天然药化大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
OH
O
OH
CH3O O
CH3
大黄素-6-甲醚（Physcion） 4．大黄酚（Chrysophanol） 本品六方形或单斜形结晶（乙醇或苯） ，熔点 196℃；具升华性，几乎不溶于水，略溶 于冷乙醇，易溶于沸乙醇，溶于苯、氯仿、乙醚及丙酮等。
OH
O
OH
CH3 O
大黄酚（Chrysophanol） 5．芦荟大黄素（Aloe emodm） 橙色针状结晶（甲苯） ，熔点 223-224℃。易溶于热乙醚中。在乙醚及苯中呈黄色，氨 水及硫酸中呈绯红色。
1
2
3
标
1 号极性大，高度小，为大黄酸；2 号与标准品高度一致，为大黄素；3 号为混合物 （2）呈色反应 a. 碱液反应 分别取三部分萃取物的乙醇溶液少量，置于有穴白瓷板孔穴中加 2%NaOH 溶液数滴，观察 颜色变化。 b.醋酸镁反应 分别取三部分萃取物的乙醇溶液少量， 置于白瓷板孔穴中， 滴加 0.5%醋酸镁乙醇溶液数滴， 观察颜色变化。
OH
O
OH
CH2OH O
芦荟大黄素（Aloe emodm）
三、实验内容（8 学时） 1．大黄中总蒽醌类成分的提取、分离 大黄粗粉（50g） 置于 500ml 的圆底烧瓶中，加 95%乙醇至约高于液面为度， 水浴加热回流 2 次，第一次 40 分钟，第二次 30 分钟，保持 乙醇微沸，取下圆底烧瓶，趁热抽滤，合并提取液。
一、实验目的与要求 1．了解蒽醌及蒽醌衍生物的理化性质及提取方法 2．掌握热回流提取中草药的方法及注意事项 3．掌握蒽醌类化合物应用 PH 梯度萃取的方法进行分离的原理及操作 4．熟悉蒽醌类成分的性质及鉴定方法（羟基位置及呈色之间的关系） 二、实验原理 利用乙醇作为提取溶剂， 可以把不同性质的游离蒽醌及其苷提取出来。 蒽醌苷元乙醚中 溶解度较大，用乙醚进行萃取，得到总蒽醌苷元。根据蒽醌衍生物的酸性强弱，用不同 的碱液进行梯度萃取分离，最后得到不同的蒽醌苷元。 1．大黄酸（Rhein） 本品为黄色针状结晶（升华法） ，熔点 321-322℃，330℃分解。几乎不溶于水，溶于碱 和吡啶，溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。
乙醚液 （2） 5% Na2CO3 水溶液萃取 3 次
NaHCO3 水溶液 加 HCl 酸化，调 PH=2,抽滤，水洗至 中性 沉淀（橙红色结晶） （大黄酸）Na2CO3 水溶液
乙醚液 加 HCl 酸化，调 PH=2 抽滤，水洗至中性 沉淀 （主要含有大黄素）
（3）加 2% NaOH 水溶液，萃取 3 次
NaOH 水溶液 加 HCl 酸化，调 PH=2，抽滤，水洗至中性 沉淀（芦荟大黄素等混合物） （1）将含有游离蒽醌的乙醚溶液置于 500ml 分液漏斗中，加 5% NaHCO3 水溶液 40ml，振 摇提取（缓慢振摇，防止乳化现象发生） ，放置分层，放出下层 NaHCO3 溶液，置于另一三
角烧瓶中，再加 5% NaHCO330ml 萃取两次，合并 NaHCO3 萃取液，小心滴加 HCl，使溶液 PH=2，沉淀析出，抽滤，洗涤沉淀至水洗液呈中性，沉淀Ⅰ（大黄酸）备用。 （2）留在分液漏斗中的乙醚溶液，用 5% Na2CO3 溶液 40ml（30ml2 次）萃取 3 次，合并萃 取液，小心滴加 HCl 至 PH=2，待沉淀析出，抽滤，水洗涤沉淀，至洗涤液呈中性，沉淀Ⅱ （大黄素）备用。 （3）留在分液漏斗中的乙醚溶液，用 2% NaOH 溶液 40ml（30ml2 次）萃取 3 次，小心滴 家加 HCl，使溶液 PH=2，放置待沉淀析出，抽滤，水洗至沉淀呈中性，沉淀Ⅲ（芦荟大黄 素等混合物）备用。 3．鉴别 （1）薄层检查： 取三部分萃取物进行薄层展开。 吸附剂：硅胶 G 湿法铺板，105℃活化 30 分钟。 样品：三种沉淀溶于乙醇， 标准品：大黄酸乙醇溶液，大黄素乙醇溶液 展开剂：石油醚（30~60℃）-醋酸乙酯-甲酸(15：5：1)上层 显色：紫外灯下可观察到黄色荧光，5%KOH 喷雾显红色。 （或者展开剂：环己烷-醋酸乙酯（7：3） ，饱和 20 分钟，展距 10cm，晾干后，氨水熏至斑 点清晰）
滤液（作糖份鉴定用）
沉淀 水洗，粗品用 95%乙醇大 约 20ml 回流溶解，趁热 过滤，放置，加水至浓度为 50%左右，放置。 黄色细针状结晶（槲皮素） 抽滤，60~70℃下干燥
3．芦丁的定性反应 取芦丁 3-4mg，加入甲醇 5-6ml 使溶解，分成 3 份做下述实验。 （1）盐酸-镁粉反应 取上述溶液 1~2ml，加少量镁粉，再加 2 滴浓盐酸，振摇，观察颜色变化（逐渐出现红 至紫红色） 。 （2）锆盐-枸橼酸反应 取上述溶液 1~2ml，然后滴加 2%的 ZrOCl2 的甲醇溶液，观察颜色变化（生成黄色的络 合物） 。然后向试管中加入 2%的枸橼酸甲醇溶液，观察颜色变化（黄色溶液显著褪色） 。 （3）Molish 反应 取上述溶液 1~2ml，置于试管中，加 10%等体积的α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴
