标在不同时间点出现不同的变化,作为细胞内最丰富的抗氧化剂,GSH在细胞清除ROS过程中发挥关键作用,尤其在肺纤维化早期炎症阶段大量耗竭;MDA含量和SOD活力在纤维化阶段有所变化,推测在成纤维细胞过度增殖并分泌大量胶原的过程中,SOD可能发挥一定抑制作用. 而据文献报道,胞外SOD是肺组织的主要抗氧化剂,它分布于细胞表面及胞外基质中,对于保护肺泡细胞及抑制基质的过度重建有重要作用[11]. 因此,研究如何调控细胞基质细胞间氧化/抗氧化系统的平衡等肺纤维化的发生机制,为防治肺纤维化的发生、发展提供新的思路.
博莱霉素致大鼠肺纤维化肺泡巨噬细胞氧化和抗氧化损伤的动…
博莱霉素致大鼠肺纤维化肺泡巨噬细胞氧化和抗氧化损伤的动…
陈佰义;姜莉
【期刊名称】《中国医科大学学报》
【年(卷),期】1995(024)003
【摘 要】动态观察了博莱霉素（ＢＬＭ）致大鼠肺纤维化过程中巨噬细胞氧化和抗氧化损伤的变化。结果表明：ＢＬＭ气管内灌注后肺泡巨噬细胞（ＡＭ）中ＭＤＡ含量第一天即明显增高，第三天达高峰，并明显高于对照组。同时，ＧＳＨ－Ｐｘ含量极低，于１４天、２８天逐渐上升始接近正常水平。认为ＡＭ脂质过氧化损伤在肺纤维化形成中发挥一定作用。
【总页数】3页(P240-242)
【作 者】陈佰义;姜莉
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中 文
【中图分类】R563.102
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养阴益气合剂对博来霉素所致肺纤维化大鼠的影响
养阴益气合剂对博来霉素所致肺纤维化大鼠的影响
目的 观察养阴益气合剂对博来霉素所致肺纤维化大鼠的影响，探讨其可能的作用机制。方法 将SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和养阴益气合剂低、中、高剂量组。采用气管内滴注博来霉素方法复制肺纤维化大鼠模型，造模后1 d，各给药组给予相应药物灌胃。分别于第7、14、28日取肺组织，Masson染色观察病理变化，碱水解法检测羟脯氨酸（HYP）含量，Western
blot检测基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）和基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）蛋白表达。结果 造模7 d，病理切片显示模型组大鼠肺部胶原较正常组明显增多，即造模成功；HYP含量同步显著升高（P＜0.01）；造模28 d，病理切片显示模型组肺泡间隙胶原大量沉积，部分肺泡结构丧失，HYP含量仍处于高值（P＜0.01）。经养阴益气合剂中、高剂量28 d干预治疗，肺组织胶原沉积均有所改善，且表现出剂量相关性，HYP含量明显减少（P＜0.01），养阴益气合剂高剂量组表现出与阳性药组相当的效果。Western blot检测结果显示，造模7 d在正常肺组织低表达的MMP-9和TIMP-1蛋白水平显著升高（P＜0.05），至28 d持续处于高表达状态（P＜0.05）。与模型组比较，第14日养阴益气合剂高剂量组MMP-9水平明显降低（P＜0.05），第7、14、28日TIMP-1表达水平明显降低（P＜0.05）。结论 养阴益气合剂能有效抗肺纤维化，推断其通过抑制TIMP-1和MMP-9的表达，调控促进胶原的水解，抑制胶原蛋白的沉积，最终抑制肺纤维化。
Abstract：Objective To investigate the effects of Yangyin Yiqi Mixture on
pulmonary fibrosis caused by bleomycin in rats；To discuss its possible mechanism.
