柠檬精油的抗菌活性研究

柠檬（ Citrus limon） 属芸香科（ Rutaceae） 柑橘属常绿小乔 木，其枝叶花果均含特殊芳香油［1］。柠檬精油主要存在于柠 檬外果皮的油细胞中，平均含量约 0． 7% ～ 0． 8%［2］。柠檬精 油富含柠檬烯、柠檬醛等多种特殊成分，可用于薰身洗面，护 肤保健，起到促进新陈代谢、抗菌防腐的作用，此外还可做食 品添加剂，给食品调香增味。近年来许多研究发现，精油成 分亦具有强烈的抑制或杀死真菌等微生物的特性［3 －6］。当 前在动植物病原菌对化学杀菌剂产生抗药性、农药残留危害 日渐加剧的形势下，精油可作为一种有待开发的新型杀菌物 质进行研究［7］。目前关于柠檬精油抗菌性研究相对较少，因 此笔者建立了小白鼠肺炎模型，将柠檬精油制成固体栓剂， 利用栓剂中柠檬精油自然挥发的特性，通过动物试验研究了 柠檬精油对肺炎小白鼠的治疗作用，以期为柠檬精油在预防 人口密集场所呼吸道疾病交叉感染，及治疗呼吸道疾病方面 提供科学依据，也为柠檬精油在天然消毒杀菌产品开发利用 方面提供参考。 1 材料与方法 1． 1 材料 18 ～ 22 g 雌雄小白鼠若干，购自成都市实验动 物配送中心； 柠檬精油，购自江西雪松天然药用油有限公司； 保护伞固体栓剂（ 治疗猪肺炎） ，购自成都福临生物技术公 司； 琼脂、吐温 － 80、山梨酸钾、琼脂营养粉、75% 酒精、乙醚； 超净工作台、恒温生化培养箱、高压蒸汽灭菌锅、接种针、1 ml 注射器。
药物对照组 8 只，在圈养小白鼠笼上放置保护伞固体栓剂。 肺炎小 白 鼠 的 恢 复 性 治 疗，小 白 鼠 平 均 存 活 率 提 高 了
饲养笼分别放于不同的房间，室温适宜。小白鼠以专用饲料 49． 2% ，说明柠檬精油可通过呼吸作用直接到达肺部发挥抑
喂养，让其自由采食饮水。给药后，观察小白鼠生理活动情 菌作用。我国柠檬资源丰富，加强有针对性的现代特色药剂
内观察 4 h，无明显异状，则建模成功。
3 结论与讨论
1． 5 柠檬精油固体栓剂药效试验 取 24 只已成功建立肺
试验中成功将柠檬精油制成固体栓剂，使其能够持续、
炎模型的小白鼠随机分成 3 组，柠檬精油组 8 只，在圈养小 均匀向空气中散发，发挥其抑菌杀菌活性，在成功建立小白
白鼠笼上放置柠檬精油固体栓剂； 空白对照组 8 只； 保护伞 鼠肺炎模型的基础上，柠檬精油以小鼠自然呼吸的方式用于
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40 卷 10 期
秦海燕等 柠檬精油的抗菌活性研究
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菌液 0． 05 ml，用手触摸小白鼠腹部，在小白鼠左下腹部找到 解剖观察发现，死亡小白鼠肺部均有针孔，表明菌液注射到
最后肋骨，从下至上，摸至左侧第 3 与第 4 根肋骨之间，进针 肺部； 存活小白鼠肺部亦有针孔，肺部总体呈淡红色，弹性良
穿过胸腔，刺入肺小心推注。注射完成后，将小白鼠置于笼 好，其他无明显病变特征，表明肺部得到恢复甚至被治愈。
况并记录，每日 2 次。试验 3 次重复。
开发，将会使柠檬精油ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ呼吸道疾病的治疗方面的应用前景
2 结果与分析
非常广阔。
2． 1 柠檬精油固体栓剂对肺炎小鼠的影响 小白鼠在感染 参考文献
肺炎病菌后的第 1、2 天均表现精神沉郁、活动量明显下降、 食欲不振等，从第 3 天开始柠檬精油组和保护伞组有部分小 白鼠出现好转，并在 7 d 后生理活动情况恢复正常，但空白对 照组死亡情况较为严重。且柠檬精油组和保护伞组的小白 鼠死亡率低于空白对照组，柠檬精油组存活率为 62． 5% ，保 护伞阳性 对 照 组 存 活 率 为 75% ，空 白 对 照 组 存 活 率 仅 为 13． 3% 。可见柠檬精油组与空白对照组差异显著，与空白对 照组相比，柠檬精油使肺炎小白鼠存活率提高了 49． 2% ，说 明柠檬精油具有一定的抗菌活性。 2． 2 空白组小白鼠存活原因 注射菌液时可能未注射成 功，小白鼠肺部没有感染； 由于小白鼠体重的差异，注射的剂 量可能不足； 小白鼠个体体质差异，可以自行恢复。 2． 3 试验组小白鼠死亡、存活原因 对试验组小白鼠及时
摘要 ［目的］研究柠檬精油的抗菌活性。［方法］将柠檬精油作为抑菌活性物质制作成固体栓剂，以穿刺肺叶注射菌液的方法建立小 白鼠肺炎模型，利用柠檬精油固体栓剂自然挥发的特性对肺炎小白鼠进行治疗，同时设立空白对照与保护伞阳性对照，观察各组小鼠存 活及死亡情况，重复 3 次。［结果］柠檬精油实验组、保护伞阳性对照组、空白对照组小白鼠平均存活率分别为 62． 5% 、75% 、13． 3% 。 ［结论］柠檬精油对小白鼠肺炎具有恢复治疗作用。 关键词 柠檬精油； 固体栓剂； 肺炎模型 中图分类号 S 666． 5 文献标识码 A 文章编号 0517 － 6611（ 2012） 10 － 05976 － 02
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基金项目 作者简介
收稿日期
