测生理指标的方法

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测量生命体征的方法

测量生命体征的方法

测量生命体征的方法测量生命体征(也称为生理参数)是评估人体健康状况和监测疾病进展的重要手段。

常见的生命体征包括体温、脉搏、呼吸、血压和心电图等。

1. 体温测量:体温是衡量人体热量与能量平衡的一种生理参数。

常用的体温测量方法包括口腔测温、腋下测温、耳膜测温和额温测温等。

例如,耳膜测温利用耳温计将传感器放置在耳道内测量耳膜的温度,并据此推测全身体温。

2. 脉搏测量:脉搏是心脏收缩和舒张的结果,反映了心脏泵血功能和血管弹性状态。

常见的脉搏测量方法包括手动测量和自动测量。

手动测量通常通过轻触动脉(如颈动脉、桡动脉或股动脉)来计算每分钟的搏动次数,自动测量则通过脉搏传感器和计时装置来测量脉搏频率。

3. 呼吸测量:呼吸频率是人体每分钟呼吸的次数,反映了肺活量和呼吸系统功能。

常见的呼吸测量方法包括手动计数和使用呼吸传感器。

手动计数需要观察胸部或腹部的起伏,并计算每分钟呼吸次数;而呼吸传感器则利用压力传感器或流速传感器来监测呼吸频率和呼吸深度。

4. 血压测量:血压是衡量动脉血液对血管壁产生的压力。

常见的血压测量方法包括非侵入式和侵入式测量。

非侵入式测量常用的方法是袖带式血压计,通过压力传感器检测动脉的压力变化。

侵入式测量通常需要在动脉内插入导管,并通过监测导管内的压力来测量血压。

5. 心电图:心电图是记录心脏电活动的图像,可以用于评估心脏功能和检测心脏疾病。

心电图测量通常通过将多个电极粘贴在胸部和四肢上,将心脏电活动转化为图形化的电压信号。

除了上述常见的生命体征测量方法,还有一些新的技术正在不断发展,例如呼吸音分析、脑电图、眼底成像等。

这些非侵入性的测量方法有助于提高测量的舒适性以及准确性,为医生和患者提供更准确的诊断和治疗信息。

在现代医疗中,生命体征的测量方法得到了广泛应用,并且不断发展和改进。

它们为评估身体健康、监测疾病进展以及进行有效治疗提供了重要的依据。

需要注意的是,准确的测量方法和设备是保证生命体征测量可靠性和一致性的关键因素,因此,专业人员在选择和使用测量设备时应当具备相关的知识和技能。

植物生理指标测定

植物生理指标测定

植物生理指标测定1.叶绿素含量测定叶绿素是植物进行光合作用的关键分子,它的含量可以反映植物的光合能力和叶片的健康状况。

叶绿素含量的测定可以通过光谱分析或色度法进行。

其中,光谱分析通过测量叶片吸收和反射的可见光波段来计算叶绿素含量;色度法则是通过提取叶片中的叶绿素,然后用乙醇或乙酸乙酯进行溶解,最后通过比色法来测定其含量。

2.蒸腾速率测定蒸腾是植物通过叶片气孔释放水分的过程,蒸腾速率可以反映植物水分的利用和调节能力。

蒸腾速率的测定方法有多种,常用的有质量法和热法。

质量法是通过称量植物在不同时间段内的重量变化来计算蒸腾速率;热法则是利用蒸腾过程中产生的热量来测定蒸腾速率。

3.气孔导度测定气孔是植物调节气体交换的关键结构,气孔导度可以反映植物对环境中各种因素的响应和适应能力。

气孔导度的测定可以通过气体交换技术进行,常用的方法有蒸腾流速法和扩散阻力法。

蒸腾流速法通过测定气孔腔中水蒸气和二氧化碳的浓度来计算气孔导度;扩散阻力法则是通过测定气孔腔中水蒸气的扩散阻力来计算气孔导度。

4.抗氧化酶活性测定氧化应激是植物面临的常见环境胁迫,而抗氧化酶是植物对抗氧化应激的主要防御系统。

抗氧化酶活性的测定可以通过比色法、荧光法和电化学法等进行。

比色法是基于酶催化反应产生的物质的颜色变化来测定酶活性;荧光法是通过检测酶催化反应产生的荧光信号来测定酶活性;电化学法则是通过测量酶催化反应中释放或吸收的电荷来测定酶活性。

