番茄红素的抗氧化活性

几种抗氧化酶的作用

一.超氧化物歧化酶(SOD): 超氧化物歧化酶，是一种新型酶制剂，是生物体重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体，如动物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性，是生物体清除自由基的首要物质。SOD在生物体的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞。由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要！ 超氧化物歧化酶(SOD)按其所含金属辅基不同可分为三种，第一种是含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的称（Cu.Zn—SOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；第二种是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞；第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。 SOD是一种含有金属元素的活性蛋白酶。超氧化物岐化酶（SOD）能催化如下的反应：O2-+H+→H2O2+O2，O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。SOD是机体天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶（POD）会立即将其分解为完全无害的水。

这样，三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。 目前，人们认为自由基（也称游离基）与绝大部分疾病以及人体的衰老有关。所谓的自由基就是当机体进行代时，能夺去氧的一个电子，这样这个氧原子就变成自由基。自由基很不稳定，它要在身体组织细胞的分子中再夺取电子来使自己配对，当细胞分子推出新一个电子后，它也变成自由基，又要去抢夺细胞膜或细胞核分子中的电子，这样又称会产生新的自由基。如，超氧化物阴离子自由基、羟自由基、氢自由基和甲基自由基，等等。在细胞由于自由基非常活泼，化学反应性极强，参与一系列的连锁反应，能引起细胞生物膜上的脂质过氧化，破坏了膜的结构和功能。它能引起蛋白质变性和交联，使体的许多酶及激素失去生物活性，机体的免疫能力、神经反射能力、运动能力等系统活力降低，同时还能破坏核酸结构和导致整个机体代失常等，最终使机体发生病变。因此，自由基作为人体垃圾，能够促使某些疾病的发生和机体的衰老。虽然自由基会对机体产生诸多危害，但是在一般的条件下人体细胞也存在着清除自由基、抑制自由基反应的体系，它们有的属于抗氧化酶类，有的属于抗氧化剂。像SOD就是一种主要的抗氧化酶，能清除超氧化物自由基，在防御氧的毒性、抑制老年疾病以及预防衰老等方面起着重要作用。 SOD能专一地清除体有害的自由基，以解除自由基氧化体的某些组成成分而造成的机体损害。如氧中毒、急性炎症、水肿、自身免疫性疾病、辐射病等疾病都与活性氧的毒性有关。实验证明，SOD能够清除自由基，因此可消除上述疾病的病因。此解毒反应过程是两步：

SOD酶活性测定方法

SOD酶活性测定 所需药品： （1）0.1mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液： A液：0.1mol/l磷酸氢二钠液 B液：0.1mol/l磷酸二氢钠液 1毫升B+10.76毫升A （2）0.026mol/l蛋氨酸液（Met）：现用现配 称取0.3879克蛋氨酸，用1号液定容至100毫升。 （3）75*10-5mol/l氯化硝基四氮唑蓝（NBT）液：现用现配 称取0.1533克NBT，先用少量蒸馏水溶解，然后定容至250毫升。 （4）1umol/lEDTA-2钠和2*10-5mol/l核黄素混合液 （5）0.05mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液 （6）石英砂 实验步骤： 1.酶液制备：称取0.5克鲜叶，放入研钵中，加入3毫升5号液和少量石英砂，于冰浴中研成匀浆。然后用5号液定容至8毫升，于0～4℃、13000g时离心15分钟，上清液即为酶提取液。酶液可在低于0℃下的环境中保存。 2.按下表加入试剂： 试剂摇匀后，迅速遮光处理1号杯，其余杯在25℃、光强为4000勒克司的条件下照光处理15分钟，然后立即遮光。接着在560nm下，以1号杯作为空白测定其余杯中溶液的光密度。假定2、3号杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率为100%，然后按下式分别计算其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率。 M/N=100/X M——2、3号杯中溶液的光密度的平均值 N——其余杯中溶液的光密度值 X——其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率 然后以酶液量为横坐标，以其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率（X）为纵坐标制作曲线，根据线性好的曲线所得出的函数关系计算抑制NBT光还原的相对百分率为50%时所加入的酶液量，以该酶液量作为1个酶活单位。 结果计算：SOD活力按下式计算： A=V*1000*60/（B*W*T）

