生物指示剂活性确认
3M压力灭菌用生物指示剂的使用方法
3M压力灭菌用生物指示剂的使用方法压力灭菌用生物指示剂1262该压力蒸汽灭菌生物培养指示剂用于压力蒸汽灭菌效果的生物监测(包括下排气锅和预真空锅);通过培养基颜色变化，反应嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌生物监测结果。
1. 将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于一标准测试包中;2. 按照国家规范, 分别将测试包放于锅内不同位置;3. 灭菌完毕, 取出该生物指示剂;4. 挤破内含的安瓿, 与一支对照管一起放于56℃培养锅内培养;48小时后阅读结果。
结果阅读：1.培养后指示管不变色(呈紫色), 表示灭菌通过;2.培养后指示管变色(呈黄色), 表示灭菌不通过,(必须及时查出灭菌失败原因)。
3.同时培养的对照管应为阳性(呈黄色), 如阴性,可能的原因为: 培养条件不符合要求; 生物指示剂有问题; (应及时查出阴性原因)。
注意事项：1. 灭菌完毕, 含生物指示剂的包裹很热并有一定压力; 需至少冷却10分钟以上, 否则可能引起塑料管内的安瓿破裂, 飞溅的碎片导致损伤;2. 只有对照管为阳性, 其生物监测结果才算有效。
3. 贮存于室温: 15-30℃; 相对湿度为35-60%;避免靠近灭菌器和化学消毒剂。
1292该生物指示剂可用以121℃下排气和132℃预真空压力蒸汽灭菌锅。
3MATTESTTM压力蒸汽灭菌生物培养指示剂(快速)在与3M ATTEST 290 培养锅共用时, 通过酶活性的灭活与否，探测嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌结果。
使用方法:1、在生物指示剂标签上注明灭菌器锅号, 负荷数量, 灭菌日期; 不要在指示剂的瓶或盖上另贴一个标签。
将生物指示剂放于一个标准测试包内，并置于最难灭菌的位置。
2、将含有生物指示剂的测试包放在灭菌器最难灭菌的位置，通常是灭菌器底层，近门或排气口上面。
3、正常装载。
4、灭菌循环完毕, 取出生物指示剂。
5、灭菌结束后，从灭菌器内取出含有生物指示剂的测试包，打开散热5分钟后才能取出生物指示剂。
生物指示剂的原理
生物指示剂的原理生物指示剂是一种用于检测物理、化学因素对生物体影响的工具。
它能够通过对生物体的生理、生化反应和生长发育等方面的观察，反映出环境因素的变化。
生物指示剂可以用于监测环境污染、评价生态系统的健康状况、研究生态系统的功能和相互作用等方面。
本文将从生物指示剂的原理、应用和发展等方面进行阐述。
一、生物指示剂的原理生物指示剂的原理是基于生物体对环境因素的敏感性和反应性。
生物体对环境因素的变化会产生一系列生理、生化反应和生长发育等方面的变化，这些变化可以被观察到和测量。
通过对这些变化的观察和测量，可以得出环境因素的变化情况。
生物指示剂的原理可以用以下几个方面来进行解释：1. 生物体的生理和生化反应生物体的生理和生化反应是一种对环境因素变化的直接反应。
例如，植物叶片的叶绿素含量、叶片的氮、磷含量等，都可以反映出土壤养分的状况；而动物细胞内酶的活性、血液中的生化指标等，都可以反映出环境中毒物质的影响。
2. 生物体的生长发育生物体的生长发育是对环境因素变化的一种长期反应。
例如，树木的生长速度、植物的繁殖能力等，都可以反映出环境因素的变化情况。
3. 生物体的种群结构和数量生物体的种群结构和数量是对环境因素变化的一种间接反应。
例如，某种昆虫的数量和种群结构的变化，可以反映出环境中的污染程度和生态系统的健康状况。
