DB33T454—2021动物血清中盐酸克伦特罗残留的检测方法
DB33T454—2021动物血清中盐酸克伦特罗残留的检测方法前 言
本标准由嘉兴市卫生监督所提出并归口。
本标准由嘉兴市卫生监督所、浙江省畜产品质量安全检测中心、嘉兴市疾病预防操纵中心、浙江省疾病预防操纵中心负责起草。
本标准要紧起草人：吴小龙、沈志英、邹忠明、宣士荣、吴平谷、葛志坚、王明龙、汪刚。 动物血清中盐酸克伦特罗残留的检测方法
1 范畴
本标准规定了以酶联免疫吸附（ELISA）法和气相色谱-质谱联用（GC/MS）法测定动物血清中盐酸克伦特罗的方法，规定气相色谱-质谱联用法为仲裁法。
本方法适用于动物血清中盐酸克伦特罗残留量的测定与仲裁。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓舞依照本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
DB33/T 307-2001 可食性动物组织中盐酸克伦特罗残留量的检测方法
DB33/T 308-2001 饲料中盐酸克伦特罗含量的检测方法
DB33/T 309-2001 动物尿液中盐酸克伦特罗残留量的检测方法
3 酶联免疫吸附法
3.1 原理
利用固相酶联免疫吸附原理，将盐酸克伦特罗特异性抗体(羊抗兔IgG )包被于聚苯乙烯微量反应板中，加入血清、盐酸克伦特罗标准品、酶标记物、盐酸克伦特罗抗体于微孔中，使血清（未知抗原）和酶标记物中的盐酸克伦特罗抗原（已知抗原）与抗体进行免疫竞争反应，未反应的酶标记物在洗涤中被清除，结合了的酶能够由显色物显示出来。用目测法或酶标法来判定。显色的强弱与样品中的盐酸克伦特罗浓度成反比。
3.2 试剂和材料
以下所用的试剂和水，除专门注明者外均为分析纯试剂，水为重蒸水。
3.2.1 盐酸克伦特罗固相酶联免疫试剂盒（德国 r-Biopharm公司或类似产品）。
3.2.1.1 预包被微孔条。
3.2.1.2 标准品（6瓶×300μL/瓶，浓度分别为0ppt、100ppt、300ppt、900ppt、2700ppt、8100ppt ）。
3.2.1.3 盐酸克伦特罗酶标记物。
3.2.1.4 盐酸克伦特罗抗体。
3.2.1.5 基质液。
3.2.1.6 终止液。
3.2.1.7 缓冲液。
3.2.2 50%乙醇。
3.3 设备与器材
3.3.1 酶标仪。
3.3.2 洗板机。
3.3.3 离心机（3000 r/min -4000r/min）。
3.3.4 超声清洗仪。
3.3.5 振荡器。
3.3.6 水浴锅。
3.4 样品处理
3.4.1 取1mL血清加入50%乙醇1mL混合，超声清洗仪处理30min。 3.4.2 以许多于3000 r/min离心10min，取其上清液，氮气吹干或100℃水浴锅挥干。
3.4.3 在残留物中加入水1mL，超声清洗仪处理10min；许多于3000r/min离心10 min，取其上清液待测。
3.5 测定（或参考类似产品说明书）
将试剂盒各组分取出，平稳至室温(20℃-25℃)。
3.5.1 以1：11的比例吸取盐酸克伦特罗抗体加入到缓冲液中，待用。
3.5.2 以1：11的比例吸取盐酸克伦特罗酶标记物加入到缓冲液中，待用。