抗氧化酶活性等测定方法

叶绿体得提取 一、试剂配置 １、PＢS提取液:每L水依次加入MES(１9５.2×0。05=９、7６g)、山梨糖醇(0。33×182。2＝60。1２6g)、ＮaCｌ(０、０10×58.5=0、５85g)、MgCｌ(０.002×95=0、19g)、EDＴA(292、２5×０.0０２=０、５84５g)、KH2PO４(２00×0.0005=０、１g);使用时加入ASＡ—Nａ(１98。1×0、00２=0、３962g); 2、悬浮液:将ＰBS提取液中得MES换为238。３×0.05＝１１、９15g得HEＰＥS(238、3×０。05=11。915ｇ); ３、8０%Pｅrｃoｌ:8０ml原液+２0ml水;40％Perｃol:４0ｍl原液＋60ml水; 实际配制: PBS提取液2000ｍl(3个处理*2个品种＊３个重复＊20ml＊３次=1０80mｌ), 悬浮液100ml(３个处理＊2个品种＊3个重复*1mｌ＊3次＝5４ml); 8０％Percol ２０0ml;40%Percｏl 200ml。(3个处理*2个品种*3个重复*3mｌ＊3次=162ｍl) 二、提取步骤 1、10g鲜样加20ｍl提取ＰＢS(50mM MES PH６、1,含0、３3M山梨糖醇,10mM NaＣl,2mMＭgCｌ２,２ｍM EＤTA,０.5 mMKH2PＯ４,2mM ASA—Ｎa,ASＡ—Na使用前现配现加) 2、快速研磨,使叶片碎成绿豆粒大小,４层纱布过滤,去除残渣(注意过滤时不可用力挤压,以免叶绿体膜破碎) 3、滤液20００g ３ｍin,小心倒出上清液,将离心管放入离心机后,使离心机得加速很快上升到预定值(水平转头,加速度调到9),约经30s后很快使其下降停止,整个离心持续大约2—3ｍｉｎ左右完成; 4、沉淀用１ml提取液漂洗表面悬浮物; 5、用1ml悬浮液(５０mM HＥPＥS pＨ7。6,含０、３３mM山梨糖醇,１０mM NaＣl,2mM MgＣl2,2mM EDTA,0。5mMKH2PＯ４,2mM ASA－Ｎａ,ASＡ-Na使用前现配现加)将沉淀悬浮,在分散叶绿体时宜用毛笔轻轻刷,或者用手握住离心管在冰块之间搅动,使叶绿体由于震动分散开来,不要用棉球吸滤,以防被膜压破。叶绿体悬浮时要浓点,含叶绿素２ｍg、ml-1以上,这样有利于保持活性。 6、２000g 1min; 7、沉淀再用悬浮液悬浮;(悬浮液同5,可以不做) 8、用Ｐｅrcol试剂进行梯度离心(将3ml含有80％Peｒcｏl(原液按100％算)铺在１0mｌ离心管下层,再把３ｍl 40％Perｃol铺在离心管中层,然后将1mｌ叶绿体悬浮液轻轻铺在离心管上层)１500ｇ2-3mｉn(用

ABTS_法测定葡萄酒抗氧化活性的研究

第37卷　第11期2009年11月 西北农林科技大学学报(自然科学版) Journal of Northwest A&F University(Nat.Sci.Ed.) Vol.37No.11 Nov.2009 ABTS?+法测定葡萄酒抗氧化活性的研究3 李　华,李　勇,吴　莹,王　华 (西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西省葡萄与葡萄酒工程技术研究中心,陕西杨凌712100) [摘　要]　【目的】确定AB TS?+法测定葡萄酒抗氧化活性的最佳反应时间和葡萄酒的最佳稀释倍数。【方法】应用福林肖卡比色法(FC)测定36种葡萄酒样品的总酚含量(Total phenol index,TPI),从中选出9种总酚含量具代表性的葡萄酒样品,并采用AB TS?+法测定反应不同时间和稀释不同倍数葡萄酒样品的抗氧化活性。【结果】AB TS?+法测定葡萄酒抗氧化活性的最佳反应时间为2～5min;红葡萄酒的最佳稀释倍数为0.2∶10～0.4∶10,桃红葡萄酒的最佳稀释倍数为1∶10～4∶10,白葡萄酒的最佳稀释倍数为3∶10～7∶10。【结论】得到了AB TS?+法测定葡萄酒抗氧化活性的最佳反应时间和葡萄酒的最佳稀释倍数,且无需事先测定总酚含量,简化了试验步骤。 [关键词]　葡萄酒;抗氧化活性;AB TS?+法;反应时间;稀释倍数 [中图分类号]　TS262.6[文献标识码]　A[文章编号]　167129387(2009)1120090208 Research of antioxidant activity of wine s determined by the ABTS?+method L I Hua,L I Y ong,WU Y ing,WAN G Hua (College of Enolog y,Engineering Research Center f or V iti2V i nicult ure,N ort hwest A&F universit y,Yangli ng,S haanx i712100,China) Abstract:【Objective】The p resent st udy aimed to confirm t he best reaction time and wine dilution of t he AB TS?+met hod.【Met hod】The Folin2Ciocalteu colorimetry was used to measure t he total p henol in2 dex of36kinds of wines and t hen9kinds of rep resentative samples were selected f rom t hem,AB TS?+ met hod was used to measure t he antioxidant activities of wines wit h different reaction time and different di2 lutio ns,and was analyzed t he experiment result.【Result】The result s showed t hat t he best reaction time of t he AB TS?+met hod is2to5minutes,t he best dilution range,0.2∶10to0.4∶10for red wines,1∶10to 4∶10for ro se wines,and3∶10to7∶10for white wines.【Conclusion】The st udy has obtained t he best re2 action time and wine dilution to measure antioxident activity of wines by AB TS?+met hod,and t here is no need to measure total p henol content beforehand,so t he test p rocedure is simplified. K ey w ords:wine;antioxidant activity;AB TS?+met hod;reaction time;dilution 经过研究和分析发现,葡萄酒中含有大量的多酚类物质,如白藜芦醇、儿茶酚、表儿茶精、槲皮酮和芸香苷等,这些多酚类物质具有抗氧化活性,除了抑制低密度脂蛋白的氧化、预防心血管疾病以外,还有抗癌、抗炎症和抗血小板凝聚等功能[1],但不同的品种、气候、地理条件和工艺措施,导致葡萄酒中酚类物质在数量和种类上都有明显不同[223]。因此,如何评价葡萄酒中酚类物质的抗氧化活性很有现实意义。 AB TS?+在414,645,734和815nm处均有特征吸收[4]。Miller等[5]在1993年首次介绍了用AB TS?+法来评价一些化合物的抗氧化活性,即根据待测化合物清除AB TS?+引起的吸光度变化来评价其抗氧化活性。此后,AB TS?+法成为一种被广泛采用的抗氧化活性测定方法,用于饮料和食 3[收稿日期]　2009203206 [基金项目]　陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项“陕西省葡萄与葡萄酒产业关键研究”(2007ZD KG209) [作者简介]　李　华(1959―),男,重庆市梁平人,教授,博士生导师,主要从事葡萄与葡萄酒研究。 E2mail:lihuawine@https://www.360docs.net/doc/c213162769.html,

