血常规复检标准操作程序

血常规复检标准操作程序

1.检验目的

核对标本并观察血细胞形态，校正自动化血液分析仪检测中由于各种原因可能出现的结果偏差，确保检测结果的准确、可靠。

2.检验原理和方法

2.1原理：

瑞姬氏染色

2.2方法：

2.2.1人工对仪器报告进行审核(观察警示标志、直方图、散点图等)；鉴定、仪器运行状态是否正常；核对标本标示；对触犯血常规复检规则的血样采用机器重测、稀释后上机重测、适当处理（加温、置换血浆等）后上机重测，配合血液细胞形态学检测标准操作程序进行复检，校正自动化血液分析仪检测中出现的结果偏差，确保检测结果的准确性，从而为临床提供准确可靠的检测结果。

2.2.2显微镜检：

制作血涂片，经瑞姬氏染色后油镜检查与机测结果比较，调整或标注后出具结果。

2.2.2.1首先在低倍镜下（10倍～40倍）进行浏览，观察有无异常细胞和细胞分布情况。

2.2.2.2检查从约50％的红细胞互相重叠区域开始，向红细胞完全散开的区域推移。血涂片较薄的区域，呈羽毛状，为“血片边缘”。

2.2.2.3采用“城垛式”方法检查血涂片，检查内容包括：

1）血小板：检查PLT大小和形态；评估PLT数量是否与检测结果相符。

2）红细胞：观察检查RBC大小和形态。

3）白细胞：WBC分类计数及检查形态；评估WBC数量是否与检测结果相符。

4）其他：检查其它异常如中毒颗粒、Dohle小体、空泡、寄生虫、原始幼稚细胞和异常细胞等。

2.2.3结果登记并录入电脑，标注后出具报告单，必要时电话联系临床。

3.性能特征

血细胞形态学具有直观、简便、经济、细胞学诊断金标准的优势。

4.标本

EDTA－K2抗凝血。

5.仪器和试剂

5.1仪器和用具：

OLYMPUS 厂生产的OLYMPUS CX31显微镜、载玻片、推片、一次性微量吸管、擦镜纸

5.2试剂：

5.2.1 BASO瑞吉氏染液

5.2.2试剂品牌：珠海BASO公司；规格：250ml

5.2.3储存条件：15℃～30℃，避光保存。有效期内使用。

5.2.4以上试剂每瓶试剂开封后应注明启用日期、失效期（开瓶后6个月，或有效期内）并附签名。

5.2.5在使用前确认是否有污染或颜色变化，一经发现，请速更换。如出现冻结现象，将其解冻，混匀后使用，注意防尘。避免和眼睛、皮肤接触，一旦接触，用大量清水冲洗，并适当考虑必要的医疗措施。

6.环境和安全控制

6.1实验室及工作人员一般安全防护措施见《生物安全手册》。

6.2血液样本溢出后，由工作人员立即用75%酒精或含氯消毒液对污染环境和设备进行消毒处理。

6.3如操作人员的皮肤或衣物上沾到了血液及废液，应立即用75%酒精或含氯消毒液消毒处理，再用肥皂水、清水进行冲洗。如果眼睛中溅入血液及废液，用大量清水冲洗并采取必要的医疗措施。

6.4与血液样本接触的一切器皿、仪器组装/拆卸组合零件都应视为污染源，因此操作人员应采取必要的保护性措施如穿戴保护性外套、手套等。不小心接触了这种污染源时，应立即用清水冲洗被污染区域并用75%酒精或含氯消毒液进行消毒处理。

6.5对突发传染性疾病的血液样本的防护应启动特殊的安全防护程序。

6.6 操作使用后的台面、仪器用具表面及环境均应视为污染区并要进行必要的消毒处理。

7.操作步骤

7.1机器复检：

7.1.1 复检条件：

7.1.1.1血细胞计数结果超出仪器线性范围或部分结果出具不完全时：（如检测样本存在有核红细胞、红细胞凝集、小红细胞、红细胞有内容物或疟原虫、血小板聚集、巨型血小板等影响因素导致）；

