荷叶中黄酮提取及测定方法的研究进展_邓源喜
饲料研究FEED RESEARCH NO.5,2011
18综述荷叶中黄酮提取及测定方法的研究进展邓源喜 李 妍 许 晖 孙兰萍安徽蚌埠学院生物与食品工程系
收稿日期：2011 - 01 - 26基金项目：2010年度院级自然科学研究项目（2010ZR12）通信作者：邓源喜荷叶系睡莲科植物莲的叶片，除了含有糖类、蛋白质、脂类等营养成分外，还含有多种生物活性物质。因此，其在食品及药品方面均有较广泛的应用。荷叶黄酮类成分是荷叶中含有的一类重要的药理活性物质。许多研究表明：叶中的黄酮类成分具有抗氧化、抗自由基、调血脂、抑菌和抗病毒等多种生理活性功能。对荷叶中黄酮类物质的化学成分、提取、分离和纯化及测定方法的国内外研究，旨在为荷叶黄酮类物质的进一步研究提供参考。1 荷叶黄酮类物质的化学成分研究黄酮类物质指具有色酮环与苯环为基本结构的一类化合物的总称，是以C6-C3-C6结构为基本母核的天然产物，常以游离态或与糖结合成甙的形式存在，可分为黄酮类、黄酮醇类、异黄酮类和黄烷酮类等。广义的范围还包含查耳酮、嗅酮 、异黄烷酮及茶多酚。荷叶中黄酮类化合物主要是荷叶苷，其次是槲皮素、异槲皮素等，且槲皮素多以结合苷的形式存在。此外，关于双黄酮类的原花青素、黄烷酮类的无色花青素与无色翠雀花素等方面的研究也有所报道。田娜通过分离纯化荷叶的乙醇/水提取物，并通过光谱解析鉴定，得到了金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷和槲皮素4种黄酮类单体物质，其中紫云英苷是首次从荷叶中分离获得的。张赟彬等用高速逆流色谱（HSCCC）分离纯化荷叶提取物，结合薄层层析(TLC)和颜色反应，分析结果表明：分离得到的2种化合物均为黄酮醇类化合物，分别为槲皮素-3-丙酯和山奈酚。韦红对分离纯化后得到的荷叶黄酮制品，采用高效液相色谱（HPLC）分析其中组成，并对未知组分进一步分离纯化，通过紫外光谱(UV)、HPLC和核磁共振(NMR)等手段分析，结果显示出，荷叶中含有芦丁和棚皮素，其中芦丁为首次从荷叶中分离获得。吕静对经大孔树脂分离、重结晶和纯化得到的荷叶黄酮类成分进行结构分类鉴定和分析，最后分离得到异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷。王玲玲等将荷叶乙醇提取物经大孔树脂分离后，采用各种柱色谱法进行分离纯化,根据理化性质及光谱数据鉴定结构，结果分离鉴定了8个黄酮类化合物分别为，异鼠李素、山奈酚、槲皮素、槲皮素-3-O-β-D-吡喃木糖(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、紫云英苷、柯伊利素-7-O-β-D-葡萄糖苷、异槲皮苷和金丝桃苷；其中化合物异鼠李素、槲皮素-3-O-β-D-吡喃木糖(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷和柯伊利素-7-O-β-D-葡萄糖苷为首次从荷叶中分离得到。另外，古山春夫采用大孔吸附树脂、聚酰胺柱、Sephadex LH-20柱和有机溶剂法对荷叶提取液进行分离纯化，利用化学方法结合HPLC、UV、X-射线单晶衍射（MS）和NMR等波谱技术对化合物进行结构研究，从pH8提取液中分离出3种黄酮类化合物，分别为槲皮素3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷、异槲皮苷和槲皮素，其中槲皮素3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷为首次在荷叶中发现。 2 荷叶黄酮类物质的提取、分离纯化及测定方法研究2.1 荷叶黄酮类物质的提取黄酮类化合物一般易溶于碱水，酸化后又可沉淀析出。其原因：一是由于黄酮酚羟基的酸性；二DOI:10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2011.05.001饲料研究FEED RESEARCH NO.5,2011
19综述是由于黄酮母核在碱性条件下开环，形成2’-羟基查耳酮，极性增大而溶解。目前，荷叶黄酮类物质的提取方法主要有热水提取法、乙醇/水溶剂提取法、超声波法和微波协同萃取法。游离的黄酮类化合物一般难溶于水，易溶于甲醇、乙醇和乙醚等有机溶剂，而黄酮甙一般易溶于热水、甲醇、乙醇和吡啶等有机溶剂。荷叶中的黄酮类化合物即属于甙类，所以可采用热水提取。陈海光等研究了采用热水浸提荷叶黄酮类物质的工艺，通过正交试验确定其水提的最佳工艺条件：提取温度为80 ℃，提取时间为1.5 h，固液比1：30，黄酮提取得率为1.57 %。黄酮体的甙元不溶于水，只能溶于乙醇等有机溶剂。因此，采用水提法不能将荷叶中的黄酮甙元提取出来,而采用乙醇/水溶剂提取法可以提高其浸提率。钟先锋等研究了其最佳渗提条件：渗提固液比为1：25，乙醇质量浓度65 %，渗提温度为35 ℃，渗提时间为2.5 h。