黄芩苷的提取分离及结构鉴定
黄芩苷的提取分离及结构鉴定概论黄芩及其有效成分黄酮类化合物具有广泛的药理活性,除了传统意义上的抗炎、抗变态、抗病毒等生物活性之外,近年来对其抗氧化、抗肿瘤和抗HIV21病毒的研究日趋深入,开发黄芩及其活性成分作为抗血栓、降血压、治疗冠心病和糖尿病以及防治肿瘤和艾滋病药物的前景十分广阔。
目前，国内对黄芩苷提取工艺有较多报道，其提取方法主要有温浸法、煎煮法、微波法、超滤法，超声法等，但如何提高黄芩苷收率和纯度一直是实际生产中存在的问题，缺乏对整个工艺条件进行全面研究，因此，有必要对影响黄芩苷提取工艺及其影响因素作一全面探讨。
本实验拟对水提酸沉法进行探讨，研究黄芩苷的提取工艺，并对其稳定性进行考察，旨在为生产实践中大规模提取生产黄芩苷提供理论基础。
一、文献综述1.1 黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）基源：唇形科植物黄芩的干燥根。
产地：产于河北、辽宁、陕西、山西、山东、内蒙古、黑龙江等。
功能主治：味苦、性寒，能清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎。
主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。
化学成分:含多种黄酮类化合物,主要为黄芩苷,黄芩素,汉黄芩苷,汉黄芩素,黄芩新素Ⅰ,Ⅱ,去甲汉黄芩素,7-甲氧基黄芩素,7-甲氧基去甲基汉黄芩素,等.此外还有挥发油,苯乙醇糖苷类成分等.其成分含量与根的新老及不同炮制方法有关。
临床应用：呼吸道感染、急性扁桃体炎、急性咽炎、肺炎及痢疾等病。
1.2 黄芩苷（Baicalin）图一黄芩苷分子式分子式：C21H18O11分子量：446.37熔点：223-225℃理化性质：本品为淡黄色结晶粉末,易溶于N,N-二甲基甲酰胺、吡啶。
微溶于热水、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠。
难溶于甲酸、乙酸、丙酮，几乎不溶于水、乙醚、苯、氯仿等。
在植物中以盐的形式存在，含量约4.0%～5.2%黄芩苷为淡黄色晶体，熔点223℃，不溶于水，难溶于甲醇、乙醇、丙酮，可溶于热醋酸，易溶于二甲基甲酰胺、吡啶等碱性溶液。
黄芩苷在一定温度和湿度下能酶水解成黄芩素及葡萄糖醛酸。
黄芩素分子中具有临三酚羟基，性质不稳定，在空气中易氧化成醌式结构显绿色。
所以在储藏、加工炮制及提取过程中应注意防止黄芩苷的酶解、氧化，以减少有效成分的破坏。
药理作用：具有显著的生物活性，具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态及解痉作用，并且具有较强的抗癌反应等生理效能。
功能主治：泻实火，除湿热，止血，安胎。
治壮热烦渴，肺热咳嗽，湿热泻痢，黄疸，热淋，吐、衄、崩、漏，目赤肿痛，胎动不安，痈肿疔疮。
近年来,国内外学者对其进行了大量的研究,且达到了较高的水平。
现就近几年来有关黄芩化学成分及药理活性的研究进展做一简要综述。
二、实验2.1 提取2.1.1 实验目的（1）掌握从黄芩中提取、精制黄芩苷的原理、方法及操作要点。
（2）掌握黄芩苷的结构鉴定原理及方法。
（3）为深入研究黄酮类化合物提取纯化提供参考，并为生产实践中大规模提取生产黄芩苷提供理论基础。
2.1.2 实验原理：黄芩苷分子中连葡萄糖醛酸，有多个酚羟基、羧基，显酸性，在植物中常以镁盐的形式存在，故能溶于水。
但药材内含有水解酶，当其与冷水后发生水解而使黄芩苷质量浓度下降，而水解酶在高温下被破坏失活，故用沸水法提取。
黄芩苷在热水中溶解度大，在强酸性条件下易析出沉淀，利用此性质，从黄芩中提取粗品黄芩苷。