猴头菌提取物抗氧化活性研究

猴头菌提取物抗氧化活性研究 分别采用还原力测定法、Fenton法、2,2-二苯基-1-苦肼基（DPPH）分析法和改良邻苯三酚自氧化法，对猴头菌子实体水提物和醇提物的总还原力，清 除?OH、DPPH?和O - 2?自由基的能力进行测定。结果表明：醇提物还原力 较强，且还原力大小与浓度成正比；猴头菌水提物和醇提物均有清除?OH、DPPH? 和O - 2?自由基的能力，且水提物的效果比醇提物好；水提物和醇提物对?OH、DPPH?和O - 2?的清除能力依次为DPPH?、?OH和O - 2?，并且在一定浓 度范围内，清除率与浓度成正比。 猴头菌；清除自由基；抗氧化活性 人体持续暴露在活性氧与促氧化剂中时，很容易引起机体组织产生氧化应激，导致代谢性功能紊乱以及一系列的慢性疾病［1］。食用一些富含具有抗氧化活性物质的功能性食品可以减轻机体组织氧化应激或预防损伤。一些合成抗氧化剂与天然抗氧化剂相比，尽管具有很强的清除自由基活性，但同时也具有强的毒副作用，因此人们倾向于从自然界中寻求更安全的抗氧化剂。LEE等［2］从桦褐孔菌（Inonotus obliquus）中分离到一些具有较强活性的抗氧化成分（多酚类化合物）。MAU等［3］研究表明灵芝(Ganoderma lucidum)是很好的天然抗氧化剂。同为食用菌的猴头菌(Hericium erinaceus)是著名的药膳两用真菌，具有抗溃疡、抗炎症、抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳、提高机体耐缺氧能力、增加心肌血液输出量、加速机体血液循环、降血糖、保肝护肝和降血脂、降血压等作用［4］。笔者通过对猴头菌子实体的水提物和醇提物总还原力、清除?OH、2,2-二苯基-1-苦 肼基自由基（DPPH?）及O - 2?自由基的研究，旨在为其在医药保健方面的 利用提供理论依据。 1 材料与方法 1.1材料 猴头菌（H. erinaceus)子实体由上海市农业科学院食用菌研究所提供。 1.2主要试剂与仪器 柠檬酸、Na 2HPO 4、NaH 2PO 4、六氰合铁酸钾（铁氰化钾）、醋酸、三氯化铁、维生素C、FeSO 4?7H 2O、30％H 2O 2溶液、水杨酸、无水乙醇、95％乙醇等（国药集团化学试剂有限公司），DPPH（美国Sigma公司），实验用水（娃哈哈纯净水）；infinite M200 PRO酶标仪（瑞士TECAN公司）；UVmini-1240分光光度计（日本SHIMADZU 公司)。 1.3提取物的制备 1.3.1水提物 干燥猴头菌子实体，用粉碎机粉碎，称取50 g粉末，加1 L蒸馏水超声20 min，过滤，滤液减压浓缩，反复3次，合并浓缩液，转至蒸发皿中，60 ℃水浴蒸干，备用。 1.3.2醇提物 同样称取50 g猴头菌子实体粉末，加1 L 95％乙醇超声20 min，过滤，其

生物活性肽的研究及其进展汇总

生物活性肽的研究及其进展 摘要：生物活性肽作为一种来源广泛、种类繁多、功能性良好的生命因子，目前已成为全球范围内的研究热点。研究表明这些肽除具有常规的生物活性,如增加矿物质吸收、调节血压、抗菌、抗氧化、降胆固醇、免疫调节之外还对人类营养有调节作用,因而受到广泛关注。本文综述了生物活性肽的种类、生理功能、吸收、制备研究进展,以期为生物活性肽的进一步研究和应用提供参考。 关键词：生物活性肽，生理活性，吸收 Research and progress of biological active peptide Abstract:Bioactive peptides as one rich sources, wide variety, good functional life factors have been a global research hot spot. Studies have shown that these peptides have some conventional biological activities, such as increase mineral absorption, adjust blood pressure, antibacterial, antioxidant, decrease cholesterol, regulate immune. What’s more, they also have a regulating effect on human nutrition, so they have attracted widely attention. The kinds of bioactive peptides was reviewed in this paper, preparation research progress of physiological function, absorption and biological active peptide in order to provide reference for further research and application. Key words:Biological active peptide, Physiological activity, Absorb 1.功能肽的简介 肽(peptides)是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,是蛋白质的结构与功能片段,并使蛋白质具有数以千万计的生理功能。肽本身也具有很强的生物活性。是由蛋白质中20种天然氨基酸以不同的组合和排列的方式构成的，从二肽到复杂的线性或者环状的多肽的总成。一般说来,肽链上氨基酸数目在10个以内的叫寡肽,10～50个的叫多肽,50个以上的叫蛋白质。人们习惯上也把寡肽中的二、三肽称为小肽。由于构成肽的氨基酸种类、数目与排列顺序的不同,决定了肽纷繁复杂的结构与功能。 生物活性肽( biologically active peptide/ bioactive peptide/ biopeptide) 是指对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物,又称功能肽(functional peptide)[1]。肽由氨基酸组成,人体存在20 种氨基酸,由不同的氨基酸的种类排列,加上数量排列形成,再加上还可能有的二级、三级结构,其种类是十分庞大的[2,3]。每一种活性肽都具有独特的组成结构,不同活性肽的组成结构决定了其功能。此外活性肽在生物体内的含量是很微量的,但却具有显著的生理活性。据研究,有些多肽在10 - 7mol/ L 的浓度时仍具有生理活性,就是说1 mL 的多肽用60 倍水稀释后,仍然具有生理功能。功能肽是源于蛋白质的多功能化合物，是多样化且来源充足的食品原料，具有多种人体代谢和生理调节功能，如易消化吸收、促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等[4] 现代营养学研究发现，人体摄入蛋白质经消化道中的酶作用后，大部分是以寡肽的形式

