新生隐球菌荚膜研究现状
・３１２・ 中国真菌学杂志２０１０年１Ｏ月第５卷第５期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｍｖｃｏｌ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１０，Ｖｏｌ ５，Ｎｏ．５
新生隐球菌荚膜研究现状
王高峰 孔庆涛 王雪连 刘芳 桑红 （南京军区南京总医院，南京２１０００２） ・综述・
【摘要】新生隐球菌是一种专性需氧条件致病菌，它的细胞壁外包绕着一个多糖荚膜，是其主要毒性因子之一。荚膜主要 包含两种多糖一葡萄糖醛酸木糖和半乳糖甘露聚糖，此外还有少部分的甘露糖蛋白。这些多糖分子除构成多糖荚膜外，同 时也参与新生隐球菌与宿主之间的免疫反应。该文对新生隐球菌荚膜的结构、生物合成、免疫反应及针对荚膜的抗真菌治 疗等方面作一综述，旨在为新生隐球菌相关疾病的研究提供新的思路。 【关键词】新生隐球菌；荚膜；现状 【中图分类号】 Ｒ ３７９．５ 【文献标识码】 Ｂ 【文章编号】 １６７３—３８２７（２０１０）０５－０３１２－０４
新生隐球菌（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｒｒｔａｒｔｓ）是少 数致病真菌之一，不仅能感染免疫抑制患者，也能
感染免疫正常人群。主要感染中枢神经系统，导致 致命性的脑膜脑炎。近年来，随着隐球菌病在人群
中发生率逐渐增加，新生隐球菌已经越来越受到研 究者的重视。该菌的主要致病因素为荚膜、产黑 素¨ 及其在宿主体温环境生长的能力等。其中荚
膜作为新生隐球菌毒性的主要决定因子之一，成为 众多有关新生隐球菌研究中被关注的焦点之一。
１荚膜的组成和新生隐球菌分型
新生隐球菌最具特征性的结构是包绕在菌体
周围的多糖荚膜。隐球菌荚膜是由高度亲水性的 多糖构成，含量约占荚膜总重的９９％ 。常规的 显微镜无法看到，但可通过印度墨汁染色观察到包
绕在细胞周围的光圈，或利用其他技术，例如扫描 电子显微镜术和荧光技术等，也能清楚地观察到荚
膜形态。 研究者利用 射线或二甲亚砜处理新生隐球 菌，分离出其荚膜。构成分析显示荚膜多糖主要有 两种，即葡萄糖醛酸木糖（ＧＸＭ）和半乳糖甘露聚 糖（ＧａｌＸＭ）。ＧＸＭ大约占多糖总量的９０％～
９５％，ＧａｌＸＭ大约占５％～８％，此外，经鉴定还有
小部分甘露糖蛋白（ＭＰ，＜ｌ％），但目前对这一成 分并没有详细的研究报道。ＧＸＭ已被专家们广泛 研究，但对于ＧａｌＸＭ，由于没有针对这种抗原的特
作者简介：王高峰，男（汉族），硕士研究生在读．Ｅ－ｍａｉｌ：ｐｅａｋ１９８７＠ １２６．ｅｏｍ 通讯作者：桑红，Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｈｚｗｑｚｓｌ＠１６３．ｃｏｍ 的特异性血清学试剂，大家对其了解仍甚少。最近
更有学者提出ＧａｌＸＭ并不是荚膜的结构成分，实 验结果显示它只是荚膜的暂时性过渡成分 。
新生隐球菌按血清学分类可分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ和 ＡＤ五种不同的血清型，这种分类最早是根据对多
糖荚膜成分抗原的玻片凝集反应试验进行的。临 床上人们又将这五种血清型归入３个变种，即新生 变种（血清型Ｄ和ＡＤ）、格特变种（血清型Ｂ和 ｃ，目前已提升至种，即格特隐球菌）和格鲁比变种 （血清型Ａ） Ｊ。目前我们已经应用多种技术来研
究不同的血清型的荚膜结构，这对我们研究荚膜多 糖的组成和构造提供了更多实验性依据。
２荚膜代谢
２．１荚膜的合成 荚膜合成相关基因 目前研究证实多种基因 参与荚膜的合成，例如ＣＡＰ５９、ＣＡＰ６４、ＣＡＰ６０、 ＣＡＰ１０以及编码荚膜合成相关酶的基因等。荚膜
相关基因ＣＡＰ基因对于荚膜合成是至关重要 的 Ｊ。ＣＡＰ５９、ＣＡＰ６０、ＣＡＰ６４、ＣＡＰ１０四种荚膜相
关基因已依次被克隆并测序。专家们对这些基因 编码的蛋白进行了研究，结果显示Ｃａｐ５９蛋白具有
１个跨膜区域，在荚膜分泌机制中起重要作用，并 还有研究认为ＣＡＰ５９基因与Ｉ２７基因有关，这种
Ｌ２７基因编码一种在新生隐球菌运输荚膜多糖分 泌小泡中出现的核糖体蛋白 ；ＣＡＰ６４基因的删除
会导致小鼠体内新生隐球菌无荚膜突变体的产生， 与ＣＡＰ５９相同，ｃａｐ６４突变体经插入相应基因后其
荚膜表达和毒性都会恢复；ＣＡＰ６０与ＣＡＰ５９位于 中国真菌学杂志２０１０年ｌ０月第５卷第５期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｍｖｃｏｌ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１０，Ｖｏｌ ５，Ｎｏ．５
相同染色体上，两者具有相似性；ＣＡＰ１０基因与一 种编码木糖基转移酶的基因具有同源性，与前３种 基因产物位于细胞核有所不同，其基因产物位于胞
质内 。近来，新生隐球菌荚膜基因与绿色荧光蛋 白的融合表达系统的构建，给研究者们对新生隐球
菌荚膜基因的深入研究带来方便 。
荚膜合成相关酶类 新生隐球菌荚膜的合成 过程也就是多糖的合成、装配加工和运输过程。 这一过程会涉及到许多单糖的聚合、糖基转移、变