李强得出荷叶黄酮的最佳浸提条件：料液比1：30，浸提温度80 ℃，乙醇溶液质量浓度70 ％，浸提时间2 h。在最佳浸提条件下对荷叶浸提3次，荷叶黄酮含量达到36.19 mg/g。另外，江慎华等对乙酸乙酯、正己烷萃、正丁醇和水4种不同极性萃取组分的总黄酮含量分别进行了测定研究，结果显示，不同极性萃取组分总黄酮含量存在较大的差别，且乙酸乙酯萃取组分的含量最高，为（894.45±41.75）mg/g。蒋益虹通过正交试验并结合人工神经网络，优化了荷叶黄酮提取的工艺条件，提高了黄酮的浸提率，减少了生产成本，降低了能耗。其优化工艺为固液比1：30，乙醇质量浓度50 %，提取温度75 ℃，提取时间1 h。超声波提取是利用超声波的空化作用来加速植物有效成分的浸出，从而加快提取速度和提高提取率的。赵骏等研究利用超声法提取荷叶黄酮苷，结果表明：料液比1：25，超声处理40 min，黄酮苷收率为9.2 %。微波协同萃取技术是近几年发展较快且应用较多的一种新工艺。欧阳明采用微波协同萃取技术，即以乙醇水溶液结合微波照射浸提荷叶黄酮，结果显示，以60 %乙醇水溶液作提取剂，固液比1：30、微波照射1.5 min、浸提2.5 h，荷叶黄酮物质的浸出最多。赵骏等也研究了采用微波法协同萃取荷叶黄酮，研究表明：以微波功率80 W，乙醇体积比60 %，微波时间30 min，料液比1：25为工艺条件，黄酮苷的收率高达10.68 %。但是也有结果显示，在一定功率下，随着微波时间的延长，荷叶黄酮物质的萃取率会迅速上升，如时间过长也可能会造成黄酮类物质的分解。靳素荣等研究表明：以乙醇体积比50 %、微波2 min、微波功率420 W和料液比1：30，在此工艺条件下黄酮的提取率为4.08 %。徐曌分别采用溶剂热提取法、微波辅助法的提取法和超声法3种方法研究了荷叶黄酮类物质的最佳提取工艺，结果黄酮的提取率分别为4.74 %、4.08 %和4.85 %。可见，3种提取方法相比，超声法提取荷叶黄酮类物质的提取率较高。2.2 荷叶黄酮类物质的分离纯化荷叶中的槲皮素多以结合苷的形式存在，所以测定水解后的槲皮素含量可作为荷叶中黄酮类成分的质量评价指标。近年来，荷叶黄酮类物质的分离纯化主要采用TLC法、大孔吸附树脂法和高速逆流色谱法。邬晓鸥等研究采用TLC法鉴别荷叶中的黄酮苷元，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(5：4：1)展开，5 %的三氯化铝乙醇溶液显色，放置紫外光灯(365 nm)下检视，结果发现，荷叶中叶绿素含量较高，在紫外光下显数个较强红色荧光斑点，对黄酮苷元的检出影响较大，后来采用氯仿-石油醚混合溶液脱色后，可消除其影响。张蕾研究了采用大孔树脂富集法分离荷叶黄酮类物质，结果表明：AB-8型大孔吸附树脂对荷叶黄酮有较好的吸附分离性能，经过AB-8型大孔吸附树脂的精制，荷叶黄酮的含量达到59.31 %。韦红通过静态吸附—解吸试验，研究了从HZ-801、HZ-802、HZ-803和HZ-806 这4种树脂中筛选出HZ-806大孔吸附树脂对荷叶黄酮进行纯化处理，结果显示，产品纯度由28.97 %提高到了89.04 %。欧阳明通过试验也证实：以pH 9，荷叶黄酮质量浓饲料研究FEED RESEARCH NO.5,2011
20综述度≤25 g/L的提取液，在4.7 BV/h流速下过DA201树脂柱，再用4.5 BV/h流速的丙酮洗脱处理，荷叶黄酮类物质可以被较好的分离纯化。单斌将荷叶黄酮提取物经离心、过滤、减压蒸馏和调pH等反复处理后经AB-8大孔树脂柱进行富集和洗脱，最后得到2种黄酮混合物：50 %乙醇洗脱部分，占总黄酮量约6 %，纯度约为40 %；70 %乙醇洗脱部分占总黄酮量约90 %，经真空干燥后得棕黄色粉末，纯度为84.43 %。李彩侠等分别采用3种方法对荷叶提取物进行分离纯化，并结合TLC和颜色反应对各分离组分跟随鉴定，研究结果显示：HSCCC分离效果最好，SephadexLH.Zo柱层析分离效果次之，硅胶柱层析分离效果最差;荷叶提取物经高速逆流色谱分离纯化，可以得到2种黄酮醇类单体。2.3 荷叶黄酮类物质的测定方法目前，国内外对荷叶总黄酮含量的分析测定方法无公开普遍的质量控制标准，一般采用分光光度法（比色法）和HPLC法。分光光度法是对3,5位羟基含量较多的黄酮类成分的测定，采用在亚硝酸盐存在时, A1(NO3)3在碱性条件下与黄酮形成络合物,在一定波长下有最大吸收峰的特点, 以芦丁为标准溶液进行紫外分光光度法的比色分析测定的。因黄酮结构在碱性溶液中稳定性差，且操作繁琐，樊淑彦等研究了利用黄酮类成分与KAc-AlCl3体系反应形成络合物分的特点，通过在紫外波长414.2 nm处进行比色法分析，结果显示：荷叶总黄酮的含量为5.08 %，平均回收率为101.2 %，RSD=2.41 %(n=5)。该方法对组成相对稳定的体系而言，作为简便和快捷的量性分析手段是可行的，但是在杂质较多的情况下，荷叶中的杂质与黄酮类成分的结合物增加了测定的吸光度,使化学吸光法测得的荷叶黄酮浸提物含量偏高。HPLC法是通过荷叶浸提液的HPLC图显示而测定的。