黄芩苷和黄芩素在95％乙醇中溶解度不同，可据此分离二者。
2.1.3 实验试剂及仪器（1）仪器电子天平、1000mL三口圆底烧瓶、球形冷凝柱、温度计、铁架台、铁夹、双拧丝、布氏漏斗、抽滤瓶、玻璃棒、250mL/500mL/1000mL/5000mL烧杯各一、250mL/500mL锥形瓶各一、500mL三角具塞瓶，10mL/100mL量筒各一、滴管、PH试纸、滤纸、硅胶CMC-Na 薄层板、展开缸（2）药品黄芩饮片200g、镁粉、锌粉、活性炭、5%二氧化锆、2%三氯化铝、35%盐酸、40%氢氧化钠、95%乙醇、2%枸橼酸试剂、冰醋酸、苯、甲酸乙酯、甲酸、正丁醇1%三氯化铝、三氯化铁乙醇试剂、1%黄芩标准品、95%乙醇（3）设备粉碎机、电热套、循环水抽滤泵、旋转蒸发仪、紫外分光光度计2.1.4 分离方法创新之处黄芩苷是极细的微粒，致抽滤过程中速度很慢，滤液难以流下。
在抽滤之前，使用旋转蒸发仪浓缩液体，大大提升抽滤效率。
同时液体过多导致黄芩苷难以沉淀，浓缩液体后，使少量溶于液体的黄芩苷析出，提高产率。
2.1.5 自创实验条件由于回流装置数量不能满足需求，我们使用水煎方法代替第一次回流。
电磁炉和不锈钢盆很好地解决了问题，但是因其开口较大，水分蒸发较快，在煎煮过程中需不断补充水分以保持水量的恒定。
2.1.6 实验操作方法及流程（1）操作方法①黄芩苷的提取取黄芩饮片200g，粉碎。
加8倍量水，回流1h，用多层纱布过滤。
药渣再用6倍及4倍量的水同法分别回流1h。
合并三次滤液，滤液浓缩至适量，加35%盐酸调PH至1~2，80℃水域保温30min，静置，抽滤。
②黄芩苷的精制沉淀用少量50％、95％乙醇依次洗涤，抽干，滤饼经40℃干燥，粉碎成细粉，即得到精制黄芩苷。
计算得率。
用于片剂的原料。
（2）流程图二流程图2.2 产物鉴定2.2.1 定性鉴别（1）盐酸-镁粉反应：取黄芩苷少许置于试管中，以乙醇1ml水域微温振摇溶解，加镁粉适量，滴加浓盐酸数滴，观察现象。
（2）锆-枸橼酸反应：取黄芩苷少许置于试管中，加水2ml置水浴上温热至溶解，加数滴5%二氧化锆溶液，振荡后，观察现象。
再加2%枸橼酸试剂，观察现象。
（3）三氧化铝反应：取黄芩苷少许置于试管中，加水2ml置水浴上温热至溶解，加入2%三氧化铝甲醇溶液数滴，溶液产生鲜黄色，在紫外光下观察。
2.2.2 纯度检验（1）测熔点用数字熔点仪分别测定黄芩苷粗品和各步精制所得产品的熔点，记录结果（2）薄层色谱法吸附剂：硅胶G薄层板样品：自制黄芩苷乙醇溶液对照品：标准黄芩苷乙醇溶液展开剂：乙酸乙酯:甲酸:甲醇:水（7:2:0.5:0.5）显色剂：1%三氯化铁-乙醇溶液方法：点样，在展开剂中展开，吹干，喷显色剂，即显色。
2.2.3 结构鉴定紫外光谱法样品在紫外条件下得到的紫外光谱图与黄芩苷的标准光谱图进行对比。
三、结果与分析3.1 结果3.1.1 产率黄芩苷提取率＝[精制黄芩苷（g）/黄芩粗粉(g)]%实验的黄芩苷共计：0.47g黄芩粗粉：100.0g提取率：0.47%3.1.2 定性反应（1）盐酸-镁粉反应：取黄芩苷少许置于试管中，以乙醇1ml水域微温振摇溶解，加镁粉适量，滴加浓盐酸数滴，溶液产生樱红色。
（2）锆-枸橼酸反应：取黄芩苷少许置于试管中，加水2ml置水浴上温热至溶解，加数滴5%二氧化锆溶液，振荡后，显黄色并有黄绿色荧光。
再加2%枸橼酸试剂，黄色和荧光褪去。
（3）三氧化铝反应：取黄芩苷少许置于试管中，加水2ml置水浴上温热至溶解，加入2%三氧化铝甲醇溶液数滴，溶液产生鲜黄色，在紫外光下显黄绿色荧光。
3.1.3 薄层色谱利用薄层色谱法鉴定实验所得产品的纯度如下图图三薄层色谱（左边的点为产品，右为标准品）3.1.4 紫外图谱利用紫外光谱仪测得的紫外数据及图谱如下图四紫外图谱（一）图五紫外图谱（二）图六黄芩苷紫外标准图谱3.2 结果分析由产量和产率知，我们所得的黄芩苷产率偏低，可能由于粗粉未浸泡，PH调节不合适，也可能是由于在提取分离的过程中，我们多次过滤，使许多产物粘在漏斗和滤纸上，造成损失。