3.5.3 每孔加入已稀释盐酸克伦特罗抗体100μL，15min后洗板。
3.5.4 分别加入标准品、待测样品(标准品和样品做两孔平行试验)各20μL。
3.5.5 每孔加入已稀释盐酸克伦特罗酶标记物 100μL，30min后洗板。
3.5.6 加入100μL基质液避光显色15min，加入终止液100μL。
3.5.7 酶标仪450nm测定。
3.6 结果运算
3.6.1 运算每个标准品和样品平均吸光度值。
3.6.2 每个标准品和样品平均吸光度值除以0ppt的吸光度值再乘以100。以标准品的百分比形式的吸光度值为纵坐标，以标准品的浓度为横坐标，绘成一个半对数坐标系统曲线图，相对应每一个样品的相对浓度（μg/L）能够以样品平均吸光度值从曲线上查出，乘以样品稀释倍数，即为事实上际浓度。
3.7 检测限
本方法的检测限: 0.2μg/L。
4 气相色谱-质谱联用法（仲裁法）
4.1 原理
血清用乙酸乙酯提取；提取液浓缩后经SLH柱净化，净化洗脱液通过双三甲基甲硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）+1%（φ）三甲基氯硅烷（TMCS）衍生，然后用GC/MS 法测定。
4.2 试剂和材料
以下所用的试剂和水，除专门注明者外均为分析纯试剂，水为重蒸水。
4.2.1 盐酸克伦特罗标准品。
4.2.2 体积分数为3%乙醇/乙酸乙酯、体积分数为5%乙醇/乙酸乙酯、体积分数为50%乙醇/乙酸乙酯、乙酸乙酯、1mol/L氢氧化钠、饱和氯化钠、乙醇、甲醇、甲苯、氢氧化钠、浓氨水、无水硫酸钠。
4.2.3 BSTFA+1%（φ）TMCS。
4.2.4 SLH净化柱（1000mg/5mL，SLH小柱为商品名，给出这一信息是为了给本行业标准的使用者提供方便，而不是标准主管部门对这一产品的认可）或同等成效的净化柱。
4.2.5 美托洛尔（metoprolol）内标：使用时用甲醇配成10μg/mL溶液 。
4.2.6 4% （φ）氨化甲醇：取4mL浓氨水，用甲醇定容至100mL。
4.2.7 克伦特罗标准储备溶液（100mg/L）：称取11.3mg 盐酸克伦特罗标准品于100mL 容量瓶中，用4%氨化甲醇溶解并定容至刻度，存放于4℃冰箱中备用。
4.3 设备与器材
4.3.1 气相色谱-质谱联用仪。
4.3.2 旋转蒸发仪。
4.3.3 超声清洗仪。
4.4 实验条件
4.4.1 色谱条件
色谱柱：HP―5MS5%苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)； 进样口温度300℃，柱温程序：初温120℃，保持3min，然后以10℃／min升至230℃，保持10min，再以20℃／min升至270℃保持10min。
载气为高纯氦气（99.999%），流速0.9mL/min，不分流进样。
4.4.2 质谱条件
EI源 源温230℃；电子能量70eV ；接口温度280℃；
电子倍增器电压1388V；质量扫描范畴35 ～350U；
选择离子监测方式（SIM）；盐酸克伦特罗监测离子（m/z ）：86、243、262、333美托洛尔监测离子（m/z ）：72。
溶剂延迟：5min。
4.5 样品处理