因黄酮类成分结构多样,很难逐一分析,故采用酸水解法先将黄酮苷水解为黄酮苷元后,用HPLC法测定其苷元含量,以槲皮素为标样折换成具体含量。古山春夫研究采用HPLC测定各化合物在提取液中的含量，pH8提取液中的槲皮素3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷、异槲皮苷和槲皮素的含量分别为158.39、131.68和93.69 μg/mL(提取液)。邬晓鸥等以甲醇-0.4 %磷酸溶液(48：52)为流动相，流速1 mL/min，检测波长为360 nm，并以槲皮素绘制标准曲线，在0.025 6～0.512 μg范围内呈良好线性关系。在此条件下测定5批荷叶黄酮的含量，分别为0.609 %、0.528 %、0.612 %、0.654 %和0.535 %。周兰香等以甲醇-0.4%磷酸(1：1)的流动相、检测波长360 nm、流速1 mL/min、进样量20 μL和室温为HPLC的色谱条件，吸取一定量酸水解的浓缩浸提液与槲皮素对照品溶液各20 μL进样，测定荷叶黄酮的含量为1.183 %，平均回收率为98.12 %，RSD=1.12 %(n=5)；后来经过将其与分光光度法的结果进行比较，结果分光光度法测的总黄酮含量4.43 %，比HPLC的分析数据明显要高，分析原因可能与分光光度法有杂质干扰及HPLC法是单组分分析对照，不能全面反应总黄酮含量有关。由此可见，采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH体系与黄酮形成络合物的化学吸光分析法, 简便快捷,线性关系好,条件一致时,可比性强,结合HPLC分析数据进行修正可作为定量分析的参考依据,这为探索最佳提取工艺和中间指标的控制提供了较为有效的评价方法。3 结语我国荷叶资源十分丰富，从荷叶中提取的黄酮类物质安全，无毒无害。目前，黄酮类化合物是国内外植物化学在食品及医药保健领域研究的一大热点。随着人们对荷叶黄酮类物质研究的不断深入，荷叶黄酮的提取、分离纯化及测定技术的工艺条件将更加成熟，荷叶黄酮类物质的综合应用也将更加广泛。通信地址： 安徽省蚌埠市曹山路1866号蚌埠学院生物与食品工程系 233000
黄酮提取方法
黄酮提取方法
黄酮是一种具有多种生物活性的天然化合物,常用于抗氧化、抗炎、抗菌、心血管治疗等领域。以下是常用的黄酮提取方法:
1. 溶剂萃取法:该方法是将黄酮原料通过溶剂将黄酮化合物溶解出来,从而达到提取黄酮的目的。常用的溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿等。
2. 结晶法:该方法是通过加热将黄酮原料转化为黄酮晶体,然后再将其过滤、结晶、洗涤等方法提取出来。常用的结晶方法有溶剂热法、超声波法、氯仿热法等。
3. 超声波法:该方法是利用超声波的能量将黄酮原料中的水分蒸发,从而将黄酮提取出来。
4. 微流控技术法:该方法是利用微流控技术控制温度、压力等参数,将黄酮从原料中直接提取出来。
5. 真空萃取法:该方法是通过真空泵将黄酮化合物从原料中抽出,从而达到提取黄酮的目的。
以上是常用的黄酮提取方法,不同的提取方法适用于不同的原料和提取需求,可以根据具体情况选择合适的方法。
响应面法优化荷叶黄酮提取工艺及其抗氧化研究
第８期（总第３２５期） ２０１３年８月 农产品加工（学刊） Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｅｒｉｏｄｉｃａｌ ｏｆ Ｆａｒｍ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｎｏ．８ Ａｕｇ．
文章编号：１６７１—９６４６（２０１３）０８ａ一００３４—０４
响应面法优化荷叶黄酮提取工艺及其抗氧化研究
张书弦 ，杜海珍 ，陈旭斌。， 李远志 ，洪雁 ，张 晓
（１．华南农业大学食品学院，广东广州５１０６４２；
２．广州市清香农产有限公司，广东广州５１０９２５；３．汕头市茂发食品有限公司，广东汕头５１５０２１）
摘要：为提高荷叶利用价值，采用响应面分析法优化荷叶黄酮提取的工艺条件，并以ＤＰＰＨ法和羟基自由基法对其 黄酮提取物的抗氧化性进行研究。结果表明，以干燥的荷叶为样品，体积分数６０％的乙醇溶液为提取剂，料液比为 １：８５，８０℃水浴回流提取为提取条件，得到黄酮提取量最高为４．０１ ｍｇ／ｇ。荷叶黄酮的抗氧化能力较强，且对ＤＰＰＨ 自由基的清除率大于对羟基自由基的清除率。 关键词：荷叶；黄酮；提取；抗氧化 中图分类号：ＴＱ９１４ 文献标志码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊｉｓｓｎ．１６７１—９６４６（Ｘ）．２０１３．０８．０１２
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｆｒｏｍ Ｌｏｔｕｓ Ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ａｃｔｉｖｉｔｙ
