霉菌试验简明教程-实验部分

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霉菌试验简明教程_实验部分

霉菌试验简明教程_实验部分

霉菌试验培训教程空军装备环境与可靠性试验中心.. .. ..实验部分实验一霉菌试验室常用的器皿微生物学实验室所用的玻璃皿,大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物,因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。

一般,玻璃器皿的质量要求硬质玻璃,才能承受高温和短暂烧灼而不破损;器皿的游离碱含量要少,否则会影响培养基的酸碱度;对玻璃器皿的形状和包装方法的要求,以能防止污染杂菌为准;洗涤方法不恰当也会影响实验结果。

一、器皿的种类、要求和应用1.试管微生物学实验所用的玻璃试管,其管壁必须比化学实验室用的厚些,这样在塞棉花塞时,管口才不会破损。

试管的形状要求没有翻口,不然,微生物容易从棉花与管口进入试管而造成污染。

棉塞可用棉花塞、试管帽,橡胶塞等。

试管的大小常选用中试管(约13~15×100~150mm)。

2.玻璃吸管(又称移液管)霉菌试验室一般要准备1、5、10ml的刻度玻璃吸管,与化学实验室所用的不同,其刻度指示的容量往往包括管尖的液体体积,亦即使用时要注意将所吸液体吹尽,故有时称为“吹出”吸管。

3.培养皿常用的培养皿,皿底直径90mm,高15mm。

培养皿一般为玻璃皿盖。

在培养皿内倒入适量培养基制成平板,用于分离、纯化、鉴定菌种以及微生物计数等。

4.三角烧瓶与烧杯三角烧瓶有100、250、500、1000ml等不同的大小,常用来盛无菌水、培养基和摇瓶发酵等。

常的烧杯有50、100、250、500、1000ml等,用来配制培养基和药品。

5.载玻片与盖玻片普通载玻片大小为75×25mm,用于微生物涂片、染色,作形态观察等。

盖玻片为18×18mm。

6.双层瓶由内外两个玻璃瓶组成,内层小锥形瓶盛放香柏油,供油镜头观察微生物时使用,外层瓶盛放二甲苯,用以擦净油镜头。

7.滴瓶用来装各种染料、生理盐水等。

8.接种工具接种工具有接种环、接种针、接种钩、接种铲、玻璃涂布器等。

接种环、针、钩、铲的金属可用铂或镍,原则是软硬适度,能经受火焰反复烧灼,又易冷却。

实验六 霉菌形态结构观察

实验六 霉菌形态结构观察
实 验 六
霉 菌 形 态 结 构 观 察
一、实验目的 1、观察霉菌菌落特征。 2、学习并掌握霉菌的制片方法。
3、观察4类常见霉菌的基本形态。
二、实验原理
1、霉菌菌落特征
霉菌菌落特征:菌落形态较大,质地疏松,外观干 2 、常见霉菌形态
燥,不透明,呈现或松或紧的蛛网状、绒毛状、棉
絮状或毡状;菌落与培养基间的连接紧密,不易挑
取,菌落正反面、边缘与中心颜色常不一致。
三、实验材料
1、菌种:培养法培养3~4天的根霉(Rhizopus
sp.)、青霉(Penicillum sp.)和曲霉 (Aspergillus sp.)平板。
2、其他物品:乳酸石炭酸溶液、载片、盖片
等。
四、实验步骤
1、霉菌菌落特征观察 2、霉菌个体形态观察
(1)水浸片法观察(根霉与曲霉) (2)粘片法(青霉)
ห้องสมุดไป่ตู้
根霉:加热至沸腾后观察 曲霉:直接观察
五、实验报告 1、绘制产曲霉、青霉、根霉及毛霉的个体形态图。 2、霉菌的无性繁殖和有性繁殖的孢子各有几种? 3、如何区别毛霉、根霉、曲霉、青霉培养物?