天然药化 大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
大黄是常用中药，具有泻下攻积、清热泻火、解毒止血、活血化淤的功效。大黄种类较 多，药典收载的大黄品种是蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄及药用大黄的根及根茎。大 黄药材中主要含有蒽醌类化合物及其苷， 其中蒽醌苷类化合物是其泻下攻积作用的主要 成分，某些游离的蒽醌如大黄酸、大黄素具有明显的抗菌活性。
加少量浓硫酸，观察现象（两液界面处产生紫红色的环） 。 4．芦丁和槲皮素的薄层色谱鉴别 样品：5%的槲皮素的乙醇溶液 5%的芦丁的乙醇溶液 对照品：5%的槲皮素标准品的乙醇溶液 5%的芦丁标准品的乙醇溶液 薄层板：硅胶 G 以 0.4%CMC-Na 为黏合剂制板，105℃活化 1 小时。 展开剂：CHCL3-MeOH-HCOOH（15：5：1） 显色剂： 喷 1%AlCl3 的乙醇溶液， 显黄色斑点 （紫外灯下观察显更加明显的黄色荧光） 。 5．糖的纸层析鉴别 层析滤纸：中速（5×20cm） 样品： 取水解芦丁之后的滤液 10ml， 水浴加热， 且在搅拌下加适量碳酸钡细粉至中性， 过滤，取滤液并浓缩至 2ml 左右，放冷后，供纸层析。 对照品：1%葡萄糖标准品水溶液 1%鼠李糖标准品水溶液 展开剂：正丁醇：醋酸：水（4：1：5 上层） 显色剂：喷邻苯二甲酸苯胺溶液后，105℃烘烤 5 分钟，显棕红色斑点。 6.光谱测定 芦丁溶液的配制 精密称取的芦丁纯品 1g，用无水甲醇溶解，并稀释至 10ml，从中吸取 5ml，置 50ml 容量瓶 中，用甲醇稀释至刻度。 A. 甲醇光谱：取样品液置石英杯中，至 200～500nm 内进行扫描，重复一次，观察紫外光 谱。 B. 甲醇钠光谱：取样品液置石英杯中，加入甲醇钠溶液 3 滴后，立即测定，放置 5 分钟后 再测一次。 C. 三氯化铝光谱， 在盛有样品液的石英杯中， 加入三氯化铝 6 滴， 放置 1 分钟后进行测定。 测定后加入 3 滴盐酸溶液（盐酸：水＝1：1）再进行测定。 D. 醋酸钠光谱：取样品溶液约 3ml，加入过量的无水醋酸钠固体，摇匀（杯底剩有约 2mg 的醋酸钠） ，加入醋酸钠后两分钟内测定，5 分钟到 10 分钟后再测定一次。 E. 醋酸钠硼酸光谱：方法一：在测定用的盛有样品液和醋酸钠溶液的石英杯中加入足够量 的硼酸使成饱和溶液进行测定。本法适用于在加入醋酸钠 5 分钟后有分解现象者，方法 二：于 3ml 样品中加入 5 滴硼酸饱和溶液后，快速加入醋酸钠，立即测定。
残渣
滤液 在 60~70℃下浓盐酸调至 PH4~5，静置 1 小时， 抽滤，洗涤沉淀至中性。
滤液
沉淀（粗制芦丁） 将沉淀悬浮于 300ml 蒸馏水中，加热煮 沸 15 分钟趁热抽滤。
残渣
滤液 充分静置过滤，60~70℃下干燥。 芦丁（精制品）
2．芦丁的酸水解 称取精制品芦丁约 2g 研细，加 1%H2SO4150ml，投入 500ml 锥形瓶中，放沸石，直火沸 腾后，保持 2 小时，放冷后抽滤。
滤渣
滤液 滤液移入 500ml 的蒸馏烧瓶中，体积勿超 过瓶容积的 1/2， 常压下回收乙醇至糖浆状 （勿太稠厚） ，得乙醇总提物。加入乙醚 60ml（丙酮 10ml） ，时时振摇，将上层乙 醚液倾入另一三角烧瓶中，残渣加乙醚 40ml（丙酮 2ml） ，合并乙醚提取液。 总游离蒽醌
2．游离蒽醌的分离 乙醚提取物 （1）5%NaHCO3 水溶液萃取 3 次
OH
O
OH
COOH O
大黄酸（Rhein）
2．大黄素（Emodin） 本品为橙黄色结晶（丙酮） ，几乎不溶于水，溶于乙醇及 NaOH，NaCO3，NH4OH 水溶 液中，在乙醚中溶解度为 0.14%（25℃w/w） 。
OH
O
OH
HO O
CH 3
大黄素（Emodin）
3．大黄素-6-甲醚（Physcion） 为金黄色针晶， ，几乎不溶于水熔点 207-209℃。溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯、乙醇、 冰醋酸等。
OH HO O OH
OH
OH OO
O CH2 OO OH OH OH
OH HO O OH OH O OH
CH3 OH OH
芦丁(rutin)
槲皮素（quercetin）
CH2O H O
OH O
OH
OH
H OH
OHΒιβλιοθήκη CH3H OHOH OH
葡萄糖
鼠李糖
三、实验内容（12 学时） 1．芦丁的提取、精制 槐花米粗粉（60g） 置 1000ml 烧杯中，加水 600ml，加入石灰乳（大约 2-3g） ，搅拌， 调 PH8-9，加热至微沸，保持 30 分钟（维持 PH8-9）趁热先用脱 脂棉过滤，然后抽滤。
实验三 槐米中芦丁的提取分离、鉴定及槲皮素的制备