ＺＨＡＮＧ Ｓｈｕ－ｍａｎ ，ＤＵ Ｈａｉ—ｚｈｅｎ２，ＣＨＥＮ Ｘｕ—ｂｉｎ３，＂ＬＩ Ｙｕａｎ－ｚｈｉ ，ＨＯＮＧ Ｙａｎ１，ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｏ１
（１．Ｆｏｏｄ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１０６４２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｑｉｎｇｘｉａｎｇ Ａ鲥一ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１０９２５，Ｃｈｉｎａ；３．Ｓｈａｎｔｏｕ Ｍａｏｈｕａｔ Ｆｏｏｄｓｔｕｆｆｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｓｈａｎｔｏｕ， Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１５０２１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ａｄｄｅｄ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｌｏｔｕｓ ｌｅａｖｅｓ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｆｒｏｍ ｌｏｔｕｓ ｌｅａｖｅｓ ｉｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｂｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ．Ａｌｏｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｉｓ，ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｉｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ＤＰＰＨ‘ａｎｄ ｔｈｅ’ＯＨ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｓｓａｙｓ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ａｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｈｅ ｄｒｙ ｌｏｔｕｓ ｌｅａｆ ａｓ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ， ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ６０％ｅｔｈａｎｏｌ；ｍａｔｅｒｉａｌ／ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ １：８５；ｒｅｆｕｘ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ８０℃．Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｆｒｏｍ ｌｏｔｕｓ ｌｅａｖｅｓ ｉｓ ４．Ｏ１ ｍｇ／ｇ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅｓｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ｌｏｔｕｓ ｌｅａｖｅｓ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｓｔｒｏｎｇ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｉｔ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ＤＰＰＨ‘ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ ｔｈａｎ ｔｈｅ。ＯＨ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｌｏｔｕｓ ｌｅａｖｅｓ；ｆａｖｏｎｅｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ
荷叶黄酮最新提取优化工艺研究比较及最新应用领域分析
２０１ １年第ｌ０期
（总第２６０期） 吉林农业
ＪＩＬｌＮ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＥ ＮＯ．１０。２０ｌ１
（ＣｕｍｕｌａｔｉｖｅｔｙＮＯ．２６０）
荷叶黄酮最新提取优化工艺研究比较
及最新应用领域分析
陈仙菊，唐 维，赵杨杨，马成有