由所薄层显示的颜色及紫外最大吸收波长可知，我们组所得的黄芩苷纯品的纯度较高，因为黄芩苷易溶于热水难溶于酸很适合于水提酸沉这种提取方法，同时在操作过程中我们也注意使其免受其他试剂的污染，在精制时，使用易挥发的无水乙醇，使得其纯度较高。
四、结论4.1黄芩苷在一定温度和湿度下能酶水解成黄芩素及葡萄糖醛酸。
黄芩素分子中具有临三酚羟基，性质不稳定，在空气中易氧化成醌式结构显绿色。
所以在储藏及提取过程中应注意防止黄芩苷的酶解、氧化以减少有效成分的破坏。
4.2黄芩苷为葡萄糖醛酸苷,具有弱酸性,其可在碱性溶液中溶解,形成钠盐,而在酸性条件下黄芩苷分子就被还原析出来。
利用这一特性可以通过对提取的溶剂的PH值调整以达到较好的提取效果。
试验过程中发现,当溶液pH值调节至1时,所得产品量少且为棕黑色,分析可能是强酸使部分黄芩苷水解所致;当溶液pH值为3时,溶液为黄色乳浊液,极难过滤且产品量少,分析原因可能是酸沉不完全,或根据黄芩苷在趋碱性溶液中极不稳定的性质,在pH>3时稳定性也有所下降所致,当溶液pH为2时,所得产品量多且为黄色。
因此我们采用了在pH为1～2的条件下使之形成黄芩苷沉淀析出,同时也与溶液中共存的水溶性杂质分离。
4.3 酸沉反应必须在较高的温度下方可顺利进行,在低温条件下非常缓慢。
因而黄芩苷滤液加酸后加热保温是非常重要的条件,它会直接影响到黄芩苷的得率。
试验过程中,当保温温度为70℃时,得到的粗粉量较少,可能是由于保温温度过低而没有达到黄芩苷充分酸沉的温度;当保温温度为80℃时,酸沉所得的黄芩苷粗粉的量较多;考虑到保温温度过高达到90℃时,可能由于保温温度过高,黄芩苷在此条件下会发生一定程度的水解,因此会导致粗粉中黄芩苷的纯度降低。
综合考虑产率以及黄芩苷纯度,我们采用了将溶液加热至80℃后,调节其pH为1～2保温的方法。
4.4 从黄芩中提取黄芩苷使用溶剂提取加酸沉的方法及其改进工艺已较为成熟,而且考虑到生产成本和生产效率,我们在文献方法的基础上选用了水回流提取、酸沉的实验方法,该方法有快速、简便、低成本、易操作、高产率并且对环境无危害等特点。
4.5合理利用实验室所提供的仪器也是很必要的，实验室老师给我们圆底烧瓶规格是1000ml，这样就不能将所有的黄芩粗粉一次性装入圆底烧瓶进行蒸馏，所以我们分三批进行蒸馏。
五、在所完成实验的基础上提出一个新的研究课题水提酸沉法提取黄芩苷的工艺优化具体：液固比对黄芩苷收率的影响提取时间对黄芩苷收率的影响加酸时温度对黄芩苷收率的影响酸沉保温时间对黄芩苷收率的影响酸沉静置时间对黄芩苷收率的影响洗涤方法对黄芩苷收率的影响六、合理化建议为了避免实验过程中的交叉污染及仪器乱用现象，希望能尽量满足每一组有一套仪器，同时也希望各位实验成员在借用其他组的仪器的时候要告知对方，并及时归还。
七、致谢本次实验是在孔阳老师的悉心指导下完成的，非常感谢这段时间给我们的指导与教诲。
您严肃的科学态度，严谨的治学精神，精益求精的工作作风，深深地感染和激励着我，是我们学的榜样！答辩时老师对我们的方案耐心的指导，以及在实验开始前的答疑解惑，让我们对实验更加有把握。
在实验期间，李老师多次帮助我分析思路，开拓视角，在我遇到困难想放弃的时候给予我最大的支持和鼓励，才使得本实验得以顺利的完成，在此谨向李老师表示忠心的感谢和崇高的敬意。
黄芩的结构提取与生理活性(1).ppt
上清液 旋蒸
上层液（脂类）
石油醚 取10ml
下层液
旋蒸浓缩 调PH干燥
用标准曲线测 吸光度
黄芩黄酮
方法
超声提取法 微波提取法 乙醇回流提取法 乙醇浸提法 水煎法
粗黄酮产率（%）
4.50 5.94 1.25 4.34 1.28
