猪伪狂犬病活疫苗(HB-98株)的分子特性与免疫效果分析-论文
ｌ疫苗与免疫Ｉ兽医导刊２ｏ１ １年第６期
猪伪狂犬病活疫苗（ＨＢ－９８株）的 分子特性与免疫效果分析 汤细彪’，刘峰 ，谌磊 ，喻红艳 ，尚书 ，满小营 ，陈楚雄 ，吴斌’ （１华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，湖北武汉４３００７０； ２华中农业大学动物传染病诊断中心，湖北武汉４３００７０） 伪狂犬病（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ，ＰＲ）是危害全球养 猪业最严重的急性传染病之一。猪伪狂犬病的临床症 状主要表现在：（１）母猪流产、产死胎、木乃伊胎；（２） 公猪感染睾丸肿胀、萎缩，失去种用能力；（３）新生 仔猪的死亡，仔猪的顽固性腹泻，保育猪呼吸系统综 合症；（４）育肥猪呼吸困难，生长延缓。该病在猪群 中常呈暴发性流行，影响各个阶段的猪群的生产性能。 我国自１９４８年刘永纯首次报道该病以来，迄今已有 近２０多个省、市（区）相继报道发生该病，对我国 的养猪业，尤其是集约化养猪带来了巨大的经济损失。 疫苗免疫接种是预防控制与消灭猪伪狂犬病的根本措 施，全球已有许多国家用不同方法培育了不少伪狂犬 病弱毒株，这些疫苗在控制和净化本国伪狂犬病中起 到了非常重要的作用，本文将对我国最早研发、具有 完全自主知识产权的猪伪狂犬病活疫苗（ＨＢ一９８株） 的分子特性及应用效果进行介绍。 猪伪狂犬活疫苗（ＨＢ－９８株）的研发背景 伪狂犬病最早是由匈牙利的Ａｕｊｅｓｚｋｙ博士于１９０２年 发现。我国首次报道该病是在１９４８年。２０世纪８０年代以 后关于本病发生的病例数逐年增多，至２０世纪９０年代蔓 延至２０多个省市，在各个省份均出现暴发性流行（猪场的 伪狂犬阳性率高达８０％）。给全国的养猪业带来巨大的损失。 正是在这样的背景下，华中农业大学动物传染病实验室在 全国范围内开展了猪伪狂犬病毒的分离和疫苗研发工作， 并率先在我国流产母猪子宫内膜炎分泌物中分离鉴定出伪 狂犬野毒，并命名为鄂Ａ株，随后以鄂Ａ株为种毒，应 用分子基因工程技术、反复筛选、大量临床试验，研制出 具有完全自主知识产权的猪伪狂犬活疫苗ＨＢ一９８株（ＴＫ／ ４２ Ｊ投稿信箱ｓｙｄｋ２００７＠２６３．ｎｅｔ ｇＧ一／ｇＥ三基因缺失疫苗株）。 二．伪狂犬病毒基因工程疫苗（ＨＢ－９８株） 的分子特性 （一）安全的伪狂犬病毒基因工程疫苗须缺失ＴＩ（基因 作为弱毒活疫苗首先必须是安全的。欧盟提出的伪狂犬 病疫苗安全性的要求包括：无局部和全身性反应；不扩 散到非免疫猪；不能通过精液和胎盘传播；致弱必须是 彻底的不返强。 胸苷激酶（ＴＫ）基因位于ＵＬ区，功能为催化脱氧 胸苷磷酸化。ＴＫ基因是疱疹病毒的一个主要毒力基 因。ＴＫ基因的失活大大地降低了病毒毒力而不影响 病毒在组织培养中的增殖，该基因对于病毒在中枢神 经系统中的复制起着主要作用。因此安全的伪狂犬病 基因工程疫苗须缺失ＴＫ基因。而且通过基因工程手 段完全缺失ＴＫ基因的疫苗毒株在临床应用中不会出 现毒力返强的现象。相反，通过自然致弱的毒株没有 缺失ＴＫ基因，如Ｂａｒｔｈａ Ｋ一６１株在使用过程中就曾 出现过疫苗毒株和野毒重组后发生毒力返强的现象。 （二）伪狂犬病毒ｇＧ基因的缺失可激发机体产生 非特异性细胞免疫伪狂犬病毒编码的ｇＧ（ｇＸ）蛋白 是一种趋化因子结合蛋白，ｇＧ蛋白通过结合趋化因 子使趋化因子不能发挥功能，导致机体不易或难以识 别侵入的病毒。缺失ｇＧ基因可以大幅提高疫苗激起 的细胞免疫。ｇＧ基因缺失的疫苗毒株感染动物后， 可提升了非特异性细胞免疫，进而游离的趋化因子 浓度较未缺失ｇＧ基因的野毒株要高，起到快速清除 野毒的能力。同时，ｇＧ基因的缺失可以进一步提高
活疫苗的安全性。Ｐｅｅｔｅｒｓ（１９９３）证明仅单独缺失ｇＥ 或ＴＫ基因的毒株经鼻腔免疫后可从接种猪传播至同 群饲养的非免疫猪；但ＴＫ一／ｇＧ一／ｇＥ一三基因缺失 株在非免疫猪群中则不会传播。所以ＴＫ／ｇＧ一／ｇＥ一 三基因缺失毒株具有更高的安全性。 （三）ｇＥ基因的缺失可应用于伪狂犬病毒的临床 鉴别诊断与疫病净化ｇＥ糖蛋白对病毒在神经系统中 包括三又神经节和嗅神经的扩散中发挥重要作用，但 不是ＰＲＶ生长所必需。所以，ｇＥ基因缺失可以进 步提高疫苗的安全性。ｇＥ—ＰＲＶ毒株免疫的猪血 清中，不产生针对ｇＥ糖蛋白抗原表位的抗体，而自 然感染野毒株后，则可产生抗ｇＥ表位的抗体，因此 通过检测针对ｇＥ蛋白的抗体水平可以区分ｇＥ—ＰＲＶ 疫苗免疫猪和野毒自然感染猪，是监测ＰＲ免疫接种 表１伪狂犬病活疫苗ＨＢ－９８株与Ｂａｒｔｈａ株的区别 区别ＨＢ－９８株传统疫苗Ｂａｒｔｈａ株 主要毒力基因ＴＫ ’蠢缺失＇存在毒力返 ｇＧ基因孽 霎摹囊翥 羹萎Ｊ 免疫趋化因子，增强：： 。 ｇＧ基因 釜鎏 篓 星量勇 巷褒Ｇ【和§两种干扰素及， 。……… …～ｇＥ基因（鉴别诊断）自然缺失 ｇＣ等免疫原性基因耋整保留， 拙 自然缺失 免疫原性存在多个点突变降 低免疫原性 图１不同伪狂犬疫苗免疫后ｃ【干扰素的分泌水平 ６０ ●ａ ５Ｏ ４０ ３０ ２Ｏ １０ ＝ｍｃｋ １Ｘ一／ 一ＲＶＰＣＶ２ ／ｇＥ— ＲＶ５ｍ６ Ｐ科 ／ＯＲＦ２＋ 图２不同伪狂犬疫苗免疫后Ｄ干扰素的分泌水平
ｍｏｃｋ ｎ【一／ｇＧ—ＲＶＰＣＶ２ ｇ６＿／ｇＥ— Ｗ￣５＝６ ＰＲＶ ／ＯＲＦ２＋ 兽医导刊２０１１年第６期Ｉ疫苗与免疫Ｉ 和根除ＰＲ最常用的工具。 （四）ＨＢ－９８株与其它伪狂犬疫苗毒株的分子差异性 分析猪伪狂犬病活疫苗ＨＢ－９８株与国外的伪狂犬病活 疫苗的主要区别体现在疫苗毒株的遗传背景、基因改造 技术、免疫原性和安全性上。首先，国外传统疫苗主要 使用的Ｂａｒｔｈａ Ｋ一６１株和Ｂｕｃｈａｒｅｓｔ株，这两株病毒均 分离自欧洲，与我国的流行毒株在遗传背景上相差较大。 其次，这些毒株是通过在鸡胚上自然盲传获得的，缺失 主要毒力基因的目标性不强，随意性较大，且并没有缺 失ＴＫ基因，存在毒力返强的风险。再次，ｇＧ基因没有 缺失，不能有效的产生非特异性细胞免疫。其主要分子 差异见表１。 三．ＨＢ－９８株可产生仅和ｐ干扰素，具有 广谱抗病毒作用 干扰素具有广谱的抗病毒作用。机体在早期的病毒 感染期间，干扰素即可控制病毒的生长和增殖。