土壤中植病拮抗细菌的分离及其抑菌活
土壤中植病拮抗细菌的分离及其抑菌活
性的初探
学生姓名： 张文瑞
学 校：北师大二附中国际部
辅导机构：北京市农林科学院
指导老师： 陈德峰
完成时间：2017年5月-2018年7月
摘要
植物病原菌能够诱发植物病害，对农业生产造成严重的影响。化学杀菌
剂的长期使用已经对自然环境造成严重的影响，在保证农业生产的同时减少
化学农药的使用已经成为亟待解决的重要问题。本文以采集自北京市5个地
区的土壤样本为材料，利用土壤颗粒撒布法筛选得到植病拮抗菌35株，通
过平板对峙培养以及盆栽的方法筛选优势拮抗菌，并对优势细菌进行分子鉴
定。研究表明，分离得到的拮抗菌对镰刀菌属的4种病原菌菜豆根腐病菌、
番茄枯萎病菌、小麦赤霉病菌和大豆根腐病菌表现出不同程度的拮抗作用。
通过盆栽实验筛选出防治大豆根腐病的优势菌株NK1，对大豆根腐病的防
效达到69.7%，且植株干重与空白对照相比提高了23.8％，分子鉴定该细菌
为枯草芽孢杆菌。同时筛选出防治菜豆根腐病的优势菌株HD1，对菜豆根腐
病的防效达到58.33%，且植株干重与空白对照相比提高了35.7％，分子鉴
定该细菌为甲基营养性芽孢杆菌。此项研究丰富了植病生防菌的资源，将会
为镰刀菌属生防药剂的生产提供有力的材料。
关键词：植物病原菌 拮抗细菌 抑菌活性
Abstract
Plant pathogens can induce plant diseases which affect agricultural production
seriously. The long-term use of chemical fungicides has seriously impacted natural
environment. Reducing the use of chemical pesticides while ensuring agricultural
production has become an important problem to be solved. In this paper, 35 strains of
antagonistic bacteria were screened from soil samples collected from 5 districts of
Beijing by soil particle spread method. The dominant antagonistic bacteria were
screened by plate confrontation culture and pot culture, and the dominant bacteria were
identified by molecular identification. The results indicated that the isolated
antagonistic bacteria showed different degrees of antagonism to 4 Fusarium, including
Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium graminearum and Fusarium solani.
The dominant strain NK1 which against Fusarium solani was screened by pot
experiment, the control effect was 69.7%, and the dry weight of the plant was increased
by 23.8% compared with the blank control. The bacterium was identified as Bacillus
subtilis. At the same time, the dominant strain HD1 against another Fusarium solani
was screened by pot experiment, the control effect was 58.33%, and the dry weight of
the plant was increased by 35.7％ compared with the blank control. The bacterium was
