病原微生物分子分型技术研究进展(一)
病原微生物分子分型技术研究进展(一)
现代分子分型技术主要包括质粒DNA图谱分析、限制性内切酶消化后的染色体DNA分析、核酸探针杂交、脉冲场凝胶电泳(PFGE)、PCR和多位点序列分析(MLST)技术。
DNA重复序列PCR技术(Rep-PCR)的实用性强、低用费、可再现性好，可用来进行普查工作。
PFGE技术分辨力高，是病原微生物分子分型的最佳选择。
而有更高分辨力和再现力的MLST新技术正在逐渐被使用。
这些分子分型技术将有助于在全球范围内进行病原微生物流行病学研究。
本文对近年来常用的病原微生物分子分型技术的研究进展作一综述。
1评估分型技术标准的可行性
评估一项分型技术是否可行的标准有2个：完成标准(有效性)和便利标准(效率性)。
完成标准包括分型能力、分辨力和分型技术间的一致性，而便利标准包括通用性、快捷性、解释和执行的容易程度。
一项分型技术的分型能力意味着通过这项分型技术，分离株被划分为所属类型的比例。
再现性是指通过这种技术对同种样品在重复检测时，产生相同结果的能力。
分辨力是指拥有一致的或非常相似的相关图谱的分离株事实上具有相同的传播途径的可能性。
2种分型技术的一致性通过使用这些技术把高度相似的分类株分组归类而被评价〔1，2〕。
因此，对一种分型技术来说首选标准是有效性〔3〕。
当应用于细菌病原菌时，一种分型技术必须要有效率性优点。
通用性就是用于任何病原菌的能力，这对于医源性病原菌感染的研究是一个非常重要的优点。
操作和解释结果的容易度以及所需费用、试剂和仪器的可行性都是选择一项分型技术的重要标准〔2-4〕。
2现代分子分型技术
质粒DNA图谱分型技术细菌质粒分析是较早被使用的对病原微生物流行病学进行调查的分子分型技术〔4〕。
这种技术包括萃取质粒DNA，通过琼脂糖凝胶电泳分离DNA。
这是一种容易操作和理解的技术。
由于不同菌株质粒DNA序列和大小不同，通过琼脂糖凝胶电泳分离得到的DNA质粒图谱也将不同，因此，与流行病相关的分离株能够被分类分型。
质粒图谱分析的再现性和分辨力可通过限制性内切酶消化质粒而提高。
支持这个方案的理论是，虽然2个不相关质粒有相同的分子量，限制性内切酶位点的位置和频率是不同的。
但此技术也有应用局限，质粒是可移动的非染色体遗传物质，细菌能自发的失去或很容易的获得，结果流行病相关的菌株可以展示不同质粒指纹图谱。
许多质粒带有抗性决定因子的基因，存在于转位子上，而转位子很容易丢失或获得，这同样可以迅速改变质粒DNA组成。
产生图谱的再现性也会由于质粒空间存在的不一致性(超螺旋的、断口的和线形的)而被影响，而凝胶电泳时具有不同迁移速度。
大多数病原微生物有质粒，但没有质粒的就不能用此技术分型。
此外，由于有些分离株中含有1个或2个质粒，会使菌株间的分辨力降低〔4〕。
染色体DNA限制性内切酶分析技术染色体DNA经限制性核酸内切酶消化，消化后的片段再通过琼脂糖凝胶电泳进行分离。
用限制性内切核酸酶BglⅡ和EcoRI等消化病原微生物基因组DNA，因为它们对染色体上的酶切位点非常敏感，可以产生大量短的片段。
电泳后，将获得一系列被分离的DNA图谱。
通过比较图谱，就可以进行菌相似性研究。
几乎所有的病原微生物分离株都可以通过这种方法分型，但由于基因组DNA巨大，酶切后产生的片段众多，且含有大量的重叠片段，这将导致菌株间图谱一致性分析产生困难〔4〕。
核酸探针杂交技术用高效率的限制性内切核酸酶消化染色体DNA后，染色体就被分解成一系列不同大小的片段，具有一定的片段长度多态性。
由于片段太多(包括上述的重叠片段)，给分型带来困难。
这种分型困难可以通过印迹杂交解决。