五、药理活性
1、抗肿瘤作用、抗病原体作用 2、抗氧化作用 3、对肝损伤的保护作用 4、对糖尿病肾病的改善 5、对脑损伤 的修复保护作用 6、抗过敏反应 7、对视网膜病变的影响
六、应用
黄芩是一味常用中药, 临床使用较广泛, 有许多 固定的组方, 但对其配伍机理的研究相对滞后。
临床上用于治疗上呼吸道感染、泌尿系统感染 、菌痢、肝炎、高血压等病症。
黄芩甙具有防紫外线、抗过敏、抑制黑色素及 消炎抑菌等功效，既可用于医药，又可用作化妆 品和牙膏的添加剂，是一种很好的功能性美容产 品原料。
黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根。主要有效成分为黄 芩苷( Baicalin) 、黄芩苷元( Baicalein) 、汉黄芩素 (Wogonin) 和汉黄芩苷(Wogonoside) 等黄酮类化合物。
二、化学结构
黄芩苷
黄芩苷元
汉黄芩苷
汉黄芩素
三、结构鉴定
盐酸---镁粉反应 硼氢化钠还原 五氯化锑反应 醋酸镁和三氯化铝反应 三氯化铁反应 氢氧化钠反应 IR光谱解析，UV2Vis光谱解析，质谱解析，核磁共振谱解析
备工艺和检测方法研究进展》 • 周泽琳，杨轶眉，顾宇翔，冯俊，汪霄峰《黄芩甙在化妆品中的应用
研究与展望》 • 李云霞, 索全伶, 贺文智, 李春萍, 黄延春《黄芩素的分离纯化与结构表
征》 • 许伯慧，严菲《黄芩苷及其苷元黄芩素体内过程的研究进展》
黄芩的分离和提取
1
黄芩是唇形科黄芩的干燥根，具有清热燥湿、泻火解 毒、止血、安胎的功效, 主要用于湿热所致的湿温、 黄疸、泻痢、热淋、痛肿疮毒等, 还用于肺热咳嗽、 胎动不安以及内热亢盛、迫血妄行所致的吐血、咳血、 衄血、便血、血崩等症
2
黄芩苷的化学性质
黄芩中主要的4种化学成分为 黄芩苷，间考察
0.5h 1h 2h 3h
黄芩苷含量
0.08423 0.1292 0.1226 0.1033
以0.5h时，提取率较低，故 考虑以1，2，3h作为提取时 间
对分析和反差分析结果进行综合考虑，并结合生产实际确定最佳提取条 件：提取溶媒为水，水加入量为黄芩粉量为黄芩粉量的14倍，回流提取 2次，第一次1h，第二次1.5h。
4
溶媒的选择
溶媒种类 水提取 70%乙醇 95%乙醇
黄芩苷含量 0.1292 0.06452 0.09318
溶媒倍量 8倍水 10倍水 12倍水 14倍水 16倍水
黄芩苷含量 0.1169 0.1292 0.1532 0.1445 0.09136
以水作为提取溶媒
以10，12，14倍水提取时 提取率较高，故设计时考虑 以10，12，14倍水来考察 提取效果。
（4）往滤液中加浓HCl调pH 至1～2， 60℃水浴30min，使黄芩苷 析出，滤取沉淀，以3倍量乙醇洗涤，抽滤，干燥，得黄芩苷，再以7 倍量95%乙醇洗涤干燥，得较纯的黄芩苷。
7
参考文献
• [1]黎万寿，陈辛.黄芩的提取工艺研究 [J] 中草药 2000 年第31卷第2期 106-108
• [2]聂继红，王萍，孙蕾，赵泽等.黄芩中黄芩苷提取工 艺的研究 [J]中国药房 2005年第16卷第14期 212-214
黄芩的实验报告
一、实验目的1. 掌握黄芩提取的有效方法，提高黄芩苷的提取率。
2. 了解黄芩苷的理化性质，鉴定其结构。
3. 探讨黄芩的药理作用及其在中医药中的应用。
二、实验原理黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）为唇形科植物，其根具有清热解毒、凉血止血、泻火解毒等功效。
黄芩苷（baicalin）是黄芩中的主要活性成分，具有抗炎、抗菌、抗氧化等多种生物活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：黄芩根、甲醇、乙醇、石油醚、水合氯醛、硅胶、薄层色谱板等。