这些测定方法可以用于研究植物对不同环境因子的响应和适应能力,也可以用于评估植物的生长和发育状态。

通过测定植物生理指标,研究人员可以更好地了解植物的生理机制和适应策略,为植物的种植和管理提供科学依据。

测生理指标的方法

测生理指标的方法

实验路线及安排:项目主要在晋西北地区展开区域化试验,供试品种4个,均为当年生扦插苗,每个品种15株,采用完全随机区组设计进行,其中包括4个处理,3个重复。

所测定内容包括12项生理指标在相应部位(根、茎、叶)的年变化规律,并从形态、生理和生物化学方面对其抗寒抗旱性机理进行研究探讨。

在每个小区分别选健康植株2株,每株取其中上部位叶片1-2片,组成混合样,编号,带回实验室用一部分样品进行抗旱指标测定,其余样品放入冰箱低温处理,处理温度为0℃、-10℃,-20℃,然后进行抗寒指标测定,每月采样一次。

根的取样方法为每个小区分别选健康植株10株,挖出其部分根系组成混合样,处理方法同叶片;茎的取样方法为选健康植株10株,取其上部嫩茎组成混合样,处理方法同上。

2009年10月-2010年3月对所选材料进行人工低温干旱处理,完成相关实验指标的测定工作。

低温处理通过相对电导率及相关指标评价其抗寒性;干旱处理是通过对所栽品种进行适宜土壤水分、中度干旱、严重干旱条件的人为处理,测定杨树的蒸腾速率和相应指标,评价其抗旱性。

实验方法一.光合效率、气孔导度、蒸腾速率三项指标用光合仪直接测定;二.水势(小液流法)1.取10个干净的试管,分成A组和B组,都贴上0.05mol/L、0.1 mol/L、0.15 mol/L、0.2 mol/L、0.3 mol/L 6个不同浓度标签,并向这两组试管中分别移取相应浓度的CaCl2溶液4mL。

2.取待测叶子数片,用打孔器在其上均匀打孔,混匀,将其分别装入A组试管(每支试管装10片),摇匀,滴入一滴相同浓度的甲烯蓝溶液,再摇匀。

3.用干净的毛细移液管,吸取1~2滴蓝色溶液,小心的插入装着相同浓度的B组试管中部,轻轻的挤出一滴蓝色溶液,观察蓝色液滴流动方向。

按下公式计算植物组织水势:Ψ=-iRTC式中:Ψ为植物组织水势(MPa);C为CaCl2溶液的摩尔浓度(mol/L);R为摩尔气体常数,0.008314MPa·L/mol·K;T为热力学温度(K),即273+t(t为当时摄氏温度);I解离常数(CaCl2=2.6)三.叶绿素含量(直接浸提法)80%的丙酮液的配制:4L丙酮 + 1L蒸馏水。

植物生理指标测定方法

植物生理指标测定方法

植物生理指标测定方法植物生理指标是指用来衡量植物生理状况的具体参数或指标,在植物生理研究中起到了非常重要的作用。

植物生理指标测定方法主要包括以下几个方面:光合作用指标、呼吸作用指标、蒸腾作用指标、叶绿素指标、产量指标和抗逆性指标等。

1.光合作用指标的测定方法:(1)净光合速率的测定方法:通过光合速率仪测定植物叶片在光照条件下的净光合速率;(2)光饱和点和CO2抗饱和点的测定方法:通过对光合速率与光照强度或CO2浓度的关系进行测定,确定光饱和点和CO2抗饱和点;(3)光合色素含量的测定方法:通过分光光度计或高效液相色谱法测定叶片中的叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素等光合色素的含量;(4)光合机构有效光能利用率的测定方法:通过光合色素荧光分析仪测定叶片的光能利用效率。