同时干 扰素一方面可直接激活免疫细胞，另一方面可间接抑制 病毒的复制过程。除此之外，干扰素还可以活化自然杀 伤细胞和巨噬细胞，并且也会在机体内显示出有效的Ｔ 淋巴细胞与Ｂ淋巴细胞佐剂的作用。 伪狂犬病毒编码的ｇＧ蛋白是一种趋化因子结合蛋 白，由于ｇＧ蛋白与机体本身的趋化因子结合，使趋化因 子不能发挥功能，导致机体不易或难以识别侵入的病毒。 所以缺失了ｇＧ基因的ＨＢ一９８活疫苗能迅速激发细胞免 疫，产生大量的 和 干扰素（图１，图２），从而达到 对病毒性疾病的治疗效果。经过长时间的临床实践证实， ＨＢ－９８激起的非特异性细胞免疫对仔猪腹泻有很好的防 控效果。 四．伪狂犬病毒基因工程疫苗（ＨＢ－９８株） 的临床应用 猪伪狂犬病活疫苗ＨＢ一９８株构建于１９９８年。经过 ８年实验室试验和临床试验，于２００６年获得国家新兽药 注册证书和生产许可证。在８年的实验室试验和临床试 验期间，ＨＢ－９８株表现出稳定性高、针对性强、安全性好、 免疫原性强等特点。口
投稿信箱ｓｙｄｋ２００７＠２６３．ｎｅｔ Ｉ
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武汉科前98伪狂犬说明书
武汉科前98伪狂犬说明书
制品名称 ：
通用名：猪伪狂犬病活疫苗（HB-98株）
英文名：SwinePseudorabiesVaccine，Live（HB-98Strain）
汉语拼音：ZhuWeikuangquanbingHuoyimiao（HB-98ZHU）
主要成分及含量：
含猪伪狂犬病病毒（HB-98株）双基因缺失株，每头份病毒含量≥105.0TCID50
性状：
本品为乳白色海绵状疏松团块，加专用稀释液或生理盐水稀释后迅速溶解。
作用与用途：
用于预防猪伪狂犬病。
用法与用量：
1.按瓶签注明头份，用专用稀释液或灭菌生理盐水稀释，皮下或肌肉注射1ml（1头份）。
2.推荐免疫程序为：PRV抗体阴性仔猪，在出生后1周内滴鼻或肌注免疫；具有PRV母源抗体的仔猪，在45日龄左右（肌肉注射）。经产母猪，每4个月免疫1次。后备母猪，6月龄左右肌肉注射1次，间隔1个月后加强免疫1次，产前1个月左右再免疫1次。种公猪每年春、秋季各免疫1次。 注意事项：
1.疫苗在运输、保存、使用过程中，应防止疫苗接触高温、消毒剂和阳光照射。
2.应对注射部位进行严格消毒。
3.疫苗稀释后限2小时内用完。
4.剩余的疫苗及用具，应经消毒处理后废弃。
不良反应：一般无可见不良反应。
规格：10头份/瓶
包装：10头份/瓶×10瓶/盒
贮藏与有效期：在-20℃以下，有效期为12个月。
批准文号：兽药生字（2011）170041056
规模猪场猪伪狂犬病抗体检测及免疫效果分析
规模猪场猪伪狂犬病抗体检测及免疫效果分析
杜平丽;严秀丽;刘润东;王静;许玉静;韩庆安
【期刊名称】《养殖与饲料》
【年(卷),期】2009(000)007
【摘 要】@@ 伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的一种传染病.随着我国养猪业规模的发展,猪群流动和种猪调运频繁,猪伪狂犬病成为严重危害猪群的原发性疾病之一.它的控制与净化关系到猪群其它疫病的发生与防控,制约着规模化养猪场的经济效益.2008年9月到11月,笔者对猪场进行了猪伪狂犬病、猪瘟及猪蓝耳病的跟踪监测,现将有关情况报道如下.
【总页数】2页(P1-2)
【作 者】杜平丽;严秀丽;刘润东;王静;许玉静;韩庆安
【作者单位】河北省定州市农牧局,河北定州,073000;河北省徐水县农业局,河北徐水,072550;河北省唐山市动物卫生监督所,河北唐山,063004;河北省沧州市孟村县畜牧局,河北沧州,061400;河北省动物疫病预防控制中心,河北保定,071000;河北省动物疫病预防控制中心,河北保定,071000
【正文语种】中 文
【中图分类】S8
【相关文献】
1.福建省部分规模猪场猪伪狂犬病野毒抗体检测及后备母猪的初步净化 [J], 曾新斌;王隆柏;陈小权;陈如敬;修金生 2.规模猪场应用伪狂犬gE基因缺失疫苗免疫 及淘汰措施净化猪伪狂犬病技术 [J],
柒铁平;曾军辉;张胜斌;陆健雄;何桂茂;张楚常
3.崇明县部分规模猪场猪伪狂犬病免疫抗体监测报告 [J], 薛高飞;施蔡培
4.某规模猪场猪瘟、猪伪狂犬病免疫效果评价 [J], 马玉馨;段新慧;徐夏;潘绍华;李文贵
5.2013～2016年广西部分规模猪场猪伪狂犬病gE抗体检测分析 [J], 段群棚;秦毅斌;卢冰霞;何颖;陈忠伟;周英宁;李斌;梁家幸;闭炳芬;蒋冬福;苏乾莲;卢敬专;赵武
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猪伪狂犬病流行病学特征、净化技术及其应用示范
疫病控制2018年2月下
摘 要：近年来，我国生猪养殖产业受到猪伪狂犬病的严重影响，这种传染性疾病一旦大面积爆发，就会对猪群健康造成严重的影响，带来巨大的经济损失。为了降低猪伪狂犬病对养殖经济效益的影响，我们需要对其进行产地彻底的净化。在制定计划方案时，我们需要借鉴国际先进净化经验，结合我国实际情况制定针对性的猪伪狂犬病流行净化方案，采用先进的净化技术，并确保方案能够顺利实施，本文将对猪伪狂犬病流行病学特征及净化技术进行分析。关键词：猪伪狂犬病；流行病学；净化技术
1 猪伪狂犬病流行病学特征猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒引起的一种传染性疾病，具有多种动物共患的特点。如果妊娠期的母猪患病，会出现死胎、流产、木乃伊胎，而处于保育期的猪患病，会出现呼吸道症状与神经症状，并且患病日龄越大，其死亡率越低，成年猪患病，会出现呼吸道症状与发热症状，一般情况下不会造成死亡，当康复后会终身携带病毒。猪伪狂犬病的传播方式分为直接接触传播与间接接触传播两种，而有显著症状的病猪是主要传染源。在公猪患病后，病毒会在其精液中存留12d，在这期间，使用其精液授精，会造成母猪患病，导致妊娠失败。如果种猪处于潜伏感染状态，其中枢神经系统中会存留病毒的基因组，在遇到营养不良、天气寒冷以及应激与免疫抑制疾病发生时，这些病毒基因组就会产生子代病毒，形成猪场内的循环传播。2 猪伪狂犬病净化技术及应用对猪伪狂犬病进行净化就是通过技术手段使猪群中的伪狂犬病临床病例消失，在这个过程中使用的技术就是净化技术。