有报道，以印迹法为基础的针对金黄色葡萄球菌进行分型研究的2次分型法〔4〕，首先是通过金黄色葡萄球菌染色体DNA随机扩增而制备一些探针，再使用几株菌检验探针的特异性，并选择出有效的探针。
使用2次筛选到的探针与分离株进行杂交，根据是否杂交，对分离株进行分型，效果良好。
染色体DNA的脉冲场凝胶电泳分型技术PFGE分型技术是〔5〕使用对染色体有很少酶
切位点的限制性核酸内切酶消化细菌DNA，产生大的DNA片段(10～800kb)，这些大片段不能通过常规电泳方法进行有效分离。
在电场方向周期改变(脉冲)的凝胶电泳条件下，DNA片段根据大小有效分离。
PFGE产生的染色体DNA图谱比用那些高频率切割的限制性内切酶产生的图谱更为简单清晰〔6〕。
理论上，所有的细菌都能使用PFGE进行分型分类，结果具有极高的再现性和分辨率，鉴于PFGE技术的一系列优点，一些人把其视为一种理想的分型技术，并推荐作为对金黄色葡萄球菌等病原微生物分型的最优标准技术〔4〕。
使用PFGE也有一些局限，例如所需时间长，使用的试剂非常昂贵，要求专门的仪器等。
另外，很小的电泳条件的不同就可以改变每条光谱带间距离，使用不同凝胶进行电泳得到的结果也比较复杂，这为不同实验室间的结果比较带来一定麻烦〔7〕
聚合酶链反应技术聚合酶链反应(PCR)是一种高灵敏度的体外扩增DNA片段的技术，近年来在病原微生物分型研究上也得到了广泛应用。
而且，科学家根据微生物基因组特点及分型工作的需要，对PCR技术进行了一系列的改良，使其成为了快速、简捷的分型技术。
目前，常用的PCR分型技术有随机扩增的多态性DNA技术(RAPD)和重复序列PCR技术(Rep-PCR)。
RAPD是一种典型PCR衍生技术，用一系列任意的核苷酶序列(10个碱基)作为引物，通过引物与模板DNA序列随机配对进行PCR扩增。
由于引物较短，所以退火温度要求较低。
扩增时只有距离最近、方向相反的2个引物之间的模板DNA区段才能被扩增。
因此，基因组在这些区段如发生了DNA片段缺失、插入或碱基突变，就可能导致这些特定结合位点分布发生相应的变化。
通过电泳对扩增产物DNA片段的多态性进行检测、分析就可以反应出不同菌株基因组的DNA特点，从而对他们进行分型。
RAPD技术的使用范围也非常广，分辨结果也有较好的实验室再现性。
与其他技术相比，这种技术的优势是它的简便性和快捷性。
分辨力依靠引物的数据和核苷酸序列而改变。
使用单引物具有低分辨力，但是使用3个或3个以上引物时，会使获得最终结果所需时间大大减少〔8，9〕。
虽然RAPD的分型结果在不同实验室间变化较大，分辨力不如PFGE技术，但在疾病暴发流行时，PAPD仍是一种分析相关菌株和排除不相关菌株的良好技术〔10〕。
Rep-PCR技术是利用细菌基因组中广泛分布的短重复序列为引物靶序列，进行PCR扩增，通过对PCR产物电泳结果的比较，分析菌株间基因组存在的差异〔11〕。
这些重复序列在原核生物界广泛存在，这一些细菌属和种中是保守的。
在这种方式获得的图谱中，光谱带的大小和数量的不同代表着不同菌株重复序列间的距离和重复序列的数量，该技术对于大量或少量的菌株分型均适用，简单易行。
与其他分类技术相比，这种技术有更高的分辨力。
研究表明，虽然有时Rep-PCR分辨力稍低，但与PFGE获得的结果确有很好的关联度。
最近已经有人把Rep-PCR与其他已经用于菌株分类的基因分型技术相比较。
分析结果显示，Rep-PCR与RAPD和PFGE有相同的分辨力〔12〕。
与RAPD相比，Rep-PCR在DNA提纯中需要一额外步聚。
因此，RAPD技术比Rep-PCR稍微简单快速。
然而Rep-PCR技术的再现性非常好，这是RAPD无法比拟的。
与PFGE相比，Rep-PCR主要的优点是操作中简便和快捷。
而再现性PFGE相似。
分子分型 命名