芦丁又叫芸香苷，广泛存在于植物中。其中以槐花米和荞麦叶中含量最高，使用最多的 是槐花米。 槐花米为豆科植物槐（Sophora japonica L.）的未开放花蕾。味苦性凉、具有清热凉血、 止血的功效。炒炭常用来治疗各种出血症，如肠风便血、痔血、尿血、崩漏下血等。 槐花米的主要成分为芦丁。 芦丁可降低毛细血管脆性和调节渗透性。 临床上用作毛细血 管脆性引起的出血症，并常作为高血压症的辅助治疗药， 一、实验目的与要求 1．掌握酸碱法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2．掌握化学鉴别实验、苷的水解及薄层检查等方法在苷类化合物鉴定中的作用。 3.了解 UV 在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 二、实验原理 芦丁（rutin）C27H30O16：浅黄色针状结晶 mp174~178℃（含三分子结晶水） ；188℃（无 结晶水） 。难溶于冷水，可溶于热水、热甲醇、冷甲醇、热乙醇、冷乙醇，不溶于乙醚、氯 仿、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液，酸化后析出。全水解得槲皮素和葡萄糖及鼠 李糖。 槲皮素（quercetin）C15H10O7﹒2H2O:黄色结晶,mp313~314℃（2 分子结晶水） 。316℃ （无水物） 。能溶于冷乙醇、易溶于沸乙醇，可溶于甲醇、乙酸乙脂、冰醋酸、吡啶、丙酮 等，不溶于水、苯、乙醚、氯仿、石油醚等。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。
具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。
以分离酸度不同的蒽醌苷元。
也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。
（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g加20%H2SO4 100ml，乙酸乙酯250ml，水浴回流2h，稍冷过滤乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液5%NaHCO3溶液萃取三次（80ml，60ml，40ml）碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层乙酸乙酯层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 0.25%NaOH溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或取三次（40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层乙酸乙酯层丙酮精制滴加浓盐酸，调 5%NaOH溶液萃橙色结晶（大黄素）节pH=2，放置取三次（40ml/次）沉淀物调pH=2,沉淀过滤（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素） -乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。
实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定
实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定一、实验目的：1、了解一个天然药物中含有的主要有效成分并对其进行提取分离。
2、掌握植物中活性成分的化学检测方法，并进行初步的鉴定工作。
二、实验原理：大黄是一味天然草药，具有泻下通便之效果。
其主要活性成份是大黄素与蒽醌类物质，其中瑞贝洛Ⅱ（rustbelineⅡ）、大黄素（emodin）、芦丁（rutin）等，在医学上有广泛的应用。
大黄素与蒽醌类物质在自然状态下大多处于质子化状态，存在于与水相较弱的有机溶剂中。
为了获得高品质的大黄素与蒽醌类物质，需要对有机溶剂进行筛选，筛选出适宜的溶剂并对大黄中的主要成分进行提取与分离工作。
三、实验步骤：A. 大黄中蒽醌的提取分离1、将粉末大黄紫锥子取 1g 加入圆底烧瓶中，加入 15 mL 95% 乙醇溶液，加热回流30分钟。
2、冷却后用干净的滤纸分离上清液用热水冲涤保持颜色相同（保留水冲涤液备用）。
3、将去溶剂后的渣用 10 mL 苯醇溶解，并过滤写滤液保存，不断冲涤干净渣质。
4、将 2mL 苯醇滤液分离于干净的离心管中，在室温下慢慢加入正硫酸，足量使呈酸性.，加入 5 mL 甲醇，蒸去溶剂后，注 1mL 50%氨水，筛过活性炭或过硅酸钠脱除杂物，使溶液呈现深黄色液体。
5、以上溶液在 20ml 分液漏斗中加入 20-25 mL 丙酮，振荡混合，分离两层液体，取下蒸馏收干（可以置于干燥器或开放场地自然干燥，当感觉无水分或连续称量两次称量值一致时即可）6、将干燥沉淀取少量溶解于绝对丙酮中成特邻醌的溶液。