二、生物指示剂的应用生物指示剂可以用于监测环境污染、评价生态系统的健康状况、研究生态系统的功能和相互作用等方面。
1. 监测环境污染生物指示剂可以用于监测环境污染。
例如，可以利用苔藓、地衣等生物指示剂来检测大气中的污染物质，例如二氧化硫、氮氧化物等。
苔藓和地衣对这些污染物质十分敏感，它们的生长情况和化学成分的变化可以反映出环境中的污染程度。
2. 评价生态系统的健康状况生物指示剂可以用于评价生态系统的健康状况。
例如，可以利用鱼类、昆虫等生物指示剂来评价水域的生态系统健康状况。
鱼类和昆虫对水质的变化很敏感，它们的数量和种群结构的变化可以反映出水域的健康状况。
生物活性物质的分离和鉴定方法
生物活性物质的分离和鉴定方法生物活性物质是一类对生命有重要作用的化合物，例如药物、植物中的有效成分等。
它们的分离和鉴定方法对于药物研发、天然药物提取等方面有着重要的意义。
本文将介绍生物活性物质的分离和鉴定方法。
一、生物活性物质的分离方法1.色谱法色谱法是分离生物活性物质的一种常用方法。
它使用固/液相作为移动相，在固定的填充物上进行柱层析、薄层层析或者高效液相层析等方法将样品组分分离开来。
通过采用不同的填充物和固/液相条件，可以对不同类型的生物活性物质进行有效地分离和纯化。
2.热解法热解法是一种将不同组分分离的方法。
它利用样品中不同组分的不同挥发性，在一定的温度下进行加热，从而实现组分的分离（不同组分的沸点不同）。
利用热解法可以提取天然产物，如香草中的香草酸和香豆素等。
3.抽提法抽提法也是一种常用的天然产物提取方法。
比如常见的用于提取酮体类天然产物的氢氧化钠-酚酞法。
在酸性条件下，用酚酞指示剂标示溶液中碘对应的浓度。
将氢氧化钠溶液加入样品中，使其中的酮体迅速脱羧，生成相应的aromatic acid，同时碘氧化成碘的氧化态+5，和酚酞反应生成红色的碘酸酚酞。
其中的酮体的质量浓度可以根据酚酞的显色程度进行比色测定。
二、生物活性物质的鉴定方法1.逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)RT-PCR是一种将RNA转换为DNA的方法，在转录后将RNA 转换为DNA，通过聚合酶链式反应扩增重要DNA序列，如生长因子、转录因子、糖酵解酶和抗氧化酶等的基因。
利用RT-PCR可以快速、灵敏地检测特定基因的表达情况，同时可以扩增少量的RNA样品，是一种非常有效的生物活性物质鉴定方法。
2.质谱分析质谱分析是一种分析生物活性物质的重要工具。
它可以分析样品分子的质量和数量，并结合色谱技术以进一步分离组分。
质谱分析可以用来鉴定样品中类似生物活性物质的结构，以及尿液和血浆中的蛋白质分离等。
3.生物学活性分析生物学活性分析可以用来检测样品中具生物学最活性的成分。
3M压力灭菌用生物指示剂的使用方法
压力灭菌用生物指示剂1262
该压力蒸汽灭菌生物培养指示剂用于压力蒸汽灭菌效果的生物监测(包括下排气锅和预真空锅);通过培养基颜色变化，反应嗜热脂肪杆菌芽孢是否存活，从而判断压力蒸汽灭菌生物监测结果。
1.将压力蒸汽灭菌生物培养指示剂放于一标准测试包中;
2.按照国家规范,分别将测试包放于锅内不同位置;
注意事项：
1.灭菌完毕,含生物指示剂的包裹很热并有一定压力;需至少冷却10分钟以上,否则可能引起塑料管内的安瓿破裂,飞溅的碎片导致损伤;
2.只有对照管为阳性,其生物监测结果才算有效。
3.贮存于室温:15-30℃;相对湿度为35-60%;避免靠近灭菌器和化学消毒剂。
1292
该生物指示剂可用以121℃下排气和132℃预真空压力蒸汽灭菌锅。?