分子分型命名
分子分型（Molecular Typing）是生物学领域中的一个重要概念，它指的是通过分子生物学手段对生物样本中的分子特征进行分析，从而确定其遗传型、基因型或表型的过程。
这种分型方法广泛应用于生物学研究的各个领域，如微生物学、遗传学、病理学等。
在微生物学中，分子分型技术被用于鉴定和区分不同种类的微生物。
例如，通过PCR 扩增和测序分析，可以确定病原体的种属、毒力基因、耐药基因等关键信息，为临床诊断和治疗提供重要依据。
此外，分子分型还可以用于监测微生物的流行病学特征，分析微生物的传播途径和进化关系。
在遗传学领域，分子分型技术被用于研究生物体的遗传变异和基因结构。
通过对DNA 或RNA序列的分析，可以确定个体的基因型、基因突变、基因重组等信息，为遗传病的诊断、预防和治疗提供理论支持。
同时，分子分型还可以用于研究物种的遗传多样性和进化历史，揭示生物演化的奥秘。
在病理学领域，分子分型技术被用于研究疾病的发病机制和分子特征。
通过对病变组织的分子分型，可以确定疾病的类型、分期、预后等信息，为临床诊断和治疗提供重要参考。
此外，分子分型还可以用于研究药物的作用机制和抗药性机制，为药物研发和临床用药提供理论支持。
总之，分子分型技术是一种重要的生物学研究手段，它可以帮助我们深入了解生物体的遗传结构和分子特征，为生物学研究和临床应用提供有力支持。
随着分子生物学技术的不断发展，分子分型将会在更多领域得到应用和发展。
病原微生物检测实验原理及流程介绍
华大
DNA纳米球：DNB技术是将基因组DNA首先经过片段化处理，再加上接头序列，并环化成单链环化DNA，随后使用PCR-Free 的滚环扩增技术将单链环化DNA扩增2-3个数量级，所产生的扩增产物为DNA纳米球。
测序-原理
华大
数据质控
表单各项
相关要求解释与要求
备注
样本
样本名称，包括NF及临床样本
敏感性和特异性差、并不是所有病原微生物都有相应抗体、有窗口期、假阳性高。
核酸检测（PCR）
简单、快速、价格低、可定量检测、准确性高。
依赖主观假设、检测已知的微生物、需要引物扩增，但引物并不总是可靠、只能检测微生物基因组的很小部分。
质谱法
过程简单、特异性和准确性高、可进行高通量分析。
基于已培养的阳性菌落，依赖培养、只能检测细菌和真菌约1000种已知微生物、部分病原体不能鉴定到种、只能定性不能定量。
感染人群多新发罕见感染源不断涌现
诊断方法找不到病原/患者等不到诊断结果
经验性用药加剧细菌耐药无药可医、不治而亡
[1]Troeger C, et al, The Lancet Infectious Diseases, 2018. [2]William OC, et al, Nature Reviews Microbiology,2017
优点：理论上能检测全部已知和未知病原体（一网打尽);缺点：灵敏度受宿主背景干扰；
病原宏基因检测（mNGS）-检测流程
1
0.5h
样本前处理+去宿主+破壁
g+DNB
8h
测序
2-3h
病原宏基因检测（mNGS）-去宿主
差异裂解法：利用人源细胞与微生物细胞结构差异，选择性的裂解宿主细胞，利用核酸酶酶解掉释放出来的宿主DNA，最后进行病原体DNA的富集纯化；
鲍曼不动杆菌分子流行病学研究进展
鲍曼不动杆菌分子流行病学研究进展陈威震;陈良安【摘要】介绍了鲍曼不动杆菌的分子流行病学特征，并比较了鲍曼不动杆菌几种分子分型方法的优缺点。
【期刊名称】《海峡科学》【年(卷),期】2011(000)010【总页数】4页(P72-75)【关键词】鲍曼不动杆菌;分子流行病学;分子分型【作者】陈威震;陈良安【作者单位】解放军总医院呼吸科;解放军总医院呼吸科【正文语种】中文【中图分类】S852.659.5流行病学的研究对象是某种疾病在特定人群中发生、传播、预防、控制的影响因素，暴发性感染及其病原微生物的研究是流行病学研究的重要内容。