2.呼吸作用指标的测定方法:(1)总呼吸速率的测定方法:通过呼吸速率仪或气体分析仪测定植物组织在不同温度条件下的总呼吸速率;(2)细胞内呼吸速率的测定方法:通过氧和二氧化碳分压差法或氧电极法测定细胞内的呼吸速率。

3.蒸腾作用指标的测定方法:(1)蒸腾速率的测定方法:通过蒸腾速率仪测定植物叶片在不同光照和湿度条件下的蒸腾速率;(2)水分利用效率的测定方法:通过测量蒸腾速率和光合速率的比值来反映植物对水分的利用效率。

4.叶绿素指标的测定方法:(1)叶绿素含量的测定方法:通过叶绿素荧光分析仪或高效液相色谱法测定叶片中叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量;(2)叶绿素荧光动力学特性的测定方法:通过荧光指数、叶绿素荧光参数和叶绿素荧光成像等技术来评估叶绿素在光抑制和光保护状态下的变化。

5.产量指标的测定方法:(1)单株产量的测定方法:通过对植株生物量、籽粒数或实际产量的测定来计算出单株产量;(2)单穗产量的测定方法:通过对穗长、穗粒数和粒重的测定来计算出单穗产量;(3)单粒产量的测定方法:通过对单穗粒数和粒重的测定来计算出单粒产量。

6.抗逆性指标的测定方法:(1)抗氧化酶活性的测定方法:通过测定植物组织中抗氧化酶活性,如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和抗坏血酸过氧化物酶等的活性来反映植物的抗氧化能力;(2)渗透调节物质含量的测定方法:通过测定植物组织中渗透调节物质(如脯氨酸、脯氨酸激酶等)的含量来评估植物的胁迫适应能力;(3)膜脂过氧化程度的测定方法:通过测定植物组织中膜脂过氧化程度的指标,如丙二醛和过氧化氢含量来评估植物膜的稳定性。

生理指标测定方法

生理指标测定方法

选取生长6周的印度芥菜及生长8周的遏蓝菜和烟草水培幼苗,转移至含有200、400或800 μM CdCl2的1/2 Hoagland营养液中生长4天,分别选取相同叶位的植物叶片进行以下生理指标测定。

每个实验设3次重复。

(1)光合系统指标测定用光合仪(LCpro+,ADC,UK)测定光合速率(Pn)、蒸腾速率(E)和气孔导度(Gs)。

测定时间为11:00~13:00。

(2)过氧化氢含量测定取0.5g植物叶片加0.1%(w/v)冰预冷的TCA研磨匀浆,4℃ 15000g离心25 min。

3 ml 反应混合液含有0.5 ml样品提取上清液、0.5 ml 100 mM磷酸缓冲液(PH6.8)和2 ml 1M KI。

将反应混合液置于黑暗处放置1h后,于390 nm处测定反应液吸光度。

根据过氧化氢标准曲线查得样品中H2O2浓度C(μM),按下式计算过氧化氢含量:H2O2含量(μMol/g)=(C×V t)/(W×V1)式中:C-标准曲线上查得样品中H2O2浓度(μM);V t:样品提取液总体积(ml);V1:测定时用样品提取液体积(ml);W:样品鲜重(g)。