identified as Bacillus methylotrophicus. This research enriches the resources of
biocontrol fungi for plant diseases and will provide powerful materials for the
production of Fusarium biocontrol agents.
Keywords：Pant pathogens Antagonistic bacteria Antifungal activity
前言
植物病害是影响农业生产和农产品质量的主要因素之一。一直以来，化
学农药作为防治植物病害的主要方法，在农业生产中起到了至关重要的作用。
随着长期大量的使用，农药所带来的问题也日益凸显，如农药对非靶标生物
的影响严重、化学农药的长期使用导致植物病原菌对其产生很高的抗药性。
许多常用农药是高毒、高残留的化学制剂，不仅严重危害人、畜健康，还对
人们赖以生存的自然环境在成严重污染。近年来，伴随着我国粮食产量的连
续增长，化肥农药的使用也不断的增加，已经对我国的自然环境造成了严重
影响。2018年4月25日农业农村部召开新闻发布会，指出推进化肥农药使
用量零增长，确保化肥农药减量增效取得新成效将是我国农业未来发展的方
向。
自然界中的微生物可以通过其对植物病原菌的抗生作用、重寄生作用、
营养和空间的竞争作用以及诱导植物产生对病原菌的抗性等途径实现对植
物病害的生物防治[1-2]。植病生防菌有三类：生防细菌、生防真菌和生防放
线菌。与生防真菌和放线菌相比，生防细菌具有繁殖迅速，易于规模化发酵、
抑菌机理的多样及靶标病原菌不易产生抗性等特点，在广泛的应用于植物病
害的生物防治[3-4]。
本研究以采集自北京5个地区的土样为材料，利用土壤颗粒撒布法筛选
植病拮抗细菌，并通过盆栽实验验证生防菌的活体防效，为植物病害的生物
防治提供资源。
1. 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 土样采集
在作物的生长季节，采集北京市海淀（HD）、昌平（CP）、顺义（SY）、
南口（NK）、石景山（SJS）的土壤样本（5-20cm土层）5份，置于室内自
然风干。称取土壤样本10g置于灭菌后的研钵中充分研磨，所得土壤粉末用
于植病拮抗菌的分离。
1.1.2 供试植物病原真菌
菜豆根腐病（Fusarium solani）和番茄枯萎病（Fusarium oxysporum）由中国
农业科学院蔬菜花卉研究所提供，小麦赤霉病（Fusarium graminearum）和大豆
根腐病（Fusarium solani）由中国农业科学院植物保护研究所提供。
1.1.3 主要试剂
胰蛋白胨、酵母提取物、琼脂粉：购自北京澳博星生物技术有限公司；葡萄糖、
NaCl、K2HPO4和MgSO4、苯酚、氯仿、异戊醇、醋酸钠、无水乙醇：购自北
京化工集团有限公司；LA Taq酶和LA Taq buffer，dNTP Mix：购自TaKaRa；
DNA分子量marker、细菌基因组DNA提取试剂盒：购自天根生化科技(北京)有
限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 常规试剂配制
LB培养基（液体）：将10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，10g NaCl溶解于800mL
蒸馏水中，调整溶液pH值至7.2，将溶液定容到1L，高压湿热灭菌（121℃，
20min），备用。
LB培养基（固体）：将10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，10g NaCl溶解于800mL
蒸馏水中，调整溶液pH值至7.2，将溶液定容到1L，加入琼脂粉20g，高压湿
热灭菌（121℃，20min），待培养基冷却至室温倒入培养皿中，待其凝固后4°C
保存备用。
PDA培养基（液体）：称取200g马铃薯切成小块，加水煮沸30min后过滤，
向滤液中加入20g葡萄糖，用蒸馏水将上述溶液定容至1L，高压湿热灭菌（121℃，
20min），备用。
PDA培养基（固体）：称取200g马铃薯切成小块，加水煮沸30min后过滤，
向滤液中加入20g葡萄糖，用蒸馏水将上述溶液定容至1L，加入琼脂粉20g，高
压湿热灭菌（121℃，20min），待培养基冷却至室温倒入培养皿中，待其凝固后
4°C保存备用。
凝胶电泳缓冲液母液（5×TBE）：称取54.0g Tris base，27.5g 硼酸，溶解于