不同剂量博莱霉素致小鼠肺纤维化模型的比较
刀７易２基斛中国组织工程研究与临床康复勇亨７３誊第７ｊ努２００９—０２—１２出版ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＲｅｈａｂｉｌ＃ａｔｉｖｅＴｂｓｕｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＦｅｂｒｕａｒｙ１２，２００９ＶｏＬ１３，Ｎｏ．７
不同剂量博莱霉素致小鼠肺纤维化模型的比较术术术术★
陶章，李惠萍。‰’７，…嘴甜日■＾Ｍ《城Ｆ～’．埘ｄ４ｐ带舭＃惜：峨＾目■■Ⅲ＊啦押～々Ⅻ、ｒ扁｝懈＋＃■１鲫■＊瞩觯
Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｍｏｕｓｅｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｂｒｏｓｉｓｍｏｄｅｌｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｂｌｅｏｍｙｃｉｎａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｓ
ＴａｏＺｈａｎｇ，ＬｉＨｕｉ·ｐｉｎｇ
ＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ。ＳｈａｎｇｈａｉＰｕｌｍｏｎａｒｙＨｏｓｐｉｔａｌ．ＴｏｎｇＪｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０凸４３３．ＣｈｌｎａＺｈａｎｇ★．Ｍａｓｔａｒｐｈｙｓｉｃｉａｎ．ＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＳｈａｎｇｈａｉＰｕｌｍｏｎａｒｙＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｏｎｇｊｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００４３３．ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅＵＨｕｉ·ｐｉｎｇ．Ｃｈｉｅｆ
ＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，＾俑Ｉ嘶ｅｄＳｈａｎｇｈａｉＰｕｌｍｏｎａｒｙＴｏｎｇｊｉＳｈａｎｇｈａｉＣ：ｈｉｎａＬｉｈｕｉｐｉｎ９１９５８０ｙａｈｏｏ．ｃｏ（Ｔｉ．ｃｎＳｕｐｐｏｒｔｅｄＮａｔｉｏｎａｉＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ．Ｎｏ．３０６７１９９８’：ＩｎｔｅｍａｔｉｏｎａｉＣｏｏｐｅｒａｔｉｏｎＰｒｏｊｅｃｔｏｆＳｈａｎｇｈａｉＭｕｎｉｃｉｐａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎ，Ｎｏ．ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｓｅａｒｃｈＦｕｎｄＰｒｏｊｅｃｔｏｆＳｈａｎｇｈＭｕｎｉｃｉｐａｌＳｃｉｅｎｃｅＴｅｃｈｎｏｔｏｇｙＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎ．Ｎｏ，∞４１０７０５０＊：ＰｒｏｊｅｃｔｏｆＳｈａｎｇｈａｊＥｘｃｅｌｌｅｎｔＤｅｃｉｐｌｌｎｅＬｅａｄｅｒｊｎ２００８．Ｎｏ．０８ＸＤｌ４０３４００’Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：２∞堋－２５＾∞目抽ｄ：２００８－１０－０１
博来霉素诱导小鼠实验性肺纤维化方法的优化
博来霉素诱导小鼠实验性肺纤维化方法的优化
目录
一、内容概括................................................3
1.1 研究背景.............................................4
1.2 研究意义.............................................5
二、材料与方法..............................................6
2.1 实验动物.............................................7
2.1.1 实验动物选择.....................................7
2.1.2 实验动物分组.....................................7
2.2 实验药物与试剂.......................................9
2.2.1 博来霉素........................................10