4.5.1 取1mL-2mL血清，加1mL饱和氯化钠溶液，然后用1mol/L氢氧化钠调剂PH至10左右，加3mL乙酸乙酯振荡，离心分出乙酸乙酯相，重复一次，乙酸乙酯相过无水硫酸钠，用氮气吹干。加2mL体积分数为3%乙醇/乙酸乙酯溶液溶解剩余物，移到预先用体积分数为3%乙醇/乙酸乙酯溶液淋洗的SLH净化柱上，然后用5mL体积分数为5%乙醇/乙酸乙酯溶液洗脱除杂，最后用10mL体积分数为50%乙醇/乙酸乙酯溶液洗脱，收集该洗脱液，加美托洛尔内标 20μL ，用氮气吹干。
4.5.2 蒸发剩余物加 0.1 mL BSTFA+1%（φ）TMCS，加盖于旋涡混合器上震荡，在80℃烘箱中加热1h，然后用氮气吹干，加0.1mL 甲苯溶解。同时取20μL0.5μg/mL克伦特罗标准工作液，加美托洛尔内标20μL，吹干后同时进行衍生化。取1.0μL甲苯溶液进行GC/MS 分析。
4.6 测定
定性采纳保留时刻、标准盐酸克伦特罗棒图对比进行NIST98图库检索。以86作为定量离子，262、333、243作为辅助离子进行定性、定量分析。
4.7 结果运算
定量方法：采纳单点或多点校准法定量 ；
盐酸克伦特罗（以克伦特罗计）X=mL×D/m
式中：X —样品中盐酸克伦特罗含量ng/g或ng/mL；
mL—质谱测定对应的盐酸克伦特罗含量 ng/g 或 ng/mL ；
m —取样量g或mL ；
D —稀释倍数 。
4.8 检测限
本方法的检测限: 1.0μg/L。
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饲料中沙丁胺醇、克伦特罗和莱克多巴胺的定性筛查
饲料中沙丁胺醇、克伦特罗和莱克多巴胺的定性筛查
前言
β-受体激动剂能与动物和人体内多数组织细胞膜上的β-受体结合，调节交感神经系统兴奋，又称β-兴奋剂、β2-
肾上腺素受体激动剂，以克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇为代表。在发现具有促使肉畜体内营养素重新分配、 提
高瘦肉率功效后，20世纪80年代初克仑特罗和沙丁胺醇被用于改善肉畜胴体品质。西班牙1990年和1992年两次爆发食用残留克仑特罗的牛肉、牛肝中毒的严重食品安全事件，自此欧盟颁布法规，禁止此类药物用于饲养食品动
物。我国也早在1999年颁布《饲料和饲料添加剂管理条例》，禁止使用β-受体激动剂作为动物促生长调节剂。但近
几年仍时有残留克仑特罗、莱克多巴胺动物组织导致的食品安全事件发生。可见加强β-受体激动剂残留的检测任重道远。
本研究基于PCS-MS-Mate联用质谱分析系统开发了饲料中沙丁胺醇、克伦特罗和莱克多巴胺的快速检测方法，
无需繁琐的样品前处理，1步操作1min完成样品分析，本方法的检出限均为1μg/g。
沙丁胺醇结构式 克伦特罗结构式 莱克多巴胺结构式 图1. 三种β-受体激动剂的结构式 实验部分 1.1
仪器及材料
线性离子阱质谱仪（Thermo LTQ）；
MS-Mate（M2001）；
快速检测试剂包（含PCS试剂盒、微量固体取样器、快速检测专用溶剂-B01）。
1.2分析条件
扫描方式：正离子扫描；
检测方式：三级子离子扫描；
喷雾电压：4kv；
毛细管温度：30℃；
监测离子对和碰撞能量见表1.