目前我国猪伪狂犬病净化的方案与净化技术如下：2.1 准备好疫苗一般情况下，用于猪伪狂犬病免疫工作的疫苗为伪狂犬病gE基因缺失疫苗，但是，目前使用的伪狂犬病gE基因缺失疫苗分为HB98株、Bartha株、BUK株以及SA215株。在准备疫苗时，养殖户需要根据猪场的具体情况选择合适的伪狂犬病gE基因缺失疫苗。2.2 病毒感染的评估对超过2年未出现伪狂犬病的猪场，进行种猪血液的gE抗体检测，并依据检测结果确定净化措施。首先，如果所有样本gE抗体阴性，需要对猪群进行全部检测，如果检测结果全部为阴性，代笔种猪群为伪狂犬病阴性，采取检测措施。其次，如果样本中gE抗体阳性占总数的10%以下，可采取检测淘汰、检测维持的方案。再次，如果样本中gE抗体阳性占总数的10～20%，可采取强化免疫、检测淘汰的方案。最后，如果样本中gE抗体阳性占总数的20～30%，可需要采取部分清群的方案，而超过30%时，需要采取全部清群方案。2.3 采取强化免疫措施猪伪狂犬病的强化免疫一般使用伪狂犬病gE基因缺失疫苗，并采取生物安全措施，对疾病进行有效的控制，保持病情稳定，防止病毒排出与传播。在具体的免疫中，每年需要对母猪进行3～4次免疫，如果感染压力较大，则需要对母猪采取3次免疫，并且在产前进行1次免疫。与此同时，还需要每年对公猪进行3次免疫。2.4 猪群检测与淘汰在对猪群进行全部检测后，对于gE抗体阳性的猪，需要直接淘汰，而对于可疑的猪，需要对其进行再次检测，也可以在2周后再次抽样检测，如果检测结果仍为gE抗体阳性，需要直接淘汰处理。在对后备种猪进行检测时，需要对其在5月龄与配种前1个月进行gE抗体监测，如果其中1次检测结果为gE抗体阳性或2次均为可疑，应都要对后备种猪进行淘汰处理。2.5 做好清群处理清群处理可分为部分清群与全部清群，在进行部分清群处理时，需要加大对种猪的淘汰力度，对于gE抗体阳性的种猪，需要立即淘汰。如果母猪产下死胎、流产、木乃伊胎，需要对其进行全面检测，将检测结果为gE抗体阳性的母猪淘汰。同时加强gE抗体阴性的补充，保证更新率超过40%，实现猪伪狂犬病的净化。在进行全部清群处理时，需要将猪群全部淘汰，或对其加强免疫接种，作为商品猪，不能作为种猪。2.6 采取必要的生物安全措施在猪伪狂犬病的净化工作中，可以采取的生物安全措施包括以下几个方面：第一，加大检疫力度。在留种或引种时，需要选择伪狂犬病gE抗体阴性的猪作为后备。在后备种猪引入后，需要隔离观察2周，再对其进行狂犬病gE抗体检测，检测结果为阴性，才可以作为种猪。第二，做好消毒与隔离工作。在对猪场环境进行消毒时，可以选择醛类和碘类消毒剂，并且采用合理的消毒流程。与此同时，猪场办公区应与养殖区隔离，如果需要人员出入，需要在办公区或生活区隔离2d以上。第三，对病死猪进行无害化处理。根据《病害动物和病害动物产品生物安全处理规程》与《病死动物无害化处理技术规范》的规定，在处理病死猪时，可以采取深埋、焚烧、发酵化制等方法，也可以采用锯末堆肥、高温发酵生产有机肥等处理方法，需要根据具体情况选择合适的处理方法。3 结语由于猪伪狂犬病会对猪的健康造成严重影响，为生猪养殖户带来巨大的经济损失，因此，养殖户需要根据猪伪狂犬病的流行病学特征以及猪场的具体情况采取合理有效的净化技术。参考文献[1] 张明辉，库旭钢，凌云志，等.猪伪狂犬病病毒HNX株在免疫猪群中水平传播能力的研究[J].中国预防兽医学报，2015，37（6）：426-429.[2] 康冬柳，曾桂根，朱淑琴，等.仓箱式堆肥发酵法处理病死猪试点情况初报[J]. 江西畜牧兽医杂志，2014，（6）：22-23.[3] 童武，张青占，郑浩，等.免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定[J].中国动物传染病学报，2013，（3）：1-7.猪伪狂犬病流行病学特征、净化技术及其应用示范
五个不同厂家伪狂犬病活疫苗免疫效果对比试验
伪狂犬病是由伪狂犬病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）引起的一种急性传染病，以发热、奇痒、脑脊
髓炎为主要特征，该病毒目前仅有一个血清型。
疫苗免疫是预防和控制该病的主要手段，目前我
国伪狂犬病活疫苗毒株以经典株Bartha株为
主［1，2］，Bartha株不仅具有免疫原性强、安全高效的
特点，而且使用后能区分野毒感染和疫苗免疫，为
伪狂犬病的净化提供了良好的工具［3］。通过市场
调研分析，我们发现不同厂家生产的伪狂犬病活
疫苗效果存在差异［4⁃6］，疫苗的选择与伪狂犬病的
防控效果密切相关。因此，本次试验从目前市场
上国产和进口的伪狂犬病活疫苗中挑选了5个进
行病毒含量测定和免疫试验，以评价不同伪狂犬
病活疫苗的免疫效果，为该疾病的防控提供参考。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1试验动物
60头4~5周龄健康仔猪，经PRRSV、CSFV、PRV、PPV和PCV2抗原检测均为阴性，且PRV⁃gB
抗体阳性、PRV⁃gE抗体阴性，未免疫伪狂犬病疫
苗，来源于广东某猪场。
1.1.2试验疫苗
选择5个不同厂家生产的伪狂犬病活疫苗作
为试验疫苗，分别标记如下：A组，广东某厂猪伪
狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61株，传代细胞源）；B组，
进口猪伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61株）；C组，福
建某厂伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61株）；D组，黑
龙江某厂伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61株）；E组，
湖北某厂猪伪狂犬病活疫苗（HB⁃98株）。
1.1.3检测试剂盒
猪伪狂犬病毒gB抗体ELISA检测试剂盒和猪
伪狂犬病毒gE抗体ELISA检测试剂盒均购自IDEXX公司。
1.2试验方法
1.2.1疫苗病毒含量测定
按瓶签注明头份，用无血清培养基将每头份