2.2.2 其他常用药品与试剂..............................11
2.3 实验仪器与设备......................................12
2.4 实验操作流程........................................13
三、模型建立与评价标准.....................................14 3.1 模型建立方法........................................15
3.1.1 给药途径与剂量..................................16
5-HTR2B、E-cad、α-SMA在博莱霉素致大鼠肺纤维化中的表达变化
5-HTR2B、E-cad、α-SMA在博莱霉素致大鼠肺纤维化中的表达变化
5-HTR2B、E-cad、α-SMA在博莱霉素致大鼠肺纤维化
中的表达变化*
涂容芳+，张秀峰+，何振华△
【摘要】【摘要】目的：观察5-羟色胺2B受体(5-HTR2B)、E-钙粘素(E-cad)、α-平滑肌蛋白(α-SMA) 在博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化中的表达变化。方法：健康雄性SD大鼠45只，随机分为3组(n=15)：对照组、BLM组、泼尼松+BLM组。各组分别于第7、14和28天各处死动物5只，取肺组织，行HE、Masson染色，观察大鼠肺组织炎症和纤维化的程度；免疫组化法及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织中5-HTR2B、上皮细胞标记物E-cad和间质细胞标记物(α-SMA) mRNA及蛋白的表达水平。结果：BLM组肺组织病理切片HE和Masson染色按时间顺序呈现由肺泡炎症至纤维化的动态改变。免疫组化及RT-PCR结果显示肺纤维化大鼠肺组织中5-HTR2B、α-SMA的蛋白及mRNA表达均增加(P<0.05)，28 d时最高；E-cad蛋白及mRNA表达均减弱(P<0.05)，28 d时最低；泼尼松+BLM组，相应时间点5-HTR2B、α-SMA 蛋白及mRNA表达有所下降(P<0.05)，E-cad蛋白及mRNA表达不同程度增强(P<0.05)。结论：5-HTR2B可促进大鼠肺纤维化发生，机制可能与减弱E-cad，促进α-SMA表达，诱导上皮细胞间质转化(EMT)有关。
【期刊名称】中国应用生理学杂志
【年(卷),期】2016(032)004
【总页数】7
【关键词】【关键词】5-HT2B受体；肺纤维化；上皮细胞间质转化；博莱霉素；大鼠
5,7,3’-三乙酰橙皮素对博来霉素致大鼠肺纤维化的影响及作用机制
5,7,3’-三乙酰橙皮素对博来霉素致大鼠肺纤维化的影响及作用机制
谢小丽;李俊
【期刊名称】《安徽医科大学学报》
【年(卷),期】2018(053)008
【摘 要】目的 研究5,7,3’-三乙酰橙皮素(TAHP)对博来霉素致大鼠肺纤维化的治疗作用及可能的作用机制.方法 SD大鼠气管内一次性滴注博来霉素(5 mg/kg)诱导肺纤维化后,于造模后第2天分别灌胃给予TAHP(50、100、200 mg/kg)、阳性药地塞米松(1.4 mg/kg),对照组和模型组灌胃给予等体积的羧甲基纤维素钠溶液.各组于给药后第7、14和28天随机取样,病理分析肺泡炎和肺纤维化程度;检测各组肺组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和羟脯氨酸(HYP)的含量水平;RT-PCR法检测肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)、干细胞因子(SCF)、干细胞因子受体(c-Kit) mRNA的表达水平.结果 与模型组比较,各剂量组TAHP可明显减轻大鼠肺泡炎和肺纤维化程度,显著降低大鼠肺组织中HYP和MDA的含量(P＜0.05),增加肺组织中GSH和SOD的含量(P＜0.05);RT-PCR结果显示,TAHP可抑制肺组织中TGF-β1、α-SMA、SCF和c-Kit的基因表达(P＜0.05).结论 TAHP能够减轻博来霉素诱导的大鼠肺纤维化,其机制与机体内抗氧化、抑制TGF-β1表达有关.SCF/c-Kit信号通路在博来霉素致大鼠肺纤维化中被激活,TAHP对肺纤维化的干预作用可能与影响SCF/c-Kit有关.
【总页数】8页(P1245-1252)
【作 者】谢小丽;李俊 【作者单位】安徽医科大学药学院,安徽医科大学肝病研究所,安徽省创新药物产业共性研究院,合肥230032;安徽医科大学药学院,安徽医科大学肝病研究所,安徽省创新药物产业共性研究院,合肥230032
博来霉素致大鼠肺纤维化模型中赖氨酰氧化酶蛋白表达与活性的动态变化