（吉林大学农学部，吉林长春１３００００）
摘要：近年来对荷叶黄酮的研究表明，荷叶黄酮的抗氧化、降血脂、抑茵等多种特性在食用和药用方面将会有很大的发展潜 力。本文就对近两年来荷叶黄酮提取的最新优４Ｌ．ｒ－艺以及其最新应用前景进行综述，能给荷叶黄酮研究者以参考。 关键词：荷叶黄酮；优化工艺；特性；应用 中图分类号：ｓ一３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４－０４３２（２０１１）一１０—０２０８—２
基金项目：国家级大学生创新实验项目及吉林省自然科学基金项目（２０１１１５０４１）
荷叶原产于中国和印度，目前全世界皆有分布。在中国主要
分布在长江、黄河和珠江等三大流域。荷叶为睡莲科多年生水生
草本植物的叶片。１９９１年卫生部的卫监发第４５号文件，荷叶被列
入第二批“既是食品，又是药品”的名单。
１荷叶黄酮成分分析
黄酮类化合物是荷叶的主体活性成分，甙类为主要存在形
式，主要包括异槲皮甙、莲甙、山奈酚、槲皮素等。黄酮类化合
物一般易溶于热水，也溶于甲醇、乙醇、乙酸乙脂等极性溶剂，
而难溶于氯仿等非极性有机溶剂。
黄酮类化合物泛指两个苯环通过中央三碳链相连而成的一系
列化合物，即具有ｃ６—ｃ３—ｃ６结构。
２荷叶黄酮最新提取工艺优化研究比较
２．１正交组合设计优化荷叶总黄酮的提取工艺
康璇等以安徽合肥地区产的风干荷叶为材料，用乙醇热提法
提取荷叶黄酮。以影响提取率的固液比、提取时间、提取温度和
乙醇体积分数等因素，通过正交试验筛选提取荷叶总黄酮的最佳工
艺条件，并通过单因素试验对提取条件的重现性与稳定性进行验
证。单因素试验表明，重现性与稳定性试验与正交试验所得的结果
基本符合。表明该方法可以优化荷叶总黄酮的提取工艺条件。邓
荷叶总黄酮提取工艺及其抗氧化性研究
收稿日期：2020-12-28作者简介:范业刚（1977-），男，毕业于苏州大学，硕士，讲师，fygleaf@；通讯联系人：曹利慧（1980-），女，毕业于苏州大学，硕士，副教授，从事分析化学工作，caolihui2009@。荷叶总黄酮提取工艺及其抗氧化性研究
范业刚，曹利慧
（衡水学院化学化工学院，河北衡水053000）
摘要：以河北衡水湖的风干荷叶为材料,进行单因素实验，然后使用正交实验来确定荷叶黄酮的提取条件。最佳的提取条件为：超声时长45min，温度45℃，料液比1∶12（g/mL），乙醇浓度75%。抗氧化性实验表明：荷叶总黄酮具有一定的还原能力，且对自由基的清除能力与浓度成正比。关键词：荷叶；总黄酮；超声波辅助提取；抗氧化性doi：10.3969/j.issn.1008-553X.2021.02.014
中图分类号：R285文献标识码：A文章编号：1008-553X（2021）02-0055-04
荷叶属睡莲科植物莲的叶片，是国家卫生部公布的
既是食品又是药品的植物[1]。荷叶中富含多种具有生物
活性的成分，如荷叶精油、荷叶生物碱、荷叶多糖及荷叶
黄酮等，其中荷叶黄酮是其主要活性物质[2]。报道显示，
黄酮类化合物对治疗血管病有很好的效果，具有抗氧
化、稳固血管、疏通血管、防止高龄人的血压疾病等功
效[3]，对身体代谢和人体免疫也有重要作用[4]。所以，针
对影响荷叶总黄酮提取的因素进行研究，选择优良的提
取工艺，提高荷叶总黄酮的提取率，研究其总黄酮抗氧
化性，对人体健康保护具有重要意义。1实验部分
1.1试剂与仪器
荷叶样品，河北衡水湖；无水乙醇、氢氧化钠、硝酸
铝、亚硝酸钠、硫酸亚铁、H2O2、水杨酸，均为分析纯；芦
丁对照品，含量98.7%，化学标准品，上海金穗生物科技
有限公司。722型可见分光光度计，上海仪电分析仪器有限公
司；FA2004B型电子天平，上海衡平仪器仪表厂；FW100
型高速万能粉碎机，天津市泰斯特仪器有限公司；80-2
吴文龙-有机溶剂提取法提取荷叶黄酮单因素实验 (1)
1、黄酮类化合物理化性质
黄酮类化合物的溶解性因其结构不同而有很大差别，据此可进行提取精制。荷叶中的黄酮类化合物主要有荷叶苷、槲皮素等，主要以苷类的形式存在。黄酮类化合物的苷类一般难溶于乙醚、氯仿和苯等非极性溶剂，而易溶于甲醇，乙醇、乙酸乙酯、水（热水）等极性溶剂。所以对于荷叶中黄酮类化合物的提取采用极性溶剂提取。
2、单因素实验
2.1料液比对有机溶剂提取法提取荷叶黄酮的影响
实验步骤：
①取3g干荷叶,浸没于一定料液比的60％乙醇一水溶液
②水浴加热，水浴温度75℃，浸渍40min
③真空抽滤。用50ml石油醚处理浸提液，回收石油醚,取下层液
④高速旋转离心器进行离心，用旋转蒸发器减压浓缩，100mL容量瓶定容
⑤测定溶液吸光度
测定结果
料液比 1:15 1:20 1:25 1:30 1:35
吸光度（Abs） 1.259 1.627 1.728 1.948
1.995
料液比与吸光度之间的关系1.2591.6271.7281.9481.99500.511.522.51:151:201:251:301:35吸光度（Abs）
实验结论：随着料液比逐渐增大，提取率逐渐增大。增大到一定程度时，逐渐趋于缓慢，为保节能，高效，最佳工艺条件为1:30。