疫苗作10倍系列稀释，取10-4，10-5，10-6，10-7四五个不同厂家伪狂犬病活疫苗免疫效果对比试验
李少辉，黄秋雪，赖月辉，牛贝贝，侯高伟，林益坤，吴文福*
（广东永顺生物制药股份有限公司，广东广州511356）
猪伪狂犬病疫苗的研究进展
江西农业学报 2010,22(3):154~157ActaAgriculturaeJiangxi猪伪狂犬病疫苗的研究进展杨毅1,李文刚2*,饶宝1,张永涛1,吕玉金1
收稿日期:2009-12-21基金项目:河南省杰出青年基金。作者简介:杨毅(1984-),男,河南荥阳人,在读硕士研究生,从事动物传染病研究。*通讯作者:李文刚。(1.河南农业大学,河南郑州450002;2.郑州牧业工程高等专科学校,河南郑州450011)摘 要:猪伪狂犬病是一种高死亡率的急性传染病,给畜牧业发展带来了很大的损失。综述了各种伪狂犬疫苗的类型、特点、发展动态以及应用前景。关键词:猪伪狂犬病;疫苗;研究进展中图分类号:S852.4 文献标识码:A 文章编号:1001-8581(2010)03-0154-04ResearchAdvanceinSwinePseudorabiesVaccineYANGYi1,LIWen-gang2*,RAOBao1,ZHANGYong-tao1,LUYu-jin1(1.HenanAgriculturalUniversity,Zhengzhou450002,China;2.ZhengzhouCollegeofAnimalHusbandryProject,Zhengzhou450011.China)Abstract:Swinepseudorabiesisanacuteinfectiousdiseasewhichcouldcausehighmortality,andithasbroughtagreatlossonlivestockdevelopment.Theauthorsummarizedthetypes,characteristics,developmentaladvanceandapplicationprospectsofvariousswinepseudorabiesvaccines.Keywords:Swinepseudorabies;Vaccine;Researchadvance 猪伪狂犬病是一种由伪狂犬病毒引起的高死亡率的急性传染病。该病最早发现于美国,后由匈牙利学者Aujeszky首次分离出该病毒,因而又称奥耶斯基病(Au-jeszkysDisease)。目前该病分布于全世界50多个国家和地区,对养猪业的发展构成了严重的威胁,已引起世界各国的高度关注。该病在我国的发生已较严重,是现在危害我国规模养猪业最严重的疫病之一。猪伪狂犬病毒可侵害各种日龄阶段的猪,病毒可在康复猪的嗅球、三叉神经节和其他神经组织中潜伏,在猪受到体内外因素的刺激时,体内的病毒活化后通过排毒和传播,引起妊娠母猪流产、死胎或木乃伊胎,即使具有较高的母源抗体水平的哺乳仔猪在受到野毒感染时,也会出现神经症状,如麻痹,最后因衰竭而死亡,而不易致死的,也会表现出体温升高、食欲下降等临床症状,且耐过病后常出现生长阻滞。猪伪狂犬病野毒更可能诱导或加剧呼吸道症状,也可能与断奶后的腹泻有关,并且还可降低猪的机体对其他疫苗如猪瘟疫苗的体液免疫应答能力,抑制抗体水平的升高。猪伪狂犬病病毒的持续性感染和潜在的免疫抑制,对于猪的疾病防治工作带来了很大的困难。目前,进行疫苗接种是预防、控制甚至消灭伪狂犬病最主要的措施之一。国内外已研制出猪伪狂犬病的常规弱毒疫苗、灭活疫苗、基因缺失弱毒疫苗和基因缺失灭活疫苗,而病毒载体重组疫苗和基因疫苗尚处于实验室研究阶段[1~3]。基因缺失疫苗已在生产中发挥着重要的作用,尤其在美国和欧洲一些发达国家的PRV根除计划中功不可没。1 灭活疫苗1.1 概念与原理 目前,灭活疫苗是将BHK-21细胞或IBRS-2等进行传代细胞培养,当病毒滴度达到要求时,经过收获、灭活并加入油乳剂,从而制成灭活疫苗。1.2 特点 灭活疫苗的安全性高,不会引起散毒,也不会带来潜伏感染的问题。但灭活疫苗不能将内源性蛋白抗原提呈给免疫系统,因而不能诱导细胞毒T细胞反应(CTL)。疤疹病毒本身的免疫原性与毒力有一定的相关性,因此灭活疫苗的免疫效果一般较差,并且灭活疫苗使用的免疫剂量较大,偶尔会发生过敏反应,故在生产上较少应用这种灭活疫苗。2 弱毒活苗2.1 概念与原理 弱毒活苗是将分离到的野毒株经非猪源细胞反复传代,或适应鸡胚,或加入致突变剂在高于一般的培养温度条件下,在细胞培养基上反复传代而获得的疫苗,如Bartha、Buk、NIA4、Alfort和VGNKI等毒株。目前使用较多的是Bartha、Buk毒株。2.2 发展动态 Bartha株是1961年由匈牙利学者Bar-tha分离,经过鸡胚细胞传代致弱的一个疫苗株。在匈牙利应用了几十年,效果都很好,在欧洲应用也很广泛。近年来,采用分子生物学技术对该疫苗株的遗传背景进行了分析,发现在该疫苗株的基因组中存在多个突变,在US区存在涉及gI、gE、11k、28k的一个大缺失。UI区gC存在点突变,该点突变导致其免疫性下降,有人试图修复此突变[4]。BUK株是将Bucharest株通过鸡胚成纤维细胞继代培养800代以上获得的疫苗株。经基因组的分析表明,BUK株在US区的gE基因缺失。我国目前广泛使用的是由哈尔滨兽研所研制生产的PR弱毒冻干疫苗(Bartha-61),是一种gI/gE双基因缺失弱毒疫苗,由于该基因缺失而进一步阻断弱毒株回复毒力的可能性,所以大大提高了这种弱毒苗的安全性。2.3 特点 弱毒苗具有良好的免疫原性,而且价格低廉,至今仍在伪狂犬病的防控中起着重要的作用。但一些实施PRV根除计划的国家已经不再允许使用天然弱毒疫苗,因为未经充分致弱的弱毒苗的毒力可能会返强而导致疾病的流行,弱毒疫苗可建立潜伏感染,并有可能散毒。3 基因工程缺失疫苗3.1 概念与原理 随着分子生物学的发展,猪伪狂犬病病毒的基因组结构、基因缺失对病毒生物学性质和免疫原性的影响得到了广泛研究,使其基因工程疫苗的研究得到更深入的发展。PRV基因缺失主要包括对与毒力相关的基因如TK、RR、gE、gI等基因的缺失以降低病毒毒力;对糖蛋白如gG、gC、gD等基因的缺失以引入选择标记或阻止感染性病毒的产生。