鸡新城疫病毒F蛋白的研究进展
1 鸡新城疫病毒F蛋白的研究进展
鸡新城疫病毒为有囊膜的负链RNA病毒。NDV基因组编码6种结构蛋白：L蛋白为RNA依赖聚合酶，与核衣壳相联；HN~具有血凝素和神经氨酸酶活性，构成副粘病毒二种纤突中的大纤突；F为融合蛋白，构成小的纤突；NP为核衣壳蛋白；P为磷酸化的核衣壳相联蛋白；M为基质蛋白，是构成囊膜的支架。其中的融合蛋白是NDV的功能性糖蛋白之一，在致病和免疫应答过程中起重要作用，已成为研究NDV致病性的热点，为了使大家对NDV的F蛋白有个整体的认识，现综述如下。
1、F蛋白的结构
F基因全长1662bp，单一的开放阅读框编码553个氨基酸的多肽，单体的分子量为65KD，能够相互交联形成寡聚体，NDV的F蛋白主要寡聚体的分子量为195KD，次要寡聚体的分子量为130KD。F蛋白具有3个大约由25个疏水氨基酸区域：一个在N端信号肽序列内(1-32)，一个在F0裂解产生的F1多肽N端(117-142)，该序列能启动病毒与宿主细胞的膜融合，还有一个靠近F1的C末端，它使该蛋白能嵌入病毒囊膜中(500-525)，在这三个功能区中，与糖蛋白功能结构有重要关系的6个潜在糖基化位点分别位于85，191，366，447，471和541残基处。F蛋白还有3个相当保守的抗原位点，分别位于343(I-Leu)，72(Ⅱ-Asp)161(Ⅲ-Tbr)。有证据表明，3个抗原位点中任何一个位点的氨基酸发生变化，都将引起其抗原位点的变化，从而引起折叠蛋白的空间变化，影响抗体与该位点的结合。F蛋白先以无活性的F0蛋白形式存在，糖蛋白F0必须由宿主细胞蛋
鸡新城疫病毒融合蛋白基因的克隆及进化分析
沈阳农业大学学报，２００６—１０，３７（５）：７８２—７８５ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００６—１ ０，
鸡新城疫病毒融合蛋白基因的克隆及进化分析
栾慎顺，魏玉荣，张 敏，金苗苗，沈国顺水
（沈阳农业大学 畜牧兽医学院，沈阳１１０１６１）
摘要：根据ＧｅｎｅＢａｎｋ中报道的ＮＤＶ融合蛋白基因（Ｆ）序列，设计了一对特异性引物，用该引物对ＮＤＶＬＮ—ｓＮ株进行 ＲＴ—ＰＣＲ扩增；将扩增得到的ＰＣＲ片段纯化后与ｐＧＥＭ—Ｔ连接得到重组质粒ｐＧＥＭ—Ｆ，用于核苷酸序列测定。结果该基因 ＯＲＦ长１６６２ｂｐ，编码５５３个氨基酸；将ＬＮ—ｓＮ毒株与ＧｅｎｅＢａｎｋ中已报道的ＮＤＶ毒株进行比较，Ｆ基因核苷酸序列的同源性 在８３．４％～９９．９％之间，推导的Ｆ蛋白氨基酸序列的同源性在８８．４％一９９．８％之间。 关键词；新城疫病毒；融合蛋白基因；克隆；序列分析 中国分类号：￥８５８．３１；￥８５２．４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００—１７００（２００６）０５—０７８２—０４
Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｇｅｎｅ ｏｆ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ
ＬＵＡＮ Ｓｈｅｎ．ｓｈｕｎ，ＷＥＩ Ｙｕ．ｒｏｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｍｉｎ，ＪＩＮ Ｍｉａｏ．ｍｉａｏ，ＳＨＥＮ Ｇｕｏ－ｓｈｕｎ米
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＡｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １０１６１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｓｔｒａｉｎ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ＧｅｎｅＢａｎｋ ｄａｔａｂａｓｅ，ａ ｐａｉｒ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗａｓ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ａｎｄ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｍｐｌｉｆｙ Ｆ ｇｅｎｅ ｏｆ ＬＮ—ＳＮ ｓｔｒａｉｎ．Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ ｗａｓ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｌｉｇａｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ｐＧＥＭ—Ｔ． Ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｃｔ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｔｈｅ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ Ｆ ｇｅｎｅ ｏｆ ＬＮ—ＳＮ ｓｔｒａｉｎ ｗａｓ １６６２ｂｐ ａｎｄ ｅｎ— ｃｏｄｅｄ ５５３ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ．Ｔｈｅ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ＮＤＶ ａｃｃｅｓｓｅｄ ｂｙ ＧｅｎｅＢａｎｋ ｄａｔａｂａｓｅ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ８３．４％ｔｏ ９９．９％ａｎｄ ｆｒｏｍ ８８．４％ｔｏ ９９．８％． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ；ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅ；ｃｌｏｎｉｎｇ；ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ
新城疫病毒山东分离株F和HN基因克隆与进化分析
．２０１１年２４卷４期 Ｖ０Ｌ ２４ Ｎｏ．４ 西南农业学报 Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｃｈｉｎａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａ ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １５４７
文章编号：１００１—４８２９（２０１１）０４—１５４７—０５
新城疫病毒山东分离株 和删基因克隆与进化分析
杨少华 ，胡北侠 ，黄艳艳 ，许传田 ，颜世敢 ，张秀美 ・
（１．山东省农业科学院畜牧兽医研究所；２．山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东济南２５０１００）
摘要：选取山东２００７～２００８年的５株ＮＤＶ流行株，克隆融合蛋白（Ｆ）和血凝素一神经氨酸酶（ＨＮ）基因全长并测序。结果表 明，５个分离株Ｆ基因长度为１６６２ ｂｐ，编码５５３个氨基酸。Ｆ蛋白裂解位点的氮基酸序列均为“ Ｒ—Ｒ—Ｑ－Ｋ—Ｒ—Ｆ“’，符合强毒株Ｆ基 因裂解位点的氨基酸序列特征。对Ｆ基因４７￣４２０ ｎｔ序列进行比对，发现４株鸡源毒株基因型为Ⅶｄ，另一鸽源毒株基因型为Ⅵ。 ５个分离株间Ｆ基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为８８．８％～９９．７％和９４％一９９．３％，与ＬａＳｏｔａ、Ｃｌｏｎｅ３０、Ｆ４８Ｅ９的氨基酸 同源性分别为８８．４％一８９．５％、８７．７％～８８．８％、９０．８％～９２．４％。ＨＮ基因长度为１８０１ｂｐ，编码５７１个氢基酸，５个毒株均合 １３个半胱氨酸残基且位置保守。与Ｉ．，ａＳｏｔａ的氨基酸同源性为８７．２％一８８．８％，与８个山东ＮＤＶ流行株的同源性为８９．８％～ ９８．６％。 关键词：新城疫病毒；基因型；强毒株 中图分类号：￥８３ 文献标识码：Ａ
Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｆ ａｎｄ ＨＮ Ｇｅｎｅ ｏｆ
Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ ｏｆ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｉｓｏｌａｔｅｓ
ＹＡＮＧ Ｓｈａｏ—ｈｕａ 一，ＨＵ Ｂｅｉ．ｘｉａ ．－，ＨＵＡＮＧ Ｙａｎ．ｙａｎ ｒ一，ＸＵ Ｃｈｕａｎ—ｔｉａｎ －一，ＹＡＮ Ｓｈｉ．ｇａｎ ．一，ＺＨＡＮＧ Ｘｉｕ．ｍｅｉ ・ ’ （１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａ ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；２．Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｄｉｓ— ｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，Ｓｈａｎｇｄｏｎｇ Ｊｉｎａｎ ２５０１００，Ｃｈｉｎａ）
新城疫的研究进展
新城疫的研究进展
谷臣君刘兴盛范安武（重庆市城口县农业委员会４０５９００）
李科（四川省自贡市大安区畜牧局６４３０１０）
摘要：新城疫是由副粘病毒科副粘病
毒属新城疫病毒引起的鸡高度接触性、
急性传染病。本文从新城疫病毒的病
原学概况、病毒的流行病学概况、临
床症状、病理变化、诊断以及防治等
诸方面进行概述。 关键词：新城疫；流行病学；症状；
防治：综述
鸡新城疫（ＮＤ）又称伪鸡瘟、亚
洲鸡瘟．是由新城疫病毒引起的鸡的
一种急性、烈性病毒性传染病，常呈
败血症症状。主要侵害鸡和火鸡，严
重威胁养鸡业健康发展。其特征是发
热，呼吸困难，严重下痢，粘膜、浆
膜出血和坏死．病程稍长的伴有神经
症状。该病被世界动物卫生组织
（ＯＩＥ）和我国列为Ａ类传染病。我国
于１９３５年发现鸡新城疫。目前，鸡新
城疫尚无有效治疗药物，鸡群一旦发
病，一般应立即采取隔离、消毒、扑
杀等综合措施，并用疫苗作紧急预防
接种。本文仅就新城疫病毒方面的研
究作综述。 １病原学概况
新城疫病毒（ＮＤＶ）为副粘病毒，
病毒粒子呈球形，具有囊膜．其大小
差别从１２０～３００ｎｍ。通常为１８０ｎｍ左 右。病毒核酸为单链负股、不分节的
ＲＮＡ。病毒只有１个血清型，但存在
多个基因型．毒株的毒力有着较大的
差异。新城疫病毒的毒力大小可分为３
大类：
（１）低毒力株（弱毒株）；
（２）中等毒力株：
（３）强毒力株。感染强毒株新城
疫时，可导致典型新城疫的发生，而
且死亡率很高。
２流行病学概况
各种年龄的鸡都可以发生，该病
不受季节的影响．一年四季均可发
生，但以冬春两季多发，以鸡、火鸡、
野鸡最易感染。鸡不论大小均可发病，
死亡率可达９５～１００％。近年来。新城
疫发生了新的变化，典型的新城疫已
不多见。其发病率占１０～３０％。临床症
状不明显，病理变化不典型，死亡率
１５～４５％，伴有呼吸症状为特征的非典 豳 黼
饲养管理
型新城疫则屡见不鲜。 发病率高低还取决于不同季节的
新城疫病毒反向遗传技术研究进展
新城疫病毒反向遗传技术研究进展
赵长光;宋松林;赵继勋;张国中
【摘 要】新城疫( newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(newcastle disease
virus,NDV)引起禽类的一种急性、高度接触性传染病,也是目前严重危害我国养禽业的主要疫病之一.虽然NDV只有一个血清型,但不同毒株之间的毒力存在明显差异.有关NDV毒力及其相关决定因素的研究一直是世界范围内的研究热点,其中反向遗传学操作技术是进行NDV毒力相关基因研究的一种主要技术手段.本文简要综述了NDV反向遗传操作系统的构建过程以及利用该技术在NDV研究中取得的最新成果.