7.1.1.2本次结果比较前一次结果的差值超过了20%，并与临床治疗不相符时；

7.1.1.3严重黄疸、脂血和肉眼可见的冷凝集标本出现时。

7.1.2复检方法：

7.1.2.1 重复上机检验后出具结果。

7.1.2.2超出机器线性范围的过高值可用稀释后上机检测，乘以稀释倍数出具结果；结果过低或还是不出数，选用手工替代方法计数，必要时涂片粗略估值与临床联系。

7.1.2.3对于严重黄疸、脂血和肉眼可见的冷凝集标本，可采用离心后血浆置换和37度温育至少30分钟后，上机检测校对检测结果并备注相关处理信息。

7.1.2.3.1脂血样本的具体处理方法：

a.血浆置换法：标本3000 r／min离心5 min，用定量加样器将上层血浆缓缓定量取出，去除乳糜血浆后的标本再加入等量生理盐水或稀释液，颠倒混匀8～10次后再次上机测定，记录血浆置换后标本的结果；视标本乳糜严重程度，可用同样的方法置换第二次或多次血浆，并测定每次置换后的血细胞结果。

b.公式校正法：计算公式：HGB修正值= HGB修正前一(HGB乳糜血血浆一HGB 乳糜血血浆×HCT修正前)，同时对MCH和MCHC进行校正，MCH修正值= HGB修正值／RBC修正前；MCHC修正值= HGB修正值／HCT修正前。

7.1.2.3.2 PLT聚集样本的具体处理方法：

首次出现PLT计数<100*109/L或仪器出现血小板聚集（PLT Clump？）报警信息，或血小板直方图异常（PLT Abn Distribution）的提示，可用荧光血小板染色（PLT-F）通道复检并涂片镜检；如镜检结果为血小板聚集，PLT-F复检后报警消除且结果纠正可发送报告；如PLT-F 复检后仪器报警未消除或结果未纠正，可视以下情况予以纠正：

a.怀疑为冷凝集标本时，可观察标本外观，严重的冷凝集现象肉眼可见试管壁出现细沙样颗粒，弱冷凝集时可将标本置于4℃冰箱环境下3-5min，即可肉眼发现，也可将少许标本滴于玻片上在显微镜下查看。此时，需采用水浴法（在 37℃的温箱中孵育30~60min）处理消除干扰后再进行检测。

b.怀疑为EDTA依赖性假性血小板减少，或镜检有“血小板卫星现象”，可换用非EDTA 抗凝剂进行重新计数，比如枸橼酸盐，并抽血立即送检。枸橼酸钠抗凝管(1∶9)的PLT计数

值校正公式: 其中：A为枸橼酸钠(1∶9)抗凝管所测得的PLT值，X为PLT实际值，同时涂片镜检，如聚集纠正可发送报告并备注“血小板聚集，结果为枸橼酸钠校正后”。

c.如排除冷凝集、更换抗凝剂后镜检血小板仍然聚集，可联系患者前往门诊抽血室用无抗凝剂采血管采集并立马上机检测或行显微镜手工计数。

7.2显微镜复检：

表1 本实验室制定的显微镜复检规则

7.3当血液自动化检测仪所检测的结果出现异常时，首先检查、了解仪器是否处于正常的状态，室内质控指标是否在允许的范围内，标本是否凝血等。

7.4仔细阅读仪器报告的各种参数和直方图和临床提供的初诊等资料，按建立的血常规复检标准进行复检。

7.5复检内容包括对标本的复查、人工对仪器报告的审核、涂片镜检、人工分类、仪器运行状态的检查等。因此，复检不是通常所指的“人工分类”。

7.6对需要复片镜检的血标本，制备合格的血涂片瑞氏染色后低倍、高倍、油镜观察后，将原始结果登记在《血常规复检记录表》中，并录入电脑并在备注栏备注相应信息后出具报告。