分子流行病学是流行病学的重要领域，它的主要工作是通过追溯病原体来源，为判断暴发性感染的范围、扑灭疫情、制订预防策略提供重要依据。
上世纪80年代以来，DNA分子分型作为分子流行病学的重要技术迅猛发展，并为流行性感染的预防和控制提供了重要信息。
1 不动杆菌的分子流行病学不动杆菌属（Acinetobacter）是需氧、不发酵糖类的革兰氏阴性杆菌，可分为6种：醋酸钙不动杆菌（A. calcoaceticus）、鲁菲不动杆菌（A. lwoffi）、鲍曼不动杆菌（A. baumanii）、溶血不动杆菌（A. haemolytius）、琼氏不动杆菌（A. junii）和约翰逊不动杆菌（A. johnsonii）。
不动杆菌是机会致病菌，鲍曼不动杆菌、不动杆菌属 3型和13TU型是主要病原菌，常引起重症监护病房患者的呼吸机相关性肺炎、皮肤和软组织感染、创面感染、泌尿系统感染、继发性脑膜炎和败血症[1]。
鲍曼不动杆菌、不动杆菌属3型和13TU型等临床相关菌株与环境菌株醋酸钙不动杆菌具有高度相似的生化和遗传表型，在临床诊断实验室常难以区分，因而被统称为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体（A.calcoaceticus–A. baumannii complex，Acb complex）[2]。
不动杆菌属3型、13TU型在临床上相对少见，但这可能与VITEK等临床常用菌种鉴定系统不能将其与鲍曼不动杆菌进行鉴别有关。
分子分型方法在流行病学调查中的应用(景怀琦)
细菌的分子分型方法
• 在实际应用过程中，任何单一的方法所 得出的结论都具有片面性，所以，联合 应用几种方法是目前较为理想的分子分 型方法。
细菌的分子分型方法
• 这其中又以PFGE与其它方法相结合的效 果为最佳，先用分辨力较低的方法进行 初筛，然后用分辨力较高的方法进行进 一步的分型，这是目前大多数实验室所 采取的策略。随着科学技术的发展和进 步，会有更好的方法问世。
细菌的分子分型方法
• 一种方法是否能应用于分子分型以及其 分型效果如何大致可以从以下几个方面 考虑：
细菌的分子分型方法
• 1、分型力 是指对所分析菌株能够得到 明确的阳性结果的能力。 • 2、重复性 是指当重复测试相同菌株时 能够得到相同结果。 • 3、鉴别能力 是指区别非相关菌株的能 力。理想的分型方法应该能识别每一无 关的分析菌株。 • 4、结果易于解释 这是非常重要的。 • 5、快速、廉价、技术简单。
细菌的分子分型方法
• 基于PCR的分型系统 • 随机引物PCR（AP-PCR），也就是随机 扩增多态性DNA分析（RAPD）。使用那 些不针对任何已知遗传位点的短引物 （通常8-10bp），可以随机地与染色体 DNA结合，并有足够的亲和力启动聚合酶 反应。
细菌的分子分型方法
• 然而，在实践中，用AP-PCR获得可重复 的高分辨力的结果还存在一定的困难。 • 第一，如果条带的强弱可以证明菌株之 间的差异时，我们很难比较和解释图谱； • 第二，由于某些产物可能代表效率相对 低的反应，技术因素的微小改变就可以 导致不同的扩增反应中一个特定菌株产 生的实际片段差别很大。
E.coli O157：H7的分子分型方法
徐州地区E.coliO157:H7动物粪便分离株PFGE图谱
分子生物学在微生物检验中的应用(精)