900mL ddH2O。向其中加入20mL 0.5mol/L的乙二胺四乙酸溶液调整pH值至8.0，
并用ddH2O定容至1L，室温保存。
凝胶电泳缓冲液工作液：用ddH2O将凝胶电泳缓冲液母液（5×TBE）
稀释为1倍即为电泳缓冲液的工作液。
1.2.2 植物病原菌及其菌液制备
将菜豆根腐病、番茄枯萎病、小麦赤霉病和大豆根腐病的病原菌接种到
PDA平板上，28℃培养48个小时。向布满菌丝体的植物病原菌平板中加入
适量的无菌水，配制成植物病原菌的孢子悬液待用。
1.2.3 植病拮抗细菌的分离
利用土壤颗粒撒布法（soil sprinkle technique）分离植病拮抗细菌[5-6]。
将100μL配制好的植物病原菌的孢子悬液均匀的涂布于PDA固体培养基上，
室温放置1h。取土壤粉末样本少许置于称量纸上，用吸耳球轻轻吹散土壤
粉末，使其飘落在含有植物病原菌的PDA固体培养基表面，28℃培养48h。
拮抗细菌在PDA平板上产生抑菌圈，用接种环挑取拮抗菌，并利用三区划
线法对目标菌进行分离纯化，得到单菌落。将筛选得到的拮抗菌转接于LB
液体培养基中，30℃ 180rpm震荡培养48h，将菌液与50%的甘油等体积混
匀，保存于-80℃冰箱。
1.2.4 拮抗菌抑菌效果测定
将番茄枯萎病菌、菜豆根腐病菌、小麦赤霉病菌和大豆根腐病菌接种于
ＰＤＡ平板上，于28℃条件下培养。待病原菌长满整个平板后，用直径为5
mm 打孔器打孔，备用。将待测拮抗菌株接入液体LB培养基中，30℃ 180rpm
震荡培养48h，离心收集菌体，并用无菌水配制成108 cfu. mL−1的菌液，备
用。
1.2.5 平板对峙培养
用打孔器在布满病原菌菌丝的PDA平板上打孔，制备病原菌菌饼，备
用。将待测菌液均匀的接种于PDA平板的边缘，每个平板接三滴（各接种
点到PDA培养基中心的距离相同），每滴20μL，以无菌水作为对照，28℃
培养24h。将制备的菌饼置于含有拮抗菌的PDA培养基中央，28℃培养7
天，每个处理重复3次。测量病原菌菌落长度，并计算抑菌率。
抑菌率（%）＝（R﹣r）／R×100
R：培养基中心到与拮抗菌株相对一侧的病原菌菌丝最大长度。
r：培养基中心到与拮抗菌株之间病原菌菌丝最大长度。
小麦纹枯病拮抗细菌的分离筛选
・ １Ｏ８・ 陕西农业科学
小麦纹枯病拮抗细菌的分离筛选
卫拯友 ，吴富强 ，党 永 。杨会。 （１．陕西省微生物研究所，陕西西安７１００４３；２．安康学院，陕西安康７２５０００） 摘要：小麦纹枯病是一种典型的土传病害，主要发生在江淮流域及黄河中下游冬麦区，已成为影响小麦高 产、稳产的重要因素。各地推广的品种绝大部分为感病品种。筛选高效和活性稳定的拮抗茵株是保证生物防 治获得成功的先决条件。本研究从西安市周边地区小麦田块分离筛选具有较强拮抗作用的细菌，进行室内生 防测定，为陕西小麦纹枯病的生物防治提供理论依据。 关键词：小麦纹枯病；拮抗细菌；筛选；生物防治 小麦纹枯病（Ｗｈｅａｔ ｓｈａｒｐ ｅｙｅｓｐｏｔ）是由禾谷 丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｃｅｒｅａｌｉｓ ｖａｎｄｅｒ Ｈｏｅｖｅｎ）和 立枯丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ Ｋｕｈａ）引起的一 种典型的土传病害，主要发生在江淮流域及黄河 中下游冬麦区，已成为影响小麦高产、稳产的重要 因素［１］。近十多年来，由于陕西省小麦品种的更 新换代，农业栽培技术的改变及肥水条件和环境 因素的变化，致使小麦纹枯病发病面积不断扩大， 有逐年加重的趋势Ｅ引。同时有些区域主栽品种比 较单一，面积过大，播种面积占到８７％左右，特别 是小偃２２号面积占４５％一６Ｏ％，这些将影响小 麦的产量和品质［３］。 ２０世纪７Ｏ年代以来各地在品种推广上趋于 单一化，河南、江苏、安徽、河北和山东对各地推广 的品种进行抗纹枯病鉴定结果表明，绝大部分品 种为感病品种［４］。生产中尚未发现高抗纹枯病的 小麦品种，对该病的控制主要使用化学药剂控制 病原菌，容易污染环境，并对有益微生物的生存构 成威胁，且过度使用易诱导病菌产生抗药性。依 靠筛选拮抗菌株研发生物防治剂防治小麦纹枯病 是解决小麦纹枯病发生危害最为经济有效的措施 之一。而筛选高效和活性稳定的拮抗菌株是保证 生物防治获得成功的先决条件［２“ ］。关于这方 面的报道主要为河南、河北、安徽、江苏等省市，陕 西省还未见相关报道。 