2.2乙醇浓度对有机溶剂提取法提取荷叶黄酮的影响
实验步骤：
①取3g干荷叶,浸没于90ml一定浓度的乙醇一水溶液（1:30）
②水浴加热，水浴温度75℃，浸渍40min
③真空抽滤。用50ml石油醚处理浸提液，回收石油醚,取下层液
④高速旋转离心器进行离心，用旋转蒸发器减压浓缩，100mL容量瓶定容 ⑤测定溶液吸光度
测定结果
C（乙醇）/% 40 50 60 70 80
吸光度（Abs） 1.434 1.605 1.765 1.780
1.368
乙醇浓度与吸光度之间的关系1.4341.6051.7651.781.36800.20.40.60.811.21.41.61.824050607080系列1
荷叶黄酮及生物碱的提取研究
※工艺技术 一日■字 ２００２．ＶｏＪ．２３． ．ｊ ６９
荷叶黄酮及生物碱的提取研究
陈海光仲恺农业技术学院食品科学系广州 ５１０２２５
余以刚 曾庆孝华南理工大学食品与生物工程学院广州 ５１０６４１
摘要研究了荷叶中的功能成分黄酮类化舍物和生物碱的水提取工艺条件。研究结果表明：以永为溶剂来提取荷叶 中的黄酮类化合物及生物碱时，较佳的工艺条件为：以３０倍的承，于８０～９０ｏｃ提取１．５ｈ．提取液呈酸性。 关键词荷叶黄酮类化台物生物碱提取 Ａｂｓｔｌａｃｔ Ｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｓｔｕｄｉｅｄｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｎｆｌａｖｏｎｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓａｎｄ ａｌｋａｌｏｉｄｓｆｒｏｍｌｏｔｕｓｌｅａｆ．ＴｈｅｒｅｓｕＩｔｓ
ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｗｈｉｌｅｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｗａｔｅｒｗａｓｔｈｉｒｔｙｔｉｍｅｓ ａｓｍｕｃｈ．ａｔ８０℃ｆｏｒ１．５ｈｒ，ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｒａｔｅＷａＳｏｂ－
ｔａｔｉｎｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｌｏｔｕｓ ｌｅａｆ Ｆｌａｖｏｎｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ Ａｌｋａｌｏｉｄｓ Ｅｘｔｒａｃｔ
荷叶为睡莲科植物莲（Ｎｅｌｕｍｂｌ ｔｅａＧａｅｒｔｎ）的 叶片。在１９９１年１ １月中华人民共和国卫生部的卫监
发（１９９１）第４５号文件中，荷叶被列人第二批“既是食 品又是药品”的名单之中ｎ。 荷叶在食用及药用两方面
均有较广泛的应用 荷叶除了含有普通植物所共有的
碳水化合物、脂质、蛋白质、单宁等常规化学成分外， 还含有多种生物碱和黄酮类化合物。在荷叶的众多化
学成分中具有明显生物活性和生理功能的是黄酮化 合物和生物碱这两大类物质。杜力军等 以急性高脂
血症小鼠为整体模型观察荷叶水提物对血清胆固醇 及甘油三酯的影响，结果表明荷叶水提物有明显的调
脂作用，其活性部位主要是荷叶黄酮，其次是荷叶生
物碱。许腊英等Ｉ 以荷叶提取物中的生物碱为指标，通 过对小鼠的喂养试验，证明其具有降脂作用。荷叶的
超声波协同法提取荷叶中总黄酮的研究
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超声波协同法提取荷叶中总黄酮的研究
作者：李海梅 胡佳佳
来源：《中国科技博览》2014年第03期
摘要：采用超声波协同提取法对荷叶总黄酮进行提取，通过单因素试验确定最佳的荷叶总黄酮提取工艺：提取时间20min，料液比1：30，乙醇浓度60%，温度50℃，验证试验证明实际提取率为4.85%。
关键词： 超声波法；荷叶总黄酮；协同提取
中图分类号：P631.5
荷叶为睡莲科莲属植物莲的叶。荷叶中的黄酮类化合物主要是荷叶苷，其次是槲皮素、异槲皮素等常见的黄酮类物质。本课题以荷叶为研究对象，利用超声波协同法提取总黄酮，从而增加荷叶的附加值，将为荷叶在食品、药品中的应用提供科学依据。
1材料与方法
1.1试验材料
原料：荷叶（湖北武汉）：新鲜、无污染荷叶，采摘后洗净，用烘箱60℃烘干。主要试剂：芦丁（生化试剂，国药集团化学试剂有限公司）、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、盐酸、锌粉等均为分析纯。
1.2黄酮测定方法
用NaN02-Al（N03）3-NaOH体系络合化学吸光法测定黄酮。得到回归曲线方程：y=0.5095x+0.0019，R2=0.9997。式中：y，提取液吸光度；x，提取液黄酮类物质浓度，mg/ml。
1.3荷叶总黄酮单因素试验与分析