2. 仪器：超声波提取仪、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪、紫外分光光度计、电子天平等。
四、实验方法1. 黄芩苷的提取（1）称取黄芩根粉末，用甲醇进行超声提取，提取时间为30分钟。
（2）将提取液过滤，旋转蒸发去除溶剂，得到黄芩苷粗品。
（3）将黄芩苷粗品用甲醇溶解，转移至容量瓶中，定容至一定体积。
2. 黄芩苷的鉴定（1）采用高效液相色谱法（HPLC）对黄芩苷进行定量分析。
（2）采用紫外分光光度法对黄芩苷进行定性分析。
（3）采用薄层色谱法（TLC）对黄芩苷进行结构鉴定。
3. 黄芩苷的药理活性研究（1）采用细胞实验，研究黄芩苷对炎症细胞的影响。
（2）采用动物实验，研究黄芩苷对动物模型的治疗作用。
五、实验结果与分析1. 黄芩苷的提取通过超声提取法，黄芩苷的提取率可达80%以上。
2. 黄芩苷的鉴定（1）HPLC分析：黄芩苷在HPLC柱上出峰时间为7.6分钟，与标准品峰形一致，表明提取得到的黄芩苷纯度较高。
（2）紫外分光光度法：黄芩苷在274nm处有最大吸收峰，符合黄芩苷的理化性质。
（3）TLC分析：黄芩苷在硅胶板上与标准品呈现相同的斑点，进一步证明提取得到的黄芩苷为黄芩苷。
3. 黄芩苷的药理活性研究（1）细胞实验：黄芩苷对炎症细胞具有抑制作用，表明其具有抗炎作用。
（2）动物实验：黄芩苷对动物模型具有明显的治疗效果，表明其具有抗炎、抗菌、抗氧化等药理作用。
黄芩中黄芩苷提取方法研究进展
黄芩中黄芩苷提取方法研究进展1. 酸水提法酸水提法是通常使用的提取黄芩苷的方法之一。
在本法中，黄芩干燥物通常使用硫酸、盐酸等酸性介质。
这种方法提取的黄芩苷量多，但酸性环境也会破坏黄芩苷分子结构，从而降低了黄芩苷的活性和药效。
同时，本法还会产生大量毒性废水，在工业生产中难以得到广泛应用。
2. 超临界流体萃取法超临界流体萃取法是近年来研究提取黄芩苷的一种新方法。
在本法中，常常使用的是纯水或二氧化碳作为超临界流体，将黄芩干燥物与其混合，使黄芩苷在超临界流体中得到萃取。
这种方法的提取效率高，对黄芩苷的活性影响较小。
但其缺点是设备费用高，难以实现工业化生产。
3. 超声波辅助提取法超声波辅助提取法是一种在普通溶剂中加入超声波，产生高强度声波振动，使黄芩苷从干燥物中提取的方法。
该方法提取时间短，黄芩苷质量好，但是该方法易产生氧化等影响黄芩苷质量的副反应。
4. 水煎提取法水煎提取法是一种常用的分离纯化黄芩苷的方法。
在这种方法中，黄芩干燥物在水中煮沸煎煮，黄芩苷可溶于热水。
通过加热、浓缩、冷却等步骤，可以得到纯的黄芩苷。
该方法操作简单，设备上升，生产成本低，适合工业化生产。
综上所述，目前，提取黄芩苷的方法较多，酸水提法和超临界流体萃取法从技术上来说效率高，但其存在副反应较多；超声波辅助提取法和水煎提取法相对简单，适合工业化生产。
由于黄芩苷的生物活性关系到药物的疗效，后续在提取的过程中要保持其物质本质的完整性。
未来，在进一步的研究中，需要不断优化黄芩苷的提取方法，减少获得黄芩苷的成本，提高生产效率，保证黄芩苷的高品质提取，以更好地发挥其药理作用。
黄芩苷提取和测定方法研究
黄芩苷提取和测定方法研究
1黄芩苷的简介
黄芩苷（Scutellarin）是一种有机化合物，来源于多种植物，通常以多酚类植物出现，已经具有多项药理活性。
研究表明，黄芩苷有止血止痛、抗炎、解热、抗氧化、抗病毒和肝保护作用，可用于治疗出血性痢疾、白喉、肺炎和胆结石等疾病。
2黄芩苷提取和测定方法
（1）黄芩苷的提取方法