表1 监测离子对和碰撞能等参数 化合物中文名称 母离子及二级子离子 碰撞能 三级子离子 碰撞能 沙丁胺醇 Salbutamol 240>221.67 25 165.75 147.75 25
克伦特罗 277>258.67 25 202.67 25 Clenbuterol 莱克多巴胺 Ractopamine 302>283.83 25 163.75 25
DB33T 623-2016 动物尿液中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留量的测定 气相色谱-质谱法.doc
ICS 67.120
C 53
浙江省地方标准
DB33/T 623—2006
动物尿液中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留量的测定
气相色谱-质谱法
Determination of the residues of terbutaline, clenbuterol, salbutamol
and ractopamine in animal urine—
Gas chromatography-mass spectrometry method
2006-12-14发布 2007-01-14实施
浙江省质量技术监督局 发布 DB33 DB33/T 623—2006
I 前 言
本标准是在参阅了国内外文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，建立了气相色谱-质谱法测定动物尿液中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺等4种β2-兴奋剂残留的方法。
本标准附录A和附录B为资料性附录。
本标准由浙江省农业厅提出并归口。
本标准起草单位：浙江省畜产品质量安全检测中心、浙江省疾病预防控制中心。
本标准主要起草人：朱聪英、吴平谷、应永飞、陆春波、任玉琴、陈勇、林仙军、周文海、赵永信。
DB33/T 623—2006
1 动物尿液中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺
残留量的测定 气相色谱-质谱法
1 范围
本标准规定了气相色谱－质谱（GC－MS）法测定动物尿液中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺等4种β2-兴奋剂残留量的方法。
本标准适用于猪、牛、羊等动物尿液中特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺等4种β2-兴奋剂残留量的测定。
本方法检测限为：特布他林1.0μg/L、克伦特罗2.0μg/L、沙丁胺醇1.0μg/L、莱克多巴胺2.0μg/L。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
ProRapiTTM 盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试纸卡 说明书
R-protagen
R‐Protagen Company Tel:512‐62956169 Fax:512‐62956180‐832 www.r‐ email:sales@r‐ FOR RESEARCH USE ONLY.
NOT FOR HUMAN OR
DIAGNOSTIC
USE. TM0507 Page 1 of 6 ProRapiTTM 盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试纸卡 使用说明书 (TM0507 For Cat. No. FS0002) 产品明细 产品名称 包装 Cat. No. ProRapiTTM Clenbuterol Rapid Test 40 assays FS0002 产品概述 盐酸克伦特罗（Clenbuterol, CLE）是一种肾上腺受体激动剂，俗称瘦肉精。因该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖 户和养殖企业作为养殖促进剂使用。食用饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所生产的禽畜产品后，残留的盐酸克伦特罗可对消费者的健康构成极大危害，由盐酸克伦特罗引起的食物中毒在多个国家均有报道，牲畜产品中盐酸克伦特罗残留已成为社会各界关注的公众问题。因此，世界许多国家禁止在饲料中使用克伦特罗来增加动物的瘦肉率。
R‐Protagen Company Tel:512‐62956169 Fax:512‐62956180‐832 www.r‐ email：sales@r‐
FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR HUMAN OR DIAGNOSTIC USE. TM0507 Page 2 of 6 R-Protagen克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡，系采用免疫胶体金技术，能够快速、半定量、特异的检测尿液、组织样品中的克伦特罗，可通过肉眼直接判读结果，检出定量值为3ppb（3ng/ml），且检测结果精确，与其它Beta受体激动剂等无交叉。适用于现场、快速、大量样本的筛查，检测成本低，适合基层和非专业人士及家庭使用。 检测原理 R-Protagen盐酸克伦特罗快速检测试纸卡采用竞争抑制免疫层析的原理设计， 当样本中含有克伦特罗时，待测物将和金标垫上的金标克伦特罗抗体结合并一同向上层析迁移，到达固定有抗原的检测线（T）时，抗原将和样本中的克伦特罗竞争结合金标克伦特罗抗体上有限的抗原结合位点。 样本中克伦特罗含量越高，其竞争力越强，检测线上的抗原和金标抗体结合越少。当样本中克伦特罗含量低于一定量时，检测线（T）处将有红色线条出现；当样本中克伦特罗含量高于一定量时，检测线（T）处的红色线条就会变浅直至消失。 产品组成 z 40包 克伦特罗快速检测卡，铝箔袋密封包装； z 40支 一次性滴管 产品储存 常温运输与储存，有效期1年。
盐酸克伦特罗(瘦肉精)
综述盐酸克伦特罗的
药理作用、在机体内的残留性及检测技术
摘要：由瘦肉精引起的中毒事件屡见不鲜，而品种繁多的瘦肉精中盐酸克伦特罗是使用最普遍的一种，本文从盐酸克伦特罗的理化性质、药理作用、残留性、检测方法等方面详细介绍其对人体的危害，为我们更好的认识和抵制瘦肉精提供参考。
关键词：理化性质；药理作用；毒性；残留性；检测方法
瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。当它们以超过治疗剂量5-10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。
1. 盐酸克伦特罗的理化性质及药理作用
1.1 理化性质
中文名：瘦肉精；克伦特罗；学名：盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride)，又称氨哮素、克喘素氨双氯醇胺，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，是一种平喘药。该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。相对分子量：313.7，分子式：C12-H18-Cl12-N2-O·HCl；
图1 盐酸克伦特罗结构式
盐酸克伦特罗的外观与性状：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦；熔点：174～175.5°C；溶解性：溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚[1]。
1.2 药理作用
20世纪70年代中后期,克伦特罗作为一种伦特罗1000～3000 μg 具有促进新的、选择性的β肾上腺受体激动剂逐步应用于临床试验,它能够引起交感神经兴奋在治疗剂量下,强而持久地松弛支气管平滑肌,口服治疗剂量仅为 30～40 μg/d, 对支气管哮喘和伴随有逆性气道梗塞的慢性支气管炎均有良好的效果,能较长时间地增加肺的最高呼气量(PEFR)，用药剂量仅为舒喘宁片的1%, 副作用和对心血管系统的作用不明显。克伦特罗可作为支气扩张剂治疗慢性梗塞性肺部疾病,用吸入法给药,有效剂量可低至12ug；口服效果是特布他林的170倍，对心率和血压的影响不明显。克伦特罗进入机体后, 与广泛分布于呼吸道效应细胞膜上 的β2受体结合,导致受体构型改变,激活腺苷酸环化酶,催化细胞内 ATP转化为cAMP,后者激 活cAMP依赖性蛋白激酶,促使胞浆中游离钙浓度下降钾通道开放引起平滑肌松弛而缓解 喘息等症状除松弛支气管平滑肌外克伦特罗也激活β2肾上腺受体克伦特罗能增加神经生长 因子的表达而起到保护神经系统的作用,也能防止大鼠诱导性肝细胞凋亡。此外,克伦特罗可能具有治疗过敏性炎症的作用并可以在抑制失神经肌萎缩的同时不影响或很少影
时间分辨荧光微球免疫层析法定量检测克伦特罗
时间分辨荧光微球免疫层析法定量检测克伦特罗
赖科洋;陈媛
【摘 要】建立了一种定量检测克伦特罗的时间分辨荧光微球免疫层析法.对抗体标记量、微孔中克伦特罗抗体-时间分辨荧光微球探针的体积以及检测线上抗原浓度进行了优化.通过时间分辨荧光微球试纸条检测仪读取试纸条上检测线和质控线的信号强度,以克伦特罗标准品的浓度为横坐标,以检测线和质控线信号强度的比值为纵坐标建立标准曲线.结果表明:该方法定量检测范围为0.01～0.81μg/L,检测限为0.004μg/L,半抑制率为0.06μg/L.本检测方法具有简便、灵敏度高、快速和可定量等特点,适合于大批量样品的现场筛查.