该疫苗的研制始于20世纪80年代初,即利用基因工程技术在PRV基因组中插入或缺失一段序列致使PRV的某些基因不能表达,从而致弱PRV,同时又保持其较强的免疫原性。3.2 发展动态 Kit等[5]最早于1984年报道:以PRVBUK株为起始材料,通过缺失TK基因序列的148bp,构建出PRV的TK缺失株PRVBUK-d13株。1987年,Kit等又报道:在PRVBUK-dl3株的基础上通过缺失gC基因序列的1100bp,构建出了缺失TK、gC基因的PRVdlgC/dlTK株[6]。ShinMengFu等[7]于1987年利用PRVshope株,通过缺失BamHI-5片断中的IE基因启动子上游的部分重复序列和TK基因序列的300bp,构建出S-PRV-002缺失疫苗株。Quint等[8]对PRVNIA-3株的US区进行部分缺失(gE基因缺失),构建的PRV突变株能明显降低PRV对小鼠和10周龄仔猪的毒力,可使免疫猪能抵抗强毒的致死攻击。但该突变株对3日龄仔猪仍具有较强的毒力。Vanoirschot等[9]和Moormann等[10]在PRVgE基因缺失的基础上,对TK基因进行缺失,构建了gE/TK双基因缺失突变株PRV783,这种突变株对新生幼猪极为安全,其毒力甚至低于商用传统减毒活疫苗,对牛、羊等易感动物也是无毒的。接种PRV783突变株的动物用免疫抑制剂处理,不会使病毒活化。与商用的传统减毒疫苗(Bartha株疫苗)相比,PRV783株能更好地保护猪免遭强毒攻击和减少攻毒后的病毒分泌。研究显示,引入PRV783株的TK突变通过改变读码框使翻译提前终止而使TK灭活。灭活TK基因能显著降低PRV的毒力但不影响其在培养细胞上的增殖,加之TK基因灭活是一个有效的重组病毒筛选标记,因此,对PRVTK基因缺失突变的研究最早也最为深入。第一个申请专利并注册使用的PRV基因工程疫苗OM-NIVAC-PRV就是TK基因缺失疫苗。AndrewKCheung等报道,利用PRVInFn株,在含有LAT和EPO基因编码序列的BamHI-p片断中缺失800bp,构建出了PRV缺失疫苗株EL-001。ThomasCMetterleiter等于1994年报道:在建立表达PRVgD基因细胞系的基础上,从PRV的BamHI-7片段中缺失5.1kb片段,缺失片段含有gG、gD、gE、gI基因的编码序列,构建出了PRV的gG、gD、gE、gI的4基因缺失株PRV376。利用4基因缺失株免疫猪后,猪不能排出有感染力的病毒,对6周龄仔猪完全无毒,并能抵御强毒的攻击,这为研制伪狂病基因缺失疫苗拓宽了思路。在国内,华中农业大学的陈焕春等在PRVEaTK-株的基础上构建了PRVEaTK-/gG-TK-/gE-株。四川农业大学的郭万柱等构建了PRV闽ATK-/gC-、TK-/gE-等毒株。其中应用较多的有TK-/gC-、TK-/gD-、TK-/gE-、TK-/gG-等双缺失疫苗株和TK-/gE-/gG-三缺失疫苗株。这些双缺失或三缺失疫苗株经临床验证表明,具有良好的安全性和保护力。近几年,GFP作为报告基因而引起了广泛的注意,该报告基因编码绿色荧光蛋白,能自身催化形成发光结构并在蓝光激发下发出绿色荧光,因而是一种全新的报告分子。1997年,AliceJons等把GFP基因整合到PRVgG启动子下游,形成重组病毒,用该病毒接种细胞,在病变的细胞中可观察到稳定的绿色荧光,可用该技术检测PRV在体内的增殖和分布。因此,插入失活型基因工程活疫苗既可作为疫苗使用,也可用于阐明伪狂犬病病毒的分子致病机理研究。上述基因缺失疫苗的构建成功,为伪狂犬病的根除计划打下了物质基础。除此之外,人们还将注意力集中在核苷酸还原酶(RR)、蛋白激酶(PK)、碱性酸外切酶、脱氧尿苷三磷酸激酶等与PRV毒力相关的基因上,试图通过缺失这些基因,更进一步地降低疫苗毒株的残余毒力,从而使突变株更为安全。3.3 特点 由于PRV缺失疫苗株都缺失了目的基因的几百甚至几千个碱基,缺失区域明确,所以它们返祖的可能性极小。PRV缺失株一般都缺失了一个或几个影响病毒毒力的基因,所以大多数PRV缺失株对鼠、猪无毒力或仅有相当低的毒力,但是,仅缺失TK基因的弱毒株对犊牛还有较低的毒力,而对猫、狗毒力较强,若同时再缺失gC或gE基因,则几乎不表现出毒力。大多数的155 3期 杨毅等:猪伪狂犬病疫苗的研究进展PRV缺失疫苗株都有较强的免疫原性,免疫动物都获得了较强的保护力。强毒攻击免疫猪只出现临床症状和增重受阻,而猪只的排毒时间大大缩短,排毒量也大大降低。大多数PRV缺失疫苗株都不能侵入猪的中枢神经系统并复制或在这方面的能力大大减弱,但能在三叉神经节处复制,与强毒株相比,其毒力已大大减弱,难以造成潜伏感染。4 亚单位疫苗4.1 概念与原理 亚单位疫苗是利用基因工程方法将病原保护性抗原基因克隆到原核或真核表达系统中,使其高效表达而制成的疫苗。亚单位疫苗是病毒的结构蛋白,据目前发现的糖蛋白中的gB、gC、gD均能使机体产生中和抗体,这些抗体无论是在体内、体外,还是在有无补体存在的情况下都有中和PRV的能力。因此,gB、gC、gD是研制伪狂犬病病毒亚单位苗的首选糖蛋白。4.2 发展动态 Marchioli等将PRV保护性抗原基因gD克隆到pSV2dhfr载体的人巨细胞病毒(hCMV)的立即早期启动子的下游,然后转入中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中,经氨喋呤筛选出1株表达gD蛋白的CHOgD-17细胞株,经大量培养后用表达产物配以佐剂,鼻内接种免疫猪,能诱导猪产生中和抗体并保护猪抵抗PRV强毒的攻击。ShigejiKATAYAMA用肝素亲和层析纯化的gC和免疫亲和层析纯化的gB、gC、gD分别接种猪,可阻止母猪发生繁殖障碍。Roger等用非离子去污剂NP-40处理病毒粒子和感染细胞得到gD蛋白,将此蛋白配以不完全弗氏佐剂免疫猪,可使猪免疫致死量PRV的攻击,在攻毒后2~10d内均不能从扁桃体、鼻拭子中分离出病毒,而用弱毒灭活疫苗免疫的猪在攻毒后2~8d内能分离到病毒。4.3 特点 亚单位疫苗的安全性高且可以大量生产。疫苗中不含任何病原微生物,接种后不会发生急性、持续或潜伏性的感染,可用于不宜使用活疫苗的某些情况,如妊娠动物。这样可以减少或消除常规活疫苗或灭活疫苗难以避免的热原、变应原、免疫抑制原或其他有害的反应原。