丹参不同部位总酚酸和总黄酮含量分析及其抗氧化活性研究_李欣

Antioxidant Activities and Contents of Total Flavonoids and Phenols from Different Parts of Salvia miltiorrhiza B (College of Food and Bioengineering, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, China)
1.3.3 抗氧化活性的测定
1.3.3.1 DPPH 自由基清除能力的测定 DPPH 溶液的配制：准确称取 7.88mg DPPH 用无水
乙醇溶解，定容于 100mL 容量瓶中，摇匀，配制为浓
度 2 × 10-4mol/L 的溶液，保存于冰箱中，备用。
通常的抗氧剂样品溶液在实验条件下均几乎无色，
对 DPPH 的测量不形成干扰，一般采用 Larrauri 等[8]和
标准曲线为 y=7.728x+0.0185(R2=0.9989)，其中：x 为吸 光度，y 为提取液中总黄酮含量( mg / m L) ，检测波长 5 1 0 n m ，以芦丁来计算。
总酚酸含量的测定采用 Folin-Ciocalteu 法[7]，标准 曲线为：y=0.007x+0.027(R2=0.9982)，其中：x 为总酚 含量(μg/mL)，y 为吸光度，检测波长为 765nm，以没 食子酸来计算。
108 2011, Vol. 32, No. 03
食品科学
※基础研究
丹参不同部位总酚酸和总黄酮含量分析及其 抗氧化活性研究
李 欣，薛治浦，朱文学
(河南科技大学食品与生物工程学院，河南 洛阳 471003)
摘 要：以丹参根、茎、叶为研究对象，在测定其总酚酸及总黄酮含量的基础上，以 VC 为阳性对照，选用还 原力、DPPH 自由基清除率和多不饱和脂肪酸(PUFA)过氧化体系对不同部位醇提物进行抗氧化活性评价。结果表 明：叶中总酚酸和总黄酮含量显著高于其他部位，其总酚酸含量分别为根和茎的 1.07 倍和 6.81 倍；总黄酮含量分 别为根和茎的 4.79 倍和 14.5 倍。在预设质量浓度为 20mg/mL 时，丹参叶醇提物的抗氧化活性最强，其还原力、 DPPH 自由基清除率、对 PUFA 过氧化体系的抑制作用分别相当于 VC(1mg/mL)的 1.08、1.01、5.78 倍。总酚酸的 含量和抗氧化活性之间具有很高的相关性，表明抗氧化活性可能与酚酸类物质有关。 关键词：丹参；总酚酸；总黄酮；抗氧化活性
on Fe3+, scavenging capability on DPPH free radicals and inhibitory effect on PUFA using vitamin C as the reference. Results
indicated that the contents of total phenolic acids and total flavonoids from leaves were significantly higher than those in root and
Yokozawa 等[9]的方法进行研究。但植物提取物中化学成
分复杂，可能干扰吸光度的测定。因此，本实验参考
杨怀霞等[10]和郭亚力等[11]的方法并进行改进，采用该法
研究提取物的抗氧化活性可排除干扰。
向 2.5mLDPPH 的乙醇溶液中加入 1mL 样品，混合
均匀，30min 后用分光光度计在 517nm 波长处测定吸光
stem. Total phenols in leaves were 1.07 folds and 6.81 folds higher than that of root and stem, respectively. Total flavonoids in
leaves were 4.79 folds and 14.5 folds higher than that of root and stem, respectively. Antioxidant activities of ethanol extract from
80% 的乙醇溶液为溶剂，各加入 30mL，置于 50mL 锥 形瓶中，混匀，放入超声清洗器中超声提取 30min 冷却 至室温，过滤取滤液，滤渣进行二次超声振荡提取， 合并滤液，定容至 50mL(相当 20mg 鲜样 /mL)，密闭冷 藏保存，备用。取样品液 1 m L ，作为试样待测。
1.3.2 总黄酮、总酚酸含量的测定 总黄酮含量的测定采用硝酸铝 - 亚硝酸钠比色法[6]，
vitamin C. A positive correlation was observed between the content of total phenols and antioxidant activities, which demon-
strated that the antioxidant activity was related to the content of total phenols.