【期刊名称】《江西科学》
【年(卷),期】2018(036)002
【总页数】4页(P244-247)
【关键词】时间分辨荧光微球;克伦特罗;检测;免疫层析
【作 者】赖科洋;陈媛
【作者单位】南昌市第三中学,330029,南昌;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,330047,南昌
【正文语种】中 文
【中图分类】O657.3
0 引言 克伦特罗(Clenbuterol,CLE)是一种β-肾上腺素受体激动剂，最初作为一种饲料添加剂用于畜牧业养殖，能够显著地提高动物瘦肉率，俗称“瘦肉精”[1]。人食用残留有CLE的肉制品后会引起如心悸、头晕、心跳加快等中毒症状[2]，对人的身体健康造成危害。因此，我国明文禁止CLE用于饲料添加剂，规定在动物性食品中不得检出CLE[3]。
目前，分析CLE残留常用的方法有气相色谱串联质谱法[4]、液相色谱串联质谱法[5-6]、高效液相色谱法[7]、酶联免疫吸附法[8-9]和胶体金免疫层析法(Colloidal
gold lateral flow assay,CGLFA)[10-11]等。前4种方法具有灵敏度高、准确性好、特异性强的优点，不过检测时间长、操作复杂、费用高，不适合大量样本的现场筛查。CGLFA具有快速、简便和费用低等优点[12]，但该检测方法灵敏度较差，一般只用于定性分析。随着国家对快速检测产品性能要求的提高，建立一种灵敏度高、操作简便、可现场使用的快速定量免疫层析方法具有重要的意义[13-14]。
食品冷链品控专业《实验三十四、食品中克伦特罗含量检测》
实验三十四、食品中克伦特罗含量检测〔高效液相色谱法〕
克伦特罗为强效选择性β-受体冲动剂，可明显促进动物生长，并增加瘦肉率，因而俗称“瘦肉精〞。202190年代，受当时科研水平所限，我国局部地区曾错误地将其作为先进科研成果引入，并作为饲料添加剂进行推广。之后一系列由含克伦特罗引发的食物中毒事件发生后，我国农业部、卫生部、国家药品监督管理局在2021年9月10日发布的?禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录?中，将盐酸克伦特罗等列为禁用药品。然而仍有极个别养殖户因重视程度不够或受经济利益驱使，在饲料里私自添加“瘦肉精〞，使“健美猪〞等引发的中毒事件频繁发生。
一、原理
固体试样剪碎，用高氯酸溶液匀浆，液体试样参加高氯酸溶液，进行超声加热提取后，用异丙醇乙酸乙酯〔4060〕萃取，有机相浓缩，经弱阳离子交换柱进行别离，用乙醇浓氨水〔982〕溶液洗脱，洗脱液浓缩，流动相定容后在高效液相色谱仪上进行测定，外标法定量。
二、试剂及配制
克伦特罗clenbuterol hydrochloride，纯度≥%；
超纯水；
磷酸二氢钠〔NaH2ol/L〕：准确称取40g氢氧化钠，用超纯水溶解并定容至1L，摇匀。
磷酸二氢钠缓冲液〔L，g/L的标准储藏溶液，贮存于冰箱内〔0~40℃〕；使用时用甲醇稀释成L的克伦特罗标准使用液，进步用甲醇水〔4555〕适当稀释。
三、仪器设备
高效液相色谱仪；
水浴超声清洗器；
磨口玻璃离心管：〔长〕×〔内径〕，具塞，或相当者；
5mL玻璃离心管或相当者；
酸度计；
离心机；
振荡器；
旋转蒸发器；
旋涡式混合器；
微孔过滤膜〔μm，水相〕；
弱阳离子交换柱〔LC-WCX〕3mL或相当者；
N2-蒸发器；
匀浆器。
四、平安提醒
1 多数化学试剂、药品对人体都具有危害性，在实验操作前，实验者应戴一次性手套，防止用手直接接触。
2 所有的药品、试剂都应贴有明显的标签，标明药品名称、质量规格及来货日期，必要时用明显标志标明药品、试剂危险性质。 3 甲醇具有高挥发性，为神经毒物，可经呼吸道、皮肤、消化道进入体内，对视神经及多个脏器造成伤害；异丙醇易燃易爆炸；乙酸乙酯易燃、具刺激性、具致敏性。上述试剂应由专门的实验室保管员来管理，严格记录使用人、用量。操作过程中产生的废液以及上机检测后的样液由实验室回收后交由专门的环保部门处理，严禁倒入下水道。
动物检疫中猪瘦肉精的危害及其检测方法
动物检疫中猪瘦肉精的危害及其检测方法
作者：陈宝文
来源：《畜牧兽医科学》 2019年第1期
陈宝文