此外,亚单位疫苗的稳定性高,便于保存和运输,产生的免疫应答可以与野毒感染所产生的应答相区分,有利于疫病的控制和消灭。5 核酸疫苗5.1 概念与原理 核酸疫苗是指将编码外源蛋白质的核酸表达载体直接转入机体,以激发机体产生针对外源蛋白质特异性的免疫应答。目前已构建了gD、gC基因的表达载体,其在真核细胞中得到了很好的表达,并用其注射动物进行免疫,初步结果表明,这些表达质粒均可激发出高水平的抗体。5.2 发展动态 1996年,Montail等构建了PRVgD基因(由Ñ型腺病毒晚期启动子控制)的真核表达质粒。以其接种仔猪的结果显示:未曾免疫过的仔猪和经过加强免疫的仔猪均能够产生中等水平的中和抗体。Gerdts等[11]将PRVgC或gD置于人巨细胞病毒的主要立即早期启动子控制下构建了DNA疫苗。用表达gC的核酸疫苗免疫能完全保护猪抵抗PRV-75V19毒株的致死性攻击,并能保护猪部分抵抗PRV强毒NIA-3株的攻击;但用表达gD的核酸疫苗免疫却不能保护猪抵抗PRV强毒株的攻击。用1Lg的gC核酸疫苗肌肉或皮下免疫3次,在血清中能检测到抗gC的抗体,并可使猪对NIA-3产生部分保护,还能产生特异性细胞免疫应答。VanRooij等用含PRVgB、gC、gD基因的DNA疫苗免疫猪,含PRVgB基因的DNA疫苗能诱导最强的细胞介导免疫应答,包括细胞毒性T细胞应答;而含PRVgD基因的DNA疫苗却能诱导最强的中和抗体应答。同时前者能减少攻毒猪排毒时间,而含gC或gD的质粒却不能。5.3 特点 DNA疫苗最大的优点是能克服伪狂犬病病毒的潜伏感染,而且能激发细胞免疫。因此受到人们的青睐,同时具有操作简单、成本低廉和安全等特点,颇具开发潜力。6 PRV为载体的重组疫苗6.1 概念与原理 PRV具有宿主范围广、不感染人、基因组大和可供外源基因插入或替代的非必需基因多等特点,适合于将其改造成表达外源基因的活载体疫苗,国内外在这方面均进行了诸多探索。6.2 发展动态 1987年以来,国外某些实验室先后利用PRV基因缺失株作载体,成功地构建了多种重组疫苗株。VanZijl等成功地构建了表达HCVE1基因的重组PRV疫苗株。重组病毒免疫后,保护猪不仅能抵抗PRV攻毒,而且能抵抗HCV致死性的攻毒。因此,用一种病毒疫苗能够预防猪的2种重要的病毒性疾病。Peeters[12]等把CSFVE2基因置于HCWIE启动子控制下,将其整合于PRVgE基因缺失突变株的gD位点,构建了表达E2的gE、gD双基因缺失重组病毒。这种重组病毒作为双价疫苗,能使猪同时获得对PRV和CSFV两种强毒致死攻击的保护。由于gD基因的缺失,从而阻止了感染性PRV的产生,从而彻底解决了重组病毒的生物安全性问题。但比较而言,这种重组病毒的保护效果较差。Knapp等[13]将牛疤疹病毒Ñ型(BHV-1)gE和gI基因整合于gE、gI双缺失PRV突变株的gG位点进行表达,研究发现:gE、gI双基因缺失的PRV病毒丧失的毒力因BHV-lgE和gI基因的整合而恢复。这表明gE-gI蛋白是不依赖于病毒和宿主的固有毒力因子。这对发展PRV基因缺失和重组病毒活载体疫苗具有积极的指导意义。156江 西 农 业 学 报 22卷
猪伪狂犬疫苗的选择
猪伪狂犬疫苗的选择郭照成/黑龙江省哈尔滨市哈药集团生物疫苗有限公司 150069
摘 要：本文主要讲述了决定猪伪狂犬疫苗效果的几个因素，从这几个因素出发，筛选出更适合的猪伪狂犬疫苗，以期能控制猪伪狂犬病的发生。关键词：伪狂犬；疫苗；防控猪伪狂犬病是由疱疹病毒科中的伪狂犬病毒引起的急性传染病，该病毒对多种宿主都具有感染性，其中对猪的危害性最大，猪作为该病毒的天然宿主，同时又充当着病毒贮存者和传播者的角色。目前，世界上很多国家都净化了伪狂犬病，但该病在众多国家仍是制约养猪业发展的重要因素。尤其是2011年以来，在中国发现了变异的伪狂犬毒株，该变异毒株不仅在基因上改变很大，而且病毒的致病力也有很大程度的增强，给中国养猪业带来很大的打击。妊娠母猪感染伪狂犬病毒后，会引起流产、产死胎和弱仔的情况，仔猪的神经症状比较明显，同时会伴随着腹泻、尖叫等症状，最终机体脏器衰竭而死亡。对于伪狂犬病的防控，世界公认的策略就是疫苗免疫，然而在选择使用何种疫苗时，很多养猪人并不能十分清楚疫苗中的奥秘，本文针对选择伪狂犬疫苗时需要关注哪些重点，进行概述。1 毒株对于某一种疫苗而言，毒株是非常重要的，它是疫苗发挥免疫原性最根本的体现。猪伪狂犬病是一个历史悠久的猪病，世界上很多国家都已经净化了猪伪狂犬病，目前我国已经将净化伪狂犬病提上日程，所以在选择疫苗时一定要考虑净化的操作性。借鉴其他国家伪狂犬病根除的经验，选择一个能够区分疫苗毒与野毒的疫苗是净化的前提，gE基因缺失是区分疫苗毒与野毒最好的工具，发现野毒感染的种猪及时淘汰是猪伪狂犬病净化的宗旨。在选购伪狂犬疫苗时，最好选择基因是自然缺失的，这种自然缺失的疫苗免疫原性好，最重要的是安全性高，不容易造成毒力返强，复制力也很强。另外基因缺失并不是越多越好，缺失过多会造成免疫原性的降低，并且如果Tk基因缺失会影响到疫苗的滴鼻免疫效果，不能起到提前占位的作用。目前，全球最经典的毒株是bartha毒株，很多国家都凭借着该毒株消灭了猪伪狂犬病，该毒株是通过鸡胚进行传代致弱，然后制成疫苗。目前我国广泛免疫Bartha-K61株疫苗，该疫苗为gI/gE双基因缺失，毒力基因的缺失阻断弱毒株恢复毒力的可能性，从而保证了弱毒苗的安全性。2 病毒含量疫苗能够引起机体的免疫应答，在很大程度上取决于病毒含量的高低，但对于病毒含量而言，并不是越高越好，据相关实验得出数据显示，抗原含量从低到高提供的保护力曲线是一个抛物线，也就是说，病毒含量到达一定高度后，与免疫效果不再呈正比，如果含量过高反而会带来负面的影响。实验室培养高病毒含量的病毒需要在适应的细胞上长期传代，传代的代次越高，可能会增加病毒的抗原含量，但会使病毒在猪体内的适应性慢慢丧失，进而会导致病毒复制能力变差，最终会降低疫苗的免疫原性。同时，过高的病毒含量会导致猪只免疫抑制，甚至会引起机体发病。对于Bartha-K61毒株来说，只要高于105.0TCID50/头份就能很好的发挥免疫保护作用。在2012年，很多省份多发生了由于抗原含量过高导致机体发病死亡的案例。