6、检查生物指示剂标签上的化学指示剂，颜色由玫瑰色变成棕色证明生物指示剂经过压力蒸汽灭菌过程的处理。该颜色的变化并非表明该处理达到灭菌的目的，如果化学指示剂没有变化，请检查灭菌过程。
7、戴上防护眼镜，挤碎安瓿，然后培养生物指示剂。详细步骤请参阅3MATTEST290培养锅操作说明。
8、每次培养须同时培养一个未灭菌过的生物指示剂进行阳性对照，阳性对照生物指示剂与经过灭菌处理的生物指示剂为相同生产日期和批号。
阳性对照的目的是保证：
1）正确的培养条件
2）指示剂的活性（不适当的贮存条件可能影响有效期内的指示剂活性）
3）3MATTEST290培养锅功能完好
9、在3MATTEST290培养锅（培养温度62+/-20C）内，培养阳性对照和已处理的指示剂3小时，读出最终结果。阳性对照必须得出荧光阳性结果(阅读器显示为红灯或+)，如阳性对照读出荧光阴性(绿灯或-)，应检查培养锅温度和操作过程，直至阳性对照为阳性结果，生物监测的结果才是有效的。对于经过灭菌处理的指示剂，荧光阳性(红灯或+)表明灭菌过程失败，荧光阴性(绿灯或-)表明灭菌过程合格。
灭菌方法与生物指示剂
生物指示剂 系一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设 备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果 的监控等。用于灭菌验证中的生物指示剂一般是 细菌的孢子。
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生物指示剂的形式
一定数量的孢子附着在惰性载体上， 如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等
孢子悬浮液密封于安瓿中
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无菌保证水平
ATCC 14756
用于滤膜孔径为0.22μm 的滤器
用于滤膜孔径为0.45μm harmony 的滤器
湿热灭菌法
指将物品臵于灭菌柜内利用高压饱和蒸 汽、过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋 白质、核酸发生变性而杀灭微生物的方法。
• 须保证物品灭菌后的SAL≤10-6
• 对热稳定的物品，可采用过度杀灭法，
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常用的灭菌方法
湿热灭菌法 干热灭菌法 气体灭菌法 辐射灭菌法 过滤除菌法
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不同灭菌方式不同的菌种种类的选择
灭菌方法
湿热灭菌法
生物指示剂
嗜热脂肪芽孢杆菌 Bacillus stearothermophilus 生孢梭菌孢子 Clostridium sporogenes
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制药工业常用的灭菌方法
原料药： 化学合成药——较高熔点药物常用于干热灭菌法，对较低 熔点的则用湿热灭菌法 ，对不耐热药物，如是晶体，可 溶解后过滤除菌 ；
植物提取物——若是用常规或高温提取的单一成分的流浸 膏，常用压力蒸汽法、流通蒸汽法消毒灭菌；若是低温提 取物，则优先考虑过滤除菌； 生化药物——化学消毒灭菌剂，如低温乙醇法、低温间歇 法和过滤法等。
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适用范围
不耐热药物的灭菌，医疗器械、容器、高分 子材料、包装材料、生产辅助用品、不受辐射破 坏的原料药及成品等均可用本法灭菌。
灭菌测定方法和步骤
1. 准备一定数量的微生物样本，确保它们对辐射敏感且易于计数。2. 将样本暴露于预定剂量的辐射下。3. 辐射后，将样本在适宜条件下培养。4. 计算并比较辐射前后的微生物存活率，以评估灭菌效果。5. 根据需要，调整辐射剂量并重复测试以优化灭菌条件。
灭菌测定方法和步骤
灭菌方法
测定方法
步骤
热灭菌（如蒸汽剂（如耐热的细菌孢子）。2. 将生物指示剂放置在待灭菌物品中或附近。3. 进行灭菌处理（如蒸汽灭菌）。4. 灭菌后，将生物指示剂取出，在适宜条件下培养。5. 观察并记录培养结果，评估灭菌效果。
化学灭菌（如使用消毒剂）
中和试验法