笔者研究从西安市周边地区小麦田块、关中 灌区及渭北早原小麦田块土壤样品中分离筛选具 有较强拮抗作用的细菌，并进行了室内生防测定， 为小麦纹枯病的生物防治提供可能，从而实现对 小麦纹枯病安全、高效的防治，达到小麦增产和环 保的双重目的。小麦纹枯病菌菌株的分离及鉴定 将另文报道。 １ 材料与方法 １．１ 材料 １．１．１ 病原指示菌 小麦纹枯病菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏ— ｎｉａ ｃｅｒｅａｌｉｓ ｖａｎｄｅｒ Ｈｏｅｖｅｎ）由河北省农科院提 供及自行分离。 １．１．２ 培养基 拈抗菌分离培养选用ＬＢ培养 基；小麦纹枯病菌培养采用ＰＤＡ培养基；小麦纹 枯病菌菌株的分离采用酸性琼脂培养基。 １．１．３ 小麦品种感纹枯病品种小偃２２，市购。 １．１．４ 对照药剂 ５ ９／６井冈霉素Ａ水溶性粉剂， 市购。 １．２ 方法 １．２．１土样采集 从小麦田块及小麦纹枯病病 田块土壤ｌＯｃｍ处及小麦根际土壤处采取土样并 充分混匀，装入无菌样品袋内，做好标记用于分 离。 １．２．２ 土壤细菌的分离 将采集的土样称取１Ｏ ｇ，加入到装有１００ ｍｌ灭菌水并装有玻璃珠的 ３００ ｍｌ三角瓶中，置于振荡器上摇动２０ ｒａｉｎ，取 下静置２０ ｒａｉｎ以上；取上清液进行梯度稀释，并 涂布于ＬＢ平板培养基，３Ｏ℃恒温培养４８ ｈ；挑取 不同类型的单菌落、纯化、测定拮抗性。 １．２．３拮抗茵筛选采用平板对峙法检测所分 离细菌的抑菌活性。首先将病原指示菌在ＰＤＡ 平板上２５℃活化１周，在菌落边缘区域用无菌打 孔器打制成中６ ｍｍ的菌片，将病原指示菌菌片转 接于ＰＤＡ平板中央，然后将分离挑选的细菌点 收稿日期：２０１１－０３－０４ 作者简介：卫拯友（１９５４一）男，陕西淳化人，副研究员，主要从事微生物发酵工程方面的研究工作。
草莓根腐病土壤拮抗放线菌的筛选
果农之友
2021.7科学试验草莓为蔷薇科草莓属多年生草本植物，富含维生素以及矿物质，营养价值高。中国是世界上种植面积最大、产量最高的草莓生产国[1]。随着草莓种植区的扩大，草莓病害对草莓产量及品质的影响也越来越严重，草莓根腐病就是其中一种危害较严重的病害。草莓根腐病（Strawberryrootrot）是一种典型的土传性病害，在世界各地的草莓种植区均有发生，能引起根部发生病变的病害，严重时产生缺株现象，影响草莓的生产，甚至出现绝产现象。草莓根腐病的致病菌有多种，其中由拟盘多毛孢属（Pestalotiopsis）引起的草莓根腐病在国内常有报道[2]，且危害严重。化学农药防治草莓根腐病成为传统的防治该病害的方法，但是农药对环境和人畜的危害较大。因此，笔者通过分离草莓根围土壤中的放线菌，采用平板对峙法将放线菌和草莓根腐病病原菌进行对峙培养，筛选出拮抗放线菌，进而研究无公害的绿色防治方法。1材料与方法1.1材料1.1.1供试菌株草莓根腐病病原菌来源于安顺学院微生物学实验室，用PDA培养基培养扩大培养菌种备用。1.1.2土壤样品采集于贵州省安顺市大寨村草莓种植地发生根腐病的种植区中健康草莓植株的根围土壤，共5份。1.1.3培养基[3]病原菌的扩大培养：马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）；土壤放线菌的分离：高氏合成1号培养基；土壤放线菌的纯化：燕麦粉培养基；平板对峙:马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）。1.2方法1.2.1病原菌的分离方法采用组织分离法，将采回的草莓根腐病病株，用无菌水清洗发病的部位，选取新近发病部位一小块组织（0.5厘米×0.5厘米），经75%酒精消毒10~15秒后用无菌水洗3次，置于灭菌的放有滤纸的培养皿中，将组织表面多余的水分吸干，用灭菌的解剖刀和镊子将组织切成4~5毫米的小块，置于PDA培养基中培养，一个培养基可以放置3块病组织，置于28℃恒温培养箱培养3天后，进行纯化，采用柯赫氏法则确定病原菌，并采用形态学和分子生物学相结合的方法鉴定病原菌菌株。1.2.2土样采集方法选取种植年限较长且发病较重的草莓种植地，采集健康草莓植株的根围土壤。取样时拨开表土约5厘米深，每样约50克（同地区取样点至少相距100米以上），装入自封袋并做上记号，带回实验室。1.2.3土壤放线菌分离方法将采回的土壤放于干燥无菌的地方晾7天后进行分离。称10克土样置于盛有90毫升无菌水三角瓶中（瓶里放几粒无菌玻璃珠），用摇床充分振荡15分钟后静置10分钟。取1毫升悬浮液于9毫升无菌水中，再从中取1毫升于另一支9毫升无菌水中混匀，再稀释。