抗氧化酶SODPODCAT活性测定方法

抗氧化酶 S O D P O D C A T活性测 定方法 集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法 酶液制备：取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液 （pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。 一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法） 1、试剂的配制 （1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)： A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na 2HPO 4 ·12H 2 O（分子量 358.14）71.7g； B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH 2PO 4 ·2H 2 O（分子量 156.01）31.2g。 分别用蒸馏水定容到1000ml。 0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na 2HPO 4 ) 228.75ml，B母液(NaH 2PO 4 ) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。 参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。 （2）130mM甲硫氨酸溶液：取1.9399g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。 （3）100μM EDTA-Na 2溶液：取0.03721gEDTA-Na 2 用磷酸缓冲液定 容至1000ml。 （4）20μM核黄素溶液：取0.0753g核黄素用蒸馏水液定容至1000ml，避光保存。 （5）750uM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.06133g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。 2、酶活性测定 （1）取10ml试管（要求透明度好）

菊花提取物的抗氧化活性研究

！：：：：：：＝＝：＝：２：：！垒曼型兰！蚤茎熊匹塞 菊花提取物的抗氧化活性研究 张尔贤方黎张捷俞丽君肖湘汕头大学理学院生物学系汕头５１５０６３摘要通过菊花提取物对Ｆｅ２＋诱发卵黄脂蛋白ＰｕＦＡ过氧化体系、ＴＢＡｓ生成体系和邻苯三酚一Ｌ吼ｉｎ。ｌ发光体 系的抑制作用，研究了菊花的不同提取物的抗氧化活性。结果表明．菊花黄酮类化合物有清除?ｏＨ、０?：的能力， 且有着较强的抗氧化活性，并且发现菊花抗氧化活性与黄酮类化合物含量相关。 关键词菊花黄酮类化合物抗氧化活性脂质过氧化硫代巴比妥酸反应物 ＡｂｓｔｒａｃｔＡｓｔＩｌｄ”ｖａｓｃａｒｒｉｅｄｏｎａｎｔｉ－ｏｘｉｄａｔｉｖｏａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＦｌｏｓｃｈｒｙｓａｎｔｌｌｅｍｕｍｅｘｔｒａｃｔＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｅｘｔｒａｃｔｗａｓ允】Ｉ ｏｔ、ｎａＶｏｎｅｓＳ０ｍｅｐｒｅｃｃｓｓｃｓｔｏｅｘｔｒａｃＩａａｖＯｎｅｓ打Ｏｍｃｈｌ）％ａｎｔｈｅｍｕｍｆｏｒｓｃａｖｅｎｇｉｎｇａｃｔｉｖｃｏｘｙｇｅｎｒａｄｉｃａｌｗｅｒｅｒｅｐｏｒｃｅｄ１兀 【ｈｌｓｐ印ｃｒＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｎａｖｏｎｅｓｃｏｕｌｄｓｃａｖｅｎｇｅ?ＯＨ、Ｏ＝２ａｎｄａｆ诧ｃｔｔｈｃａｎｔｉ．ｏｘｊｄａｔｉｖｅ ａｃｔｎ７Ｉｔｙ ＫｅｙｗｏｒｄｓＦｌｏｓＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍＡｎ“Ｏ一０ｘｉｄａｔｉｖｅＦＪａｖｏｎｅｓＯｘｙ鼬ｎｒａｄｉｃａｌ 菊花是菊科植物菊（ｃｈｒｙ８ａｎｃｈｅｍｕｍｍｏｒｉｆ０１ｉｕｍＲａｍａｔ）的头状花序．为多年生草本，在我国大部分地区有栽培。传统医学认为菊花的功效包括清热、明目、解毒，治疗头疼、眩晕、心胸烦热、疗疮等作用，民间更以饮用菊花水来解暑热。菊花含黄酮类化合物，本研究通过对菊花的抗氧化作用的初步研究．