分子生物学在微生物检验中的应用南京军区福州总医院全军临床检验研究所兰小鹏21 世纪是以分子生物学为代表的生命科学的时代，近年来,随着现代生物技术的快速发展,人类基因组计划的完成,尤其是生物化学、免疫学、生物仪器及计算机理论与技术的进步，分子生物学技术在医学、遗传学、法医学、生物学等各个领域广泛应用, 新的诊断技术和方法不断涌现并被广泛应用于微生物检测，为传染病的流行病学调查、基因的多样性、微生物的生物学特性、微生物的致病性和药物的耐受性、微生物的生物降解能力等各个方面提供了重要的信息。
一．核酸杂交法最初应用于微生物检测的分子生物学技术是基因探针方法,它是用带有同位素标记或非同位素标记的DNA 或RNA 片段来检测样本中某一特定微生物核苷酸的方法。
核酸杂交有原位杂交、打点杂交、斑点杂交、Sorthern杂交、Northern杂交等,核酸分子探针又可根据它们的来源和性质分为DNA探针、cDNA探针、RNA探针及人工合成的寡聚核苷酸探针等。
其原理是通过标记根据病原体核酸片段制备的探针与病原体核酸片段杂交,观察是否产生特异的杂交信号。
核酸探针技术具有特异性好、敏感性高、诊断速度快、操作较为简便等特点。
目前,已建立了多种病原体的核酸杂交检测方法,尤其是近年来发展起来的荧光原位杂交技术(FISH) 更为常用。
二．质粒DNA图谱分型技术细菌质粒分析是较早被使用的对病原微生物流行病学进行调查的分子分型技术。
这种技术包括萃取质粒DNA ,通过琼脂糖凝胶电泳分离DNA。
由于不同菌株质粒DNA序列和大小不同,通过琼脂糖凝胶电泳分离得到的DNA质粒图谱也将不同,因此,与流行病相关的分离株能够被分类分型。
质粒图谱分析的再现性和分辨力可通过限制性内切酶消化质粒而提高。
虽然2个不相关质粒有相同的分子量, 但性内切酶位点的位置和频率是不同的。
但质粒是可移动的非染色体遗传物质,细菌能自发的失去或很容易的获得,结果流行病相关的菌株可以展示不同质粒指纹图谱。
分子生物学技术在检验医学中的应用
分子生物学技术在检验医学中的应用随着科学技术的不断进步，分子生物学技术发展迅速，成为医学领域中不可或缺的一部分。
在检验医学中，分子生物学技术发挥了越来越重要的作用，为疾病的诊断、治疗和预防提供了新的思路和方法。
本文将介绍分子生物学技术在检验医学中的应用及其优势和局限性，并通过实际案例进行具体阐述。
分子生物学是研究生物分子在生命活动中的作用和规律的科学。
其研究对象包括DNA、RNA、蛋白质等生物分子，以及这些分子在基因表达、细胞信号转导、基因组学等方面的作用。
近年来，随着高通量测序技术的发展，分子生物学技术在医学领域中的应用越来越广泛，为检验医学带来了革命性的变化。
遗传性疾病的诊断分子生物学技术通过检测基因序列的变化，可以对遗传性疾病进行诊断。
例如，地中海贫血是一种常见的遗传性贫血疾病，传统的方法需要靠血红蛋白分析等手段进行诊断。
而采用分子生物学技术，可以直接检测到导致地中海贫血的基因突变，提高了诊断的准确性和效率。
肿瘤的早期诊断和预后判断肿瘤的发生与基因变异密切相关。
分子生物学技术可以通过检测基因变异、甲基化等因素，实现肿瘤的早期诊断和预后判断。
例如，通过检测肺癌患者血清中的循环肿瘤DNA，可以早期发现肺癌，并为治疗和预后判断提供依据。
感染性疾病的诊断分子生物学技术可以快速检测病原体核酸，对感染性疾病进行诊断。
例如，在新冠疫情期间，分子生物学技术被广泛应用于病毒核酸检测，为疫情防控提供了重要的技术支持。
遗传性疾病的诊断以地中海贫血为例，采用分子生物学技术对导致地中海贫血的基因进行检测，可以快速、准确地诊断出患者是否患有该疾病。
相较于传统的方法，分子生物学技术具有更高的特异性和灵敏度，能够避免漏诊和误诊的情况发生。
肿瘤的早期诊断和预后判断以肺癌为例，通过检测肺癌患者血清中的循环肿瘤DNA，可以早期发现肺癌，并为治疗和预后判断提供依据。
在某实际案例中，一名患者通过常规体检未能发现肺癌的迹象，但通过循环肿瘤DNA检测，发现了肺癌的存在。