称取一定量的荷叶，在不同反应条件下，即处理时间、料液比、乙醇浓度、提取温度，测定总黄酮的提取率，从而比较选取最佳反应条件。
1.4荷叶总黄酮响应面分析
2结果与分析
2.1不同超声波处理时间对荷叶总黄酮提取率的影响 龙源期刊网
称取荷叶0.2g，在料液比为1：30、乙醇浓度为60%、温度为50℃的条件下，分别对不同超声波处理时间的荷叶测定总黄酮的提取率。从图1看出，在处理时间为20min条件下，荷叶总黄酮的提取率最高。
醇法提取荷叶中总黄酮的工艺研究
醇法提取荷叶中总黄酮的工艺研究
采用乙醇提取法对荷叶总黄酮进行提取，通过单因素试验分析，确定最佳的荷叶总黄酮提取工艺。荷叶黄酮醇法提取的最佳工艺是：料液比1：25，提取时间1h，提取温度80℃，乙醇浓度60%，验证试验证明实际提取率为3.82%。
标签：总黄酮；荷叶；乙醇提取法
荷叶为睡莲科植物莲的叶。荷叶中所含的黄酮类化合物，其主要成分是荷叶苷，其次是槲皮素、异槲皮素等常见的黄酮类物质。实验研究表明，黄酮类物质具有很高的生物活性，如抗氧化作用、抑菌作用、降血脂、减肥作用等[1]。本课题以荷叶为研究对象，利用乙醇提取法提取总黄酮，从而增加荷叶的附加值，将为荷叶在食品、药品中的应用提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 实验设备
电热恒温水浴锅、722型分光光度计、鼓风干燥箱、电子天平、粉碎机、旋转蒸发器等。
1.2 试验材料
原料：荷叶（湖北武汉）：新鲜、无污染荷叶，采摘后洗净，用烘箱60℃烘干。主要试剂：芦丁（生化试剂，国药集团化学试剂有限公司）；无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等均为分析纯。
1.3 黄酮测定方法[2]
用NaN02-Al（N03）3-NaOH体系络合化学吸光法测定黄酮。用NaN02-Al（N03）3-NaOH体系络合化学吸光法测定黄酮。准确称取芦丁标准品0.625mg，用体积分数30%乙醇定容于100mL容量瓶中，得质量浓度为0.625mg/mL的标准储备液。分别吸取芦丁标准储备液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL分别置于0、1、2、3、4、5、6号共7支10mL具塞试管中，用体积分数30%乙醇补充至5mL，分别加入0.3mL质量分数10%硝酸铝溶液，混匀，用体积分数30%乙醇标定至刻度线，放置10min后于510nm处，以0号试剂作为空白参比，测定其吸光度值。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，见图1所示。
得到回归曲线方程：y=0.5011x+0.0022，R2=0.9997。
荷叶中总黄酮提取工艺的研究
第１ｌ期（总第３３５期） ２０１３年１１月 农产品加工（学刊） Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｅｒｉｏｄｉｃａｌ ｏｆ Ｆａｒｍ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｎｏ．１１ ＮＯＶ
文章编号：１６７１—９６４６（２０１３）１ ｌｂ一００２９—０３
荷叶中总黄酮提取工艺的研究
周松文１，２， 方江平 ，吴凤翔
（１．西藏大学农牧学院，西藏林芝８６００００；２．广西科技大学生化学院，广西柳州５４５００６）
摘要：采用溶剂法提取荷叶中总黄酮，通过单因素试验研究乙醇浓度、提取时间、提取温度和料液比对总黄酮得率 的影响，利用正交试验确定提取总黄酮的最佳条件为乙醇体积分数６０％，提取时间１ ｈ，提取温度７０℃，料液比 １：６０。该研究可为总黄酮类物质的提取工艺提供一定的理论依据和技术参数，也可应用于工业化生产中。 关键词：总黄酮；乙醇；提取工艺；广西荷叶 中图分类号：ＴＳ２０２．３ 文献标志码：Ａ ｃｌｏｉ：１０．３９６９／ｊｉｓｓｎ．１６７１—９６４６（Ｘ）．２０１３．１１．０３９
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ ｎａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｌｏｔｕｓ Ｌｅａｆ