西南科技大学青年基金（ 09zx3129） ； 西南科技大学实验技术 研究项目（ 12syjs-22） 。 秦海燕（ 1975 － ） ，女，陕西西安人，讲师，从事药用植物学教 学与科研工作，E-mail： qinhaiyan03@ 163． com。* 通讯作者， 副教 授，博 士，硕 士 生 导 师，从 事 药 物 分 析 研 究，E-mail： suozhirong@ 163． com。 2012-01-09
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40（ 10） ： 5976 － 5977
责任编辑 刘赟 责任校对 况玲玲
柠檬精油的抗菌活性研究
秦海燕1 ，张泽鹏1 ，索志荣2*
（ 1． 西南科技大学生命科学与工程学院，四川绵阳 621010； 2． 西南科技大学分析测试中心，四川绵阳 621010）
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Study on the Antimicrobial Activity of Lemon （ Citrus limon） Essential Oil QIN Hai-yan et al （ College of Life Science and Engineering，Southwest University of Science and Technology，Mianyang，Sichuan 621010） Abstract ［Objective］ The aim was to study the antimicrobial activity of the lemon essential oil in vivo． ［Method］ Lemon essential oil was taken as antibacterial substance to make into solid suppository． Mice pneumonia model was established by injecting bacilli into the mice’s lung，then，mice with pneumonia were treated with solid suppository． Moreover，blank control and umbrella positive control were set up to observe the survival and death of mice of each group，and repeated three times． ［Result］ Average survival rates of mice in lemon essential oil test group，umbrella positive control group and blank control group were 62． 5% ，75% and 13． 3% ，respectively． ［Conclusion］ Lemon essential oil has curative effect on pneumonia of mice． Key words Lemon essential oil； Solid suppository； Pneumonia model
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1． 2 柠檬精油固体栓剂的制备 取琼脂 4 g 溶于 97 ml 蒸 馏水，加热至沸腾，维持 10 min，待混合物冷却至 60 ℃ ，迅速 加入山梨酸钾 1 g，10 ml 柠檬精油及 6 ml 吐温 － 80，并沿一 个方向不断搅拌使其完全乳化，然后沿玻璃棒倾倒至栓剂模 型盒内，待其完全冷却即得柠檬精油固体栓剂。 1． 3 肺炎病原菌的接种及分离培养 在绵阳某猪场中选 取有严重肺炎症状的病猪，宰杀后取其肺部，自来水冲洗至 表面无血水，75% 酒精表面消毒备用，于超净工作台上无菌 操作挑取肺部的脓点接种于培养基，在生化培养箱中 37 ℃ 恒温培养 2 d，再挑取单个菌落转接于新的培养基，直至获得 纯培养。 1． 4 小白鼠肺炎模型的建立 1． 4． 1 肺炎菌悬液的制备。纯培养结束后，选择培养结果较 好的菌落，分别制成不同浓度的菌液，设计菌液浓度 10、20、 30 个 /10 ml 作为试探性菌液浓度，随机选择小白鼠，每个菌 液浓度注射 4 只小白鼠，每只小白鼠注射 0． 05 ml。将注射 后的小白鼠，按照注射的菌液浓度的不同，分别放进 3 个饲 养笼里，做好标签。每天观察 2 次，记录小白鼠的精神状况 以及死亡情况。若小白鼠在注射完菌液后 5 ～ 7 d 内死亡，则 该菌液浓度为最适合的浓度。预试验表明 20 个 /10 ml 的菌 液为最适合的浓度。 1． 4． 2 建立小白鼠肺炎模型预试验。改进单绍臣［8］和徐叔云 等［9］的方法，采用“1． 4． 1”制成的菌液，运用穿刺小白鼠肺叶注 射菌液方法使其感染患上肺炎，其主要病理变化通过解剖观 察，小白鼠肺部出现红肿、出血、坏死、纤维素性渗出以及黑色 斑点，证实直接穿刺肺叶法可用于建立小白鼠肺炎模型。 1． 4． 3 穿刺肺叶注射法建立小白鼠肺炎模型。取小白鼠 1 只，用乙醚麻醉使其轻度昏迷，仰卧固定。用 1 ml 注射器取