霉菌检查的实验报告

霉菌检查的实验报告

霉菌检查的实验报告引言霉菌是一类微生物,常见于自然环境中的土壤、植物、空气和水体中。

而在日常生活和工作环境中,霉菌也常常存在,尤其是在潮湿、不透气或没有良好通风的环境中。

霉菌的存在对人体健康有一定的影响,例如引起过敏反应、呼吸道症状和感染性疾病等。

因此,对于霉菌的检测和监测显得十分重要。

本实验旨在通过采集样本、培养和计数霉菌的方法,检查不同环境中的霉菌污染情况,为日后的霉菌防控提供依据。

材料与方法材料- 霉菌培养基- 霉菌培养皿- 96% 乙醇溶液- 棉签- 培养皿密封膜- 防护手套- 实验室安全镜方法1. 采集样本:在实验室、家庭、学校等不同环境中,使用棉签轻轻擦拭表面,以采集潜在的霉菌样本。

每个样本应采集相应表面积的样品,避免重复采集同一区域。

2. 培养:将擦拭得到的样本均匀涂抹在霉菌培养基上,并用标签注明采样地点和日期。

每个样本应培养两个培养皿作为重复样本。

3. 密封:将培养皿密封,以防止空气中其它微生物的污染。

4. 孵化:将培养皿置于30C恒温箱中培养,培养时间为48小时。

5. 观察:在孵化结束后,观察培养皿上是否有霉菌的生长,并进行分类和计数。

6. 记录:记录每个样本的霉菌分类和计数结果。

结果与讨论经过培养和观察,我们得到了不同样本的霉菌计数结果,并根据霉菌的外形和颜色进行了分类。

以下是实验结果的总结:采样地点霉菌数量霉菌分类-实验室25 黑色霉菌(Aspergillus niger)家庭15 白色霉菌(Penicillium)学校20 红色霉菌(Fusarium)从实验结果可以看出,不同环境中的霉菌数量和种类存在差异。

实验室中,黑色霉菌(Aspergillus niger) 的数量最多,可能与实验室设备的不透气性和潮湿度高有关。

家庭中的霉菌主要是白色霉菌(Penicillium),可能与家居环境的通风不良和潮湿度有关。

学校中的霉菌则以红色霉菌(Fusarium) 为主,可能与学校环境的潮湿度和食堂食品储存有关。

霉菌的形态观察实验原理和操作步骤

霉菌的形态观察实验原理和操作步骤

霉菌的形态观察实验原理和操作步骤一、实验目的1、学习自制水浸片观察微生物的形态;2、学习并掌握观察霉菌形态的基本方法,了解四类常见霉菌的基本形态特征。

二、基本原理霉菌可产生复什分枝的菌丝体,分基内菌丝和气生菌丝,气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝,由繁殖菌丝产生孢子。

霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。

霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3~10微米),常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍,因此,用低倍显微镜即可观察。

三、实验器材1、菌种青霉(Penicillium sp.)、曲霉(Aspergillus sp.)、根霉(Rhizopus sp.)、毛霉(Mucor sp.)培养约2~5d的马铃薯琼脂培养物。

2、溶液或试剂乳酸石炭酸棉蓝染色液、蒸馏水、50%乙醇、碘液。

3、器材剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、解剖针、显微镜等。

四、实验方法及步骤1.水浸制片观察法在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液或蒸馏水,用解剖针从生长有霉菌的平板中挑取少量带有孢子的霉菌菌丝,用50%的乙醇浸润,再用蒸馏水将浸过的菌丝洗一下,然后放入载玻片上的液滴中,仔细地用解剖针将菌丝分散开来。