【期刊名称】《中国兽医杂志》
【年(卷),期】2011(047)010
【总页数】4页(P56-59)
【作 者】赵长光;宋松林;赵继勋;张国中
【作者单位】中国农业大学动物医学院,北京海淀100193;中牧实业股份有限公司,北京丰台100070;中国农业大学动物医学院,北京海淀100193;中国农业大学动物医学院,北京海淀100193
【正文语种】中 文
【中图分类】S852.65+9.5
新城疫（newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（newcastle disease virus，NDV）引起禽类的一种急性、高度接触性传染病，也是目前严重危害我国养禽业的主要疫病之一。虽然NDV只有一个血清型，但不同毒株之间的毒力存在明显差异。有关NDV毒力及其相关决定因素的研究一直是世界范围内的研究热点，其中反向遗传学操作技术是进行NDV毒力相关基因研究的一种主要技术手段。本文简要综述了NDV反向遗传操作系统的构建过程以及利用该技术在NDV研究中取得的最新成果。
1 反向遗传操作技术
反向遗传学（reverse genetics）是相对经典遗传学而言的。经典遗传学是从生物的表型、性状到遗传物质来研究生命的发生与发展规律，而反向遗传学则是直接从生物遗传物质入手，通过对遗传物质进行加工和修饰来研究基因突变后产生的生物体的特性，从而确定生物体基因组的结构与功能以及这些突变可能对生物体特性的影响。与之相关的各种研究技术统称为反向遗传学技术（reverse genetics
鸡新城疫的发病机理、诊断及防控措施
鸡新城疫的发病机理、诊断及防控措施
作者：陈开培
来源：《乡村科技》 2018年第3期
鸡新城疫（Newcastle Disease，ND）是由鸡新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的具有高度接触性的急性传染病，主要为害鸡只，其他禽类也可感染［1］。呼吸困难、严重下痢为主要特征，败血症、黏膜和浆膜出血是其病理变化［2］，腺胃黏膜出血是很明显的诊断特征。患病鸡只的死亡率在90%以上，因此，国际兽疫局（OIE）将其列为A类疫病，中国将其定为一类动物传染病。此病传播迅速，四季均可发生，是养鸡业中危害较大的传染病之一，在世界各地广泛流行。
1 鸡新城疫的分子致病机制
新城疫病毒（NDV）属于RNA病毒中的单股负链病毒目副黏病毒科（Cparamyxoviridae）副黏病毒亚科腮腺炎病毒属（Rubulavirus）的禽副黏病毒。NDV 的基因组为不分节段单股负链RNA。现已知NDV基因组核苷酸长度有3 种：15 186nt［3］、15 192nt［4］或15 198nt［5-6］。其基因组结构模式为3′-NP-P-M-F-HN-L-5′，可编码6 种结构蛋白，依次为核衣壳蛋白（NP）、磷蛋白（P）、基质蛋白（M）、融合蛋白（F）、血凝素-神经氨酸酶（HN）和大蛋白（L）。F和HN两种蛋白是其致病性及毒力强弱的决定性成分。
F 蛋白是病毒感染细胞所必需的主要成分，是决定病毒毒力的关键因子［7］。
2 鸡新城疫的诊断
2.1 根据临床症状进行初步诊断
病鸡发病初期出现呼吸道症状，病鸡呼吸困难，咳嗽气喘，气管有“呼噜”声响，口鼻炎性分泌物增多，病鸡不时甩头，企图将渗出物排出，倒提病鸡常有酸臭味黏液从口中流出。咳嗽时咳出浓痰，病重的甚至咳出血痰，容易误诊为传染性喉气管炎［8］。此时会有少量病鸡死亡，多数7 d 左右病情有所好转，病程稍长会拉白色或淡绿色稀粪。慢性病例多有神经症状，表现为运动失调或转圈，有的呈头向后仰、嘴向上的观星状姿势［9］。
新城疫病毒的最新研究进展
新城疫病毒的最新研究进展
肖华平;黄忍;魏培;杨瑞峰;范建华
【摘 要】本文从新城疫病毒的理化特性、生物学特性,以及目前主要的诊断、鉴定方法等多方面进行了综述,为今后进一步开展该病毒的防控技术研究,提供了科学的参考和依据.