为进一步开发菊花的保健效用提供理论依据。 １材料与方法 二．二材料、试剂与仪器 千杭自菊：购于市场．绞碎备用。 卵黄悬液：新鲜鸡蛋去卵清，卵黄用等体积的ｐＨ７．４５，ｏ二＿。一，Ｌ磷酸钠缓冲液（ＰＢｓ）配成１：ｉ的悬液，磁力搅拌１０ｍ址再用ｐＢｓ稀释成１：２５的悬液（置于冰箱中备用）。 次黄嘌呤【Ｆｌｕｋａ公司）、黄嘌呤氧化酶（酶活力５ｕ，ｍｌ，广卅１军事医学研究所）、２一脱氧一Ｄ核糖（ｆｅｉｎｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ二ｅ二。÷一。ｅｒｇ，ｎｅｗｙｏｒｋ）、硫代巴比妥酸（生化试剂，上海试剂二厂。 ７５ｉ—Ｇｗ型分光光度计（上海分析仪器厂）、ＧＨＧ—ｃ型生物化学发光测量仪（上海市检测技术所检测仪器厂）、ＤＧＪｏ．５一Ｉ｜冷冻干燥机（军事医学科学院实验仪器厂）、旋转蒸发器（Ｒｏ＝ｊｒｙＥｖａｐｏｒａｔｏｒＲＥ一４７，ＹＡＭＡＴ０ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣｃ。，二二ｄＴｏｋｙ。，Ｊａｐａｎ）、ＢｅｃｋｍａｎＪ２—２１Ｍ高速冷冻离心机３ｅ：息ａｎ，ＵＳＡ）。 ：：方法 二．：二提取工艺。１。’ 干菊花绞碎，加入１５倍体积７ｏ％乙醇热浸提１２ｈ．抽滤，滤渣用热水冲洗，滤液减压浓缩．蒸去乙醇，３ｏｏｏｒ／ｍｉｎ离心：ｏ－二ｊ上清液保存待用（样品Ｉ）。取一定量样品Ｉ，用２倍 体积１００％的正丁醇萃取２次，萃取液蒸干溶剂，再用水定容，得样品ＩＩ。取一定量样品Ｉ，用２倍体积１００％的乙酸乙酯。萃取２次．萃取液蒸干溶剂，再用水定容，得样品ＩＩＩ。取一定量样品Ｉ，用２倍体积１００≈的氯仿，萃取２次．萃取液薰干溶剂，再用水定容，得样品Ⅳ。 干菊花绞碎，１５倍体积水直接浸提１２ｈ，低温浓缩获得样品Ｖ（作为对照）。 １．２．２Ｆｅｎ诱发卵黄脂蛋白ＰＵＦＡ过氧化体系…。 选用１：２５的卵黄悬液吸取ｏ．２ｍｌ，加入一定量的样品．加入ｏ，２ｍｌＦｅｓｏ．２５衄ｏｌ／Ｌ，用ｐＨ７．４，ｏ１ｍｏｌ／Ｌ的ＰＢｓ补充至２ｍ！，３７℃振荡１５ｍｉｎ，取出后加人ｏ．５ｍｌ三氧乙酸（简写ＴｃＡ），３５００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，吸取２ｍｌ上清液加入ｌｍｌ硫代巴比妥酸（简写ＴＢＡ）．加塞，放人沸水浴中１５ｍｉｎ，冷却后，于５３２ｎｍ处比色测出吸光度（Ａ）值：以不加样品管的吸光度为（Ａ．）。样品抗氧化活性（ＡｏＡ）用对卵黄脂蛋白ＬＰｏ的抑制率表示： ＡＯＡ（％）＝（Ａ０一Ａ）／Ａ。×１００％ １．２．３Ｆｅ“次黄嘌呤一黄嘌呤氧化酶一ＴＢＡｓ生成体系ｎ４加样顺序为：Ｆｅｓｏ．（２ｍｍ。１，Ｌ）ｏ．０４ｍｌ、黄嘌呤氧化酶（简写：ｘｏ）（５ｕ／ｍ１）３．５ｕｌ、脱氧核糖（３０ｍｍ０１，Ｌ）ｏ２ｍｌ、ＥＤＴＡ（５吼ｏｌ，Ｌ）Ｏ．０４ｍ１、Ｈ２０２（１７．６黝ｏｌ，Ｌ）ｏ０１ｍｌ、加入ｏ．１ｍｌ样品、ｐＨ７．４ＰＢｓ（Ｏ．１５ｍｏｌ／Ｌ）１．４８ｍｌ、次黄嘌呤（简写：ｘ）（２ｍｏｌ／Ｌ）ｏ．２ｍｌ总体积为２ｍｌ（除ＰＢｓ、Ｆｅ∞．用重蒸水配制外．其它试剂均用ｐＨ７．４ＰＢｓｏ．１５ｍｏｌ／Ｌ配制）。然后，３５℃温浴１５ｍｉｍ．取ｌｍｌ反应液加１％ｗ／ｖＴＢＡ（ＮａｏＨｏ０５ｍｏｌ／Ｌ配制）及冰醋酸ｌｍｌ，混匀后放人沸水浴３０ｍｉｎ，冷却。在５３２ｎｍ处测其吸光度Ａ，以不加样品管的吸光度为ｋ：清除活性以抑制ＴＢＡｓ生成量Ａｓ３２ｎ。值的抑制百分率表示即（Ａ。一Ａ）／Ａ。×ｌｏｏ％。１．２．４超氧阴离子的邻苯三酚“ｕＩｎｉｎ。ｌ发光体系 　万方数据

活性肽的神奇功效

小分子活性肽的神奇功效 经研究表明，小分子活性肽辅以多种维生素和复合微量元素可诱导和促进T淋巴细胞分化、成熟；调节T淋巴细胞群比例，使CD4/CD8趋于正常。同时，增强巨噬细胞的吞噬能力和红细胞免疫功能。可显着增加淋巴细胞功能，并能有效地防止辐射和放化疗及其他污染中毒后白细胞数量的减少，有效地抑制肿瘤细胞生长，起到改善免疫功能的作用。从间接作用而言，小分子活性肽可促使粪便排泄，降低血清胆固醇浓度，使甾醇排泄增加和肝脏高胆固醇浓度下降，对治疗原发性高血压有一定的功效。能抑制脂肪的积蓄，抑制有害菌，排除毒素，促进其对食物营养的消化吸收，以提高人体对药物有效成分的吸收，具有很高的生理活性，人们经常食用小分子活性肽，在强身保健方面有如下功效： 1、主动吸收，迅速恢复体能 肽是蛋白质与氨基酸的中间物质，由数个氨基酸结合而成。分子大小介于蛋白质与氨基酸之间。但是，比氨基酸分子大的肽在人体内被吸收的速度反而比氨基酸更快，原因就在于：小分子活性肽是数个氨基酸分子集中起来被整体吸收，而氨基酸需要一个一个地