盖上盖玻片(勿使产生气泡,且不要再移动盖玻片),先用低倍镜,必要时转换高倍镜镜检并记录观察结果。

2.玻璃纸透析培养观察法(1)玻璃纸的选择与处理要选择能够允许营养物质透过的玻璃纸。

也可收集商品包装用的玻璃纸,加水煮沸,然后用冷水冲洗。

经此处理后的玻璃纸若变硬,必定是不可用的,只有那些软的可用。

将那些可用的玻璃纸剪成适当大小,用水浸湿后,夹于旧报纸中,然后一起放入平皿内121℃灭菌30min备用。

(2)菌种的培养按无菌操作法,倒平板,冷凝后用灭菌的镊子夹取无菌玻璃纸贴附于平板上,再用接种环沾取少许霉菌孢子,在玻璃纸上方轻轻抖落于纸上。

然后将平板置28—30℃下培养3—5天,曲霉菌和青霉菌即可在玻璃纸上长出单个菌落(根霉菌的气生性强,形成的菌落铺满整个平板)。

观察霉菌和菌落实验2

观察霉菌和菌落实验2

观察霉菌和菌落实验2
本实验旨在观察霉菌和菌落的生长情况及特征。

以下是实验过程和观察结果的描述和分析。

实验过程
1. 准备所需材料和设备:培养基、培养皿、霉菌菌种、无菌棉签、培养箱等。

2. 用无菌棉签将霉菌菌种均匀地涂抹在培养基上,并将涂抹过的培养基倒入培养皿中。

3. 将培养皿置于培养箱中,保持适当的温度和湿度条件。

4. 在实验过程中,每隔一段时间打开培养箱观察并记录菌落的生长情况和特征。

观察结果
1. 菌落的生长速度:霉菌通常生长较慢,可能需要几天或更长时间才能看到明显的生长现象。

2. 菌落的形状:霉菌的菌落形状各异,可以是圆形、不规则形状、分叉或毛状。

3. 菌落的颜色:霉菌的菌落颜色也各异,可以是白色、黄色、
绿色、褐色等。

4. 菌落的质地:菌落的质地可以是光滑的、垂直的、粗糙的等。

结论与分析
通过观察霉菌和菌落的实验,我们可以了解到霉菌的生长特征
和变化规律。

不同霉菌在培养基上形成的菌落具有多样性,包括生
长速度、形状、颜色和质地等方面的差异。

这些观察结果有助于进
一步研究霉菌的分类、生态和应用等方面的问题。

实验过程中的注意事项包括确保使用无菌材料和设备,控制好
培养箱的温度和湿度,以及定期观察并记录菌落的生长情况。

此外,需要注意个人安全和实验室卫生,避免对人体和环境造成危害。

总之,观察霉菌和菌落的实验为我们提供了了解霉菌特征和行
为的基础,有助于进一步的研究和应用。

对于微生物学、生态学和
食品科学等领域的研究和教学都具有一定的指导意义。

霉菌实验报告

霉菌实验报告

霉菌实验报告霉菌实验报告一、引言霉菌是一类广泛存在于自然界中的微生物,其在生物学、医学、食品工业等领域中具有重要的研究价值。

本次实验旨在观察不同条件下霉菌的生长情况,以及对其进行定性和定量分析,进一步了解霉菌的特性和生态习性。

二、实验方法1. 实验材料准备本次实验所需材料包括:霉菌培养基、琼脂培养基、无菌培养皿、无菌培养瓶、无菌移液管、显微镜、染色剂等。

2. 实验步骤(1)制备霉菌培养基:按照配方将所需成分溶解于适量的蒸馏水中,经过高温高压灭菌后,倒入无菌培养皿或培养瓶中。

(2)取一份霉菌培养基,分别加入不同浓度的染色剂,制备含有不同颜色的培养基。

(3)将不同颜色的培养基分别接种霉菌菌种,放置于相应的培养条件下,如温度、湿度等。

(4)观察霉菌的生长情况,记录生长速度、菌丝形态等信息。

(5)通过显微镜观察和拍摄霉菌的细胞结构,进行定性分析。

三、实验结果与讨论1. 霉菌生长情况观察经过一段时间的培养,我们观察到不同颜色的霉菌在不同条件下的生长情况有所差异。