构及乙酰化等生物过程，这些过程需要相应的酶 类参与。
甘露糖是ＧＸＭ中含量最多的糖单位，而ＧＸＭ 的合成依赖ＧＤＰ．甘露糖的形成。胞质中的６．磷酸
果糖通过磷酸甘露糖异构酶（ＰＭＩ）催化转变为６一 磷酸甘露糖，然后分别被磷酸甘露糖变位酶和
ＧＤＰ一甘露糖焦磷酸酶转变为１一磷酸甘露糖和 ＧＤＰ一甘露糖。最终生成的ＧＤＰ一甘露糖用于ＧＸＭ 的合成。葡糖醛酸是ＧＸＭ中另一种丰富的糖单 位。相应的ＵＤＰ－葡萄糖脱氢酶通过对ＵＤＰ．葡萄
糖氧化作用产生尿苷二磷酸葡糖醛酸，参与ＧＸＭ
的合成。编码这种酶的基因（ＵＧＤ１）也已被克隆 出来 。研究发现，ＵＧＤ１基因的断裂会导致无荚 膜细胞密度的改变、出芽的颈部形态缺失、以及对 温度、洗涤剂、ＮａＣ１和山梨醇的敏感性提高等¨ 。
木糖也是ＧＸＭ中的一种重要的多糖。ＵＤＰ一木糖 是木糖的有效利用形式，它是在ＵＤＰ一葡糖醛酸脱
羧酶对ＵＤＰ．葡糖醛酸脱羧后合成的。此外，在 ＧＸＭ合成过程中涉及到的糖基转移酶（例如 一１，
３．甘露糖基转移酶、Ｂ一１，２－木糖基转移酶等）和 ＧＸＭ乙酰化所必需的酶（Ｏ一乙酰转移酶等）都已
被研究，相关基因ＣＭＴ１、ＣＸＴＩ、ＣＡＳ１等也被克隆 出来。
近来由于半乳糖代谢在新生隐球菌毒性中的 作用引起了专家们的强烈兴趣… ，针对ＧａｌＸＭ及
其相关酶的研究更多，但其作用机制至今仍未被阐 明，有待于我们更深入的研究。
影响荚膜合成的其他因素 离子浓度是影响 荚膜合成的主要环境因素之一。Ｌｅｏｎａｒｄｏ等¨引在
不同离子存在时通过电感耦合等离子体质谱测定
法和∈电位测量进行黏滞度分析显示，多糖的聚集 是葡萄糖醛酸羧基团与二价阳离子相互作用的结 果。这是通过观察到的用Ｍｇ¨和ｃａ¨处理的隐球
菌的细胞电荷量降低和阳离子与ＧＸＭ的直接结合 的结果推断出的。与黏滞度分析一致的是，低浓度 的Ｃａ“可促进荚膜生长，高浓度则抑制荚膜装配。
早期研究发现，在高浓度ＮａＣ１中荚膜生长受抑制， 研究者推测这是由于葡萄糖酸残基负电荷的单价
中和作用引起的。外周ｐＨ环境会对细胞完整性
和代谢过程产生影响，对于新生隐球菌来说，中性 或微碱性的环境有利于荚膜生长和毒性表达。
ｃＡＭＰ—ＰＫＡ信号转导途径对于新生隐球菌荚膜感 知宿主环境是至关重要的。近期研究证明１种 Ｒｉｍｌ０１途径也与荚膜合成调节和毒性有关 ”。。
２．２囊泡运输
多数微生物的多糖通常是在胞膜外层或在细
胞外间隙聚合而成的，包括细菌英膜多糖。对于真 菌，尤其是新生隐球菌，其多糖则是存细胞内合成， 确切的说是在高尔摹体内合成¨ 。荚膜多糖在细
胞内合成并被运输到细胞外用于荚膜装配和释放
的机制一直是隐球菌细胞生物学中】个中心问题。 电镜分析显示含多糖的囊泡与高尔基体衍生的分
泌途径有关。高尔基体衍生的分泌小泡将与胞浆 膜融合并将其内容物释放到胞外并用于荚膜合 成 。Ｎｉｃｏｌａ等¨ 利用１种荧光磷脂作为示踪剂
对整个细胞染色，结果显示荚膜边缘具有与囊泡运 输轨迹一致的点状结构。这也证明厂荚膜合成
胞内囊泡运输多糖有关。
３荚膜的生物学功能
３．１诱导吞噬作用
宿主细胞的吞噬作用是其清除体内敛病菌的
一种重要的保护机制。荚膜在这一过程中具有诱
导吞噬的作用，这基于荚膜表面具有特异性的识别 位点。在此，我们主要介绍抗体和补体介导的细胞
吞噬作用。 ＩｇＧ抗体是通过其Ｆ（ 受体（ＦｃＲＩ或ＦｃＲ ＩＩＩ）
结合到新生隐球菌荚膜来诱导吞噬。而ＩｇＭ抗体 并没有Ｆｃ受体。研究发现ＩｇＭ抗体介导吞噬是通
过多糖纤维结合于补体受体发生的，尤其是ＣＤＩ８。 专家推测抗体与荚膜的结合会产生一些结构的重
排，这导致多糖中ＣＤ１８结合位点的暴露，随后通 过补体受体引起吞噬…。。
新生隐球菌荚膜还是一种很强的通过旁路途 径激活补体系统的诱导剂。有荚膜细胞和纯化
ＧＸＭ都可诱导补体ｃ３的释放，但是仅有ｃ３与荚
膜结合并不足以诱导吞噬。研究发现隐球菌的吞 中国真菌学杂志２０１０年ｌＯ月第５卷第５期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｍｙｃｏｌ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１０，Ｖｏ］５，Ｎｏ．５
噬指数还与荚膜大小、ＧＸＭ分子量有关。并且来
源不同的ｃ３蛋白与荚膜结合也是有差异的，这表 明不同宿主的补体途径在抵抗新生隐球菌方面具 有不同的功能 引，这可以部分解释为何宿主对新
生隐球菌感染的易感性存在差异。 ３．２荚膜与播散 播散是真菌发病机理中一个很鼋要的过程。
众多因素与隐球菌感染期间的播散有关，包括孢 子¨ 、漆酶、磷脂酶和荚膜等。其中荚膜在这一过
程中具有重要的作用，因为大量研究表明无荚膜菌
株引起脑内播散的能力明显降低，并且新生隐球菌
在发生器官播散期间出现了与组织入侵有关的荚 膜结构的改变。 在感染和播散期间，新生隐球菌必须穿越上皮 细胞和内皮细胞屏障。新生隐球菌通过荚膜促使 其与肺泡上皮细胞结合，两者相互作用导致上皮细
胞的生存力下降。众多研究报道表明，上皮细胞结 合荚膜多糖ＧＸＭ是通过ＣＤ１４完成的，并且这种
结合导致ＩＬ．８产物的增加 。而在隐球菌性脑膜 脑炎中，新生隐球菌细胞是通过跨细胞作用穿越脑
