蛋白酶抑制分类和应用

蛋白酶抑制剂分类和应用 在分离蛋白时，组织或细胞裂解液中充满了来自溶酶体的酶,并且原来无活性的蛋白酶原被充分激火,开始消化其周围的蛋白质. 为避免此因素，蛋白酶抑制剂必须被加入在缓冲液内以阻止蛋白酶对细胞组织的消化作用. 来自哺乳类动物，植物, 霉菌或细菌的组织，蛋白酶成分是不同的, 并根据机体状态的发展蛋白酶也可以发生变化. 哺乳类动物组织分离时比细菌或其它组织分离时更需要应用蛋白酶抑制剂使组织细胞受到完全的保护.

因此，在各种蛋白分离时， 在各种蛋白电泳时蛋白酶抑制剂的适当选用就成了很重要的因素。

蛋白酶功能 : 涉及到许多细胞内和细胞外的过程:

o 食物蛋白在消化道的消化 o 激活无活性酶原和多肽激素/神经转移介质的释放 o 调节血凝物质和纤维素 o 内源性和外源性蛋白的细胞内消化 o 跨膜的蛋白转移 o 微生物对生物体攻击,通过释放蛋白酶的导致毒性增加

蛋白酶分类 : 根据催化中心结构的不同蛋白酶可分为4类 :

1. 丝氨酸蛋白酶在其活性中心含有丝氨酸和组氨酸，如: 糜蛋白酶, 弹性蛋白酶，血纤维蛋白溶酶，凝血酶，枯草杆菌蛋白酶，胰酶Chymotrypsin, Elastase, Plasmin, Subtilisin, Thrombin, Trypsin

2. 半胱氨酸蛋白酶（别名 :硫醇或SH 蛋白酶）在其催化中心含有半胱氨酸，如 : Calpain, 组织蛋白酶 B,C 和L，和木瓜蛋白酶

3 天(门)冬氨酸蛋白酶 （羧基蛋白酶）在其活化中心含有天(门)冬氨酸， 如 : 组织蛋白酶D, 木瓜蛋白酶, 肾素

4. 金属蛋白酶含有金属离子， 即 : 锌2+在其催化中心，如氨基肽酶，羧基蛋白酶A 和 B，嗜热菌蛋白酶 机体防止蛋白酶破坏作用几种可能性 :

• 酶在特殊囊性小泡的分配 (溶酶体，包涵体)

• 内源性蛋白酶抑制剂（如 : Aprotinin， 抗凝血酶，抗胰酶） SERVA 6种蛋白酶抑制剂鸡尾酒的作用 :

➢ SERVA提供6种不同的蛋白酶抑制剂鸡尾酒，用于分离纯化各种组织的蛋白，多肽的最佳选择 ➢ 蛋白酶抑制剂混合物G含有5种水溶性的抑制剂用于抗丝氨酸- , 半胱氨酸- 和金属蛋白酶作用，并且是常用选择的鸡尾酒，应当避免同时使用有机体溶剂 ➢ 蛋白酶抑制剂混合物H P含有4种水溶性抑制剂用于抗丝氨酸- , 半胱氨酸蛋白酶作用，并且有效地

用于分离和提取重组蛋白，岳阳家政 避免金属螯合物。 ➢ 蛋白酶抑制剂混合物M含有6种不同的抑制剂用于抗丝氨酸- , 半胱氨酸和天(门)冬氨酸酶以及金属蛋白酶作用，并用于哺乳动物组织的蛋白分离。 ➢ 蛋白酶抑制剂混合物P含有6种不同的抑制剂用于抗丝氨酸- , 半胱氨酸和天(门)冬氨酸酶以及金属蛋白酶作用。此被推荐用于从植物来源的蛋白分离 ➢ 蛋白酶抑制剂混合物FY含有4种不同的抑制剂用于抗丝氨酸- , 半胱氨酸, 天(门)冬氨酸蛋和金属蛋白酶作用。用于从酵母和其它真菌来源的蛋白制备。 ➢ 蛋白酶抑制剂混合物B含有5种不同的抑制剂用于抗丝氨酸- , 半胱氨酸, 天(门)冬氨酸和金属蛋白酶作用。尤其应用于在细菌提取蛋白。

产品包装 : 所有混合物为冻干粉剂. 溶解在1 ml 水或DMSO 浓度100x , 足够用于100 ml 组织提取物

每种抑制剂混合物的成分列表如下 :

注 : ➢ AEBSF (PEFABLOC SC)和Aprotinin 是丝氨酸蛋白酶的抑制剂 ➢ 苯丁抑制素 (Bestatin)是氨基肽酶的抑制剂 ➢ E-64是半胱氨酸蛋白酶的抑制剂 ➢ Leupeptin 是丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶的抑制剂

➢ Pepstatin A毛孔大怎么办 是天门冬氨酸蛋白酶的抑制剂 ➢ EDTA 和 1,10-Phenanthroline 是 金属蛋白酶抑制剂

蛋白酶抑制剂表. 以下表显示了竞争者产品与SERVA蛋白酶抑制剂在应用或成分的比较

蛋白酶抑制剂特征 :