例如,白色霉菌在温度较低、湿度较高的条件下生长较快,而黑色霉菌则对温度较高的环境更适应。

2. 霉菌菌丝形态观察通过显微镜观察,我们发现霉菌的菌丝形态各异。

有的菌丝呈现出分支状,有的呈现出网状,有的呈现出环状。

这些不同的菌丝形态可能与不同的菌种、培养条件以及环境因素等有关。

3. 霉菌细胞结构分析在显微镜下观察到的霉菌细胞结构包括细胞壁、细胞质、细胞核等。

细胞壁是霉菌的外层保护结构,具有支持和保护细胞的功能。

细胞质是细胞内的液体环境,其中包含着各种细胞器和代谢物质。

细胞核是霉菌的遗传物质的存储和复制中心,其中包含着DNA等重要的遗传信息。

四、实验结论通过本次实验,我们观察到了不同条件下霉菌的生长情况,分析了霉菌的菌丝形态和细胞结构。

实验结果表明,霉菌对环境条件的适应性较强,不同菌种在不同条件下的生长速度和形态有所差异。

同时,霉菌的细胞结构也是其适应环境和生存的重要因素。

微生物实验6 霉菌

微生物实验6 霉菌

微生物实验报告霉菌的培养及观察实验刘欣怡201100140057生物科学基地班组别:周一下午三组同组者:曹平平,周楠,刘艺,刘希伟实验完成时间:2012年11月12号一、实验原理1. 观察霉菌的菌落特征,学会霉菌的一般制作方法。

2. 观察并理解多种霉菌的个体形态及生长繁殖方式。

3. 进一步巩固无菌操作以及显微镜的使用二、实验器材1. 菌种:黑曲霉,毛霉,青霉,根霉的培养 7d 的马铃薯琼脂平板培养物(小室培养)。

2. 仪器:无菌操作台,分析天平,玻璃棒,三角瓶,小烧杯,加热炉,漏斗,纱布,培养皿,载玻片,盖玻片,U 型玻璃棒,解剖刀,镊子,接种环,移液管,酒精灯,火柴,显微镜等。

3. 试剂及培养基:马铃薯培养基(其配方见附录),蔗糖,琼脂,去离子水100,现配的20%甘油,酒精溶液等。

三、实验原理及方法1、霉菌霉菌的营养体是分枝的丝状体。

其个体比细菌和放线菌大得多,分为基内菌丝和气生菌丝。

气生菌丝生长到一定阶段又可分化出繁殖菌丝。

不同霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子。

霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。

霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3-10μm),常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍,因此,用低倍显微镜即可观察。

霉菌菌丝较粗大,细胞易收缩变形,且孢子容易飞散,所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液,用此染液做霉菌制片的特点是细胞不变形,具有杀菌、防腐作用,不易干燥,能保持较长时间,能防止孢子四处飞散,棉兰具有一定的染色作用,染液的蓝色能增大反差。

(如果用水封片,常因渗透作用而膨胀,水也易使菌丝、孢子和气泡混为一团,影响观察。

)霉菌菌落特征:A。

因霉菌的菌丝较粗且长,故形成的菌落较疏松,常成绒毛状、絮状、蜘蛛网状或毡毯状,一般比细菌和放线菌菌落大几倍到几十倍。

B。

在固体培养基上菌落最初往往是浅色或白色,当菌落上长出各种颜色的孢子后,由于孢子具有不同形状、构造和颜色,使菌落表面呈现肉眼可见的不同结构和色泽,如黄、绿、青、黑、橙等。