ＺＨＯＵ Ｓｏｎｇ－ｗｅｎ ，＊ＦＡＮＧ Ｊｉａｎｇ－ｐｉｎｇ ，ｗ１Ｊ Ｆｅｎｇ—】【ｉ蚰 （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ，Ｔｉｂｅｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎｙｉｎｇｃｈｉ，Ｔｉｂｅｔ ８６００００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｆｉｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｉｕｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｘｉ ５４５００６，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ １ｏｔｕｓ ｌｅａｒ，ｂｙ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｏｆ ｅｔｈａｎｏ１ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ．ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｓｏｌｉｄ—ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ ｏｎ ｔ｝ｌｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ．Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ：ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ６０％，ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ １ ｈ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ７０℃ａｎｄ ｔｈｅ ｓｏｌｉｄ—ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ １：６０．Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ａ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｉｃａｌ ｐ￣ａｍｅｔｅｒｓ，ｔｏ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｔｏｔａｌ ｆｌａｖａｎｏｉｄｓ；ｅｔｈａｎｏｌ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｌｏｔｕｓ ｌｅａｆ ｉｎ Ｇｕａｎｇｘｉ
荷叶黄酮体外抗氧化活性的研究
Ｎｏ．７．２００６荷叶黄酮体外抗氧化活性的研究
邓胜国，邓泽元＊，黄丽
（南昌大学食品科学教育部重点实验室，南昌３３００４７）
摘要：以ＡＢ－８树脂分离纯化荷叶中的黄酮类化合物，分别采用ＤＰＰＨ法、硫氰酸铁（ＦＴＣ）法及硫代巴比
妥酸（ＴＢＡ）法测定和评价荷叶黄酮的抗氧化效果。实验结果表明：荷叶黄酮具有良好的清除ＤＰＰＨ自由
基的能力，能有效抑制亚油酸的氧化。浓度为０．３０ｍｇ／ｍＬ荷叶黄酮溶液的抗氧化性能可和０．０１％的ＢＨＴ
相媲美。
关键词：荷叶；总黄酮；自由基；抗氧化性
中图分类号：ＴＳ２１８文献标识码：Ａ文章编号：１００５－９９８９（２００６）０７－０２７４－０３
Ｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍ
ｌｏｔｕｓｌｅａｖｅｓｉｎｖｉｔｒｏ
ＤＥＮＧＳｈｅｎｇ－ｇｕｏ，ＤＥＮＧＺｅ－ｙｕａｎ＊，ＨＵＡＮＧＬｉ
（ＴｈｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎｉｎＮａｎｃｈａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｎａｎｃｈａｎｇ３３００４７）
收稿日期：２００５－１２－２３＊通讯作者基金项目：江西省教育厅２００３年重点项目；江西省自然科学基金项目。作者简介：邓胜国（１９７０－），男，博士研究生，研究方向为功能与保健食品。
ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎａｎｄｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ．ＪＡｐｐｌ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９８，８９：８１５－８２４
［１２］ＫｏｒｐｅｌａＲ，ＭｏｉｌａｎｅｎＥ，ＳａｘｅｌｉｎＭ．Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍ－
ｎｏｓｕｓＧＧ（ＡＴＣＣ５３１０３）ａｎｄｐｌａｔｅｌｅｔａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎｉｎｖｉｔ－
ｒｏ．ＩｎｔＪＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９７，３７：８３－８６
［１３］ＬｅｅＤＪ，ＤｒｏｎｇｏｗｓｋｉＲＡ，ＣｏｒａｎＡＧ，ｅｔａｌ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