被吸收，小分子活性肽能比氨基酸更迅速地被人体吸收。 在恢复体力方面，小分子活性肽也发挥着优异的功效。人体在进行激烈运动时，为了补给能量就需要消耗肌肉中的氨基酸。就是说，身体需要能量的时候就会从肌肉中获取。肌肉中的氨基酸被消耗掉后，肌肉组织就会受到损伤、肌肉产生疲劳感、难以发挥原有的力量。服用小分子活性肽3分钟进入血液，5分 钟转换为体能，在运动前、运动中补给活性肽可以给身体提供充足的能量，能够抑制肌肉力量的下降、长时间维持充沛的体力。 2、消除疲劳 疲劳是由大脑感知的。当人体感到疲劳的时候，疲劳的机体部位向大脑发出疲劳信息，于是人就感到疲劳。从这个意义上说，感知疲劳的中心就在大脑里。如果没有疲劳这种生理反应，我们就会无休止的劳动下去，直至死亡。 大脑疲劳是由氧化血红蛋白浓度的上升引起的，服用小分子活性肽可以抑制氧化血红蛋白浓度的上升，因而能够缓和大脑的精神压力，使人在学习时保持沉着冷静、清醒的记忆，能够减轻工作造成的大脑疲劳。

抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法 一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法） 1、试剂的配制 （1）L磷酸缓冲液(PBS，： A母液：L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量）71.7g； B母液：L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量）31.2g。 分别用蒸馏水定容到1000ml。 L PBS（）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) ，B母液(NaH2PO4) ，用蒸馏水定容至1000ml。参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。 （2）甲硫氨酸溶液：取 Met用磷酸缓冲液（）定容至1000ml。 （3）30μM EDTA-Na2溶液：取用磷酸缓冲液定容至100ml。 （4）60μM核黄素溶液：取核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。 （5）氮蓝四唑(NBT)溶液：取 NBT用PBS定容至100ml，避光保存。 酶液制备：取（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。 2、酶活性测定 （1）反应混合液配制(以60个样为准)：分别取Met溶液162ml，EDTA-Na2溶液，磷酸缓冲液，NBT溶液6ml，核黄素溶液6ml,混合后摇匀； （2）分别取3ml反应混合液和30μl酶液于试管中 （3）将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min； 同时做两支对照管，其中1支试管取3ml反应混合液加入30μl PBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原管，另1支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零。 （4）以不照光的对照管（只有缓冲液并置于暗处）调零后，避光测OD560(出现颜色即可测定)。 （5）酶活性计算：SOD活性单位以抑制NBT光化还原50％所需酶量（测的样品值要在

植物源活性肽研究进展

植物源生物活性肽的研究进展 多肽是由天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称，其中可调节生物体生理功能的多肽称为生物活性肽。与蛋白质相比，活性肽不仅有比蛋白质更好的消化吸收性能，还具有促进免疫、调节激素、抗菌、抗病毒、降血压和降血脂等生理机能。此外活性肽还有较好的酸、热稳定性，水溶性及粘度随浓度变化迟钝等优点，易于作为功能因子添加到各种食品中。我国农作物种类品种繁多，利用这些廉价的植物蛋白开发具有高附加值的生物活性肽产品，越来越受到重视。本文重点综述了降血压肽、抗氧化钛、降胆固醇肽这3类生物活性肽的研究进展，将其结构特征与生理功能的关系进行了归纳，同时归纳了活性肽的生理功能，并指出其发展应用前景。 1. 生物活性肽的生理功能 1.1 抗菌活性 抗菌活性肽通常由细菌、真菌产生，或从动植物体中分离。它们尽管在结构上千差万别，但几乎所有的抗菌肽都是阳离子型的，两亲结构是它们的共同特征[1]。国内外研究成果表明，抗菌肽对部分细菌、真菌、原虫、病毒及癌细胞等均具有强大的杀伤作用。临床试验也表明，抗菌肽能够增强机体抵抗病原微生物的能力，而且在体内还不容易产生耐药性。 1.2 免疫活性[2] 免疫活性肽能够刺激机体淋巴细胞的增殖，增强巨噬细胞的吞噬功能，提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率。从人乳和牛乳的酪蛋白中已检测到具有免疫刺激活性的肽片段，这些肽具有刺激巨噬细胞吞噬能力的作用。另外，乳蛋白、大豆蛋白和大米蛋白等通过适当酶解处理也可产生具有免疫 活性的肽类物质。 1.3 抗高血压活性 血压是在血管紧张素转换酶（angiotensin-convertion enzyme，ACE）的作用下进行调节的，血管紧张素Ⅰ在A C E的作用下可转化为有活性的血管紧张素Ⅱ，使血管平滑肌收缩，引起血压升高。降血压肽是具有抑制ACE活性的肽类， 来源广泛，ACE 抑制肽的主要来源是乳制品和鱼蛋白（沙丁鱼、金枪鱼、