微血管内皮细胞的。跨细胞作用通过细胞紧密结
构的断裂和细胞骨架的改变来完成。 近期研究发现肌醇鞘磷脂磷酸酶Ｃｌ缺陷的突
变株是有荚膜的，但不能导致脑内播散 。类似 的发现也见于不能合成ＧａｌＸＭ的突变株，它同样 具有荚膜但 能引起感染期间脑内播散 。这些
突变细胞都具有一个不同结构的荚膜并且缺乏 ＧａｌＸＭ，暗示 ｒ ＧａｌＸＭ可能在播散过程中具有重要
作用。 ３．３免疫调节作用 荚膜多糖在调节隐球菌与宿主免疫反应中具
有重要作用。其中大量免疫介质的表达都受ＧＸＭ 的调节 。近期研究发现在隐球菌小鼠模型的巨
噬细胞中出现了ＧＸＭ诱导的ＴＮＦ—Ｂ聚集的细胞
系 ，并发现ＧＸＭ可诱导单核细胞中ＩＬ－６的产 生。其他免疫调节机制包括调节Ｃ５ａＲ的表达、通
过ＣＤ４＋Ｔ细胞调节细胞因子的表达以及通过ＩＬ— ｌ０和ＩＬ４产生增强的机制增加真菌复制等。
尽管目前大多数荚膜多糖免疫调节效应研究 都集中于ＧＸＭ，但是我们对人单核细胞在不同荚
膜成分存在时的细胞因子表达谱进行分析，结果发 现ＧａｌＸＭ和ＧＸＭ可诱导相似的效应 巧 。并且在
小神经胶质细胞中ＧａｌＸＭ或ＧＸＭ的加入都与 ＴＮＦ— 聚集增加有关，ＬＰＳ的存在对ＧａＩＸＭ或
ＧＸＭ的诱导都会产生阻碍作用。这 结果表明 ＧａｌＸＭ和ＧＸＭ都具有免疫调节特性。ＧａｌＸＭ还 具有抗原呈递和诱导细胞凋亡功能，并且ＧａｌＸＭ
隐球菌脑膜炎的诊疗进展
２（）１０年５月第９卷第３期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｖｏｌ！ ａｙ ・１４５・
．专家论坛．
隐球菌脑膜炎的诊疗进展
Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃａｌ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ：ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
杨晓苏（ＹＡＮＧ Ｘｉａｏ—ｓｕ），王红星（ＷＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ｘｉｎｇ）
（中南大学湘雅医院，湖南长沙４１０００８） （Ｘｉａｎｇｙａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｅｎｔｒａｌ Ｓｏｕｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０００８，Ｃｈｉｎａ）
［关键词］隐球菌；新生隐球菌；脑膜炎，隐球菌性；诊断；治疗 ［中图分类号］Ｒ５１９．４ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１６７１—９６３８（２０１０）０３—０１４５—０７
隐球菌脑膜炎（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃａｌ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ）简称
隐脑，是由隐球菌属中某些种或变种侵犯中枢神经
系统（ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ，ＣＮＳ）引起的一种深 部真菌病，为ＣＮＳ最常见的真菌感染。隐脑为机会 性感染，是人免疫缺陷病毒（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉ—
ｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ，ＨＩＶ）感染后ＣＮＳ重要的并发症之一。
在过去３０年里，由于广谱抗菌药物、糖皮质激素及
化学治疗药物的广泛应用，特别是获得性免疫缺陷
综合征（ａｃｑｕｉｒｅｄ ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，
ＡＩＤＳ）的流行，使得隐脑的发病率显著增加ｌ＿１］。在
撒哈拉以南地区，由于Ｈ１Ｖ的严重流行，使得隐脑
已经超越肺炎链球菌及脑膜炎球菌性脑膜炎，成为 最主要的社区获得性脑膜炎。据估计，全世界每年
约有１００万ＨＩＶ相关性隐脑患者Ｅ２］，目前国内多以
散发、非ＡＩＤＳ人群为主。隐脑死亡率及致残率均
高，在免疫缺陷患者中表现更为突出，即使联合高效
抗逆转录病毒疗法（ｈｉｇｈｌｙ－ａｃｔｉｖｅ ａｎｔｉ—ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ
隐球菌致病的免疫学机制研究进展
隐球菌致病的免疫学机制研究进展
宋英;邱玉芳;刘惟优;袁小亮
【摘 要】感染隐球菌是否致病主要取决于病菌的毒力及机体免疫防御能力.机体免疫功能低下或缺陷易感染新型隐球菌,而格特隐球菌易感染免疫功能正常的宿主.一方面,宿主免疫细胞可通过复杂的免疫防御机制杀灭入侵的隐球菌;另一方面,隐球菌可通过多种策略逃避机体宿主细胞的清除作用(免疫逃逸).本综述主要阐述隐球菌的致病过程和机体防御隐球菌感染的免疫学机制.