（山东省滨州市邹平市畜牧兽医局，滨州 256200）
摘要：瘦肉精是一种饲料添加剂，它主要是指肾上腺β类激动剂，由于该种饲料添加剂能够显著促进动物瘦肉生长，抑制脂肪生成，因此被称为“瘦肉精”。这类激动剂主要包括盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁氨醇。
关键词：动物检疫；猪瘦肉精；危害；检测方法
中图分类号：S851.34
文献标识码：B
doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.01.034
0 引言
猪肉中瘦肉精是我国明令禁止的违禁药品，该类化合物虽然能够有效促进生猪生长，但如果使用量控制不当，将会给人类身体健康造成严重危害。瘦肉精进入机体后，导致心血管系统和神经系统运行出现障碍，引起多种心血管和神经疾病。因此，需要加强动物检疫中的瘦肉精检测，及时发现不合格的猪肉制品，并采取措施进行妥善处理，保障动物制品市场秩序安全。
1 猪瘦肉精及其危害
1.1 瘦肉精概述
1.1.1 性状
瘦肉精是一类化学物质的总称，猪养殖中应用的瘦肉精被称为盐酸克伦特罗，该种化合物属于苯乙醇胺类衍生物，反应过程中需要添加盐酸，最终生成物外观呈现白色结晶粉末，无嗅，味道略微苦涩，极容易溶于水中和乙醇中，微溶于丙酮中，不溶于乙醚。该种化学药物的药理性质与肾上腺素、去甲肾上腺素相似。瘦肉精进入动物机体后，可以选择性的作用在α-受体上，引起交感神经兴奋，被称为β-兴奋剂。在兽医临床医学中，瘦肉精还具有一定的平喘作用，常用于治疗咳喘、哮喘。瘦肉精进入动物体内后，会被内脏器官快速吸收，整个半衰周期较长，代谢十分缓慢，主要分布于肝脏、肾脏、肺脏以及肌肉组织中。
1.1.2 作用机理
瘦肉精能够选择性的作用在猪β-肾上腺素受体上[1]，激活腺苷酸环化酶，使环磷腺苷增加，同时药物使用不合理，使用剂量超过了治疗推荐剂量的5～10倍，并且存在长时间使用的情况下，能够切实提高脂肪分解速度，促进机体蛋白质合成，实现机体营养的再度分配，提高酮体中的瘦肉含量。
农业部动物及动物产品兽药残留监控
附件2：检测方法及残留限量
畜禽产品检测方法及残留限量
化合物
Compound 动物/组织
Species/Matrix 检测方法
LaboratoryMethods
〔推举方法〕 检测限(或定量限)
DetectionorQuantificationLimit(g/kg或g/L〕 残留限量
MRL〔g/kg〕
克仑特罗
Clenbuterol 猪/肝
Pig/Liver 酶联免疫法ELISA；
气相色谱质谱法GC-MS〔1031号公告-3-2021〕
液相色谱质谱法LC-MS-MS〔1025号公告-18-2021〕 1 不得检出
ND 猪/尿
Pig/Urine 酶联免疫法ELISA；
气相色谱质谱法GC-MS〔1031号公告-3-2021〕
气相色谱质谱法GC-MS〔1025号公告-16-2021〕
液相色谱质谱法LC-MS-MS〔1025号公告-11-2021〕 1 不得检出
ND
地美硝唑/甲硝唑
Dimetridazole/Metronidazole 猪/肉
Pig/Muscle 液相色谱质谱法LC-MS-MS〔1025号公告-2-2021〕 不得检出
ND
卡巴氧残留标示物
CarbadoxMarkerResidue 猪/肝
Swine/Liver 高效液相色谱法HPLC〔781号公告-3-2006〕 10(定量限) 不得检出
ND 硝基呋喃类代谢物
NitrofuranMetabolites
〔AOZ、AMOZ、AHD、SEM〕 猪/肉
Pig/Muscle 液相色谱质谱法LC-MS-MS〔781号公告-4-2006〕
不得检出
ND
喹乙醇残留标示物
OlaquindoxMarkerResidue 猪/肉
Pig/Muscle 高效液相色谱法HPLC〔781号公告-3-2006〕
4〔定量限〕 4
四环素类
Tetracyclines 猪/肉
Pig/Muscle- 酶联免疫法ELISA；
酶联免疫法定量检测克伦特罗
RIDASCREEN® Clenbuterol Fast
酶联免疫法定量检测克伦特罗
摘要
RIDASCREEN® Clenbuterol Fast（编号：R1701）