霉菌的形态实验报告

霉菌的形态实验报告

霉菌的形态实验报告霉菌的形态实验报告引言:霉菌是一类微生物,广泛存在于自然界中的土壤、空气、水体以及植物和动物体内。

它们具有多样的形态和结构,对人类和环境有着重要的影响。

本实验旨在通过观察和研究霉菌的形态特征,了解其生长和繁殖方式,进一步认识霉菌的生物学特性。

实验材料与方法:1. 霉菌培养基:将适量的琼脂糖、葡萄糖、酵母粉和琼脂按比例混合,加入适量的蒸馏水,混合均匀后加热煮沸,倒入培养皿中,冷却凝固。

2. 霉菌样品:从自然环境中采集到的霉菌样品,如土壤、腐烂的植物等。

3. 实验器材:培养皿、显微镜、移液管、烧杯等。

实验步骤:1. 准备好霉菌培养基,将其倒入培养皿中,待凝固。

2. 从采集到的霉菌样品中取一小块,用移液管将其转移到培养皿的表面,轻轻涂抹均匀。

3. 将培养皿放入恒温箱中,设置适宜的温度和湿度,培养一段时间。

4. 取出培养皿,用显微镜观察霉菌的形态特征,记录下所见。

实验结果与讨论:在观察过程中,我们发现了霉菌的多样形态。

有些霉菌呈现出菌丝状的结构,由细长的菌丝组成,形成一个复杂的网络。

这种菌丝状的结构有助于霉菌在环境中的生长和营养吸收。

另外,还有一些霉菌呈现出颗粒状或球状的形态,它们通常生长在潮湿的环境中,如水体或腐烂的植物上。

除了形态上的差异,我们还观察到了霉菌的颜色多样性。

有些霉菌呈现出白色或浅黄色,而另一些则呈现出绿色、黑色或红色等。

这是由于霉菌在生长过程中产生的色素的不同。

色素的产生与霉菌的代谢活动密切相关,不同的色素可能具有不同的生物学功能。

此外,我们还注意到霉菌在培养基上的分布情况。

有些霉菌呈现出均匀的分布,形成一个连续的菌落;而另一些则呈现出不规则的分布,形成散落的斑点。

这可能与霉菌在培养过程中的生长速度和竞争关系有关。

通过这次实验,我们对霉菌的形态特征有了更深入的了解。

霉菌的多样形态和色彩给我们展示了微观世界的奇妙之处。

同时,我们也认识到霉菌在自然界中的重要作用,它们可以分解有机物质,促进土壤肥沃化,还可以产生抗生素等有益物质。

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霉菌试验培训教程空军装备环境与可靠性试验中心实验部分实验一霉菌试验室常用的器皿微生物学实验室所用的玻璃皿,大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物,因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。

一般,玻璃器皿的质量要求硬质玻璃,才能承受高温和短暂烧灼而不破损;器皿的游离碱含量要少,否则会影响培养基的酸碱度;对玻璃器皿的形状和包装方法的要求,以能防止污染杂菌为准;洗涤方法不恰当也会影响实验结果。

一、器皿的种类、要求和应用1.试管微生物学实验所用的玻璃试管,其管壁必须比化学实验室用的厚些,这样在塞棉花塞时,管口才不会破损。

试管的形状要求没有翻口,不然,微生物容易从棉花与管口进入试管而造成污染。

棉塞可用棉花塞、试管帽,橡胶塞等。

试管的大小常选用中试管(约13~15×100~150mm)。

2.玻璃吸管(又称移液管)霉菌试验室一般要准备1、5、10ml的刻度玻璃吸管,与化学实验室所用的不同,其刻度指示的容量往往包括管尖的液体体积,亦即使用时要注意将所吸液体吹尽,故有时称为“吹出”吸管。

3.培养皿常用的培养皿,皿底直径90mm,高15mm。

培养皿一般为玻璃皿盖。

在培养皿内倒入适量培养基制成平板,用于分离、纯化、鉴定菌种以及微生物计数等。

4.三角烧瓶与烧杯三角烧瓶有100、250、500、1000ml等不同的大小,常用来盛无菌水、培养基和摇瓶发酵等。

常的烧杯有50、100、250、500、1000ml等,用来配制培养基和药品。

5.载玻片与盖玻片普通载玻片大小为75×25mm,用于微生物涂片、染色,作形态观察等。

盖玻片为18×18mm。

6.双层瓶由内外两个玻璃瓶组成,内层小锥形瓶盛放香柏油,供油镜头观察微生物时使用,外层瓶盛放二甲苯,用以擦净油镜头。

7.滴瓶用来装各种染料、生理盐水等。

8.接种工具接种工具有接种环、接种针、接种钩、接种铲、玻璃涂布器等。

接种环、针、钩、铲的金属可用铂或镍,原则是软硬适度,能经受火焰反复烧灼,又易冷却。

9.容量瓶常见的容量瓶有100、250、500、1000ml等不同的大小,常用来定容溶液体积。

二、玻璃器皿的清洗方法清洁的玻璃器皿是实验室得到正确结果的先决条件,因此,玻璃器皿的清洗是实验前的一项重要准备工作。

清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。

1.新玻璃器皿的洗涤方法新购置的玻璃器皿含游离碱较多,应在酸溶液内先浸泡数小时。

酸溶液一般用2%的盐酸或洗涤液。

浸泡后用自来水冲洗干净。

2.使用过的玻璃器皿的洗涤方法(1)试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗,然后用自来水充分冲洗干净。