7、分别进行下列试验来分离纯特邻醌：（1）纯特邻醌呈现红色；（2）用极少量生石灰进行检测，呈现橙色。
B. 大黄中大黄素含量的色谱定量测定色谱图谱图峰形面积法进行测定。
1、用同上操作，按“ A ”-“ E ”方法操作，取所得特邻醌溶液 1-5 mL 再加入丙酮使其溶解（溶液的浓度以能出现三个吸光峰为适宜，可调配NaOH溶液调节pH 值，使吸光峰相对集中于三个波长摆荡之一）。
实验八大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
留存的乙醚液，置圆底烧瓶中，回收乙醚，放置。抽滤收 集沉淀，经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。 4．鉴定 （1）碱液试验：分别取蒽醌化合物结晶少许，置试管中，加 1ml乙醇溶解，加数滴5%氢氧化钾试剂振摇，溶液呈红色 （2）醋酸镁试验：分别取各蒽醌化合物结晶少许，置试管中， 加1ml乙醇溶解，加数滴0.5%醋酸镁试剂，产生橙、红、紫等颜色
③
芦荟大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用0.5%NaOH水溶液 每次15ml萃取3～4次。乙醚溶液再以蒸馏水萃取 2～3次，以洗去碱液。合并NaOH和水的提取液， 加盐酸调pH2~3，放置。抽滤析出沉淀，收集沉淀， 经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。
（三） 蒽醌类化合物的提取与分离
蒽 醌 的 提 取 与 分 离
蒽苷的分离 比苷元困难 ，分离前一 般先用溶剂 法除去大部 分杂质，得 较纯的总苷 后，再用柱 色谱分离。
（3）薄层检识
（4）纸色谱检识
支持剂：新华色谱滤纸（中速、20cm×7cm） 样品：各蒽醌成分1%三氯甲烷溶液
对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液； 1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液
展开剂：甲苯 显色剂：0.5%醋酸镁甲醇溶液
四、思考题
1．在实验过程中采用pH梯度萃取法分离游离蒽醌，萃取过程中 若出现乳化现象，应如何处理？ 2．大黄酚和大黄素甲醚结构相似，怎样分离？
②
大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用5%Na2CO3水溶液每次 15～20ml如上法相同萃取数次，直至提取液呈色较浅时为止， 约需6～7次，合并Na2CO3提取液，小心滴加盐酸酸化至pH2~3， 放置待沉淀析出，抽滤收集析出物经水洗涤，抽干移至表面皿上， 干燥后称重。
实验六大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(二)
实验目的
1. 通过大黄酚及大黄素甲醚的分离试验，掌 握硅胶柱色谱的操作技术。 2. 掌握蒽醌类化合物的化学鉴定及色谱鉴定 技术。
实验原理
大黄中游离蒽醌的极性大小顺序为：大黄酸>大黄 素>芦荟大黄素>大黄素甲醚>大黄酚。前三种可用 pH梯度萃取法分离。 大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用 硅胶柱色谱法进行分离。 总蒽醌及各种分离成分可用色谱法进行鉴别。同时 硅胶柱色谱洗脱液可用色谱法鉴别后，合并单一成 分的洗脱液。来自注意事项
①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在 于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可 溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥 发，严防中毒； ②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去， 并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取 液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余 液进行下一步分离试验用。 ③ 分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步 最好用新鲜CHCl3，回洗碱水液。回洗液应弃去，可除去混 入碱液中的大黄素甲醚和大黄酚。 留取5ml的三氯甲烷提取液做总样，供最后层析鉴定用。
仪器、材料与试剂
实验试剂及试药： 大黄药材粗粉2Kg，氯仿500ml 10瓶，浓硫酸2瓶，浓盐酸2 瓶，冰醋酸，苯，乙酸乙酯，碳酸钠（5% Na2CO3溶液 3000ml），碳酸氢钠（5% NaHCO3溶液3000ml），氢氧 化钠（5% NaOH溶液1000ml），氢氧化钾，醋酸镁试剂等。 实验仪器设备： 500ml圆底烧瓶10个，冷凝回流管10只，500ml分液漏斗10 只，500ml烧杯20只，100-250ml量筒10只，常压漏斗（510cm斗径10只），定性滤纸（10cm）2盒，毛细管点样器1 盒，玻璃喷瓶4套，广谱PH试纸5盒，纱布一卷，多孔水浴 锅5台，旋转蒸发仪2台。