如此类推就得到不同稀释倍数的土壤悬浮液（分离放线菌所需稀释倍数为10-2、10-3、10-4）。从各浓度的土壤悬浮液中吸取0.1毫升悬浮液分散滴于高氏合成1号平板上，再用灭菌的三角玻璃棒涂匀，静置20分钟后于32℃的恒温培养箱中倒置培养，待菌落形成后立即纯化并保存。1.2.4拮抗放线菌的筛选方法（1）对峙培养：用灭菌的接种针挑取一小块放线菌置于PDA培养基的一侧，用打孔器将草莓根腐病病原菌制作成直径为5毫米的菌蝶，将菌蝶接种于PDA培养基的另一侧（培养基的直径为7.5厘米），置于32℃恒温培养箱中培养，3天后观察。（2）同时对峙：是将放线菌和病原菌草莓根腐病土壤拮抗放线菌的筛选陆铮铮1,熊仕俊2（1遵义师范学院贵州遵义563002；2安顺学院农学院贵州安顺561000）摘要：为获得草莓根腐病病原菌的拮抗放线菌，从草莓根围土壤中分离放线菌，采用平板对峙法筛选出了2株对草莓根腐病病原菌具有拮抗作用的生防放线菌。结果显示：同时对峙的平均抑菌直径分别是F3-8为20毫米、F2-2为17毫米；错时对峙的平均抑菌直径分别是F3-8为32毫米、F2-2为28毫米。关键词：草莓根腐病；拟盘多毛孢属；拮抗；放线菌
辣椒疫霉菌拮抗细菌的分离鉴定及防效试验
湖南农业大学学报(自然科学版) 2023，49(2)：201–205．DOI：10.13331/ki.jhau.2023.02.012 Journal of Hunan Agricultural University(Natural Sciences)
引用格式： 高香辉，朱丽娜，谭泽宝，郑井元，严蓓，刘敏，罗坤．辣椒疫霉菌拮抗细菌的分离鉴定及防效试验[J]．湖南农业大学学报(自然科学版)，2023，49(2)：201–205． GAO X H，ZHU L N，TAN Z B，ZHENG J Y，YAN B，LIU M，LUO K．Isolation and identification of antagonistic bacteria against Phytophthora capsici and its antagonistic efficacy[J]．Journal of Hunan Agricultural University (Natural Sciences)，2023，49(2)：201–205． 投稿网址：
辣椒疫霉菌拮抗细菌的分离鉴定及防效试验
高香辉1，朱丽娜3，谭泽宝1，郑井元2，严蓓1，刘敏1，罗坤1*
(1.湖南农业大学植物保护学院，湖南 长沙 410128；2.湖南省农业科学院蔬菜研究所，湖南 长沙 410125；3.金
华市婺城区经济特产站，浙江 金华 321000)
摘 要：在辣椒疫病为害较严重田块采集健康植株，从其根际土壤中分离筛选出具有抗疫霉菌活性的细菌菌株
Pa608。通过菌落形态特征以及分子水平同源性鉴定，测定其生理生化指标和胞外产酶特性，确定该菌株为铜绿
假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)；采用平板对峙法测试其抗菌谱，盆栽试验确定防效后应用于温室辣椒田测试
温室防效，发现该菌株对灰霉菌、稻梨孢菌、疫霉菌、炭疽杆菌具有较好的拮抗作用，当菌液浓度为1.0×109 cfu/mL、
西洋参土壤菌株的分离与拮抗菌株的筛选与鉴定
西洋参病害土壤细菌和真菌的分离与
拮抗菌株的筛选鉴定
邓华宁 指导教师：孙艳
（陕西师范大学 生命科学学院，陕西 西安，710119）
摘 要：为了寻找解决西洋参连作障碍的生物防治方法，我们分离出4年生西洋参病害土壤里的真菌和细菌，依据形态学特征，我们得到15株真菌，并用马丁氏培养基斜面保存，得到114株细菌并保种于甘油里，在4℃冰箱保存，初筛是用细菌的发酵液来检测细菌是否抑制真菌的生长，具体的做法是在真菌培养皿中涂布上真菌孢子悬液，然后将培养基过中心均匀划分为6个区域，每个区域内用打孔机打出8mm直径的小孔，其中5个里面注入不同细菌的发酵液，剩下的一个小孔注入蒸馏水作空白对照，通过此抑菌实验筛选出具有抑制真菌生长的细菌有：C1抑制P7，C11、B2抑制P6，A40抑制C1，A14、B45、B28抑制J3，A22抑制J4，C14抑制J6，A5抑制J10，
将产生拮抗效果的细菌和真菌进行种类鉴定，细菌采用16sRNA比对的方法进行鉴定，真菌采用ist比对的方法进行鉴定；上述结果将会为西洋参产业化生产扫清障碍，也会帮助到种植西洋参的农民，当然，也对菌种种类的鉴定和作用机理的探索打好了基础。
关键字：西洋参；拮抗菌；筛选