【期刊名称】《赣南医学院学报》
【年(卷),期】2019(039)004
【总页数】5页(P417-421)
【关键词】隐球菌;免疫机制;巨噬细胞;树突状细胞
【作 者】宋英;邱玉芳;刘惟优;袁小亮
【作者单位】赣南医学院,江西赣州341000;赣南医学院,江西赣州341000;赣南医学院第一附属医院呼吸内科,江西赣州341000;赣南医学院第一附属医院呼吸内科,江西赣州341000
【正文语种】中 文
【中图分类】R379.5
隐球菌属于真菌担子菌亚门，包括很多种类，其中引起人类机会性感染的条件致病菌主要有两类：新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)和格特隐球菌(Cryptococcus gattii)。新型隐球菌在全球自然界中分布，主要存在于土壤、腐烂的蔬菜中，特别是鸽子的鸟粪中最多。而格特隐球菌主要存在于桉树中，主要分布于热带、亚热带地区，1999年它在哥伦比亚温带地区爆发以及扩散至华盛顿州、俄勒冈州和加利福尼亚州[1]。但是，最初在热带地区报道，现在全球范围内诊断出格特隐球菌感染[2]。新型隐球菌感染是全世界艾滋病患者死亡的主要原因，尤其是在撒哈拉以南非洲地区发病率最高[3]。新型隐球菌除了容易感染HIV个体外，还易感其它免疫功能低下的个体，如造血系统恶性肿瘤、器官移植后服用免疫抑制剂及免疫缺陷病患者。格特隐球菌主要侵犯免疫功能正常的个体，但也有一些特例报道新型隐球菌感染某些免疫功能正常的患者和格特隐球菌感染免疫功能低下患者如合并艾滋病毒的患者[4]。
组织病理隐球菌PAS染色
组织病理隐球菌PAS染色
摘要：目的：探讨影响隐球菌糖原染色的因素，改善染色效果。方法：选取隐球菌染色阳性的肺组织标本，比较高碘酸水溶液浓度氧化不同时长、雪夫氏（Schiff）染色时间对PAS染色质量的影响。结果：浓度为l％高碘酸溶液，氧化30分钟，雪夫氏（Schiff）染色15分钟，可取得较好的染色效果。结论：进行隐球菌糖原染色时，氧化程度是成功的关键。
关键词：糖原染色法；组织病理；隐球菌
前言：PC，即肺隐球菌病，其属于一种新型隐球菌或是格特隐球菌在感染的条件下形成的急性、亚急性、慢性内脏真菌病，临床之中的表现形式为新型隐球菌的感染，而主要发生在免疫力低下的人群之中，不管是否具有基础疾病的人群都可能会发生此病，但此病的发病率并不高。现代化条件下，伴随临床诊断技术的不断创新以及医务人员对疾病的了解更为深入全面，不断提高隐球菌感染的检出率，从而逐渐出现在人们的视野之中，成为了继念珠菌和曲霉菌之后的第三大类肺真菌疾病，并且在临床之中得到高度重视。而糖原染色作为组织病理真菌检查常用的特殊染色，其染色过程受到多种因素的影响[1]，本文将从高碘酸浓度与氧化时间，雪夫氏（Schiff）试剂作用时间三方面探讨影响糖原染色的因素。
1实验材料与方法
1.1实验材料
组织标本选择本科室隐球菌染色阳性的蜡块。
1.2实验试剂与步骤
实验试剂： l％高碘酸溶液：lg高碘酸粉末加至蒸馏水到100mL溶解；0.5%高碘酸溶液：1g高碘酸粉末加至蒸馏水到200mL溶解，其余试剂成分购自BASO公司。试剂贮存在4℃的冰箱中，在染色时将其取出恢复到正常室内温度。
实验步骤：
①石蜡切片厚度为3um；②石蜡切片脱蜡至水；③自来水冲洗2min，然后蒸馏水洗2min；④用高碘酸溶液氧化10-30min；⑤蒸馏水冲洗；⑥雪夫氏（Schiff）染液染色15-35min；⑦自来水流水冲洗；⑧苏木素复染细胞核1min；⑨流动水冲洗5min；⑩晾干，中性树胶封片，显微镜下观察真菌染色效果。
新生隐球菌5种血清型的CAP64基因的序列分析
检验医学与临床２０１０年６月第！鲞箜 塑 ！： ： ！ ！ ：∑！！：！： ：
新生隐球菌５种血清型的ＣＡＰ６４基因的序列分析
邹先彪 ，廖；ａ－清 ，温 海 ，吴建华 ，仇 芸 ，杨金水。（１．解放军总医院第一附属医院皮肤科，
北京 １０００４８；２．上海第二军医大学长征Ｎ－－院皮肤科２００００３；３．复旦大学遗传所，上海 ２００４３３）
【摘要】 目的 多糖荚膜是新生隐球菌的重要的毒性因子，应用荚膜多糖抗原可以进行新生隐球菌的血清分
型。方法 该研究分析了５种血清型的ＣＡＰ６４基因的序列的相似性，作者扩增了ＣＡＰ６４基因一个约５５０ ｂｐ的
ＤＮＡ序列，扩增产物经纯化后克隆到Ｔ栽体上，转化至大肠杆菌ＪＭ１０９株中，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）鉴定阳性