【期刊名称】《中国畜牧兽医文摘》
【年(卷),期】2016(032)004
【总页数】2页(P43,87)
【关键词】新城疫病毒;理化特性;生物学特性
【作 者】肖华平;黄忍;魏培;杨瑞峰;范建华
【作者单位】山东畜牧兽医职业学院,山东潍坊 26104;山东畜牧兽医职业学院,山东潍坊 26104;山东畜牧兽医职业学院,山东潍坊 26104;山东畜牧兽医职业学院,山东潍坊 26104;中国农业科学院家禽研究所,江苏扬州 225125
【正文语种】中 文
新城疫（Newcastledisease，ND）也称亚洲鸡瘟，是由血清1型禽副黏病毒（即新城疫病毒）引起禽类的一种以呼吸道、消化道黏膜出血为主要病变特征的高度接触性、急性败血性传染病。除家禽外，至少有236种鸟可以自然或实验室感染，是危害养禽业最重要的传染病之一，被世界动物卫生组织（OIE）列为必须报告的传染病，我国农业部在2008年颁布的动物疫病病种目录中，也将其列为一类动物疫病。 新城疫病毒属于副黏病毒科、副黏病毒亚科、腮腺炎病毒属的成员，是Ⅰ型禽副粘病毒的代表株。
1.1 形态结构
病毒颗粒在电镜下呈多形性，直径为100～250 nm，常见有横断面100 nm左右的细丝。囊膜上的纤突长约8 nm，纤突能刺激宿主产生中和抗体。核衣壳直径为17～18 nm，呈多盘绕的竹状结构，围绕中央孔中心轴呈螺旋对称排列，主要成分是病毒、RNA及与其相连的蛋白质，其中RNA位于核衣壳中央。
1.2 抵抗力
一般来说新城疫病毒对理化因素的抵抗力较强，37℃可存活7～9d，鸡粪内病毒50℃可存活5个半月，鸡肉内的病毒15℃可存活98d，骨髓内病毒可存活134d。NDV对酸、碱的耐受力较强，在pH2和pH10条件下可存活数小时；在ND爆发后经28周仍能从蛋壳、羽毛和鸡舍及鸡舍内物品中分离到NDV。3%～5%来苏尔、酚和甲醛等化学试剂5min可将裸露的病毒粒子灭活，在37℃孵化器内，0.1%福尔马林熏蒸6h便可将其灭活。
鸡非典型新城疫发生的免疫因素分析
山东畜牧兽医 ２０１１年第３２卷
鸡非典型新城疫发生的免疫因素分析
王芳 （临沂大学生命科学学院 山东临沂２７６０００）
中图分类号：￥８５８．３１ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００７．１７３３（２０１１）０６—００４０．０２
鸡新城疫是由新城疫病毒引起的一种急性、热性、
高度接触性传染病，是危害养禽业最严重的传染病之
一，国际兽医疫局将其定为“Ａ类传染病”，我国将其列为 “一类动物疫病”。近些年来，我国新城疫的发病呈现新的
流行病学变化，高发病率、高死亡率和表现典型临床症
状以及病理变化的鸡新城疫越来越少，出现了以呼吸道
症状为主的非急性、低死亡率和高淘汰率的非典型新城
疫，这是新城疫流行病学一个明显的变化。非典型新城
疫已经成为当前新城疫的主要发病形式，如何有效防制 非典型新城疫已成为当前研究该病的重要内容。非典型
新城疫的发生原因非常复杂，涉及到免疫因素、管理因
素、环境因素和营养因素等多个方面，尤其是以免疫因
素为多，但对于发病的根本原因，目前还没有形成共
识。为了更好的理解和预防非典型新城疫的发生，本文
对鸡非典型新城疫发生的有关免疫性因素进行分析，包
括五方面内容。 １雏鸡新城疫母源抗体对首免的影响
母源抗体是从母体中获得的被动性免疫抗体，一方
面对雏鸡的早期抗新城疫感染起着积极的作用，另一方 面又会影响新城疫首次免疫接种的效果。一般接种时母
源抗体愈高，接种效果愈差；母源抗体愈低，接种效果