西洋参（Panax quinquefolium L.）属于五加科人参(Panax)属植物，多年生草本或木本植物，根部呈梭子形，根表面光滑细腻并显浅黄色，平均长度为25cm，切成参片有透喉效果，切面光滑且有纹理。能较好的生长于海拔1000米左右的山坡，散射光能更好的促进其生长，沙子含量高的土壤是其适宜的生长地[1]。最早发现于威斯康辛州（美国）的森林地带，加拿大南部与中国都生长着一些。西洋参植株根部人参皂苷含量最高[2-3]，在我国河北、北京、陕西和山东等地已形成规模化种植[4]，具有调节中枢神经、提高免疫力、抗肿瘤、保护心血管系统等作用[5]。近年来西洋参的市场需求量不断增大，但其种植方面问题突出，深受连作障碍困扰[6]。
黄瓜枯萎病拮抗菌的分离鉴定及其生物防效
第37卷第3期 2018年 5月华中农业大学学报 Journal of Huazhong Agricultural UniversityVol.37 No. 3 May 2018,32〜38
黄瓜枯萎病拮抗菌的分离鉴定及其生物防效
罗文建1杨凡2史宣杰2赵秀云1
1.华中农业大学生命科学技术学院，武汉430070; 2.河南省农业科学院园艺研究所，郑州450002
摘要从黄瓜根际土壤和根、茎中分离出对黄瓜枯萎病病原菌—尖孢镰刀菌黄瓜专化型具有较强拮抗作 用的细菌菌株7株，这些细菌在平板上对尖孢镰刀菌的抑菌效果最高可达46%。经济福平抗生素诱导抗性后， 这7株菌株共得到具有抗性的菌株4株:GJ-9、NH-1、P7、XX2 J。检测有利福平标记的菌株在黄瓜苗根系和植 株内的定殖能力，结果显示菌株在黄瓜苗具有良好的定殖能力，并且能通过根部运输进人茎中，从而显著提高黄 瓜苗的PAL、POD和PPO防御酶活性。盆栽试验结果表明:将筛选到的7株拮抗菌的发酵液对黄瓜苗进行处理,
其中拮抗菌NH-1的发酵液对黄瓜枯萎病具有显著的防治效果，其处理后的黄瓜苗病情指数为26.00,防治效果达 到66.03%。根据其生长形态特征及对其进行基因序列分析，鉴定其为贝莱斯芽胞杆菌(BaciZ&u ■aefeeraA)。关键词黄瓜枯萎病；拮抗菌（生物防效（芽胞杆菌中图分类号S 436.421.1+3 文献标识码 A 文章编号1000-2421(2018)03-0032-07
黄瓜枯萎病是一种由尖孢镰刀菌黄瓜专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cucumerium Owen) $3
原菌引起的黄瓜病害，该病原菌的侵染方式为根部
侵染，通过破坏植株的维管束，影响植株的营养运输
和营养吸收，收导致植株枯萎死亡[1]。目前生产上
主要采用田间轮作和植株嫁接的方式来防治枯萎病
害，并配合施用化学农药的方式来防治病害，这在一
罗汉果土传病害拮抗细菌的筛选及鉴定
罗汉果土传病害拮抗细菌的筛选及鉴定
作者：王瑞昊 邓业成 陈广桂 张泽 张燕玲 邓志勇 蓝福生 郭丽霞 张川梅 梁保明 骆海玉 张明良
来源：《福建农业学报》2021年第08期 摘要：【目的】从罗汉果根际土壤中筛选分离出对白绢病（southern blight）与根腐病（root rot）有抑制作用的拮抗细菌，为罗汉果土传病害生物防治提供合适菌株。【方法】采用稀释涂布法和划线法从罗汉果果园土壤中分离纯化出拮抗细菌114株。随后对分离出的拮抗细菌采用平板对峙法进行抑菌活性筛选。通过16S rDNA序列分析，结合菌落形态特征，生理生化特征对菌株进行鉴定。【结果】22株细菌对至少1种罗汉果土传病原真菌表现出小同程度的抑制作用。其中5株细菌即TYX-2、TYX-3、TYX-4、TYX-7和TYX-8对根腐病与白绢病抑制作用最为明显，对罗汉果根腐病菌的抑制率分别为67.53%、57.50%、64.17%、60.00%和66.67%。对罗汉果白绢病菌的抑制率分别为83.03%、87.58%、53.3 1%、82.27%和86.67%。经过形态学、生理生化特征以及16S rDNA系统发育树的分析，确定TYX-2、TYX-7和TYX-8为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezia），TYX-3为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），TYX-4为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。贝莱斯芽孢杆菌TYX-2、枯草：芽孢杆菌TYX-3和解淀粉芽孢杆菌TYX-4发酵液对2种罗汉果病原真菌电有较好的抑制作用，对罗汉果根腐病菌的抑菌率分别为47.83%、48.67%和45.83%，对罗汉果白绢病菌的抑菌率分别为5 2.00%、50.42%和55.83%。【结论】分离鉴定出的TYX-2、TYX-3和TYX-4分别为贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌，具有较高的生防应用价值，为进一步研制复合生防菌剂，防治罗汉果土传病害奠定理论基础。