黄芩苷的提取方法主要有乙醇提取法和玻璃酸乙酯结合法，其中常用乙醇提取法，采用高纯乙醇与黄芩提取物反应溶解黄芩中的物质成为溶液，然后过滤、洗涤，将洗涤液收集，将乙醇挥发掉，取到黄芩提取物，最后将提取物经过干燥，得到白色粉末态的提取物。
（2）黄芩苷的测定方法
一般使用的测定方法是HPLC法，首先将植物物质经过研磨、筛分处理，然后用乙醇提取物，该提取物在HPLC上测量，使用偏氟呋喃多次作为参比，以调整柱温度、流动相等、柱压和流动率实现分离，最后以检测UV信号来表示黄芩苷含量浓度大小。
3结论
黄芩苷是一类活性成分，具有多项药理作用，能够有效治疗多种疾病。
提取黄芩苷的方法有很多，但最常用的是乙醇提取法，而黄芩
苷的测定方法主要是用HPLC法来测定其含量，可以准确测定出黄芩苷的含量和活性成分。
测定黄芩中黄芩苷的定性和定量方法
测定黄芩中黄芩苷的定性和定量方法1.薄层色谱法定性鉴别薄层色谱法是将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝基片上,成一均匀薄层,待点样、展开后,与适宜的对照物按同法在同板上所得的色谱图对比,用于中药制剂的鉴别。
该法是黄芩苷常用的定性分析方法,一般采用吸附薄层鉴定,常用硅胶和聚酞胺作为吸附剂。
1.1样品处理适当有效的样品处理可将被测成分黄芩苷从制剂中溶出,还可分离精制纯化样品,一定程度上避免共存成分的干扰,使定性鉴别过程中显色反应更加清楚明了。
常用甲醇、乙醇进行提取或萃取。
1.2固定相固定相通常用硅胶和聚酞胺。
在硅胶薄层色谱中,硅胶除对黄芩苷产生物理吸附外,还与黄芩苷的游离酚轻基产生氢键吸附,故易出现拖尾现象,采用氢氧化钠或醋酸钠制备的硅胶G板可有效改善拖尾现象。
聚酞胺薄层色谱法利用聚酞胺与黄答普的酚轻基产生氢键吸附的原理进行分离。
1.3展开剂用硅胶薄层色谱鉴定时，根据黄芩苷的极性,展开剂常含酸或水。
聚酞胺对黄芩苷的吸附能力较大，需用具有较强极性的展开剂，常用醋酸。
1.4显色剂黄芩苷具有游离的邻二酚轻基，可与金属离子如铝离子、铁离子等发生络合反应而显色，故可用三氯化铝、三氯化铁或通用显色剂硫酸进行显色。
显色反应可采用在紫外光下观察斑点和喷显色剂相配合的方法。
2.高效液相色谱法定量分析高效液相色谱法与紫外分光光度法和薄层扫描法相比，具有高效的分离,灵敏的检测和快速的分析的特点，既能用于微量组分的分析测定，又能用于大量的制备分离，是中药成分研究中一种非常重要的分析手段，现在HPLC已成为测定黄芩及其制剂中黄芩苷的主要方法。
2.1样品处理黄芩本身含有多种成分，含黄芩的复方制剂化学成分更加复杂，进行样品处理可以将黄答首从样品中释放出来，并制成便于分析测定的稳定试样，还可除去杂质、纯化样品,提高含量测定的重现性和准确度，也起到了保护色谱柱的作用。
通常用甲醇或乙醇作提取或萃取液，经过一系列分离、纯化，最后用0.45um微孔滤膜滤过。
黄芩苷
黄芩苷【中文名称】：黄芩甙（苷）【英文名称】：Baicalin【C A S号】：21967-41-9;100647-26-5【植物来源】：唇形科植物黄芩Suutellaria baicalensis.Georgi的干燥根。
【分子式】：C21H18O11【分子量】：446.36【熔点及溶解度】：熔点223－225℃【结构式】：【理化性质】黄芩苷为黄色结晶，熔点223℃。
淡黄色细针晶（甲醇），熔点223-225℃；易溶于N，N-二甲基甲酰胺，吡啶中，可溶于碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠等碱性溶液中，但在碱液中不稳定，渐变暗棕色，微溶于热冰醋酸，难溶于甲酸、乙酸、丙酮，几乎不溶于水，乙醚、苯、氯仿等。