3 佐剂疫苗佐剂作为灭活疫苗制作过程中不可或缺的重要成份，不仅是携带抗原的载体，同时也可以辅助抗原能够很好的继发免疫反应，延长保护时间，但是对于活疫苗而言，佐剂的重要性就显得不是那么重要，活疫苗稀释液的缓冲稳定性是疫苗免疫成败的重要因素，缓冲稳定才能保证病毒能够在机体内成功复制，产生的抗体持续时间长，保护更确实。所以，要根据厂家指导要求，选用猪伪狂犬疫苗专用的稀释液。另外，尽量不要使用含有油佐剂的伪狂犬疫苗，其中的油成分很容易继发圆环病毒病的发生，同时油佐剂在吸收方面也不是很理想，注射部位的红肿时有发生。4 免疫后抗体监测正常来说，健康猪只免疫伪狂犬弱毒疫苗后7d开始产生抗体，大约35d达到高峰。免疫完疫苗后，可以通过检测gB及gE抗体值来评估疫苗的保护效果。当gB抗体值高而且离散度小，gE抗体为阴性时，证明猪只免疫后处在良好的免疫状态，机体对疫苗的免疫应答效果好。如果gE抗体出现阳性，证明该猪只正在处于感染状态或者有既往野毒感染史。为了实施伪狂犬病净化工作，对于gE抗体阳性的种猪，考虑淘汰处理。在选择伪狂犬疫苗时，可以针对多个品种疫苗免疫后的抗体监测，筛选出抗体高而且整齐，同时持续时间长的疫苗作为猪场伪狂犬病净化的工具。综上所述，在日常养猪生产工作中，疫苗免疫是防控猪病非常有效的措施，但是疫苗对猪只的保护程度受多种因素的影响，我们在评价疫苗时，要从整个大局出发，除了疫苗本身的因素外，还要考虑猪只的健康状况、工作人员的免疫操作等方面，综合评价疫苗的免疫效果。参考文献：[1]罗高旺.一例仔猪急性伪狂犬病的诊治体会[J].福建畜牧兽医,2016(5): 78~79.[2]高建鹏,张莉,齐亚银.2016年-2017年新疆规模化猪场伪狂犬病抗体检测[J].动物医学研究进展,2020(1): 121~125.[3]张文通,魏凤,苗立中,等.国内外商品化猪伪狂犬病疫苗分类及特点[J].养猪,2017(6): 119~120.106科学用药 2021年第5期
猪伪狂犬病毒的分子生物学研究进展
猪伪狂犬病毒的分子生物学研究进展
【摘 要】猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒引起的家畜和野生动物的一种急性传染病。该文介绍了伪狂犬病病毒的特征、病毒的基因组学和疫苗研究的分子生物学进展,为进一步认识和控制猪伪狂犬病奠定基础。
【关键词】猪伪狂犬病；基因；分子生物学
伪狂犬病（Pseudorabies,PR），是由疱疹病毒科、α疱疹病毒亚科中的伪狂犬病毒（PRV）所致的一种急性传染病。PRV可引起多种家畜、实验动物和野生动物发病，已证实有35种动物可被感染，包括猪、牛、绵羊、兔、狗、水貂、雪貂、狐狸、猫和大鼠等。猪是PRV的主要宿主，成年猪一般为隐性感染，但终身带毒和排毒，成为本病的主要传染源，在本病的传播过程中具有重要意义。
目前本病在世界范围内普遍发生，已有50多个国家和地区报道发生PR。随着规模化养猪的不断发展和强毒株的出现，PR的发生和流行日趋严重，现在已成为对全球养猪业危害最大的传染病之一，每年给养猪业造成了巨大的经济损失。
1.伪狂犬病毒的特征
PRV属于疱疹病毒科甲型疱疹病毒亚科，猪疱疹病毒Ⅰ型。其完整病毒粒子为圆形，直径150nm～180nm，核衣壳直径为105nm～110nm。有囊膜，囊膜表面有长约8nm～10nm呈放射状排列的纤突。
PRV对外界环境的抵抗力较强，55℃50min、80℃3min或100℃瞬间才能将病毒杀灭。在低温潮湿环境下，pH 6～8时病毒能稳定存活；在干燥条件下，特别是在阳光直射下，病毒很快失活。
PRV基因组为线状双链DNA，大小约180kb，G＋C含量高达74%。病毒基因组由长独特区、短独特区以及位于US两侧的末端重复序列与内部重复序列组成。对PRV基因组序列测定发现其由72个阅读框组成，可编码70种蛋白，目前已发现和命名的有gB、gC、gD、gE、gG、gH、gI、gK、gL、gM、gN，11种糖蛋白。编码gC、gE、gG、gI、gM和gN的基因为病毒复制非必需的，gB、gC、gD、gE和gI与病毒的毒力有关。此外，胸苷激酶、核苷酸还原酶、蛋白激酶等几种酶也与病毒的毒力密切相关，其中胸苷激酶是PRV最主要的毒力基因。糖蛋白gB、gC、gD在免疫诱导方面最为重要。
猪伪狂犬病活疫苗(HB-98株)的分子特性与免疫效果分析
ｌ疫苗与免疫Ｉ兽医导刊２ｏ１ １年第６期
猪伪狂犬病活疫苗（ＨＢ－９８株）的 分子特性与免疫效果分析 汤细彪’，刘峰 ，谌磊 ，喻红艳 ，尚书 ，满小营 ，陈楚雄 ，吴斌’ （１华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，湖北武汉４３００７０； ２华中农业大学动物传染病诊断中心，湖北武汉４３００７０） 伪狂犬病（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ，ＰＲ）是危害全球养 猪业最严重的急性传染病之一。猪伪狂犬病的临床症 状主要表现在：（１）母猪流产、产死胎、木乃伊胎；（２） 公猪感染睾丸肿胀、萎缩，失去种用能力；（３）新生 仔猪的死亡，仔猪的顽固性腹泻，保育猪呼吸系统综 合症；（４）育肥猪呼吸困难，生长延缓。该病在猪群 中常呈暴发性流行，影响各个阶段的猪群的生产性能。 我国自１９４８年刘永纯首次报道该病以来，迄今已有 近２０多个省、市（区）相继报道发生该病，对我国 的养猪业，尤其是集约化养猪带来了巨大的经济损失。 疫苗免疫接种是预防控制与消灭猪伪狂犬病的根本措 施，全球已有许多国家用不同方法培育了不少伪狂犬 病弱毒株，这些疫苗在控制和净化本国伪狂犬病中起 到了非常重要的作用，本文将对我国最早研发、具有 完全自主知识产权的猪伪狂犬病活疫苗（ＨＢ一９８株） 的分子特性及应用效果进行介绍。 一．猪伪狂犬活疫苗（ＨＢ－９８株）的研发背景 伪狂犬病最早是由匈牙利的Ａｕｊｅｓｚｋｙ博士于１９０２年 发现。我国首次报道该病是在１９４８年。２０世纪８０年代以 后关于本病发生的病例数逐年增多，至２０世纪９０年代蔓 延至２０多个省市，在各个省份均出现暴发性流行（猪场的 伪狂犬阳性率高达８０％）。给全国的养猪业带来巨大的损失。 正是在这样的背景下，华中农业大学动物传染病实验室在 全国范围内开展了猪伪狂犬病毒的分离和疫苗研发工作， 并率先在我国流产母猪子宫内膜炎分泌物中分离鉴定出伪 狂犬野毒，并命名为鄂Ａ株，随后以鄂Ａ株为种毒，应 用分子基因工程技术、反复筛选、大量临床试验，研制出 具有完全自主知识产权的猪伪狂犬活疫苗ＨＢ一９８株（ＴＫ／ ４２ Ｊ投稿信箱ｓｙｄｋ２００７＠２６３．