(3)相对电导率测定取样品0.5g,放入试管中,加10ml去离子水,置25℃下10h。

用玻璃棒搅拌均匀,然后用电导仪测电导值C1。

再将试管放入沸水中10min,待其冷却至25℃时,测得处理和对照得电导值为C2,按下式计算电解质渗出率和伤害度:电解质渗出率(%)=(浸泡液电导值/煮沸液电导值)×100%(4)MDA含量测定取0.5g植物叶片加5%(w/v)冰预冷的TCA研磨匀浆,4℃1500g离心10min,取上清液2ml于10ml的试管中,再加入0.67% TBA2ml,混合后在95℃水浴上煮沸30min,冰浴冷却,再1500g离心10min,分别在450nm、532nm、600nm测定吸光度值,按:C(μmol/L)=6.45×(A532-A600)-0.56×A450计算MDA的浓度,进而计算含量。

植物生理指标测定方法

植物生理指标测定方法

植物生理指标测定方法本文介绍了植物生理指标的测定方法,包括叶片持水率、植物暂时萎蔫率、叶片相对含水量、相对电导率和可溶性糖的测定。

首先介绍叶片持水率的测定方法。

选择植株上部枝条健康完整的定型叶,摘取后混均匀分成三份即时称量鲜重,然后置入40℃恒温烘箱中烘40 min,取出称重,再置入85℃烘箱中恒温烘至恒重。

失水率的大小可以反映叶片持水能力的高低,计算公式为失水率=[(鲜重-40℃烘40 min重)÷(鲜重-85℃烘至恒重)]×100%。

其次介绍植物暂时萎蔫率的测定方法。

观察植株叶片萎蔫下垂、翌日晨不能恢复正常者,即取盆中土壤测定。

将植株连土团倒出,用小刮铲从根的周围取土,剔除杂物后称重,带回室内置于105℃烘箱内烘至恒重。

每种植物每次测试一盆,按公式计算暂时萎蔫率:暂时萎蔫率=[(土壤湿重-土壤干重)÷土壤干重]×100%。

接下来介绍叶片相对含水量的测定方法。

取各植株相同部位叶片,测定叶片的鲜重M1,然后将叶片浸入蒸馏水中使其吸水达到饱和状态,再取出擦干叶片至表面无水分残留,称重得到叶片的饱和鲜重M2,最后将叶片放进烘箱,105℃杀青半小时,再于85℃环境下烘至恒重,得到叶片干重M3.按公式计算叶片相对含水量。

然后介绍相对电导率的测定方法。

取各植株相同部位叶片,用蒸馏水拭净叶片表面和背面,去除叶片中脉,剩下部分剪成大小为5mm×5mm的叶片。

取0.20g各3份放入锥形瓶中并加入30ml蒸馏水,放于真空干燥器中,用真空泵抽气10min,以抽出细胞间隙空气。

缓慢放入空气,水即渗入细胞间隙,叶片变成透明状,细胞内溶质易于渗出。

取出锥形瓶,在室温下保持30min后用电导仪测定电导率L1,然后将加塞锥形瓶转入沸水中,水浴20 mins,取出冷却至室温后测定电导率L2.按公式计算细胞膜相对透性(相对电导率)。

最后介绍可溶性糖的测定方法。

取各植株相同部位叶片,用90%乙醇浸泡2h,过滤后将滤液置于水浴中加热至乙醇挥发完毕,再用蒸馏水补足至定容,最后用显色剂显色后测定吸光度,按公式计算可溶性糖的含量。