实验五大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定(一)
2）大黄素的分离与精制
将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中，用PH10缓冲液（5%NaCO3溶
3）芦荟大黄素的分离和精制
余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO3:5%NaOH (9:1) 碱水液200ml振
摇萃取2次，碱水液加HCl酸化，析出的沉淀过滤水洗干燥，用10ml乙酸乙 酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。
注意事项
①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在 于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可 溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥 发，严防中毒； ②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去， 并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取 液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余 液进行下一步分离试验用。 ③ 分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步 最好用新鲜CHCl3，回洗碱水液。回洗液应弃去，可除去混 入碱液中的大黄素甲醚和大黄酚。 留取5ml的三氯甲烷提取液做总样，供最后层析鉴定用。
2．分离原理——pH梯度法
根据蒽醌苷元酸性强弱不同，选用不同的pH碱液进行分
步萃取，以分离酸度不同的蒽醌苷元。大黄酸连有COOH，酸性最强；大黄素连有β-OH，酸性第二；芦荟 大黄素连有苄醇-OH，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均 具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH3和-CH3，后者只连 有-CH3，因而后者酸性排在第四位。
1．大黄总蒽醌苷元的提取
大黄粉50g，置于500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和三氯甲烷250ml，
水浴回流提取4h，放置，冷却后过滤，残渣弃去，三氯甲烷提取液置于分液 漏斗中，分出酸水层，得三氯甲烷提取液。
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄是一种广泛应用的中药材，含多种活性成分，其中最重要的是蒽醌类化合物。
这些化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，因此成为广泛应用的化合物之一。
本文将介绍大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定过程。
大黄通常通过醇提、水提、超声波提取等方式提取蒽醌类成分。
醇提法是最常用的提取方法之一。
一般可以采用乙醇、甲醇或酒精等有机溶剂进行提取。
以乙醇为例，其提取过程如下：（1）将大黄切碎，加入适量的96%的乙醇。
（2）加热回流提取1小时。
（3）过滤，滤去残渣。
（4）将过滤液浓缩至干燥。
（5）得到蒽醌类化合物粗提取物。
大黄中的蒽醌类成分通常需要通过柱层析、薄层层析、高效液相色谱等多种色谱技术进行分离。
其中，高效液相色谱技术最常用。
根据不同的色谱柱填料、移相系统、检测器等条件的不同，可以对获得的粗提取物进行进一步分离。
以高效液相色谱为例，其分离过程如下：（1）将粗提取物溶于少量甲醇中。
（2）进行反相或正相高效液相色谱分离。
大黄中蒽醌类成分的鉴定主要采用紫外分光光度法、质谱分析法和红外光谱法等技术。
其中，以紫外分光光度法为例，其鉴定过程如下：（1）使用UV特征峰进行鉴定。
（2）将标准品或纯品溶于适量的甲醇中，按比例稀释。
（3）将样品溶液置于紫外分光光度计检测器中。
（4）记录在特定波长下的吸光度。
（5）通过计算溶液中所含的蒽醌类成分的浓度来鉴定蒽醌类化合物。
总之，大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定可以采用多种技术进行。
