琼脂糖凝胶电泳的制备及核酸检测
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
欢迎共阅实验二? 琼脂糖凝胶电泳的制备及核酸检测
一. 实验目的
?? 1、掌握琼脂糖凝胶电泳的原理;
?? 2、学习琼脂糖凝胶电泳的操作。
二、实验原理
??? 溴化乙锭（EB）为扁平状分子，在紫外照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光强度大10倍以上，且荧光强度与DNA的含量成正比。用肉眼观察，可检测到5 ng以上的DNA。
??? 微量移液器，电泳仪，电泳槽，微波炉
试剂
?? 琼脂糖：1.0%；
?? 电泳缓冲液（50 × TAE 电泳缓冲液取Tris24.2g ，冰醋酸5.7ml ，
0.25mol/L EDTA (pH8.0)20ml ，加蒸馏水至100ml ）
??? EB：5 μl / 100 ml TBE
?电泳材料：标准分子量核酸（DL2000）
四、操作步骤
（1）制胶（以20 mL为例）
欢迎共阅
? a. 称取0.2 g 琼脂糖，加入20 ml 的TAE缓冲液（pH 8.0），摇匀；
? b. 微波炉加热，至琼脂糖完全溶解（要防止过热溢出三角瓶）；??
??c. 将制胶板放入制胶槽中，插入适当的梳子，将溶解的琼脂糖（约50℃）加入2ul EB后，混均匀，倒入其中，直至厚度为4～6 mm（如有气泡要把气泡赶出），在室温下冷却凝固(约30~ 45 min)；
?d. 将制胶板置于电泳槽中，小心垂直向上拔出梳子，以保证点样孔完好。（2）点样
?? 用微量移液器将5 μl含蓝色染液的 DL2000 加入点样孔下部。
（3）电泳
??? 打开电源开关，调节电压至3~5 V/cm(约100 V)，可见到溴酚蓝条带由负极