玻璃器皿经洗涤后,内壁的水是均匀分布成一薄层,表示油垢完全冼净,若挂有水珠,则还需要洗涤液浸泡数小时,然后再用自来水充分冲洗。

装有固体培养基的器皿应先将其刮去,然后洗涤。

长有霉菌的培养物先行高压蒸汽灭菌,然后将培养物倒去,再进行洗涤。

(2)玻璃吸管吸过菌体或孢子悬浮液的玻璃吸管使用后应立即投入盛有2%煤酚皂溶液或0.25%新洁尔灭消毒液或巴斯消毒液的量筒或标本瓶内,24小时方可取出冲洗。

吸取其它溶液的吸管应立即投入盛有自来水的量筒或标本瓶内,以免干燥后难以洗净。

吸管的内壁如果有油垢,同样应先在洗涤液内浸泡数小时,然后再行冲洗。

(3)载玻片与盖玻片用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油,要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次,使油垢溶解,再在肥皂水中煮沸5~10分钟,用软布或脱脂棉花擦轼,立即用自来水冲洗,然后在稀洗涤液中浸泡0.5~2小时,自来水冲去洗涤液,最后用蒸馏水换洗数次,待干后浸于95%酒精中保存备用。

使用时在火焰上烧去酒精。

用此法洗涤和保存的载玻片和盖玻片清洁透亮,没有水珠。

检查过活菌的载玻片和盖玻片应先用2%煤酚皂溶液或0.25%新洁尔灭消毒液浸泡24小时,然后按上述方法洗涤与保存。

3.洗涤液的配制与使用(1)洗涤液的配制洗涤液分浓溶液与稀溶液两种,配方如下:浓溶液:重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 150ml浓硫酸(工业用) 800ml稀溶液:重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 850ml浓硫酸(工业用) 100ml配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中,可慢慢加温,使溶解,冷却后徐徐加入浓硫酸,边加边搅动。

配好后洗涤液呈棕红色或桔红色,长期使用后变成墨绿色即为失效。

贮存于有盖容器内。

使用时注意安全。

三、玻璃器皿的包装略。

实验二消毒与灭菌灭菌与消毒是有区别的。

灭菌是指杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。

消毒一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体。

灭菌与消毒的方法很多,一般可分为加热、过滤、照射和使用化学药品等方法。

在霉菌试验过程中有许多步骤是要求无菌操作的,因此灭菌是整个试验中的重要环节。

灭菌的彻底与否将直接影响试验结果的准确程度,能否确切地反映霉菌试验的真实情况,也是关系到试验结果的可靠性。

常用灭菌方法有加热法灭菌、紫外线灭菌、化学药品灭菌。

一、加热灭菌1.干热灭菌有火焰烧灼灭菌和热空气灭菌两种。

火焰烧灼灭菌适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等,无菌操作时的试管口和瓶口也在火焰上作短暂烧灼灭菌。

通常说的干热灭菌是在电烘箱内灭菌,此法适用于玻璃器皿如吸管和培养皿等的灭菌,在热空气160℃~170℃下保温2小时进行灭菌。

2.高压蒸气灭菌高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。

待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽,然后关闭排气阀,继续加热,此时由于蒸汽不能溢出,而增加了灭菌器内的压力,从而使沸点增高,得到高于100℃的温度。

导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

高压湿热蒸汽灭菌有较大的渗透力,容易使蛋白质凝固和变性,是一种可靠的灭菌方法。

它能杀死一切微生物。

其特点是杀菌可靠、经济、快速、无臭、无味和无毒性,能达到安全有效。

灭菌时,先取出灭菌桶,再向外层锅内加入适量的清水(水没过电阻丝),放回灭菌桶,并将待灭菌的器皿以及被霉菌污染的物品用纸(牛皮纸、旧报纸)包装好装入高压灭菌锅内,注意不要装得太挤,以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。

三角烧瓶与试管口不要与桶壁接触,以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。

加盖,以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓,使螺栓松紧一致,勿使漏气。

打开电源加热,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除锅内的冷空气。

待冷气完全排尽(蒸汽从气门有力的冲击)关闭排气阀,随后压力上升,直到指针到0.105Mpa,锅内温度为121.3℃为止,控制电源电压,维持压力并保持20~30min。

灭菌时间即将结束时,停止加热,让灭菌锅自行降压,等压力锅指针回到接近零时即可开启放气阀,使锅内蒸汽排空,然后揭开盖至1/3左右,利用余热烘干试管塞,再取出已灭菌的物品,如果压力未降到会位,切勿打开盖子,以免压力容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出试管口,造成棉塞沾染培养基而发生污染。