7.7显微镜复检记录、复检涂片至少保留2周。

8.质量控制

8.1室间质控

每年定期参加卫生部室间质评。

8.2人员比对

每半年进行一次室内工作人员比对分析，要求≥80%符合。

9.干扰因素

9.1涂片的厚薄与血滴大小、推片角度、速度、血液粘稠度有关；避免推片用力过大挤压细胞变形。

9.2染色时间与染液浓度、PH及室温高低、细胞多少都有关系。

9.3染色时血膜必须充分干燥，否则在染色过程中细胞易脱落。

9.4染液不可过少，以防蒸发干燥而使染料沉着于血片上。

9.5冲洗时，应用流水将染料冲去，千万不能先倒掉染液，以免染料沉着于血片上。

9.6分类时应遵循一定顺序（如弓字形移动）避免重复计数。

9.7染色液在投入使用前，应进行正确的评估，达到质量要求并在效期内使用。

9.8在镜检区域内，白细胞形态应无人为异常改变。通常随着保存时间的延长，抗凝血会

造成白细胞形态的改变，如胞浆内形成空泡，核分解破裂等，应将抗凝血液保存时间的影响减小到最低限度。除部分淋巴细胞增生性疾病外，镜检区域内破损白细胞量应<2％，无人为污染。

9.9需要用手工替代法计数的标本，一定选用市售合格的试剂测定。

10.结果计算和测量不确定度

保证在白细胞人工分类时，计数至少100个白细胞，也可以计数200个白细胞，百分比之和为100%。

11.危急值

发现未成熟粒细胞，原始细胞、异型淋巴细胞及红细胞、血小板的异常状态并与临床病史不符时，要及时与主管医生沟通。

12.实验室解释

12.1分类计数细胞，观察细胞形态异常，并对细胞数量予以评估。

12.2验证血常规异常结果复检后的一致性。

12.3指导临床诊断、治疗和用药。

13.变异的潜在来源

13.1标本的留取应参照标本采集手册，应根据不同的检验目的留取相应的标本。

13.2标本运送应保持密封，不应被污染或溢洒。

13.3标本量应足够，否则标本量过少影响结果的准确性。

14.参考文献

14.1尚红.申子瑜.王毓三. 全国临床检验操作规程[M]. 第4版. 人民卫生出版社

14.2（台资）珠海贝索BASO瑞氏吉姆萨染液使用说明书。

15.附件

附件1：血小板显微镜手工计数操作规程

【原理】在仪器计数结果异常需要确认或不具备条件使用血液分析仪时，可采用人工显微镜检查方法计数血小板。将血液标本按一定比例稀释后充入细胞计数池，在显微镜下计数一定体积内的血小板量，经过换算得出每升血液中的血小板数。

【试剂与器材】

0.012g，合并后加

(1)1%草酸铵稀释液：分别用少量蒸馏水溶解草酸铵1.0g及EDTA-Na

2

蒸馏水至100ml,混匀,过滤后备用。

(2)其他：显微镜、改良 Neubauer血细胞计数板及试管等。

【操作】

(1)于清洁试管中加入血小板稀释液0.38ml。

(2)准确吸取毛细血管血20μl，擦去管外余血，置于血小板稀释液内，吸取上清液洗三次，立即充分混匀。待完全溶血后再次混匀1分钟。

(3)取上述均匀的血小板悬液1滴，注入计数池内，静置10~15分钟，使血小板下沉。

(4)用高倍镜计数中央大方格内四角和中央五个中方格内血小板数。

【计算】血小板数/L=5个中方格内血小板数*109/L

【注意事项】

(1)应防止血小板稀释液被微粒和细菌污染，配制后应过滤。试管及吸管也应清洁。

(2)针刺应稍深，使血流顺畅流出。拭去第一滴血后，首先采血进行血小板检测。操作应迅速，防止血小板聚集和破坏。采集标本后应在1小时内完成检测。

(3)血液加入稀释液内要充分混匀，滴入计数池后应静置10~15分钟。室温高湿度低时注意保持计数池周围的湿度，以免水分蒸发而影响计数结果。

(4)计数时光线要适中，不可太强，应注意将有折光性的血小板与杂质和灰尘予以区别。附在血细胞旁边的血小板也要注意，不要漏数。