克隆并测序。结果 ５种血清型ＣＡＰ６４序列的比较显示其间的碱基差异为６１～９１ ｂｐ，相似性为８３．７５ ～
８８．０３ ，其核酸序列的差异是多位点的，主要在２２７～２３１ ｂｐ之间；氨基酸的分析结果与此类似。结论 ５种血清
型的ＣＡＰ６４基因存在着一定的差异。
【关键词】新生隐球菌；
中图分类号：Ｒ３７８．１ ＣＡＰ６４基因； 序列
文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２—９４５５（２０１０）１卜１０２５—０２
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＣＡＰ６４ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ ｆｉｖｅ ｓｅｒｏｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ ＺＯＵ Ｘｉａｎ—ｂｉａｏ ，ＬＩＡＯ Ｗａ —ｑｉｎｇ ，ＷＥＮ Ｈａｔ ，ＷＵ Ｊｔａｎ ｈｕａ。，ＱｉｕＹｕｎ ，ＹＡＮＧ Ｊｉｎ—ｓｈｕｔ。．１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，ＦｉｒｓｔＡ 一 ａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ＰＬＡ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００４８，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏＪ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｚｈｅｎｇ
隐球菌感染诊治专家共识
・专家论坛・隐球菌感染诊治专家共识
《中国真菌学杂志》编辑委员会【关键词】 隐球菌病;诊断;治疗【中图分类号】 R756.6 【文献标识码】 B 【文章编号】 167323827(2010)0220065204
1 简 介隐球菌属在真菌分类学上归入半知菌亚门、芽孢菌纲、隐球酵母目、隐球酵母科,引起人类感染的隐球菌主要是新生隐球菌和格特隐球菌。两种隐球菌的无性繁殖体均为无菌丝的单芽孢酵母样菌,在体外为无荚膜或仅有小荚膜,进入人体内后很快形成厚荚膜,有荚膜的隐球菌菌体直径明显增加,致病力明显增强。隐球菌可以感染人体的任何组织和脏器,最常见的部位是中枢神经系统,其次为肺部和皮肤。目前,在免疫抑制患者中,隐球菌感染的发病率约为5%～10%,在AIDS患者中,隐球菌的感染率可以高达30%;而在免疫功能正常的人群中,隐球菌的感染率约为十万分之一左右[1]。在加拿大曾经发生格特隐球菌感染在正常人群和动物中大流行[2]。2 HIV阴性患者的隐球菌感染治疗方案2.1 肺隐球菌感染肺隐球菌感染的临床表现多种多样,从无症状的结节到严重的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。主要表现为咳嗽、咳少量黏液痰或血痰、伴发热,部分患者可出现胸痛、咯血、乏力、盗汗等。临床亦常见慢性隐匿起病的无症状患者,仅在体检时胸部X线检查发现,多见于免疫功能正常者。急性重症多见于免疫抑制尤其是AIDS患者,临床表现为严重急性下呼吸道感染,有高热、呼吸困难等症状,伴有明显的低氧血症,可发展为急性呼吸衰竭,如不及时诊断和治疗,病死率较高。肺是隐球菌感染的主要门户,HIV阴性的免疫抑制患者发展成播散性感染的危险性很高,因此所有发生于免疫抑制患者的隐球菌感染均需治疗。
通讯作者:温海,E2mail:wenhai98@HIV阴性的免疫正常的患者中,部分痰培养阳性的患者未经治疗也可自愈。诊断 确诊主要依靠组织病理检查和病灶内脓液穿刺标本的病原学涂片和培养。通常取自无菌部位如经皮肺组织穿刺活检标本等真菌涂片、培养阳性,有确诊意义;取自痰、咽拭子或支气管肺泡灌洗液的标本涂片或培养阳性,以及血清隐球菌荚膜多糖抗原乳胶凝集试验阳性有临床疑似诊断价值[325]。肺隐球菌感染患者胸部X线及CT表现多样,通常分为单发或多发结节块状影、片状浸润影和弥漫混合病变等三种类型[6]。临床常需与肺癌和肺转移癌相鉴别。治疗目标 治愈感染,防止感染播散到中枢神经系统(CNS)。治疗方案 治疗HIV阴性患者隐球菌肺部感染的方案见表1。