愈好。在高母源抗体雏鸡群中实施新城疫首次免疫有很
大的盲目性。如果首次免疫的时间过早，可能造成高价 母源抗体中和疫苗病毒而使免疫应答降低，导致整体抗
体水平下降。首次免疫效果失败容易引起非典型新城疫
的发生，因此，制定一个合理的免疫程序以减少母源抗
体的干扰是非常必要的，其中最重要的是确定首次免疫
的时间。研究表明，雏鸡母源抗体的变化具有一定的规
养管理，进雏时间最好避开本病高发季节，以便培育出
新城疫的免疫应答特点及我国现有疫苗研究进展
2013年第10期畜牧兽医科技信息新城疫是由新城疫病毒引起的一种禽类急性尧高度接触性传染病遥常呈败血症经过袁主要特征是呼吸困难尧下痢尧神经机能紊乱尧黏膜和浆膜出血遥该病发病急尧致死率高袁对养禽业的发展构成严重威胁袁被国际兽疫局定为I类烈性传染病遥鸡新城疫自1926年首先发现于印度尼西亚后袁迅速蔓延世界各地袁给世界养禽业造成的损失仍十分巨大袁故对ND免疫预防的研究一直是禽病研究的重点遥尽管现在已取得了一些阶段性的进展袁但目前仍有许多因素影响该病的防治袁如母源抗体的干扰尧鸡群个体间ND抗体水平不均衡尧疫苗的种类尧质量尧以及其它副粘病毒的干扰和野毒株的长期存在遥因此了解鸡对ND免疫机理及其我国现有疫苗的应用特点以促进新城疫疫苗的研究和疫苗的合理应用遥1新城疫的免疫应答特点鸡抗新城疫的免疫应答可分为体液免疫应答尧粘膜免疫应答和细胞免疫应答三类遥他们一方面以其特有的方式参与免疫应答反应袁另一方面在抗NDV感染中又具有协同作用遥体液免疫应答是由B细胞介导的一种特异性免疫应答遥病毒性抗原刺激机体后袁B细胞主要是在致敏的TH细胞及其所分泌的一些细胞因子袁如IL-1尧B细胞生长因子渊BCGF冤尧B细胞分化因子渊BCDF冤尧IL-2袁刺激B细胞发育分化为成熟浆细胞袁释放各种分泌性抗体袁发挥免疫保护作用遥在抗新城疫体液免疫应答中袁IgM抗体在感染早期发挥重要的免疫作用袁它可以排除病原遥IgG抗体在IgM抗体即将消失时开始出现袁抗体持续期长袁是最重要的体液性抗体遥双染色技术检测抗NDV抗体产生细胞的研究发现袁在接种NDV疫苗或感染NDV野毒后7d袁脾脏大约有56%浆细胞产生IgM抗体袁37%产生IgG袁还有7%产生IgA遥但这些抗体的变化规律并不完全一致遥有实验表明中和抗体于免疫后4d即可检测到曰IgM抗体是3d即出现袁8d时开始消失曰HI抗体和IgG抗体在免疫后6尧7d可检出袁但二者的动态变化规律并不完全一致遥同时大量的实验研究证实NDV抗体水平的高低与鸡抗ND的免疫保护作用并不完全一致遥Giambrone渊1985冤发现HI实验剪除抗体时袁鸡群仍能抵抗NDV的攻击袁而Holmes发现用灭活的NDV疫苗肌肉内接种后虽然可产生高滴度的血清抗体袁但保护作用却很差遥粘膜免疫的发生部位渊消化道和呼吸道冤袁正是NDV入侵的门户袁因此粘膜免疫在新城疫的免疫中具有重要的作用遥在体液抗体可被首次检出的同时袁鸡的上呼吸道和肠道粘膜出现分泌性抗体袁上呼吸道和肠道的免疫球蛋白主要是IgA袁其次是IgM和IgG遥在经眼感染而不是经胃肠道感染之后袁哈德氏腺出现了相似的分泌遥国内外学者对ND粘膜免疫做了大量的研究遥ND活苗经过饮水袁滴鼻和喷雾等接种途径袁能够刺激机体粘膜免疫袁诱导局部合成和分泌IgA抗体曰而灭活苗接种后不出现IgA和IgM袁仅有高水平的循环抗体IgG遥Beard渊1967冤证明ND弱毒疫苗鼻内或气雾接种可增强呼吸道的抵抗力遥因此袁粘膜免疫现在是鸡新城疫疫苗主要的免疫途径之一遥细胞免疫应答在抗病毒感染中起到非常重要的作