通过这些技术的应用，可以得到单纯、纯度高的化合物，为下一步的药理、毒理研究提供了保障。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
药渣（弃）
氯仿提取液
实 验 内 容（二）
蒽醌苷元的分离和精制（1）
蒽醌类成分的缓冲纸色谱
层析材料：3×12㎝滤纸 样 品：大黄氯仿提取液 展 开 剂：氯仿（水饱和） 显 色：自然光下观察
3%NaOH 5%Na2CO3:5%NaOH(9:1) PH9.9 pH8 pH3
实 验 内 容（二）
蒽醌苷元的分离和精制（2）
思
考
题
1.大黄中5种羟基蒽醌的酸性和极性大小应如何 排列？为什么？ 2.pH梯度法的原理是什么？适用于哪些中药成 分的分离？
蒽醌类成分的鉴定
实验原理
提取： 蒽醌苷
酸 水 解
氯仿提取
苷元(溶于热氯仿)
总蒽醌苷元
实验原理
分离：
OH O OH
R1 O
R2
由于各羟基蒽醌结构上的不同所 表现的酸性不同，用pH梯度萃 取法分离他们；大黄酚和大黄素 甲醚酸性相近，利用其极性的差 异，用柱色谱分离之。
R2= CH3 R2= CH3 R2= CH3 R2=CH2OH R2=COOH
实 验 内 容（二）
蒽醌苷元的分离和精制（3）
柱层析法分离大黄酚、大黄素甲醚
装柱（湿法装柱） 上样（干法上样）
洗脱剂1 石油醚-乙酸乙酯（98：2）
洗脱
洗脱剂2 石油醚-乙酸乙酯（95：5）
流份检查（合并相同流份）
实 验 内 容（三）
大黄蒽醌类成分的鉴定
（1）化学鉴定 （2）色谱鉴识
实 验 内 容（三）
A大黄酚（chrysophanol） R1=H B大黄素（emodin） R1= OH C大黄素甲醚（physcion） R1=OCH3 D芦荟大黄素（aloe-emodin） R1=H E大黄酸（rhein） R1=H
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.
试验三 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定（一）概述大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。
大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。
已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：OOHR 2OHR 112-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH大黄素(Emodin)橙色针晶 256~257℃ -H-CH 2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H-CH 3大黄酚(Chyrsophanol)金色片状结晶196℃大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。
大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。
（二）实验目的和要求1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。
2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。
3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。
4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。
（三）实验方法1．大黄总蒽醌苷元的提取大黄粗粉（100g）加20%H2SO4水溶液200ml，氯仿500ml，水浴回流4hr，过滤，测量滤液体积。
残渣氯仿提取液（约450ml）注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。
2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。
具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。
以分离酸度不同的蒽醌苷元。
也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。
（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层丙酮精制橙色结晶（大黄素）节pH=2沉淀物（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 3大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl 0.25% NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。