银杏林土壤放线菌分离鉴定及对植物病原菌的拮抗作用研究
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银杏林土壤放线菌分离鉴定及对植物病原菌的拮抗作用研究
作者：高嫚妮 潘忠成 高波 杨宏勃 陈豪 翁婧 李蒲民
来源：《农业与技术》2019年第24期
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摘;要：
从银杏树林土壤中分离放线菌，并用生长速率法测得其对植物病原菌具有拮抗活性，且抑制率达到80.00%以上。杯碟法测量结果表明菌株MKLFXJ-I发酵液对9种植物病原菌均具有抑菌活性。通过菌种培养形态、细胞形态、生理生化特征和16S rRNA基因序列分析，初步鉴定菌株MKLFXJ-I为链霉菌Streptomyces sp.。
关键词：
放线菌;拮抗作用;生长速率法;鉴定
中图分类号：S-3
文献标识码：A
DOI：10.19754/j.nyyjs.20191230003
化学农药制剂长期大量使用促使植物病原菌产生抗药性的问题已越来越严重，同时化学药剂会给生态平衡带来严重的不良影响，因此开发高效、低毒、绿色的生物农药产品迫在眉睫。近几年来，利用微生物资源开发生物药剂防治病害成为当今研究的热点[1]，放线菌因分布广泛、种类多样，可产生结构丰富的具有抗菌活性的物质，且易降解，环境相容性好，使其在微龙源期刊网
生物农药开发中占据首要位置[2]。放线菌用于植物病害的防治已有很多报道[3，4]，其中以链霉菌的研究最为广泛和深入，也最具有生防利用价值。Umezawa H[5]等从日本奈良县春日神社境内发现的春日链霉菌，经研究其代谢产物，开发出了春雷霉素，广泛应用于水稻稻瘟病、黄瓜枯萎病、大白菜黑腐病等多种病害的防治。后来，沈寅初[6]从江西土良地区也分离到了1株春雷霉素产生菌，命名为小金色链霉菌。中国医学科学院医药生物技术研究所从海南地区土壤中分离到1株链霉菌，后续由中国农业科学院微生物防治研究所将其开发成一种生物农药-中生菌素，通过多年田间试验表明，该抗生素对水稻白叶枯病、大白菜软腐病、苹果轮纹病和苹果早期落叶病等具有良好的防治效果[7，8]。本研究针对从银杏林土壤中分离得到的放线菌MKLFXJ-I，测定了该菌对植物病原菌拮抗活性及其代谢物的抗菌活性，并对其进行鉴定，以期能获得结构新颖、活性显著的先导化合物，为开发新型生物农药奠定基础。
河西走廊土壤链霉菌的分离及其抗菌活性实验
河西走廊土壤链霉菌的分离及其抗菌活性实验
李婷;王凯;师瑞芳;陈熙明;李师翁
【摘 要】Streptomyces strains and their antimicrobial activity,which are
isolated from the soils of reed rhizosphere and nonrhizosphere in the
middle of Hexi corridor,are reported.A total of 143 streptomyces strains
are obtained in this study.Of these,112 strains strongly inhibit the growth
of bacterial model strains B.subtilis,S.aureus and E.coli,and 8 strains
strongly inhibit the growth of E.coli BTH 101.And 38 strains have a high
antifungal activity for fungal model strains of P.capsici,F.oxysporum
sp.conglutinans and B.cinerea.The similarity alignment of 16S rRNA gene
sequences shows that all the antimicrobial strains obtained in this