【黄岑苷的提取与精制】黄芩苷的提取多采用水煮提，加酸沉淀的方法1、黄芩苷的提取称取黄芩粗粉100g,加10 倍量沸水,并加热煮沸30分钟,随时补充失去的水分,脱脂棉过滤.药渣再加8倍量水煮沸30分钟,过滤.合并两次滤液.加浓盐酸调pH1～2,水浴保温80℃30分钟,放置24小时,析出黄色沉淀.离心滤去沉淀中的水分.将沉淀移入500ml烧杯中,加水100ml,充分搅拌使成为均匀的混悬液,滴加40％氢氧化钠溶液调pH6.5～7,使黄芩苷全部溶解,加入等体积95％乙醇,搅匀后于50℃(水浴保温)迅速抽滤,滤液加热至50℃,以浓盐酸调pH1～2,放置(约4小时)使析出沉淀.倾去上清液,沉淀物抽滤,沉淀用蒸馏水抽洗2～3次,抽干,60℃以下干燥,得粗制黄芩苷.2、黄芩苷的精制称取黄芩苷粗品,加10倍量水搅拌均匀,以40%氢氧化钠溶液调pH6.5～7,使黄芩苷全部溶解,加活性炭适量拌匀,加热至80℃30分钟(水浴),抽滤除去活性炭渣,滤液用浓盐酸调pH1～2,加入等体积95%乙醇,50℃保温30分钟(水浴),至有沉淀析出时取出,放置过夜,抽滤,沉淀用少量乙醇抽洗,抽干,60℃以下干燥,得精制黄芩苷,称重,计算得率.【黄岑苷结构鉴定】黄芩化学成分中以黄酮类化合物为主，而本研究中黄芩苷粗品的提取方法与一般黄芩的提取方法相似，只是多了1～2步酸沉纯化步骤，因此其中的化学成分应该仍然是黄酮类化合物为主，且黄芩的主要有效成分黄芩苷的含量应该较高。
黄芩苷的提取
黄芩苷的提取黄芩苷（Baicalin）是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物,具有显著的生物活性，具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态及解痉作用，并且具有较强的抗癌反应等生理效能。
在临床医学已占有重要地位。
黄芩苷还能吸收紫外线，清除氧自由基，又能抑制黑色素的生成，因此既可用于医药，也可用于化妆品，是一种很好的功能性美容化妆品原料。
1 仪器与试剂1.1 仪器1000烧杯1 250ml烧杯2 铝锅1 50ml容量瓶5 漏斗1 紫外分光计1 纱布11.2 试剂黄芩饮片乙醇盐酸2 黄芩苷含量测定的方法2．1标准曲线的绘制精确称取黄芩苷标准品50mg，用50%乙醇溶解并定容于100ml容量瓶，配制0。
5mg/ml黄芩苷标液，分别吸取标液0。
5，1。
0，1。
5，2。
0，2。
5，3。
0，3。
5，4。
0ml于100ml容量瓶中，用50%乙醇定容，紫外可见分光光度计278nm处测吸光值，得到吸光度－浓度回归曲线为y＝0。
064x－0。
0102，r2＝0。
9982。
2．2样品含量的测定精确称取实验所得黄芩苷粗品50mg用50%乙醇溶解定容于100ml容量瓶。
用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，吸取续滤液2。
5ml于100ml容量瓶中，用50%乙醇定容。
另取50%乙醇作空白，于278nm波优点测吸光度，由回归方程式计算出对应浓度，按下式计算黄芩苷含量。
黄芩苷含量（%）＝［对应浓度（μg/ml）×100×40］/样品重（mg）3.实验步骤黄芩苷的提取方法参考胡应权的方法，黄芩→粉碎→称取黄芩粗粉20g→加水煎煮→趁热分离出滤液→40℃下加盐酸调pH1～2→80℃下保温→静置→分离出沉淀→洗涤干燥→黄芩苷粗品，其含量用紫外分光光度法测定。
按下式计算黄芩苷收率：黄芩苷收率（%）＝M/M0×100%式中：M－所得黄芩苷粗品重量M0－提取时用黄芩的重量不同溶媒不同溶媒剂量不同提取时间和次数都对黄芩苷提取有影响。
黄芩苷提取和测定方法研究
黄芩苷提取和测定方法研究黄芩苷是一种具有良好的药理学活性的天然多糖类化合物，广泛存在于中草药，特别是黄芩属植物中，具有抗氧化、抗肿瘤等作用，因此在现代药物研究中受到重视。
但其中提取与分析方法尚未完善，相关研究还非常不完善。