基本生理指标测量

基本生理指标测量

基本生理指标测量1.体温测量:体温是人体内环境稳定性的重要指示器。

测量体温的方法主要有三种:口腔测温、腋窝测温和直肠测温。

其中口腔测温是最常用的方法。

使用电子体温计或者红外线体温计,将测温器放置在舌下,等待一段时间后,读取温度显示器上的数值,即可得到体温。

2.血压测量:血压是衡量心血管功能和全身循环状态的重要指标。

测量血压时,常用的方法是用血压计和听诊器。

测量时,将血压计的袖带绕在被测者的上臂上,充气使袖带膨胀,然后逐渐放气,听诊器贴在被测者的动脉点上,当听到心音的时候,记录下此时的血压。

3.心率测量:心率是指心脏收缩和舒张的频率,是心血管健康的重要指标。

测量心率的方法主要有手动计算心跳数和使用心率监测仪。

手动计算的方法是在静息状态下,感受到心脏的搏动,用计时器记录30秒内的心跳数,并乘以2得到每分钟的心跳数。

使用心率监测仪时,将传感器带在胸前或手腕上,设备会自动记录心跳数。

4.呼吸频率测量:呼吸频率是指单位时间内的呼吸次数,反映了呼吸系统的状态。

可以通过观察胸部或腹部的起伏来计算呼吸频率,也可以使用呼吸监测仪来自动测量。

在静息状态下,计算单位时间内呼吸的次数,并记录下数值。

5.体重测量:体重是反映人体健康状况的重要指标之一、使用体重秤来测量体重,将被测者放置在秤上,读取显示器上的数值即可。

在测量体重时,应注意测量的时间和基准(比如空腹、同一时间、同一秤等)。

6.身高测量:身高是称量身体的垂直尺寸,对于评估人体生长和发育状态非常重要。

可以使用身高尺或墙上的垂直标尺来测量。

站直并贴近测量仪器,使肩胛骨、头部、臀部和脚跟紧贴测量仪器,读取身高尺上与顶部垂直线对齐的数值。

除了上述基本的生理指标测量,还有其他一些指标也是非常重要的,比如心电图、血氧饱和度、脑电图等。

这些指标一般需要专业设备和专业人员来进行测量和解读。

通过定期测量这些指标,可以及时发现异常情况,采取相应的干预措施,从而保障人体健康。

测定各生理指标的试验方法

测定各生理指标的试验方法

测定各生理指标的试验方法测定各生理指标的试验方法1.4.1 电导率的测量(浸泡法)[5]取大小相当的植物叶片(尽量保证叶片的完整性,少含茎节),用自来水洗净后再用蒸馏水冲洗3次,用滤纸吸干表面水分,将叶片剪成适宜长度的长条(避开主脉),快速称取鲜样,每份0.1g,分别置于10ml去离子水的刻度试管中,盖上玻璃塞置于室温下浸泡处理12h,用电导仪测定浸提液电导(R1),然后沸水浴加热30min,冷却至室温后摇匀,再次测定浸提液电导(R2)。

根据公式:相对电导率=R1/R2×100% 算出电导率。

1.4.2 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定(氮蓝四唑法)[5]取各株植物相同部位的叶片(去叶脉)0.5g于预冷的研钵中,加1ml预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆,加缓冲液使最终体积为5ml。

取1.5~2ml于4000r/min下离心10min,上清液即为SOD粗提取液。

取32支试管(30支测定管,2支对照管),分别加入1.5ml0.05mol/l磷酸缓冲液、0.3ml130nmolMet溶液、0.3ml750μmol/l NBT溶液、0.3mol100μmol/l EDTA液、0.3ml20μmol/l核黄素、0.05ml酶液(其中2支对照管以缓冲液代替酶液)、0.25ml蒸馏水,混匀,将一支对照管置于暗处,其他各管于4000lx日光下反应20min(要求各管受光情况一致,温度高时缩短,低时延长)。

反应结束后,以不照光的对照管做空白,分别测定其他各管的吸光度。

计算公式:SOD总活性(U/g)=[(ACK-AE)×V]/(0.5×ACK×W×Vt)注:SOD总活性以每克样品鲜质量的酶单位表示(U/g);ACK为照光对照管的吸光度;AE为样品管的吸光度;V为样品液总体积(ml);Vt为测定时样品用量(ml);W为样品鲜质量(g)。