土壤酶活性测定方法综合

土壤酶活性测定方法 1、土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法） 一、原理 脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。 土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。 二、试剂 1）甲苯 2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。 3）柠檬酸盐缓冲液（）：184g柠檬酸和氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至，用水稀释定容至1000ml。 4）苯酚钠溶液（L）：苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和丙酮，用乙醇稀释至100ml （A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。

5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为%，溶液稳定。 6）氮的标准溶液：精确称取硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（ml）。 三、操作步骤 称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10% 尿素溶液和20ml PH 柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。培养结束后过滤，过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计与578nm波长处比色。（靛酚的蓝色在1h内保持稳定）。 标准曲线制作：在测定样品吸光值之前，分别取0、1、3、5、7、9、11、13ml 氮工作液，移于50ml容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。再加入4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计上于578nm波长处比色。然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。 注意事项: 1、每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的蒸馏水代替基质，其他操作 与样品实验相同，以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。 2、整个实验设置一个无土对照，不加土样，其他操作与样品实验相同，以检验 试剂纯度和基质自身分解。

生物活性肽的应用综述

生物活性肽的功能和应用研究 摘要：生物活性肽(bioactive peptides)是指具有生物活性的多肽, 是指对生物体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物。本文主要介绍目前主要的一些生物活性肽的生理功能及应用研究，介绍生物活性肽在食品中一些简单的应用。简单展望一下生物活性肽以后的研究进展。 关键词：生物活性肽；功能；应用； 生物活性肽(bioactive peptides)是指具有生物活性的多肽, 是指对生物体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物。它是一类由20种天然氨基酸以不同的组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同的肽类的总称。生物肽与蛋白质没有本质的区别，但又不同于蛋白质，比蛋白质校、生理活性强。根据肽链上氨基酸的数目，通常把具有2~10个氨基酸、分子量<2000Dalton的肽成为寡肽(oligpeptide)，讲氨基酸数目10~50个、分子量2000~10000Dalton的称为多肽（polypeptide）。 这些活性肽小到只有2个氨基酸的双肽,也可以大到复杂的长链或环状多肽,而且常经过糖苷化、磷酸化或酰化衍生,在细胞生理及代谢功能的调节上具有重要的作用,这些调节作用几乎涉及到人体所有的生理活动,如神经系统、消化系统、循环系统、内分泌系统等。不仅如此,其中许多活性肽还具有原蛋白质或其组成氨基酸所没有的新功能。特别是以数个氨基酸结合生成的低聚肽不仅有比蛋白质更好的消化吸收性能,还具有促进免疫、调节激素、抗菌、抗病毒、降血压和降血脂等生理机能,食用安全性极高。目前人们认同的活性肽的定义是对肌体构成一套高度自动化的物质,是沟通细胞间、血管间联系的信使,为外分泌、内分泌、神经系统行使传递功能,从而使肌体组成了高度严密的系统,促使生物体生长、发育、繁殖正常进行。 生物活性肽的生理功能 1.1抗高血压活性 血管紧张素转化酶(ACE)在血压调节过程中起着非常重要的作用。人体的肾脏可以分泌肾素,作用于血管紧张素释放出无活性的血管紧张素Ⅰ。ACE可以从无活性的血管紧张素Ⅰ的C-末端水解掉2个氨基酸,形成有活性的血管紧张素Ⅱ。血管紧张素Ⅱ是已知最强的缩血管物之一,可以导致血管收缩,引发高血压。同时ACE可水解血管舒缓激肽使其失活,而血管舒缓激肽可以舒张血管、使血压降低。因此ACE在肾素-血管紧张素目前主要的活性肽及其应用体系、血管舒缓素-激肽体系中起着重要的作用。已知抗高血压肽大致上有4种来源:来自乳蛋白的肽类;来自酸奶的肽类;来自鱼贝类(沙丁鱼、金枪鱼)的肽类;来自植物的肽类(玉米醇溶蛋白、无花果)等。 1.2抗菌活性 1972年,瑞典科学家在果蝇中首次发现抗菌肽,随后得到第1个真正意义上的抗菌肽天蚕素(cecropins)。后来科学家们在昆虫、被囊动物、两栖动物、鸟类、鱼类、哺乳动物、植物乃至人等多种生物体内发现了至少800多种抗菌肽,并且某些抗菌肽在临床应用中已取得良好的疗效,如Oren等从豹鳎中分离得到一种33肽的抗菌肽,具有比蜂毒素更强的抗菌活性,其抑菌机理是溶解细菌的细