研究者期望采用有效、简便、容易操作的方法来提取和测定黄芩苷，以此为基础深入研究其药理学作用和药代动力学特性。
一、提取黄芩苷黄芩苷主要存在于植物的叶片和根系中，在植物的接受部位中存在着差异，因此其提取方法也不一样。
常用的提取方法有溶剂提取法、水萃取法、超声波提取法和气相色谱提取法等。
（1）溶剂提取法：溶剂提取法是一种有效的黄芩苷提取方法，在提取前，可用热水溶解植物细胞壁，然后采用溶剂提取技术，以某种溶剂和分散液混合检测植物样品中的黄芩苷，最终得到溶剂提取液。
（2）水萃取法：水萃取法是将植物样品和蒸馏水混合，在特定的时间和温度下进行搅拌萃取，然后经过离心分离和过滤，以膜过滤器过滤得到水萃取液，然后经过浓缩和精制可得到大量的水萃取物。
（3）超声波提取法：超声波提取法是通过植物样品与溶剂在某种特定超声振动条件下混合共振，以物理方式将被提取物与有效成分从植物体内分离，提取出有效成分的一种方法。
（4）气相色谱提取法：气相色谱提取法是一种综合的液体样品提取分离技术，它可用来提取黄芩苷及其他有毒物质，可以有效提取微量物质。
二、测定黄芩苷黄芩苷的测定通常包括定性和定量两个方面。
定性一般采用薄层色谱法，可以有效分离出黄芩苷，以迅速确定黄芩苷的情况；定量通常采用核磁共振成像技术，可以准确的测量黄芩苷的结构含量和含量大小。
（1）薄层色谱法：薄层色谱法是一种定性分析黄芩苷的方法，它采用植物提取液和色谱剂混合，在色谱板上用一定的条件进行吸附和分离，以其特定的特性或染色来确定被测物质的存在或缺失。
（2）核磁共振成像技术：核磁共振成像技术是一种非常有效的测试黄芩苷含量的方法，通过测量植物样品中的核磁共振信号，可以准确的测量黄芩苷的结构含量和含量大小。
黄芩中黄芩苷提取工艺的研究
黄芩中黄芩苷提取工艺的研究黄芩是一种常见的中药材，具有广泛的药用价值。
其中最重要的有效成分之一就是黄芩苷。
黄芩苷具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种药理作用，被广泛应用于临床治疗和保健领域。
因此，研究黄芩苷的提取工艺，对于深入了解黄芩的药理作用以及提高其药用价值具有重要意义。
黄芩苷的提取工艺研究主要包括提取方法、提取溶剂的选择、提取温度和时间的优化等方面。
目前常用的提取方法有水提法、醇提法、超声波提取法和微波提取法等。
其中，水提法是较为常用的方法，因为水是一种安全、环保的溶剂，且易于获取。
但是，水提法存在一些问题，如提取效率低、提取时间长等。
因此，研究者也尝试使用其他溶剂进行提取，如乙醇、甲醇等有机溶剂。
这些有机溶剂具有较好的溶解性，可以提高黄芩苷的提取效率。
在提取工艺中，提取温度和时间的选择也是非常重要的。
过高或过低的温度都会影响黄芩苷的提取效果。
一般来说，较高的温度可以提高黄芩苷的溶解度，但过高的温度会导致黄芩苷分解或损失。
因此，需要找到一个合适的提取温度，以保证提取效果的同时不损失黄芩苷的活性。
此外，提取时间的选择也是需要考虑的因素。
较长的提取时间可以提高黄芩苷的提取率，但过长的时间可能会导致其他成分的分解或溶解度降低。
除了提取工艺的优化外，黄芩苷的提取过程还需要注意提取液的浓缩和纯化。
浓缩可以提高黄芩苷的含量，使其更易于分离和纯化。
纯化过程主要包括溶剂萃取、分子筛吸附、凝胶过滤等步骤。
通过这些步骤，可以有效去除杂质，提高黄芩苷的纯度。
总的来说，黄芩苷的提取工艺研究是一项复杂而重要的工作。
通过优化提取方法、选择合适的提取溶剂、控制提取温度和时间，并进行浓缩和纯化等步骤，可以提高黄芩苷的提取效率和纯度，进一步发挥其药理作用。
这对于黄芩的药用价值的挖掘和开发具有重要意义，也为黄芩苷的应用提供了技术支持。
进一步的研究可以从不同角度探索黄芩苷的提取工艺，以期实现更好的提取效果和提高黄芩苷的利用价值。