1.4.3 过氧化物酶(POD)活性的测定(愈创木酚法) [5]酶液提取:取5.0g植物叶片,洗净,剪碎,放入研钵中。

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实验路线及安排:项目主要在晋西北地区展开区域化试验,供试品种4个,均为当年生扦插苗,每个品种15株,采用完全随机区组设计进行,其中包括4个处理,3个重复。

所测定内容包括12项生理指标在相应部位(根、茎、叶)的年变化规律,并从形态、生理和生物化学方面对其抗寒抗旱性机理进行研究探讨。

在每个小区分别选健康植株2株,每株取其中上部位叶片1-2片,组成混合样,编号,带回实验室用一部分样品进行抗旱指标测定,其余样品放入冰箱低温处理,处理温度为0℃、-10℃,-20℃,然后进行抗寒指标测定,每月采样一次。

根的取样方法为每个小区分别选健康植株10株,挖出其部分根系组成混合样,处理方法同叶片;茎的取样方法为选健康植株10株,取其上部嫩茎组成混合样,处理方法同上。

2009年10月-2010年3月对所选材料进行人工低温干旱处理,完成相关实验指标的测定工作。

低温处理通过相对电导率及相关指标评价其抗寒性;干旱处理是通过对所栽品种进行适宜土壤水分、中度干旱、严重干旱条件的人为处理,测定杨树的蒸腾速率和相应指标,评价其抗旱性。

实验方法一.光合效率、气孔导度、蒸腾速率三项指标用光合仪直接测定;二.水势(小液流法)1.取10个干净的试管,分成A组和B组,都贴上0.05mol/L、0.1 mol/L、0.15 mol/L、0.2 mol/L、0.3 mol/L 6个不同浓度标签,并向这两组试管中分别移取相应浓度的CaCl2溶液4mL。

2.取待测叶子数片,用打孔器在其上均匀打孔,混匀,将其分别装入A组试管(每支试管装10片),摇匀,滴入一滴相同浓度的甲烯蓝溶液,再摇匀。

3.用干净的毛细移液管,吸取1~2滴蓝色溶液,小心的插入装着相同浓度的B组试管中部,轻轻的挤出一滴蓝色溶液,观察蓝色液滴流动方向。

按下公式计算植物组织水势:Ψ=-iRTC式中:Ψ为植物组织水势(MPa);C为CaCl2溶液的摩尔浓度(mol/L);R为摩尔气体常数,0.008314MPa·L/mol·K;T为热力学温度(K),即273+t(t为当时摄氏温度);I解离常数(CaCl2=2.6)三.叶绿素含量(直接浸提法)80%的丙酮液的配制:4L丙酮 + 1L蒸馏水。

称0.5g左右的叶片放在50ml的离心管(做三个重复),加入25ml浓度为80%的丙酮液,放在黑暗处浸提大约36小时后取出,稀释4倍后分别在波长663nm、645nm、652nm下测定光密度,以80%的丙酮液为空白。

按下列公式计算样品中叶绿素含量。

CA =12.72A663-2.59A645(1)CB =22.88A645-4.67A663(2)CT =CA+CB=A652×1000/34.5 (3)在652nm时可一次测出叶绿素总含量mg/g FW)=(CVT/FW×1000)n (4)以上公式中,CA 、CB、CA+B分别为叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a+b的浓度(mg/L);FW为鲜重(g);C:叶绿体色素的浓度;VT为提取液总体积(mL);n为稀释倍数。

四.丙二醛(MDA)含量测定试剂:20%三氯乙酸(TCA)溶液:20g三氯乙酸,加水80ml溶解;0.1%的TCA溶液:取250ul20%TCA稀释至50ml;0.5%硫代巴比妥酸溶液:0.25g硫代巴比妥酸溶解于50ml20%的TCA中。