抗氧化酶的作用

重要的抗氧化酶和抗氧化剂的作用 超氧化物歧化酶（SOD）是美国的McCord和Fridovich在1969年发现的一种清除超氧阴离子自由基的酶。SOD是一种广泛存在于生物体内的金属酶，按金属辅基的成分不同主要分成三类,第一类含铜和锌，称为CuZn-SOD，是最常见的一种，呈蓝绿色，主要存在于真核细胞的细胞浆内。第二类含锰，称为Mn-SOD，呈粉红色，主要存在于原核细胞体、真核细胞的细胞浆和线粒体内。第三类含铁，称为Fe-SOD，呈黄褐色，主要存在于原核细胞中。另外，在牛肝中还发现一种CoZn-SOD[8]。 正常生理状态下，机体产生的自由基和清除自由基的速率处于动态平衡状态。但当机体内自由基产生增多，就会对机体的蛋白质、脂质和DNA造成损伤，导致机体疾病的发生。SOD是生物体内对抗氧自由基的一种最重要的抗氧化酶，是专门清除超氧阴离子自由基的。它的作用是将氧自由基歧化，发生2O2- +2H+ SOD H2O2 + O2的反应。由于H2O2 在SOD活性部位生成，会对SOD本身产生杀伤。催化产生的H2O2 如果不被及时清除，它会与O2-反应生成毒性更大的羟基自由基。衰老自由基学说认为，代谢产生的自由基对机体造成的损害可引起衰老，SOD可有效的清除自由基，在一定程度上延缓衰老。此外，SOD还具有增强机体免疫力，提高机体对自由基引发的疾病的抵抗力，消除运动性疲劳等生理功能[3]。 过氧化氢酶（CAT）是一种末端氧化酶，广泛存在于动植物和微生物体内，酶分子结构中含有铁卟啉环，1个分子酶蛋白中含有四个铁原子[9]。CAT的生物学功能是催化过氧化氢分解为水和氧，2 H2O2 CAT 2H2O + O2 。过氧化氢酶（CAT），广泛存在于动植物和微生物体内的一种末端氧化酶。它的生物功能是催化细胞内的过氧化氢分解，起抗氧化作用，即2H2O2 2H2O+O2，它可防止过氧化氢含量过高对机体组织造成损伤，对细胞起到保护作用。 本研究结果显示，力竭运动后，大鼠的心组织、肝组织和肺组织中CAT活性均表现出升高，这可能是由于运动应激造成大鼠组织过氧化物质增多，使得组织CAT活性对应升高。同时，结果显示，联合补充谷氨酰胺和番茄红素对力竭运动大鼠肝组织和肺组织的抗氧化能力提高的效果最为明显，而单纯补充番茄红素对心脏

纤维素酶活力测定方法_张瑞萍

测试与标准 纤维素酶活力测定方法 张瑞萍 南通工学院(226007) 摘　要　用DN S 为显色剂,分别以滤纸和CM C 为底物,以滤纸糖酶活性(FP A )和羧甲基纤维素酶活性(CM C a se )表征纤维素酶活力。确定酶活测定用波长为530nm,参比溶液应为失活酶、底物和DN S 等共热的反应物;比较了两种底物的酶活力测定方法。结果表明,CM C a se 比FP A 高,说明酶对水溶性底物有较高的活力,也表明吸附对酶的活性部位与纤维素分子链段的结合及催化均有很大影响;对于不同牌号的纤维素酶,织物的酶减量率与CM C 酶活力关系密切。 叙　词:　测试　纤维素酶　活度中图分类号:　TS197 纤维素酶是多组分复合物,各组分的底物专一性不同。纤维素酶作用的底物比较复杂,反应产物不同,致使纤维素酶活力测定方法很多,各国的方法亦不统一。我们选择滤纸、CM C 为底物,原理系利用纤维素酶催化水解纤维素,产生纤维多糖、二糖及葡萄糖等还原糖,与显色剂反应,求出还原糖的浓度,间接求出酶的活力。由不同底物测得的酶活力分别称作FPA (滤纸糖酶活力)和CM C ase (羧甲基纤维素酶酶活力)。本文分析确定酶活力测定的主要条件,比较两种底物的酶活力测定方法的结果,探讨纤维素酶活力与织物减量率的关系,为酶在生产中的利用提供依据。 1　实验方法 1.1　化学药品、材料 纤维素酶(工业品),DNS 试剂(自配),冰醋酸,醋酸钠,葡萄糖(均为分析纯),滤纸(定性),羧甲基纤维素酶CM C (试剂级),纯棉针织物半制品(南通针织厂)。 1.2　FPA 滤纸酶活力和CMC 酶活力的测定 取适当稀释的酶液,分别以滤纸或1%的CM C 溶液为底物,于50℃恒温水解反应1h ;然后加入显色剂DNS,沸水浴中煮沸5min;再加入蒸馏水,于530nm 测定吸光度OD 值。 酶活可定义为:每毫升酶液1min 产生1mg 葡萄糖为一个单位( )。 1.3　针织物酶减量率的测定 将酶处理前后的试样在烘箱中105℃烘至恒重。减量率= 处理前织物干重-处理后织物干重 处理前织物干重 ×100% 2　结果与讨论 2.1　显色剂的选择 选用DNS ,在碱性条件下与还原糖反应,生成有色化合物,用分光光度计比色,确定低分子糖含量。 碱性条件下DNS 与还原糖共热反应如下: O 2N OH O 2N CO OH +还原糖 　H 2N OH CO OH O 2N DN S(黄色) 3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色) 生成的棕红色氨基化合物系比色法测定基础。2.2　最大吸收波长的确定 选取490～580nm 波长对显色液进行比色。由图1可知,不同浓度的葡萄糖溶液在490～500nm 处有最大吸收,DNS 在此波长下也有较明显的吸收。为了排除DNS 的干扰,选择在波长 530nm 处进行测定,此波长下的葡萄糖吸收虽有所降低,然而符合“吸收最大、干扰最小”的原则。 图1　D NS 与葡萄糖的吸收曲线 2.3　底物及酶本身含糖量的影响 在实验过程中发现,底物特别是滤纸,也含有一定的还原糖,在碱性的DNS 试剂中也会发色。而且,试验所用的纤维素酶是一种工业级的复合酶,品种不同,其本身含糖量也不同。为了排除这类还原糖的干扰,参比溶液取失活后的酶、底物、DNS 等共热的反应物。2.4　葡萄糖标准曲线 用不同浓度的葡萄糖溶液作为标准溶液,与DNS 共热反应显色后,测出其吸光度OD 值(见图2)。标准曲线的线性相关系数R 2为0.9991(见图2),线性相当好,可以用于酶活力的测定。 38 印　染(2002No .8) www .cdfn .com .cn