成份 混合G 39101 混合 M 39102 混合P 39103 混合 FY 39104 混合B 39105 混合HP

39106

AEBSF + + + + + + Aprotinin + + - - - + Bestatin - + + - + - E-64 + + + + + + Leupeptin + + + - - + Pepstatin A - + + + + - 1,10-Phenanthroline - - + + - -

EDTA-Na2-salt + - - - + -

SERVA 混合 G 39101 混合M 39102 混合P 39103 混合FY 39104 混合B 39105 混合HP

39106

S公司 P 2714 P 8340 P 9599 P 8215 P 8465 P 8849

R公司 Complete - - - - Complete EDTA-free

C公司 539131 539134 - 539136 539132 539137 ➢ SERVA 提供了全面的高纯度的用于4组蛋白酶 (丝氨酸- , 半胱氨酸和天(门) 冬氨酸蛋白 酶和金属蛋白酶) 抑制剂的产品线 ➢ 以下 应用表显示适用于不同领域抑制剂特征使用 ➢ 产品线怎么减肚子正在伸展 ➢ 蛋白酶抑制剂的生产在制备中 ➢ 100多篇文献可查阅

蛋白酶抑制剂应用范畴 :

➢ 细胞调节过程的研究 (如老年痴呆症/肿瘤研究) ➢ 抗体, 酶在诊断系统蛋白降解的抑制 (如 : 诊断试剂盒) ➢ 为了避免在细胞裂解时蛋白酶释放的破坏作用 (如 : 在制备性生化方面) ➢ 抑制由蛋白酶引起的组织裂解 (如 : 细胞培养)

应用表 : 此表总结了在生化和细胞生物学常见蛋白酶抑制剂的应用 (近40种). 该表概括了 作用机制, 靶蛋白酶类型排毒养颜胶囊, 溶解度, 浓度和有关的文献参考

货号 产品 分子量 作用 / 抑制的特异性 溶解度 稳定性 浓度范围 a) 文献参考 12745 AEBSF-HCl 239.7 Irreversible inhibitor of Thrombin and other serine proteases. Inhibits by acylation of the active site of the enzyme. Much less toxic than PMSF and DFP H2O, Aqueous solutions are stable between pH 5-6 0.1 - 2 µM 60,83,84

12309 Amastatin-HCl 511 Non-toxic reversible metallo-protease inhibitor. Inhibits many membrane-bound peptidases which are critical regulators of peptide hormones, e.g. aminopeptidase A and M, but not aminopeptidase B. Inhibits also leucine aminopeptidase. Ethanol 0.5 % AcOH 1 - 100 µM 1,2,3,4

12548 (epsilon)-Aminocaproic acid 131.2 Highly active inhibitor of fibrinolysin and chymotrypsin. H2O 1 - 20 µM 5,6 13684 (alpha)1-Antichymotypsin from human plasma 68000 Glycoprotein that inhibits chymotrypsin-like proteases (above all human neutrophil cathepsin G) by forming stable complexes. Acute phase protein; concentration in plasma increases after events like inflammation or tissue damage Aqueous buffers Used at equimolar concentration 7,8,9,10

13685 Antipain-HCL 678.2 Reversible inhibitor of serine and cysteine proteases. Inhibits papain and trypsin more specificly than leupeptin. Plasmin is inhibited only slightly. Also involved in inhibition of RNA synthesis H2O Methanol DMSO 1 - 100 µM 11,12,13 13695 Antithrombin III from human plasma ca. 60000 Glycoprotein that plays a major role in controlling serine proteases in the blood clotting cascade. Inactivates above all thrombin by forming an extremely stable complex, an effect which is enhanced by heparin. Inhibits also other proteases of the coagulation cascade like plasmin, kallikrein, factor IXa, Xa, XIa and XIIa. H2O Used at equimolar concentrations 8,14 15,16 13694 (alpha)1-Antitrypsin from human plasma ((alpha)1-proteinase inhibitor) ca. 53000 Glycoprotein that is mainly involved in the control of neutrophil elastase activity. Inhibits also most of other mammalian serine proteases but at a lower rate. Blocks the action of target enzymes by binding nearly irreversibly to their active site. H2O Aqueous buffers Used at equimolar concentra tions 8,9,17,18,19 13718 Aprotinin (Trypsin inhibitor from bovine lung) ca. 6500 Basic single-chain polypeptide that inhibits numerous serine proteases by binding to the active site of the enzyme, form ing tight complexes. It inhibits above all plasmin, kallikrein, trypsin, chymotrypsin and urokinase, but not carboxypeptidase A and B, papain, pepsin, subtilisin, thrombin and factor X. Used in cell culture to prevent proteolytic damage to cells and to extend lifetime of cells. H2O, Aqueous buffers. Sterile filtered solutions at pH 5-8 are stable for several months. Denatures at pH > 12 In cell culture: 0.01 - 3 µg/ml; in other applications: 10 - 250 µg/ml 22,23,24,25