不管选择何种方案,所有肺部感染(除无症状、非弥漫性病变的免疫正常宿主,且血清隐球菌抗原阴性或低滴度者外)及肺外隐球菌病的患者均建议进行腰穿检查以排除伴发CNS感染的可能。在免疫正常患者中,无症状而肺部标本隐球菌培养阳性的必须严密观察或采用氟康唑,200～400mg/d,治疗3～6个月。有轻到中度症状的免疫正常患者或轻到中度症状的无肺部弥漫性浸润、无其他系统累及的非严重免疫抑制患者采用氟康唑,200～400mg/d,治疗6～12个月。对不能耐受氟康唑的患者,可选用伊曲康唑,200～400mg/d,治疗6～12个月。血清隐球菌抗原持续阳性不能作为维持治疗指标。免疫抑制伴弥散性感染或严重肺炎者治疗同隐球菌中枢神经系统感染。如果不能应用口服唑类药物,或肺隐球菌病较重或呈进行性加重时,推荐使用两性霉素B,0.4～0.7mg/(kg・d),总剂量为1000～2000mg[325,7]。对于肺部病灶局限、而内科治疗效果不佳的患者,可・56・ 中国真菌学杂志2010年4月第5卷第2期 ChinJMycol,April2010,Vol5,No.2 考虑手术治疗。因剖胸探查或误诊为肿瘤或其他病变行病灶手术切除者,建议术后常规应用抗真菌药治疗,疗程至少2个月。2.2 皮肤隐球菌感染皮肤隐球菌感染根据感染来源,可以分为原发性和继发性感染两种。继发性隐球菌感染一般预示已经发生播散性隐球菌感染,主要来源于血行播散,提示感染严重。原发性隐球菌感染独立存在,但也可能播散到其他部位,发病前大多具有局部外伤史,一般预后较好。皮肤隐球菌感染的皮损多种多样,最常见的为传染性软疣样带有脐凹的损害,还可以表现为溃疡,结节,脓疱,红斑,坏死以及蜂窝组织炎等多种损害[8]。诊断 需要综合考虑发病部位,皮损类型,患者的免疫功能,皮肤病理以及真菌学检查的结果。最后确诊依赖于皮损真菌培养发现隐球菌和/或皮损的病理发现有荚膜的孢子。一旦确立为皮肤隐球菌感染,需要进行肺,脑脊液以及血液检查,以区分是原发性还是继发性皮肤感染[9210]。治疗目标 治愈感染,监测感染是否发生播散。治疗方案 继发性皮肤隐球菌感染需要按照中枢神经系统感染的原则进行治疗。原发性皮肤隐球菌感染的治疗可以采用氟康唑,200～400mg/d,治疗1～3个月。部分病例可以使用两性霉素B治疗,必要时可以采用外科手术切除[8210]。2.3 中枢神经系统感染CNS感染通常表现为脑膜炎或脑膜脑炎,极少数表现为单个或多个局灶性肿块损害(隐球菌肉芽肿)。中枢神经系统感染的主要临床表现是发热、渐进性头痛、精神和神经症状(精神错乱、易激动、定向力障碍、行为改变、嗜睡等)。随着病情进一步进展可能出现脑神经麻痹(听觉、视觉障碍)和视乳头水肿,甚至出现运动、感觉障碍,小脑功能障碍,癫痫发作和痴呆等临床表现。CNS感染可伴发肺部或其他播散性感染,但大多数不伴有其他感染的临床表现。不管CNS感染是否伴发其他部位感染,其治疗选择是一样的。诊断 脑脊液真菌涂片、培养和隐球菌乳胶凝集试验结果中的任一个阳性都可以确诊隐球菌中枢神经系统感染。患者的临床症状、体征和脑脊液常规、生化以及影像学检查对诊断具有重要价值。治疗目标 消除或减轻临床症状,如发热、头痛、精神症状、脑膜刺激征、颅内高压及脑神经异常;治愈感染,清除脑脊液(CSF)中隐球菌;预防CNS后遗症,如脑神经瘫痪,听力丧失和失明。治疗方案 对于非HIV相关的隐球菌性脑膜炎治疗的推荐方案(见表1),与美国感染病学会(IDSA)在2000年推出的初步推荐方案[11]以及2010年的更新方案有所不同[7]。两种方案均建议采取分期治疗的方式进行,在初期的诱导治疗中,联合应用两性霉素B(0.5～1mg/(kg・d))和氟胞嘧啶(100mg/(kg・d))作为诱导治疗得到全球专家的广泛认可[12],氟康唑作为后续治疗也得到
新生隐球菌荚膜培养方法与保存
新生隐球菌荚膜培养方法与保存
王娅;杨树国;冯贵香
【摘 要】新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)是一种深部致病真菌,可在土壤、鸟粪、尤其是鸽粪中大量存在.人因吸入鸽粪污染的空气而感染,引起隐球菌病.荚膜多糖是其中的致病物质,实验教学中我们采用三种方法培养出带宽厚荚膜的新生隐球菌,分别介绍如下.1 新生隐球菌荚膜的培养1.1体内培养法 (1)将新生隐球菌菌种接种于高层斜面沙保弱琼脂培养基上,电热恒温培养箱37℃培养约48h可形成肉眼可见的菌落.(2)取菌苔用生理盐水稀释成悬液,取该悬液0.5mL腹腔或0.02mL脑内注入小鼠,5～30天动物可死亡.