1.取植株上一定叶位的叶片,剪成小段,混匀,称取0.3g;2.放入冰浴的砚钵中,加少许石英砂和2ml0.05mol/LPH为7.8的磷酸缓冲液,研磨成匀浆。

将匀浆转移到试管中,再用2-3 ml0.05mol/L磷酸缓冲液分两次冲洗,合并提取液;3.在提取液中加入5 ml 0.5%硫代巴比妥酸溶液,摇匀;4.将试管放入沸水中煮沸10分钟(自试管内溶液中出现小气泡开始计时),到时间后立即将试管取出并放入冷水浴中;5.带试管内溶液冷却后,3000g离心15min,取上清液并量其体积。

以0.5%硫代巴比妥酸溶液为空白测532nm、600nm、450nm处的吸光度;6.结果计算:MDA(mmol.g-1FW)=〔6.452*(A652-A600)-0.559*A450〕*Vt/Vs*FW式中,Vt:提取液总体积(ml),Vs:测定用提取液体积(ml),FW:样品鲜重(g)五.SOD酶活性的测定1、NBT反应液的制备(a)配置50mmol/l pH=7.8磷酸缓冲液:A:取NaHPO4·12H2O 8.95g定容于500ml;B:取KH2PO4 3.4g定容于500ml;(A:B=9:1)(b)13mmol/l甲硫氨酸:在180ml50mmol/l pH=7.8磷酸缓冲液中加入348mg甲硫氨酸,待完全溶解后加入后面的试剂。

(c)63umol/l硝基四唑蓝(NBT):在180ml溶液(b)中加入8.4mgNBT;(d)1.3umol/l核黄素:在(c)中加入1.2ml核黄素母液(0.14g/30ml:0.14g 核黄素加入30ml水中);(e)0.1mmol/lEDTA:在(d)中加入6.6mgEDTA。

将上述步骤配置的NBT反应液避光保存。

2、活性测定(1)酶液提取:同过氧化物酶液的提取(2)超氧化物歧化酶活性的测定:取6mlNBT反应液,加入50ul酶液混合均匀,将试管放于荧光灯架上,光强3000lx 照光10min,到时间后关灯,在722分光光度计560nm处测吸光度值,以内装NBT反应液的试管进行光照的作为对照,以内装NBT反应液但置于暗处的作为参比。

(3)超氧化物歧化酶酶活计算:酶活性= ()Ack A VAck W VtE-⨯⨯⨯⨯12Ack:照光对照管在560nm处的吸光度值Ae:样品管的吸光度值V:酶提取液总体积Vt:测定时所用的酶液体积W:提取酶液的材料鲜重六.PPO酶活性测定用尔茶酚法。

酶液提取过程同POD的方法。

反应体系:于10毫升试管中加入3.9毫升磷酸缓冲液(PH=6)和0.1ml酶待测液混合均匀,在30℃条件下放 1min,立即加1ml 0.1mol/L儿茶酚反应介质摇匀,用721分光光度计在λ=420 处测吸光度值变化。

放好后立即读数并记录,60s读一次,共读5次。

多酚氧化酶的活性按下式计算:活性(u/g)=ΔA*D/(0.01W*t)以每分钟吸光值改变0.01为一个多酚氧化酶单位。

ΔA---反应时间内吸光值的变化;W----鲜样品的质量(g)t----反应时间(min);D----总酶液为反应系统内酶液的倍数七.POD酶活性的测定(用愈创木酚法)0.05mol/l愈创木酚:用烧杯称取6.207g愈创木酚,用少许酒精溶解,然后定容至1000ml。

(按需求不同照比例增缩); 2%H2O2:取30% H2O267ml,加水至1000ml;(1)酶液提取分别称取各待测样品0.500克,加聚乙烯吡咯烷酮(PVP)0.25克及少量石英沙和5ml磷酸缓冲液(pH=6)冰浴下充分研磨成匀浆,放入离心管,在10000r/min条件下冷冻离心10min,取上清液为酶提取液。