ｎｅｔ ｇＧ一／ｇＥ三基因缺失疫苗株）。 二．伪狂犬病毒基因工程疫苗（ＨＢ－９８株） 的分子特性 （一）安全的伪狂犬病毒基因工程疫苗须缺失ＴＩ（基因 作为弱毒活疫苗首先必须是安全的。欧盟提出的伪狂犬 病疫苗安全性的要求包括：无局部和全身性反应；不扩 散到非免疫猪；不能通过精液和胎盘传播；致弱必须是 彻底的不返强。 胸苷激酶（ＴＫ）基因位于ＵＬ区，功能为催化脱氧 胸苷磷酸化。ＴＫ基因是疱疹病毒的一个主要毒力基 因。ＴＫ基因的失活大大地降低了病毒毒力而不影响 病毒在组织培养中的增殖，该基因对于病毒在中枢神 经系统中的复制起着主要作用。因此安全的伪狂犬病 基因工程疫苗须缺失ＴＫ基因。而且通过基因工程手 段完全缺失ＴＫ基因的疫苗毒株在临床应用中不会出 现毒力返强的现象。相反，通过自然致弱的毒株没有 缺失ＴＫ基因，如Ｂａｒｔｈａ Ｋ一６１株在使用过程中就曾 出现过疫苗毒株和野毒重组后发生毒力返强的现象。 （二）伪狂犬病毒ｇＧ基因的缺失可激发机体产生 非特异性细胞免疫伪狂犬病毒编码的ｇＧ（ｇＸ）蛋白 是一种趋化因子结合蛋白，ｇＧ蛋白通过结合趋化因 子使趋化因子不能发挥功能，导致机体不易或难以识 别侵入的病毒。缺失ｇＧ基因可以大幅提高疫苗激起 的细胞免疫。ｇＧ基因缺失的疫苗毒株感染动物后， 可提升了非特异性细胞免疫，进而游离的趋化因子 浓度较未缺失ｇＧ基因的野毒株要高，起到快速清除 野毒的能力。同时，ｇＧ基因的缺失可以进一步提高
国内猪场猪伪狂犬病疫苗的免疫现状、存在问题及免疫策略
50猪业科学 SWINE INDUSTRY SCIENCE 2019年36卷第6期主题策划
FEATURE
国内猪场猪伪狂犬病疫苗的免疫现状
、
存在问题及免疫策略
王怀禹
（南充职业技术学院
，四川 南充 637131
）
基金项目：南充市科技计划项目（18YFZJ0006）
作者简介：王怀禹（1968—），男，教授，主要研究方向为动物遗传育种与繁殖，E-mail：wanghuai_yu@猪伪狂犬病
（PR
）是伪狂犬病
病毒
（PRV
）引起的高度接触性和
急性传染病
。PRV是猪伪狂犬病的
病原
，具有嗜神经性
，它感染猪群
以后将使母猪产生繁殖障碍
，导致
母猪流产
、产死胎
，新生仔猪产生
腹泻和神经症状
，尤其是小猪的致
死率非常高
；公猪的睾丸肿胀
、萎缩
，
成年猪感染后虽不易死亡
，但可长
期带毒
。该病毒自1902年被匈牙利
学者Aueszky发现以来
，给世界范
围内的养猪业造成了巨大的经济损
失
。迄今为止
，该病毒已经出现了
100多年
，但在很多养猪国家仍然
无法得到有效根除
。1947年
，我国
兽医行业的先驱刘永纯先生率先从
猫体内分离到该病毒
，首次在猫上
发现PRV感染的案例
，确认了该病
在我国的存在
。1956年
，周圣文首
次发现国内哺乳仔猪被PRV感染
。
此后PRV给我国养猪业造成了巨大
损失
，尤其是2011年以来
，伪狂犬
病毒变异株的出现和广泛流行
，严
重制约了生猪产业的健康发展
。
1 猪伪狂犬疫苗应用概况
目前
，国内外商用的猪伪狂
犬疫苗大致可分为以下3类
（见
表1
）：一是将分离的野毒或强毒经摘 要
：猪伪狂犬病是伪狂犬病病毒引起的高度接触性和急性传染病
，给世界范围内的养猪业造成了巨大的经
济损失
。近年来
，由于伪狂犬病病毒毒株不断产生新的变异
，使猪场防控和净化猪伪狂犬病的难度不断加大
。
文章分析了猪伪狂犬病疫苗及免疫现状
、疫苗免疫存在的问题
、疫苗免疫面临的挑战及对策
，希望对养猪从
业者有所帮助
。
关键词
：猪伪狂犬病
；PRV
；疫苗免疫
甲醛灭活后
，加佐剂乳化制成油乳
剂灭活疫苗
猪伪狂犬病免疫防制技术探讨
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猪伪狂犬病免疫防制技术探讨
1．灭活疫苗和弱毒草疫苗的应用。
四、五年前，这是一个争论最多的问题,主要涉及以下两方面：
1．1安全性。业界人士认为灭活疫苗很安全，而弱毒疫苗可能存在散毒和毒力返强等安全隐患。事实上，早在此前弱毒疫苗在欧美国家已经使用了数十年，证明其很安全。现在，大多数猪场已经接受了使用弱毒疫苗，几年的实践也证明了弱毒疫苗的安全性。
1．2免疫效力。一般来说，灭活疫苗能激发比弱毒疫苗更高的抗体。因此一些业内人士据此认为前者比后者的免疫效果好。显然，仅仅根据抗体水平的高低来判断疫苗的效力不够全面，因为机体依赖多种免疫机制抵抗病毒的感染，主要有干扰素、体液免疫、细胞免疫、局部免疫和超感染占位竞争等。灭活疫苗和弱毒疫苗在上述机制中所发挥的效力有较大差别，见表：免疫机制疫苗类型干扰素体液免疫细胞免疫局部免疫占位灭活疫苗+++++弱毒疫苗+++++++++++++++++++弱毒疫苗更加接近于病毒自然感染的情形，能激发机体多种免疫机制，对机体提供迅速而全面的保护。循环抗体（即体液免疫）在中和病毒方面可以发挥很重要的作用，但抗体的作用受到其所能达到的部位的限制，对进入细胞的病毒和病毒感染门户部位（如上呼吸道），抗体的中和作用很难发挥，这就有赖于细胞免疫和其它免疫机制的作用。一般来说，细胞免疫在抗病毒感染中起着更重要的作用。又由于除体液免疫以外的其它免疫机制作用十分迅速，因此弱毒疫苗在紧急接种方面优势明显。几年的临床应用验证了弱毒疫苗具有比灭活疫苗更好的免疫效果。
2．免疫程序。各猪场实施的免疫程序有一定差别，对小猪是否需要免疫的争论比较多。在江西省，大多数猪场仅对种猪进行免疫，以预防繁殖障碍，并
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通过初乳保护小猪。也有少部分猪场对仔猪进行免疫接种。若要从根本上控制伪狂犬病，仔猪的疫苗接种是必需的。因为仔猪不接种疫苗，一旦母源抗体下降了或消失了，它们就会受到野毒的感染，尽管这些猪不表现临床发病，但它们成为终身带毒者并向外排毒，增加环境感染压力。这样，野毒就在猪场内不断循环感染，威胁着猪群的安全。隐性感染还会降低猪的日增重和饲料报酬。在生产正常情况下，笔者推荐种猪在配种前免疫2次，以后每四个月免疫一次。仔猪于是10周龄左右免疫一次。疾病爆发时需要全群普免。