【期刊名称】《青岛医药卫生》
【年(卷),期】2012(044)001
【总页数】1页(P65)
【关键词】新生隐球菌;细菌培养;荚膜
【作 者】王娅;杨树国;冯贵香
【作者单位】湖北医药学院病原学实验室,湖北十堰442000;湖北医药学院病原学实验室,湖北十堰442000;湖北医药学院病原学实验室,湖北十堰442000
【正文语种】中 文
【中图分类】R372
新生隐球菌（Cryptococcus neoformans）是一种深部致病真菌，可在土壤、鸟粪、尤其是鸽粪中大量存在。人因吸入鸽粪污染的空气而感染，引起隐球菌病。荚膜多糖是其中的致病物质，实验教学中我们采用三种方法培养出带宽厚荚膜的新生隐球菌，分别介绍如下。
1.1 体内培养法 （1）将新生隐球菌菌种接种于高层斜面沙保弱琼脂培养基上，电热恒温培养箱37℃培养约48h可形成肉眼可见的菌落。（2）取菌苔用生理盐水稀释成悬液，取该悬液0.5mL腹腔或0.02mL脑内注入小鼠，5～30天动物可死亡。尸解做组织病理切片，各器官均可发现菌体，以脑和肺最多。（3）用棉签直接取腹腔液涂片，用火柴棒取墨汁与其混合均匀，加盖玻片，尽量避免产生气泡，轻压，使标本混合变薄，在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞，找到后转换高倍镜确认。
新生隐球菌稳定载体的构建
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新生隐球菌稳定载体的构建
潘炜华。．廖万清。．霍克克，李波 ．张佳忆：
（１第一节 大学长征医院皮肤科，上海２０００，３３ ２．复旦大学遗传所遗传工程国家芎 实验室
［关键词］新生臆球菌；质粒 ［中图分类号］Ｒ ３７９ ５ －３ｔ献标识码］Ｂ 文章编号］０２３８ ８７９Ｘ（２００２ Ｏ ０５７３＇３２
新生隐球菌是一种具有荚膜、能在免疫功能低下人群由
引起致命的系统性壤病的酵母真菌。要研究新生隐球蔺致病
的分子生物学机制，必须有 个相应的遗传学操作系统．而
稳定的转化载体皂其中的一个重要组成部分：藏载体陈 有
用“识别的选择性标记外。 必须有较高的转化效率．Ｊ 且
有自身的稳定性。我们曾用带有ｕＲＡ５基 的质粒ｐＣｎｔｅ【】
作为新生隐球菌转化系统中的载体，但谆质粒没有自主复制
序列（ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓｌｙ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ—ＡＲＳ） ，转化教
率厦稳定性较低，不利于筛选新基围殛对基因的功能进行研
究。因此，我们尝试构建了古有选择性标记、自丰复制序列及
着丝粒片段的质粒，使得质粒的车Ｉ化效率聂稳定性大人提
高
ｌ材料和方法
１．】 材料 菌株和质粒：Ｃ．＂州㈣删 ｃａ￣６０ ｕｒａ５突变株
由４＝实验室筛选 质粒ｐＣｘ儿８为复旦大学遗传工程鼋点实
验室酵母组掏建，大肠杆菌Ｅ． ＸＩ ｌ Ｂｌｕｅ，质粒ｐＢｌｕｅ
ｓｃｒｉｐ ｒ ＫＳ为复且人学遗传所保存，质粒ｐＣｎｔｅｌｌ由Ｃｈａｎｇ博
ｌ （ＮＩＨ，ＵＳＡ）惠赠．它音有完整的ＵＲＡ５蕈田．培养基与试
剂：酵母完全培养基ＹＥＰＤ【１ 酵母抽提物，２ 垡１ ｊ胨．２
葡萄糖），酵母选择性培养基ＳＤ（０ ６７ 酵母基车氟源，２
葡萄糖，１． 琼脂），ｏ Ｐ ｄＡＴＰ购自美国Ｄｕｐｏｎｔ公司。二
硫苏糖醇ｆ１） ’ｊ Ｇａｌ，ＩＰＴＧ赡白美国Ｆｅｉｎｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ公
司缓冲液ＳＣＥ：２０ ｍｍｏｌ／Ｉ 咛檬酸钠，１ ｍｏｌ 【＿山梨醇．３ １
文档隐球菌
尽管多数隐球菌感染具有一个自限性,亚急性或慢性过程,但艾滋病病
人感染隐球菌则可表现为严重的进行性肺炎,伴有急性呼吸困难,其肺
部X线征象类似肺孢子虫感染.弥散性皮肤受累可发生于任何被感染者,
引起脓疱丘疹样小结,或溃疡形成,有时像痤疮,传染性软疣或基底细胞
癌.播散病灶也可发生在皮下结节,长骨末端,关节,肝,脾,肾,前列腺及
其他组织.典型的受累组织含有胶胨状的酵母菌囊块,此乃由隐球菌囊
膜多糖堆积而成,但仅有轻微的或无急性炎症的变化,尤其是位于脑部
的病变。
隐球菌性脑炎的症状多为脑水肿引起,通常无特异性,包括头
痛,视觉模糊,精神错乱,抑郁,烦躁不安以及其他行为变化.除眼或面部