1. 准备测试样本和对照样本。2. 将消毒剂应用于测试样本，同时确保对照样本不受影响。3. 使用适当的中和剂来停止消毒剂的活性，同时不破坏潜在的微生物。4. 将处理后的样本在适宜条件下培养。5. 观察并记录培养结果，比较测试样本和对照样本的微生物生长情况，评估灭菌效果。
辐射灭菌（如紫外线、γ射线）
生物指示物选择、应用与缩短培养时间的验证
环氧乙烷灭菌生物指示物选择、应用与缩短培养时间（RIT）的验证生物指示物是指一类特定的微生物和载体结合，经过特定方法制备的生物制品，这些特定微生物比普通微生物对相应的灭菌模式具有更强的耐受性，用于指示微生物的死亡情况，以反映灭菌效果。
由于生物指示物可以真实可靠的反映灭菌过程中有关时间、温度和湿度等多个因素的关系，因此广泛应用于环氧乙烷等灭菌工艺的验证与日常监控。
验证时应确认所选择的生物指示物的抗力的适宜性，否则将影响灭菌验证的效果与可靠性。
生物指示物的原理是通过检测其中的细菌芽孢是否存活来判断产品是否达到完全灭菌的效果。
产品上的微生物无法经过肉眼观察，而且无法通过灭菌后的抽样检测来确定该批次产品是否合格，是一个特殊过程。
我们只能通过生物指示物中的细菌芽孢模拟产品上带菌的最坏的情况。
生物指示物中的细菌芽孢也是微生物的一种，而且所有对灭菌效果有影响的因素都对其有作用。
同时，由于采用环氧乙烷等最终灭菌的产品，其生产过程中初始污染菌的数量是受控的，其数量远远低于生物指示物所含的菌体数量。
BI中选择的菌株比生产过程中自然环境下所发现的菌株是更难杀灭的菌株，具有更高的抗力。
如果生物指示物中的细菌芽孢全部被杀死，就等同于产品中的微生物全部被杀死。
故此，在环氧乙烷灭菌工艺里面，要确认灭菌是否合格，必须使用生物指示物，没有可以替代的手段或方法。
但是应当注意，生物指示物并不是用来指示与证实灭菌后的物品确实无菌。
也就是说即使生物指示物培养无菌生长，并不能证实或保证灭菌物品100%无菌。
生物指示物只是用来测试某一个已确认的灭菌过程和采用的的灭菌设备的有效性，这种测试的实施原理是：按照无菌保证水平对微生物致死性进行评估，以确定灭菌物品中微生物存活的概率足够低。
1生物指示物（Biological Indicators,BI)生物指示物是一类特定微生物经过确定制备方法制造的生物试剂。
生物指示物对于某种灭菌工艺具有特定的耐受性（USPS1035《Biological indicators for Sterilization》）。
生物指示剂监测阳性处理流程
生物指示剂监测阳性处理流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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荣仁药业
1.目的：规范本公司生物指示剂活性确认操作，保证测试结果准确、可靠。
2.范围：适用于本公司购买的生物指示剂。
3.职责：中心化验室管理人员、QA人员负责监督本规程的执行；QC微生物实验员按本规定严格执行。
4.内容：
4.1生物指示剂活性确认
取同一批次的生物指示剂2支，将塑料瓶中的菌纸片取出一同放进1支装有4个玻璃珠和5.0ml的0.9%无菌氯化钠溶液的试管中。
将试管振摇5-10分钟，直到菌纸片浸渍成浆状，再往试管中加入5.0ml0.9%无菌氯化钠溶液，再振摇1分钟。
振摇完毕后立即从中吸取1.0ml溶液至0.9%无菌氯化钠溶液9.0ml的试管中，作为1号管，同法制2号管。
将1号管于80℃水浴中放置15min，作为热处理。
分别将1号和2号管做连续10倍稀释（10-1、10-2、10-3），然后吸取后两个稀释级（10-2、10-3）的菌悬液1ml，各加入两个无菌平皿中，然后倒入15～20ml冷却至50℃左右的胰酪大豆东琼脂培养基，混合后待冷却。
倒置平皿在56℃下培养48小时。
QC-SOP(B)007-00 第1页共2页
荣仁药业
培养结束后，计数每个平皿碟上的菌落数，计算热处理组和未处理组各稀释液中的平均菌落数，然后计算出生物指示剂纸片上平均实际活菌数和活芽孢数。
生物指示剂合格标准：每条带菌纸片上的平均活菌数不小于制造商标明的平均数的95%，同时纸片上的活芽孢数也不小于活菌数的一半，则该批次生物指示剂判定为合格。
将结果记录在“生物指示剂的活性确认表”上，每批购买的生物指示剂均应进行本项检查。
经确认批次的生物指示剂若用于验证，还应将该表附在相应的验证文件中。
5、附件：
QC-SOP(B)007-00 第2页共2页。