Key words：Salvia miltiorrhiza Bunge；total flavonoids；total phenols；antioxidant activity
中图分类号：Q946.82
文献标识码：A
文章编号：1002-6630(2011)03-0108-04
唇形科鼠尾草属植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge) 通常以根部入药，是治疗心脑血管疾病的传统中药材， 具有活血化瘀、通络止痛、清热安神的功效[ 1 ] ，主产 于山西、河北、河南、四川、江苏、安徽等地。丹 参根部主要含有两大类活性成分，其中水溶性的酚酸类 成分( 丹酚酸、迷迭香酸、原儿茶酸、咖啡酸、丹参 素等)具有很强的抗脂质过氧化和清除自由基作用[2-3]。
722N型可见分光光度计 上海精密科学仪器有限公 司；FA1004 精密电子天平 上海上平仪器公司；HH-S6 数显恒温水浴锅 金坛市医疗仪器厂；KQ-500DE 型数 控超声清洗器 昆山市超声仪器有限公司；LXJ- Ⅱ B 型 离心机 上海安亭科学仪器厂。 1.3 方法
1.3.1 样品的制备[5] 各称取干燥至恒质量的丹参根、茎、叶各 1g ，以
由于合成抗氧化剂对健康的潜在危害，近年来， 从天然植物中寻找天然的抗氧化剂引起人们极大的兴 趣。以往的研究表明，传统的中药材尤其是唇形科植 物具有很强的抗氧化活性，并且目前已知的抗氧化物质 多属于酚酸类成分。丹参是我国传统医学中应用最早而 且最广泛的药物之一，每年的产量约在 5000～7000t，其 地上部分占全草的三分之二，却被当杂质弃去。国内
1 材料与方法
1.1 材料与试剂 丹参于 2009 年 10 月采自河南孟县药材基地，经河
南科技大学食品与生物工程学院朱文学教授鉴定为 Salvia miltiorrhiza Bunge。将各部位样品(根、茎、叶) 仔细分拣，自然晾干后，粉碎，过 40 目筛，冷藏备用。
芦丁和没食子酸对照品 中国药品生物制品检定 所；福林试剂 上海荔达生物科技有限公司；1,1- 苯 基 -2- 苦肼基自由基(DPPH) 美国 Sigma 公司；抗坏血 酸( 分析纯) 、无水乙醇( 分析纯) 。 1.2 仪器与设备
收稿日期：2010-06-09 基金项目：河南科技大学科研创新能力培育基金项目(2009CZ0015) 作者简介：李欣(1979 —)，女，副教授，博士，研究方向为天然产物活性。E-mail：lixinpxy@
※基础研究
食品科学
2011, Vol. 32, No. 03 109
度 Ai，同时测定 2.5mL DPPH 的乙醇溶液与 1.0mL 80% 乙醇溶液混合液的吸光度 AC 及 2.5mL 乙醇与 1.0mL 样品 混合液的吸光度 Ab，清除率按公式(1)计算：
Ai － Ab
清除率/%=(1－————)× 100
(1)
AC
1.3.3.2 还原能力测定 实验采用高铁盐 - 铁氰化钾比色法[12]测定样品的还
1.3.3.3 PUFA 过氧化体系中抗氧化活性(AOA)的测定 采用以 Fe2+ 诱发卵黄磷脂 C2 位上的极低密度脂蛋白
(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)过不饱和脂肪酸(PUFA)的过 氧化模型，用硫代巴比妥酸法测定样品的抗脂质过氧化 作用，参照文献[13 ]的方法，略有改进。
卵黄悬液：新鲜鸡蛋去清，卵黄用等体积的 pH 7.45， 0.lmol/L 磷酸钠缓冲液(PBS)配成 1:1 悬液，磁力搅拌 10min，再用 PBS 缓冲液稀释成 1:25 的悬液(置于冰箱中 备用) 。
测定方法：在具塞试管中加入 0.4mL 卵黄悬液， 0.1mL 不同浓度样品溶液，0.4mL FeSO4(25mmol/L)， 3.1mLPBS(0.1mol/L；pH 7.45)，混匀于 37℃恒温振荡 15min， 取出后加入 lmL 三氯乙酸(质量分数 20%)，3500r/min 离心 10min，吸取 2mL 上清液加入 lmL TBA(质量分数 0.8%)， 加塞放入沸水浴中 15min，冷却后，以空白管(3mL 蒸馏 水代替)调零，于 532nm 波长处比色测定吸光度，不加 样品管(以 0.1mLPBS 缓冲液代替样品)的吸光度为 A，样 品管的吸光度为 A 样。样品 AOA 用卵黄脂蛋白脂质过氧 化(LPO)的抑制率表示。
外学者们对丹参根的强抗氧化活性进行了大量研究，但 丹参其他部位的抗氧化活性及活性成分未见报道。研究 表明，丹参地上部分不含有丹参酮类脂溶性有效成分， 含有和根部相似的酚酸类有效成分[4]。本实验对丹参不 同部位总酚酸、总黄酮的含量进行测定，并采用 3 种常 用的体外抗氧化活性评价方法，对丹参不同部位乙醇提 取物的抗氧化活性进行比较研究，以期为丹参进一步综 合应用于医药和开发新型保健品提供参考。