《仪器分析实验》分子荧光分析法

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1.1 荧光的产生
S2
2 1
V=0
2
S1
1 V=0
VR
ic
VR
A1
A2
F
发生激发 态反应
isc
T1
2
1
V=0
P
3
S0
2 1
V=0
分子内的激发和衰变过程
激发态能量的跃迁与转 化的形式和速率:
A1,A2 吸收: 10-15 s VR 振动松弛: 10-12 s ic 内转化: 10-11 s isc 系间窜越:
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2.3 注意事项:
☆注射液的移取与稀释 ☆系列标液的测定顺序 ☆即放即测,防光降解 ☆荧光仪的开关机顺序
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2.4 数据处理
1. 从荧光光谱图上读出最大激发(λex)和发射波长( λem) 2. 用标准工作曲线法算出所配实测试液的浓度 3. 计算注射液中维生素B6的含量, 病计算测定量占
《仪器分析实验》
分子荧光分析法
Molecular Fluorimetry For short: M-F
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一、分子荧光分析法 简介
原子光谱(略)


UV-Vis(紫外-可见)

分子吸收

(对光的吸收) IR(红外)
分子
光谱
光致发光
分子发光
荧光、磷光
其它发光形式 如:化学发光等
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Wavelength(nm)
(☆注意:在一定浓度范围内适用)
? 问题:
1)影响相对荧光强度的因素有哪些?
2)试比较荧光法与紫外-可见分光光度法的分析性能。
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1.4 荧光仪的基本构造
?问题:荧光光度计与紫外-可见分光光度计在光路设置
上有什么不同?为什么?
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1.5 分子荧光分析法的应用简介
200
0
250 300 350 400 450 500 550 600
Wavelength (nm)
组成、结构与衍化信息
☆ 物质的化学结构 ☆ 环境与介质条件 ☆ 与其它溶质的相互作用 ☆ 反应动力学
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1)共轭结构
萘 紫外区
2)刚性的平面结构 -O
蒽 蓝区
O
-O
3)取代基
COO荧光黄会发荧光
10-6 ~ 10-2 s F 荧光: 10-9 ~ 10-6 s
P 磷光: 10-6 ~ 100 s
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1.2 荧光光谱
任何荧光化合物,都具有两种特征的光谱:激 发光谱和发射光谱。
Relative Fluorescence Intensity
激发光谱
800
Ex.
600
发射光谱
400
★ 常规分析应用:
☆ 定性分析:φf;λex;λem;峰形等 ☆ 定量检测: F = K﹒I0﹒φf﹒C ☆ 其它(略)
★ 高端生化研究:
☆ 分子相互作用研究; ☆代谢动力学跟踪; ☆ 显微成像(物理迁移与化学衍化的原位“显迹”)
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二、维生素B6注射液中维生素B6含的 荧光法测定
标示量 的百分数
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源自文库
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2.1 实验原理
R
HO
CH2OH
H3C
N
R = CH2NH2, CH2OH, CHO.
VB6 的化学结构
★ 在近中性的水溶液中
有较强的荧光发射:
(323nm/392nm 附近)
★在碱性介质中不稳定
★易发生光降解
西北大学基础化学实验
2.2 实验流程
1、试液配制 2、VB6的荧光光谱的绘制 3、标准工作曲线的制作 4、未知液的配制
NH2
丁省 绿区 O
COO酚酞不发荧光
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1.3 荧光定量
F = K﹒I0﹒φf﹒C
I0:光源强度; φf:荧光量子产率; C:荧光体浓度)
Fluorescence Intensity
4800
4200
3600
3000
C
2400
1800
1200
600
0 550 560 570 580 590 600 610 620
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