麻痹外,灶性体征在病程的较晚期时才出现.失明可由脑水肿或视觉传
导束直接受累引起.可有低热或不发热.艾滋病病人可有轻微症状或无
症状,脑脊液除有许多酵母菌外其他参数可完全正常.但脑脊液蛋白增
加和单核细胞淋巴细胞增多常见,也可见嗜中性白细胞显著增多.葡萄
糖常偏低,多数病例的脑脊液涂片印度墨染色可见成孢酵母菌形成的窄
基芽孢.90%以上的脑膜炎病人的脑脊液和/或血清中,可检测到隐球菌
被膜多糖抗原。
隐球菌病 Cryptococcosis 北京协和医院：《感染性疾病诊疗常规》隐
球菌病（Cryptococcosis）是由新型隐球菌引起的亚急性或慢性深部真
菌感染，全身多个部位都可发病，但主要累及中枢神经系统和肺。新型
隐球菌主要存在于土壤和鸽粪中中枢神经系统感染以隐球菌性脑膜炎
最为常见。临床起病缓慢，初期症状不明显，可有发热、间歇性头痛，
症状逐渐加重为持续性，伴有其他颅内高压症状，重者可出现脑炎的症
状及体征，病情逐渐恶化常因脑疝而死亡。即使在正规抗真菌治疗中，
隐球菌脑膜炎的病死率仍高达25％～30％，合并脑炎者死亡率更可高达
55％，存活者中的复发率为20%～25％，约一半病人留有后遗症，如视
神经、动眼神经损害、人格改变或大脑功能异常。陈为民：《人兽共患
艾滋病与深部真菌感染的现状及治疗
艾滋病与深部真菌感染的现状及治疗
真菌感染是艾滋病（AIDS）患者最常见的机会性感染，具有较高的发病率和死亡率，其中有些真菌感染已成为艾滋病的首发症状，为艾滋病早期诊断提供了重要线索。艾滋病患者伴发的真菌感染几乎包括了所有已发现的致病真菌及部分条件致病菌，本文就艾滋病合并的深部真菌感染作一综述。
1隐球菌病(Cryptococcosis)
6%～30%的AIDS患者可发生隐球菌病[1]，是AIDS患者机会性感染的第四个主要原因，第二个最常见的系统性真菌病，同时也是艾滋病的一个提示性疾病，是艾滋病患者死亡的首要病因。几乎所有的AIDS患者并发的隐球菌病都是新生隐球菌新生变种引起。艾滋病毒（HIV）感染者患隐球菌病常是由无症状期过渡到晚期的象征，并且特别易发生播散性损害。有资料表明，当CD4计数＜200个/μl，隐球菌感染风险极大，当CD4计数＜100个/μl时，隐球菌性脑膜炎发病明显增加。powdrly等[2]报道在欧美和奥洲，HIV感染者合并隐球菌脑膜炎的发病率约6%～10%，而在中部非洲地区则高达15%～30%。欧美发达地区发病率低的原因可能与该地区经济卫生状态良好，实行抗病毒治疗有关。
AIDS患者隐球菌病的皮肤受累发生率大约6%，皮损可出现在身体的任何部位，但以头部、颈部更多见，皮损表现常呈泛发性、多形性，54%的AIDS患者表现为特征性损害[3]，即2～5 mm的椭圆形、半透明丘疹，似传染性软疣。另外也可出现痤疮样、结节样、疱疹样皮损、蜂窝织炎样、水痘样或卡波氏肉瘤样皮损。AIDS皮肤隐球菌病同一皮损也可存在两种不同疾病[4]，如卡波西肉瘤和皮肤隐球菌病、传染性软疣和皮肤隐球菌病；也可存在两种不同的病原体[5，6]，如组织胞浆菌和新生隐球菌、利什曼原虫和新生隐球菌、巨细胞病毒和单纯疱疹病毒、卡氏肺囊虫和新生隐球菌。皮肤隐球菌病是播散性感染的一个指征，3%～7%的AIDS患者发生隐球菌病皮肤症状可以先于出现播散性隐球菌2～8个月[7]，成为艾滋病的首发症状。
秀丽隐杆线虫研究情况
秀丽隐杆线虫研究情况
秀丽隐杆线虫被应用于实验研究至今已逾30年，因为易于实验室培养、基因易处理、解剖学结构简单以及可以提供广泛的遗传学和基因组信息，已成为一种重要的研究细菌和真菌的哺乳动物替代模型。
与黑腹果蝇一样，秀丽隐杆线虫将天然免疫作为防御微生物感染的唯一防线。Mylonakis等研究发现，一些对哺乳动物起作用的新生隐球菌毒力因子在杀死秀丽隐杆线虫的过程中同样有效，这些基因包括信号转导途径GPA1、PKA1、PKR1、 RAS1和漆酶等；而那些对哺乳动物毒力较低的因子在秀丽隐杆线虫模型中致病性亦较弱。
还有作者通过秀丽隐杆线虫模型研究荚膜、黑色素、调节通路等毒力因子来鉴定毒力减低的新生隐球菌，结果发现rom2基因突变的隐球菌在37℃时失去繁殖及生长的能力，并无法生成细胞壁和难耐高渗。多数秀丽隐杆线虫是可以自身繁殖的雌雄同体动物，偶尔也可见到雄性单体。
实验结果证实野生雄性线虫较雌雄同体线虫对真菌的抵抗力增强，而且这种抵抗力的增强归因于应激反应激活因子DAF-16的参与，而不是由于行为或生殖方式的不同。