广东医学２０１１年９月第３２卷第ｌ８期 ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｓｅｐ．２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．１８ 博来霉素致大鼠肺纤维化模型中赖氨酰氧化酶 蛋白表达与活性的动态变化水 黎仕锋，杨小晓，郑晓克，乐亮，陈丽君 中山大学中山医学院药理学教研室（广州５１（￣８０） 【摘要】 目的研究博来霉素（ＢＬＭ）致大鼠肺纤维化模型中赖氨酰氧化酶（ＬＯＸ）蛋白表达的变化，以及该 变化与其活性的关系和对胶原沉积的影响。方法将２００—２５０ ｇ雄性ＳＤ大鼠随机分组，通过气管注入ＢＬＭ（５ ｍｓ／ｋｇ）建立肺纤维化模型，分别于第９、ｌ４、２８、３５天处死动物取材。左肺切片作ＨＥ和ＭＡＳＳＯＮ染色，右肺匀浆用 于检测羟脯氨酸（ＨＹＰ）含量及ＬＯＸ活性，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ测定ＬＯＸ的蛋白水平。结果ＨＥ和ＭＡＳＳＯＮ染色结果显 示，ＢＬＭ处理后，大鼠肺组织发生炎症细胞浸润，成纤维细胞增生，胶原纤维增多；ＢＬＭ处理后９～３５ ｄ，ＨＹＰ含量 与对照组比较明显上调（Ｐ＜０．０１），并呈时间依赖性增加；ＬＯＸ的４６、５０ ｋＤ分子在第９、１４天表达显著增强，尤其 是５０ ｋＤ分子，在第１４天达到峰值，２８ ｄ后回落到基线水平；ＬＯＸ活性的变化与５０ ｋＤ分子相仿，第１４天达到对 照组的４．７倍（Ｐ＜０．０１），２８ ｄ后回落到第９天水平。结论ＢＬＭ通过增加ＬＯＸ蛋白表达而上调其活性；并时间 依赖性增加胶原蛋白沉积，两者趋势的一致揭示ＬＯＸ积极参与了ＢＬＭ导致的大鼠肺纤维化。 【关键词】肺纤维化；赖氨酰氧化酶；博来霉素；胶原蛋白 特发性肺纤维化（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ， ＩＰＦ）是一种进展性、致死性的肺部疾病，具有普通型间 质性肺炎的组织病理学特征：弥漫性肺间质纤维化伴 随轻度炎症，成纤维细胞灶与正常肺组织并存，细胞外 基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）大量增生和沉积，蜂窝 组织形成 。现有文献显示，多种器官的纤维化都 与赖氨酰氧化酶（１ｙｓｙｌ ｏｘｉｄａｓｅ，ＬＯＸ）活性上调有着密 切关系，如ＣＯＵＮＴＳ等 的研究发现在博来霉素 （ＢＬＭ）致大鼠肺纤维化模型中ＬＯＸ活性升高发生在 羟脯氨酸（ＨＹＰ）增多之前；而ＢＬＡＩＳＤＥＬＬ等 发现联 合使用牛磺酸和烟酸可以通过抑制ＬＯＸ的活性改善 ＢＬＭ引起的豚鼠肺纤维化，提示ＬＯＸ有望成为纤维化 治疗的新靶点 。已有文献大都集中在ＢＬＭ引起的 ＬＯＸ活性升高上，而ＢＬＭ上调ＬＯＸ活性的机制还不 清楚，仅ＴＺＯＲＴＺＡＫＩ等 报道ＢＬＭ可以增加ＬＯＸ ｍＲＮＡ。我们之前的研究发现，ＢＬＭ可以在细胞水平 上调ＬＯＸ的蛋白表达和催化活性 。２００９年１０月至 ２０１０年１２月本实验探讨在ＢＬＭ致大鼠肺纤维化模型 中，肺组织里ＬＯＸ蛋白表达的变化，及其与活性变化 的关系，以进一步探明ＢＬＭ调控ＬＯＸ活性的机制，明 确筛选抗肺纤维化药物的靶点。 １材料与方法 １．１动物和主要试剂ＳＰＦ级雄性ＳＤ：赶鼠购自南方 医科大学实验动物中心，动物合格证号：ＳＣＸＫ（粤） ２００６—０００１５。注射用盐酸博来霉素（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ ｈｙｄｒｏ— ｃｈｌｏｒｉｄｅ Ａ２，ＢＬＭ）（日本化学株式会社），羟脯氨酸试 国家自然科学基金资助项目（编号：３０７７２６０６） △通信作者。Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｈｅｎｌｉｊ＠ｍａｉｌ．ｓｙｓｕ．ｅｄｕ．ｃｎ ・２３７３・
Trichostatin_A对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的抑制作用
·论著·
DOI:10.3760/cma.j.issn.1673-436X.2012.022.005
作者单位:200127上海交通大学医学院附属仁济医院呼吸科通信作者:李燕芹,Email;drliyanqin@TrichostatinA对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的
抑制作用
叶清 李燕芹 熊剑飞 徐佳波 刘斌 邹静 秦慧
【摘要】 目的 观察非选择性组蛋白去乙酰化酶抑制剂TrichostatinA(TSA)对博莱霉素诱导大鼠
肺纤维化的影响以及肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原含量及转化生长因子β1(TGF-β1)
mRNA表达的变化。方法 将46只SPF级雄性160~180gSD大鼠随机分为正常对照组、模型组Ⅰ、
模型组Ⅱ、治疗组,其中正常对照组10只,模型组Ⅰ14只,模型组Ⅱ12只,治疗组10只。模型组Ⅰ、模型
组Ⅱ及治疗组经气管内注入盐酸博莱霉素(5mg/kg),制备肺纤维化大鼠模型。正常对照组气管内注入