用遥感染NDV的最初免疫反应是受细胞调理的袁并可能于感染或疫苗接种后2尧3d很快检出遥这正是免疫鸡在测出抗体之前即有抵抗攻毒的早期保护作用的原因所在遥主要以活化的CD8T细胞分泌具有抗病毒特性的细胞因子渊IL-1尧IL-2尧IFN-γ尧TNF-α尧IL-6等冤产生保护性免疫应答或者通过CD4和CD8分子分子清除病毒感染细胞的细胞毒性功能遥关于ND引起的T细胞介导的细胞免疫应答的研究袁还存在一些争议遥有人认为细胞免疫应答对于抗NDV强毒感染的作用非常有限袁也有人认为细胞免疫在抗NDV感染中发挥重要作用遥通过实验模型证实袁虽然T细胞缺陷型鸡产生中和抗体和HI抗体的能力未受影响袁但对NDV的易感性比对照鸡大100倍袁攻毒保护率显著降低遥刘胜旺等采用流式细胞仪检测研究发现袁鸡接种新城疫Lasota疫苗后外周血和脾脏中T淋巴细胞数量增加遥Marino渊1987冤对实施了法氏囊切除术的鸡免疫新城疫疫苗后袁HI抗体效价和中和抗体效价都低于可产生保护的临界值袁细胞免疫很高袁但能抵抗ND强毒攻击遥Reynold等渊2000冤在通过SDS处理NDV使B新城疫的免疫应答特点及我国现有疫苗研究进展宋新刚袁邢莹袁叶阳渊哈尔滨元亨生物药业有限公司袁哈尔滨150025冤摘要院综述了新城疫的体液免疫应答尧粘膜免疫应答和细胞免疫应答三类免疫应答特点袁及我国现有常规疫苗的作用和特点袁以促进新城疫疫苗的研究和疫苗的合理应用遥关键词院新城疫曰新城疫病毒曰免疫应答曰疫苗曰研究进展DOI:10援3969/J.ISSN援1671-6027援2013援10.026
鸡新城疫病毒ND-xx08株F基因的克隆及分析
第２７卷 Ｖｂｌ＿２７ 第１期 ＮＯ．１ 新乡学院学报：自然科学版 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｘｉｎｘｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ ２０ｌ０年２月 Ｆｅｂ．２ＯｌＯ
鸡新城疫病毒ＮＤ—ｘｘ０８株Ｆ基因的克隆及分析
王选年 ～，贾文科。，银梅 ，岳峰 ，田献礼
（１．新乡学院生命科学与技术系，河南新乡４５３００３；２．河南科技学院动物科学学院，河南新乡 ４５３００３；３．河南农业大学牧医工程学院，郑州４５０００２）
摘要：新城疫病毒（ＮＤＶ）ＮＤ．ｘｘ０８毒株经１０ ｄ龄ＳＰＦ鸡胚增殖后，提取其基因组ＲＮＡ并反转录成ｃＤＮＡ， 用ＮＤＶ Ｆ基因特异性引物，经ＰＣＲ扩增后获得与Ｆ基因预期大小一致的ＤＮＡ片段。将ＮＤＶ Ｆ基因片段 克隆到ｐＭＤｌ８．Ｔ载体上，并进行ＥｃｏＲ Ｉ和Ｈｉｎｄ ＩＩＩ双酶切鉴定和测序鉴定。结果显示，ＮＤ－ｘｘ０８毒株Ｆ基 因片段的长度为ｌ ６６２ ｂｐ，共编码５５４个氨基酸，Ｆ蛋白的裂解位点为” Ｒ．Ｒ．Ｑ．Ｋ．Ｒ．Ｆｍ，是典型强毒株氨 基酸序列结构。将ＮＤＶ ＮＤ．ｘｘ０８株Ｆ基因的４７ ｂｐ到４２０ ｂｐ序列与新城疫病毒基因型Ｉ至基因型Ⅸ毒株的 相同序列绘制病毒基因进化树，显示ＮＤ．ｘｘ０８分离株属于基因ＶＩＩｅ型。将ＮＤＶ ＮＤ—ｘｘ０８株Ｆ全基因与国内 外发表的２３株ＮＤＶ Ｆ基因核苷酸序列和氨基酸序列的同源性比较分析，结果表明，其核苷酸序列的同源 性在８２．７％～９７．８％之间，氨基酸同源性在８７．５％～９７．７％之间。 关键词：鸡；新城疫病毒；ＮＤ．ｘｘ０８毒株；Ｆ基因 中图分类号：￥８５５．３ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７４－３３２６（２０１０）０１－００４３－０４
Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｆ Ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ
ＮＤ．ｘｘ０８ Ｉｓｏｌａｔｅ
新城疫病毒作为疫苗载体的研究进展
新城疫病毒作为疫苗载体的研究进展
毛伟 ，葛金英。，李培锋 （１．内蒙古农业大学动物科学与医学学院，内蒙古呼和浩特０１００１８；２．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨 １５０００１）
新城疫（ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ，ＮＤ）最常侵害家 鸡，也能感染许多其他家禽和鸟，是危害世界养 禽业的重大烈性传染病。如果对禽群进行强制性 的免疫，该病则可得到有效控制，世界各国均在使 用各种新城疫疫苗进行防疫。尽管世界各国均使 用疫苗预防ＮＤ，但到目前为止，该病仍未得到满 意的控制。弱毒苗和灭活苗在安全性、有效性以及 成本费用上都存在一定的缺陷，此外，这两种疫 苗的应用往往造成临床上不能区分免疫鸡群和自 然感染鸡群。为了解决这些问题，许多研究者已把 研究重点集中到ＮＤＶ基因工程疫苗的开发上，如 使用带有遗传标记的基因工程ＮＤ疫苗，就很容 易区分免疫鸡群和自然感染鸡群。特别是可以把 禽类其他病原重要的功能基因以及其他蛋白表达 基因插入ＮＤＶ基因组，从而构建新一代的二价以 及多价的重组新城疫疫苗。 １新城疫病毒形态结构及分子生物学特征 新城疫病毒（ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ，ＮＤＶ）为 不分节段单股负链ＲＮＡ病毒（ｎｏｎ ｓｅｇｍｅｎｔ ｎｅｇａ— ｔｉｖｅ ｓｉｇｌｅ ｓｔｒａｉｎ ｖｉｒｕｓ），本身不能作为ｍＲＮＡ，不带 译制病毒蛋白的信息，必须通过病毒自己的ＲＮＡ 聚合酶转录出一股互补链作为ｍＲＮＡ…。新城疫病 毒的负链ＲＮＡ，一方面转录成ｍＲＮＡ，合成相应 的病毒蛋白成分，另一方面转录成其互补链，再 合成病毒ＲＮＡ链，参与病毒包装 ｊ。 新城疫病毒粒子中心是一个与蛋白质相连接 的单股负链ＲＮＡ所形成的螺旋形核衣壳，外包一 双层脂质囊膜，内衬有一层特殊的Ｍ蛋白，囊膜外
收稿日期：２００８—０３－２２ 作者简介：毛伟（１９８２～），男，在读硕士研究生，主 要研究方向为兽医药理学与毒理学。 通讯作者：李培锋（１９５５一），男，教授，主要研究方向 为兽医药理学与毒理学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｐｅｉｆｅｎｇ＠ｉｍａｕ．ｅｄｕ．１２．１１。 摘要：在综述新城疫病毒（ＮＤＶ）的分子生 物学特征、致病本质、复制机理以及利用反 向遗传操作技术获得ＮＤＶ的基础上，着重 介绍了以ＮＤＶ作为疫苗载体，将报告基因、 功能基因包括传染性法氏裳病毒ＶＰ２基因 及高致病性禽流感病毒ＨＡ基因等插入 ＮＤＶ基因纽不同的位置构建重纽新城疫病 毒，并对外源基因成功表达的研究进展。同 时对ＮＤＶ作为新的疫苗载体表达外源基 因的可行性及未来应用前景进行了初探。 关键词：反向遗传；重组新城疫病毒；疫苗载体； 外源基因 中图分类号：￥８５２．５ 文献标识码：Ａ 文章顺序编号：１６７２—５１９０（２００８）０３—００６３—０４ 综 述 维普资讯 综 述