竞争酶标免疫分析法定量检测尿液，血清/血浆，肝脏，肾脏，肉类和组织中的克伦特罗及其他β-兴奋剂。
试剂盒中包含有酶联免疫试验所需的所有试剂，包括标准溶液。
试剂盒足够进行96次检测（包括标准）。
定量检测需要微孔板酶标仪。
样品处理：
尿液和血清/血浆：不需要样品处理
肝脏，肾脏，肉类，组织：用RIDA® C18 columns (Art. No. R2002)纯化
试验时间： 样品制备（以10个样品为例）
尿液（离心或过滤）………….…………………….….…...约10min
肝脏，肾脏，肉类，组织……………..………….…...……至少6h
检测时间（孵育时间）……………………………….……………1h
检测限：
尿液，血清/血浆中的克伦特罗………………..……………100ppt
肝脏，肾脏，肉类，组织的克伦特罗………..……………100ppt
回收率： 尿样…………………………...………. 90 % ± 12 %
交叉反应：
RIDASCREEN® Clenbuterol试剂盒的特异性是通过测定相应物质的交叉反应而得到的。
Clenbuterol .............................…………….…..............约100 %
Brombuterol .............................………………..............约130 %
Bromchlorbuterol ......................…….…………............ 约95 %
Mabuterol ........................…………...….........................约86 %
瘦肉精相关检测标准汇总
瘦肉精相关检测标准汇总
央视曝光双汇济源分公司收购含“瘦肉精”猪肉，瘦肉精再次引起人们的关
注，因此汇总整理出瘦肉精相关检测标准，供大家参考。
GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定
本标准规定了动物性食品中克伦特罗的测定方法。本标准适用于新鲜或冷冻
的畜、禽肉与内脏及其制品中克伦特罗残留的测定。本标准也适用于生物材料(人 或动物血液、尿液)中克伦特罗的测定。本方法检出限：第一法气相色谱一质谱 法为0.5pg/kg第二法高效液相色谱法为0.5pg/kg；第三法酶联免疫法为0.5pg/kg。 线性范围：第一法气相色谱一质谱法为0.025ng〜2.5ng；第二法高效液相色谱法 为0.5ng〜4ng；第三法酶联免疫法为0. 004ng〜0.054ng。
GB/T20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法
本标准规定了检测动物饲料中莱克多巴胺含量的高效液相色谱(HPLC)方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莱克多巴胺含量的测
定。
GB/T21036-2007饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸多巴胺含量的测定。
GB/T22147-2008饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗
的测定液相色谱质谱联用法
本标准规定了同步测定饲料中P -激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑
特罗的液相色谱质谱联用法。
GB/T21313-2007动物源性食品中6-受体激动剂残留检测方法
液相色谱-质谱/质谱法
本标准规定了 P -受体激动剂类兽药残留检测的制样方法和高效液相色谱/
质谱确证方法。本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾等动物源性食品以猪屎中克伦特
罗、沙丁胺醇、妥布特罗、特布它林、非诺特罗、福莫特罗、莱克多巴胺、异丙 喘宁等8种P -受体激动剂类残留量的高效液相色谱-质谱/质谱测定。
GB/T22286-2008动物源性食品中多种B -受体激动剂残留量的