最新分子生物学技术新进展课件PPT
临床表现
③ 双眼视力障碍发作 双侧大脑后动脉距状支缺血导致
枕叶视皮层受累，引起暂时性皮质盲
辅助检查
➢ CT或MRI检查大多正常，部分病例(发作时间 ＞60min者)于弥散加权MRI可见片状缺血灶
➢ CTA、MRA及DSA可见血管狭窄、动脉粥样硬 化斑
（五）基因突变分析 PCR与其他技术的结合可以大大提高基因突变检 测的敏感性 。
三、几种重要的PCR衍生技术
（一）逆转录PCR技术 逆转录PCR(reverse transcription PCR，RT-PCR)是将 RNA的逆转录反应和PCR反应联合应用的一种技术， 是目前从组织或细胞中获得目的基因以及对已知序 列的RNA进行定性及半定量分析的最有效方法。
➢ TCD可发现颅内动脉狭窄，并可进行血流状 况评估和微栓子监测
➢ 血常规和生化检查是必要的 ➢ 神经心理学检查可能发现轻微的脑功能损害
诊断及鉴别诊断
1.TIA的诊断
➢ 大多数TIA患者就诊时临床症状已消失，诊断主 要依靠病史
➢ 中老年患者突然出现局灶性脑功能损害症状，符 合颈动脉或椎-基底动脉系统及其分支缺血表现， 并在短时间内症状完全恢复(多不超过1小时)， 应高度怀疑为TIA
1.DNA序列分析 用于基因突变类型已经明确的遗传病的诊断及产 前诊断 ，例如血友病、囊性纤维变性、杭延顿氏 舞蹈症、抗胰酶缺乏症等均可检测。
2.PCR技术 • 快速检出样品中的痕量病原微生物，例如乙
型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎，爱滋病等。 • 微量DNA 样品中的基因及基因变异分析。 • 用于个体识别、亲缘关系鉴定、器官移植术
➢ PWI/DWI、CTP和SPECT有助TIA的诊断
脑膜炎奈瑟菌分子分型方法的进展
Ｎ ５０ ０多个 ｓ 的 Ｍ Ｔ测 序资料 ， ｍ， ０ Ｔ型 Ｓ Ｉ 为全球 流 行
病学研 究提 供 一个 强 大 的数 据库 。ＭＩＴ唯一 的 缺 Ｓ 陷可能 是测序 技术 很 专业 化 ， 是每 个 实 验室 都 可 不 以 自行完成 ， 而且 费用较 高 ， 推广 应用有 一定阻力 。
ｃｍ ｌ （Ｔ５ 。我 国 ２０ ｏ ｐｅ Ｅ －） ｘ ０６年发 现 了一 个 新 的 高传 染性 的 Ｎ ｍ群 ， Ｔ４ ２ ｏ ｐｅ［ Ｓ 一８ １ ｍ ｌ 引。这一 ｓ ｃ ｘ Ｔ型的 Ｎ ｍ
造成 我 国 ２０ ２０ ０ ３ ０５年安 徽省 几 次 Ｃ群 流 脑 的暴 发 。ＭＩ Ｔ的测 序 资料 可 以提 交 到 ｗ ｗ ｍｓ．ｅ 网 Ｓ ｗ． ｔ ｔ ｉ ｎ 站 ， 地 区性 的菌株 与世 界其 他 地方 的菌株 进 行 比 将 较， 既可用 于流脑局 部暴发 的研究 ， 也可 用于长时 期 的流脑流行 病研究 。
ｓｑｅｃ ｐ ｇＭ ）核糖 体分 ｅｕｎｅｔ ｉ ， ＩＴ ， ｙｎ Ｓ
Ｄ Ａ， Ａ Ｄ 等 。 Ｎ Ｒ Ｐ） 由于 Ｎ ｍ表 面 抗 原 的缺 失 或抗 原 表 达 量 不 足 ， 导致 很 多 从 携 带 者 分 离 的 Ｎ 无 法 用 免 疫 学 分 ｍ 型 ＿， ｌ 而且 在免疫 压力 下 ， ｍ容 易 通过 水 平 的细 菌 ｊ Ｎ 种 内重组及 从 相关 的菌 种 获得 外 源 Ｄ Ａ引起 遗 传 Ｎ
鸡白痢沙门菌的分离鉴定、耐药性及分子分型研究
Ｐｒ ｏｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎｅ
鸡 白痢 沙 门菌 的分 离 鉴 定 、 耐 药 性 及 分 子 分 型 研 究
李静 怡 ， 崔 可琦 ， 冯赛祥 ， 贺现辉 ， 廖 明 ， 徐成 刚