(2)过氧化物酶活性的测定取10ml试管,一只加入:2.9ml0.05M pH=6的磷酸缓冲液 + 1ml 0.05M的愈创木酚 + 1ml酶液,立即在37℃水浴条件下保温3min,然后加入1ml2%的H2O2继续保温1min,取出立即用721型分光光度计于波长470nm 处测定吸光度值变化,每隔60s 读一次数,共读五次。

以每克鲜重材料每分钟吸光度变化值表示酶活性大小(其计算公式同PPO)。

空白对照不加H2O 2八、脯氨酸含量测定1、原理:当植物缺水时体内的脯氨酸含量增加。

植株体内脯氨酸含量在—定程度上反映了植株体内的水分情况,因而可以作为植物缺水情况的参考性生理指标。

用人造沸石在 pH 1~7 范围内振荡溶液,可除去干扰的氨基酸或使不与茚三酮反应(如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等),脯氨酸与茚三酮试剂呈显色反应,其含量与颜色深浅成正相关,可用分光光度计测定。

此法有专一性。

2、试剂与仪器设备·茚三酮试剂:将 2.50 g 茚三酮于 60 mL 冰醋酸和 40 mL 6 mol/L 磷酸中,加热( 70 ℃)溶解。

试剂至少在 24 小时内稳定。

.脯氨酸标准液:准确称取 25 mg 脯氨酸溶于少量 80 % 乙醇中,再用蒸馏水定容至 250 mL ,其浓度为 100 μg/mL 。

再取此液 10 mL ,用蒸馏水稀释至 100 mL ,即成 10 μg/mL 的脯氨酸标准液。

分光光度计,水浴锅,移液管,容量瓶,冰醋酸,仪器药品,离心机,烧杯,研钵,试管,恒温水浴3.实验步骤1、绘制标准曲线分别吸取脯氨酸标准母液 0 、 0.2 、 0.4 、 0.8 、 1.2 、1.6 、 2.0 mL放入 7 支具塞刻度试管,分别加入蒸馏水至 2.0 mL, 其脯氨酸含量分别为 0 、 2.0 、 4.0 、 8.0 、 12.0 、 16.0 、 20.0 μg 。

分别吸取上述标准溶液 2 mL ,加冰醋酸 2 mL, 茚三酮试剂 2 mL 加入试管中,混匀后加玻璃球塞,在沸水浴中加热 15 min 。

用分光光度计于波长 515 nm 下进行比色测定,以零浓度为空白对照。

将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标作标准曲线。

2. 植株样品液的提取选取植株功能叶片 2 g ,用 3 mL 80 % 乙醇研磨(放少许石英砂)成浆状。

用 80 % 乙醇洗研钵,将提取物和洗液置于试管中。

80 % 乙醇总量为 10 mL 。

加盖置于黑暗中室温下提取 24 h ,或 80 ℃恒温水浴中提取 20 min 。

将提取液在放有活性炭的滤纸上进行过滤,重复过滤一次,除去色素和残渣。

将滤液置于试管中,加其重量 1/5 的人造沸石强烈振荡 5 min 。

将上层液在离心机上离心 10 min ,上清液备用。

3. 样品溶液的测定取 2 mL 上清液置于试管中,再加入 2 mL 冰醋酸和 2 mL 茚三酮试剂,加盖密封,在沸水浴上加热 15 min 。

用 3 mL 80% 乙醇代替样品液作为对照。

在分光光度计上测 515 nm 处各样品的吸光度,从标准曲线上求出样品溶液中脯氨酸含量。

4、结果计算样品中脯氨酸含量的计算:脯氨酸含量(μg/g ) = C* V T*100%/ W* V 1*106式中:C ——由标准曲线上查得的脯氨酸的质量,μg。

V T ——提取液总体积, mL 。

V 1 ——测定液体积, mL 。

W ——样品质量, g 。

0.5ml酶液(对照用0.5ml 80%乙醇代替)(做三个重复) + 1ml冰乙酸 + 1.5ml 显色液―――混匀,沸水浴15min,冷却后测OD520。

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