相同体积生理盐水。治疗组在造模次日起腹腔内注射TSA2mg/kg溶于二甲基亚砜(DMSO)60μl,并
稀释于生理盐水1.2ml中,每天1次,连续3d;模型组Ⅱ在造模次日起腹腔内注射DMSO60μl稀释于生理盐水1.2ml中,每天1次,连续3d;模型组Ⅰ及正常对照组在造模次日起腹腔内注射生理盐水1.2ml,每天1次,连续3d。其中模型组Ⅰ大鼠死亡5只,模型组Ⅱ大鼠死亡4只,治疗组大鼠死亡2
只。于造模第21天处死全部存活大鼠。取肺组织进行HE染色及Masson三色染色,评估肺纤维化程度。碱水解法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量。酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织匀浆中α-SMA
及Ⅰ型胶原的含量。real-timePCR检测肺组织TGF-β1mRNA表达的变化。结果 ①HE染色分析:模型组Ⅰ及模型组Ⅱ肺泡炎程度较正常对照组增高(P<0.05),模型组Ⅰ及模型组Ⅱ之间肺泡炎程度差
丙戊酸钠减轻博莱霉素致大鼠肺纤维化
丙戊酸钠减轻博莱霉素致大鼠肺纤维化
高淑艳;冯涛
【期刊名称】《中国病理生理杂志》
【年(卷),期】2015(000)003
【摘 要】目的：探讨丙戊酸钠在博莱霉素诱导的肺纤维化中的作用及机制。方法：42只大鼠随机分为正常对照组、模型组和治疗组。造模采用博来霉素5 mg／kg气管内注射，自造模14 d开始分别采用生理盐水（0.5 mL／d）、丙戊酸钠（300 mg· kg－1· d－1）和地塞米松（0.6 mg· kg－1· d－1）腹腔内注射治疗14 d。模型组分别在造模后14和、28 d处死。治疗组在造模后28 d处死。然后通过HE染色、Masson染色、羟脯氨酸（ HYP）检测和West-ern blotting检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及E-钙黏蛋白（ E-cadherin）表达的变化，综合分析丙戊酸钠对肺纤维化发展的干预作用。结果：HE染色显示丙戊酸钠治疗组的肺泡结构、肺间质的形态优于生理盐水组和地塞米松治疗组。 Masson染色及HYP检测用于衡量肺组织内胶原的分布及含量，可见丙戊酸钠治疗组肺组织内胶原的分布及含量均显著低于地塞米松治疗组及生理盐水组。丙戊酸钠可以降低α-SMA的表达，同时上调上皮标志性蛋白E-cadherin的表达。结论：丙戊酸钠可以通过减少胶原的表达与分布及下调间充质蛋白α-SMA，同时上调上皮蛋白E-cadherin的表达从而减轻博来霉素诱导大鼠肺纤维化。
【总页数】5页(P552-556)
【作 者】高淑艳;冯涛 【作者单位】胜利油田中心医院呼吸内科，山东东营 257034;胜利油田中心医院呼吸内科，山东东营 257034
【正文语种】中 文
【中图分类】R363.2
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丹贝益肺汤对博来霉素诱导肺纤维化大鼠肺纤维化及肺血管重塑的影响
丹贝益肺汤对博来霉素诱导肺纤维化大鼠肺纤维化及肺血管重塑的影响
李强;杨雅婷;程娜;金冠男;杜松毫;张碧海;江柏华;蔡萧君
【期刊名称】《中国中医药科技》
【年(卷),期】2022(29)6
【摘 要】目的:研究丹贝益肺汤对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的特发性肺纤维化及肺血管重塑的影响。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(甲泼尼龙,4.2 mg/kg)和丹贝益肺汤高(15.2 g/kg)、中(7.6 g/kg)、低剂量(3.8
g/kg)组,每组20只。除正常组外,其余各组均采用雾化吸入BLM诱导肺纤维化,成模后连续灌胃给药20 d。取各组大鼠肺组织行HE、Masson染色,光镜观察肺组织炎性改变及纤维化程度;ELISA检测血清内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素-1(ET-1)和血管性血友病因子(vWF)水平。结果:与模型组比较,各给药组大鼠肺组织炎性改变和纤维化程度明显减轻,丹贝益肺汤高剂量组肺组织炎性改变和纤维化程度与阳性组接近。ELISA检测结果显示各给药组eNOS水平明显增高,血管增生指标ET-1、vWF水平均明显下降(P均<0.05);其中高剂量组上述指标变化显著于阳性组(P均<0.05)。结论:丹贝益肺汤可剂量依赖性减轻BLM诱导的大鼠肺纤维化程度,提高血清eNOS水平,抑制ET-1、vWF表达,调节肺血管重塑是其部分作用机制。
【总页数】4页(P952-955)
【作 者】李强;杨雅婷;程娜;金冠男;杜松毫;张碧海;江柏华;蔡萧君
【作者单位】黑龙江省中医药科学院 【正文语种】中 文
【中图分类】R56
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