将取出的灭菌培养基放入29℃±1℃恒温培养箱内培养24小时,经检查无杂菌生长,即可待用。

蒸汽压力与蒸汽温度换算的关系如表1所示。

表1 蒸汽压力与蒸汽温度换算的关系二、紫外线灭菌紫外线灭菌是利用紫外线灯照射进行的,波长为200~300nm的紫外线都有杀菌能力,其中以260nm的杀菌力最强。

紫外线灯距照射物以不超过1.2米为宜,为了加强灭菌效果,在开紫外线灯之前,可先在无菌室内喷洒2%—5%的来苏儿溶液,照射时间应在0.5小时~2小时。

紫外线对人体有害,不能直视开着紫外线灯。

三、化学药品灭菌化学药品消毒灭菌法是应用能杀死微生物的化学制剂进行消毒灭菌的方法。

即利用化学药剂进行灭菌。

试验室桌面、用具以及洗手用的溶液均常用化学药品进行消毒灭菌。

常用的2%来苏尔、0.25%新洁尔灭、1%升汞、3~5%的甲醛溶液、75%酒精溶液等。

常用化学杀菌剂的浓度及应用范围见表2:表2 常用化学杀菌剂的浓度及应用范围[甲醛熏蒸:福尔马林(40%甲醛)10ml加高锰酸钾5g/m密封熏蒸6h以上,福尔马林12.5ml/m3加入等量的水加热蒸发,熏蒸6h以上。

]实验三培养基的制备和灭菌培养基是一种人工配制的、适合微生物生长繁殖,并累积新陈代谢产物的混合养料。

它通常含有碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大类成分。

根据微生物种类和试验目的不同,培养基的种类和配制方法也不一样。

(如按营养成分分:天然培养基(PDA)和合成培养基(Czapek);按物理状态分:固体培养基、半固体培养基、液体培养基;等等。

)。

霉菌试验常用的培养基有:查氏培养基(Czapek)、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)、滤纸培养基、真菌培养基等。

1.培养基成分的配比(1)查氏(Czapek)培养基配制:NaNO33.0g K2HPO41.0gKCl 0.5g MgSO40.5gFeSO40.01g 蔗糖30.0 g琼脂15~20 g 水1000mlpH 自然1.05 kg/cm2(15磅/英寸),121.3℃灭菌20分钟。

(2)马铃薯培养基配制:马铃薯200.0 g 蔗糖(或葡萄糖) 20.0 g琼脂15.0~20.0 g 水1000mlpH 7.2马铃薯去皮,切成1cm3的小块,煮沸半小时后,用4层纱布过滤,再加糖及琼脂,加热溶化后补足水分至1000ml。

1.05 kg/cm2(15磅/英寸),121.3℃灭菌20分钟。

(3)滤纸培养基(NH4)2SO41.0g K2HPO41.0gNaCl 0.5g MgSO4·7H2O 0.7g琼脂15~20 g 水1000mlpH 自然滤纸条(摆斜面时加入) 6cm×1cm将培养基与滤纸条在1.05 kg/cm2(15磅/英寸),121.3℃条件下分别灭菌20分钟。

(4)无机盐培养基(NH4)2NO31.5g K2HPO41.0gKCl 0.25g MgSO4·7H2O 0.5gFeSO40.002 琼脂15~20g水1000ml pH 自然将培养基在1.05 kg/cm2(15磅/英寸),121.3℃条件下灭菌20分钟。

若培养球毛壳霉则在斜面上加滤纸条(6cm×1cm),将培养基与滤纸条在1.05 kg/cm2(15磅/英寸),121.3℃条件下分别灭菌20分钟,在摆斜面前加入到试管斜面上。

2.器皿天平(精确度为0.001g),2000ml搪瓷锅,电炉或电磁炉,石棉网,500ml烧杯,300ml锥形瓶,1000ml量筒,漏斗,15×150mm试管,玻璃棒,1ml、10ml吸管,滴管,pH试纸,牛角匙,洁净纱布,油皮纸,棉花,橡皮筋等。

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