１ ． １ ． ２ 参 考 菌 株 鸡 白痢 沙 门 菌 （ Ｓ ．ｐ ｕ ｌ ｌ ｏ ｒ ｕ ｍ）
标 准株 Ｃ ７ ９ — １ ３购 自中国兽 医药 品监察 所 。 １ ． １ ． ３ 主要 试 剂 细 菌微 量 生 化 反 应 管 均 为杭 州 天 和微 生物试 剂 有 限公 司产 品 ； ＡＰ Ｉ ２ ０ Ｅ生物 试剂 条
为法 国 生 物 梅 里 埃 公 司 产 品 ； 药 敏 试 验 质 控 菌 ＡＴＣ Ｃ ２ ５ ９ ２购 自中 国兽 医药 品监 察 所 ； 鸡 白痢沙 门
菌 属诊 断血 清 购 自兰 州 生 物 制 品研 究 所 ； 药 敏纸 片
了广泛应 用＿ ８ ］ ， 已被 广泛应 用 在食 源性 疾 病暴 发 溯
且盲 目用 药还 会 造 成 动物 性 食 品 中药 物残 留 ， 影 响
１ ． １ ． １ 病料 来源 对 ２ ０ １ ０年 一 ２ ０ １ １年 在 广 西 玉
林、 临桂地区， 广 东 的江 门、 台山、 新兴、 深圳、 肇庆、 花都、 清远 、 怀集 和 开平 等 １ １个 不 同 地 区鸡 白痢 沙
ｓ ｉ ｓ ， Ｐ Ｆ ＧＥ ） 是 利 用 限 制 性 内切 酶 切 开 细 菌 染 色 体
Ｄ ＮＡ 而 进行研 究 ， 具 有重 复性 好 、 分辨 力 强 的优 点 ，
2022分子诊断技术检测感染性疾病的应用和发展(全文)
2022分子诊断技术检测感染性疾病的应用和发展（全文）以分子生物学为核心的实验诊断技术是当前感染性疾病临床实验诊断的重要手段，高效、快速地检测病原微生物对于感染性疾病的临床诊疗意义重大。
而随着近年来纳米材料、应用化学、光物理学和生物传感等技术的进步，分子诊断技术也迎来了革命性的创新和发展。
分子诊断技术具有特异性强、灵敏度高、周转时间短和应用范围广等众多优点，在感染性疾病的临床诊断中已应用十分广泛。
一、新一代定量PCR技术聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是1985年建立的在体外特异性扩增一段特定核酸序列的技术，是目前病原微生物分子生物学检测中应用最为广泛的技术。
第1代普通PCR 技术，只能定性而不能准确定量，并且操作过程需要开盖，易造成“气溶胶”污染。
研究者们在常规PCR技术的基础上，于1996年建立了实时PCR技术或荧光定量PCR，实现对PCR过程中产物量的实时监测，无开盖操作，污染风险低，能准确定量检测。
目前在乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）、人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）、结核分枝杆菌等感染性疾病中细菌、病毒的定量监测中广泛应用。
但对于较低拷贝数的DNA 难以检测，而且扩增效率的差异会直接导致实验室内或者不同实验室检测结果的偏差。
而数字PCR（digital PCR，dPCR）技术是基于传统PCR以及实时定量PCR发展起来的第3代PCR技术，能更准确地观察到单拷贝核酸分子的动态，可让研究人员能够直接数出单基因分子的个数，对起始样品进行绝对定量。
已有研究表明，dPCR 能够检测出极低拷贝的靶标分子，灵敏度高于目前常用的实时定量PCR，并且dPCR 不需要制备标准曲线、不受基因扩增效率的影响，在临床诊断领域具有独特的优势。
由于dPCR 的高灵敏度，临床微生物标本无需培养即可以进行检测，大大缩短临床报告时间，并且可以准确地检测细菌数目和病毒载量，从而对疾病进行早期诊断、药物疗效观察、病情判断及预后观察，目前dPCR 技术已广泛应用于HBV、HIV、甲型流感病毒等临床领域。