experiment have over 98% similarity with at least one known strain of
streptomyces in the database.The re-sults show that there are abundant
猕猴桃根际土壤可培养细菌分离及溃疡病拮抗菌筛选
猕猴桃根际土壤可培养细菌分离及溃疡病拮抗菌筛选
作者：杨睿 汪琳罗沙 姚迪 唐蕴哲 张婧一 彭清忠
来源：《安徽农业科学》2023年第22期
摘要 ［目的］了解湘西地區猕猴桃根际土壤可培养细菌多样性，并分离溃疡病菌的拮抗菌株。［方法］通过纯培养法分离根际土壤样品中的细菌（含放线菌），基于16S rRNA基因序列的系统发育分析鉴定分离菌株。采用牛津杯法筛选拮抗溃疡病菌的菌株。［结果］从猕猴桃根际土壤中分离获得了142株细菌，通过16S rRNA基因序列分析，142株细菌分别归属4个门、6个纲、11个目、18个科、28个属，其中Bacillus为优势属。从分离菌株中筛选出4株对猕猴桃溃疡病菌有拮抗效果的细菌（A11、D1h、A4、B15），经过系统发育分析初步鉴定A11和D1h属于红球菌属（Rhodococcus），A4属于芽孢杆菌属（Bacillus），B15属于链霉菌属（Streptomyces）。［结论］猕猴桃根际土壤可培养细菌具有丰富的类群、物种和遗传多样性，并存在拮抗溃疡病菌的微生物类群。
关键词 猕猴桃根际土壤；可培养细菌；分离鉴定；多样性；拮抗菌筛选
中图分类号 S436.634 文献标识码 A
文章编号 0517-6611（2023）22-0098-06
doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.22.025
Isolation of Culturable Bacteria from Kiwifruit Rhizosphere Soil and Screening of Antagonistic
Bacteria Against Canker Pathogen
YANG Rui，WANG Lin luo-sha，YAO Di et al
Abstract ［Objective］ To investigate the diversity of culturable bacteria associated with
菠菜内生拮抗细菌的分离、筛选与鉴定-09.08
第 1 页 共 12 页 菠菜内生拮抗细菌的分离、筛选与鉴定
摘要：从菠菜叶片上和菜园土壤中分离细菌，筛选出对菠菜霜霉病菌或菠菜炭疽病菌拮抗作用强的菌株，并挑选出生活力强、适应性好、防病效果好的作为目标菌株，并其鉴定到种。
技术路线：
菠菜内生细菌的分离
拮抗菌株的筛选
目标菌株的鉴定
拮抗菌株的生物学测定
第 2 页 共 12 页 1 实验材料
1.1 样品来源
菠菜菜园内土壤和菠菜植株。
1.2 供试病原菌
菠菜霜霉病菌（Peronospora effusa）和菠菜炭疽病菌（Colletotrichum spinaciae），由本实验室分离和鉴定。
1.3 培养基
细菌的分离用NA、KB和TSA。细菌的培养用NA或LB。细菌的菌种保存用NA或YPA。真菌的培养与拮抗测定用PDA。细菌的生理生化测定用基础培养基。
1.4 标准菌株
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）标准菌株。西瓜细菌性果斑病病菌（Acidovorax
avenae subsp.citrulli Willems et al.1992）标准菌株Aac7500。
1.5 溶液与试剂
草酸铵结晶紫染剂，鲁戈尔碘液，番红复染剂，西萨—基尔染媒剂，苯酚品红染剂，7.6%孔雀绿水溶液，1%溴百里酚蓝水溶液，甲基红试剂，0.3%肌酸水溶液，格里斯试剂，吲哚试剂，10%（W/V）FeCl3溶液，1%二甲基对苯撑二胺水溶液，3%（v/v）过氧化氢。 第 3 页 共 12 页 2 实验方法
2.1 菠菜内生细菌的分离
从菠菜的健叶和病叶上取样，各取1.0g，先用70%酒精浸泡5min，再用0.2%升汞表面消毒2-3min，无菌水冲洗3次。取0.5ml最后1次无菌水冲洗液涂布接种于各种培养基上。每个处理重复3次，培养48h，观察有无菌落产生。据此验证此消毒方法是否能全部杀死供试材料表面微生物。样品晾干后转入无菌研钵中研磨匀浆，加5ml无菌水碾碎，静止15min后，各取50l涂平板，每处理重复3次，30℃黑暗培养48-72h，计算菌落数。根据菌落形态、颜色等挑取单菌落，按常规方法纯化后保存，供测试鉴定。