梅毒检测室内质控调查品使用说明解读
梅毒血清学检测室内质控调查品使用说明
1. 预期用途:梅毒血清学检测室内质控调查品用于梅毒血清学检测的室内质量控制。
批号为 1401,分为特异性和非特异性两种质控调查品。
非特异性质控品的浓度为 800mIU/ml;特异性质控品分为两种浓度:21mIU/ml用于化学发光法和 ELISA , 80mIU/ml用于 TPPA 、雅培等方法。
三种浓度的质控调查品均为弱阳性,测定值必须大于 CutOff 值或为阳性。
2. 分装规格与保存要求:梅毒血清学检测质控调查品为 0.5ml/支,请放 -20°C 保存,有效期至 2014年 12月 31日。
质控调查品复溶使用后,请置于 4°C 保存, 4周内使用,切勿反复冻融。
3. 检测要求:实验室应使用与临床标本检测相同的试剂和方法同步检测质控调查品, 并严格按照试剂使用说明书操作。
4. 质控统计要求:每月通过计算机网络向本中心上报结果。
化学发光和 ELISA 方法采用 S/CO (S 为样调查品测定 A 值, CO 为 cutoff 值值进行统计。
在本中心的质控软件中累积≥ 20 次的室内质控调查品测定数据 , 完成质控数据的初始化 , 使用 Levey-Jennings 质控图开展室内质量控制, CV 应<25%。
检测标本量少,检测频次较低的单位,初始阶段采用即刻法统计(具体方法参见软件应用说明。
TPPA 、 TRUST 、 RPR 等使用滴度方法报告结果的方法采用滴度值进行统计(具体方法参见软件应用说明。
5. 注意事项:该调查品以人血清为基质, 已经过病毒灭活。
使用时请仍视同传染性样本对待。
上海临床检验质量控制中心
2014年 1月 2日。
梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)标准操作规程
1、检验申请单独检验项目申请：梅毒螺旋体抗体（缩写TP ELISA）测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2、标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中，或采用含分离胶的真空采血管。
也可采集血浆，用肝素、EDTA或枸橼酸盐抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对检测结果可能有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在置1-2h后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。
离心必须达到3000rpm 15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。
2.2.2标本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2-8℃）稳定7d，在-20℃最多可保存4周。
避免反复冻融。
不可使用热灭活的标本。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d。
2.3标本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。
3．方法原理本试剂盒用梅毒螺旋体抗原包被反应板，用梅毒螺旋体抗原标记辣根过氧化物酶，应用双抗原夹心法原理，检测人血清或血浆样本中的梅毒螺旋体抗体。
4．试剂及其他用品4.1试剂：梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒，由上海科华生物技术有限公司出品，试剂盒药品批准文号：国药准字S2*******(96人份)。
未打开的试剂盒保存于2-8℃，不可冻存。
微孔反应板打开包装后，应立即将未试用的板条装入有干燥剂的自封袋中密封，置2-8℃避光保存。
梅毒抗体(TP)实验操作规程(吉比爱)
1.目的和适用范围：1.1.为保证血液检测的结果正确性，规范实验操作，特制定本操作规程。
1.2.适用于本实验室，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
2.术语：无。
3.职责：3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
3.2.实验室负责人负责最终实验室报告的签发。
4.操作说明4.1.实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心酶联免疫法原理检测人血清或血浆中的TP抗体。
用高纯度基因重组TP抗原包被酶标板，待检血清或血浆中的抗TP抗体可与包被抗原反应，再与酶标TP抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物。
加底物（TMB）显色，在酶标仪上测定后根据吸光值（A值）判定有无TP抗体的存在。
4.2.实验所需设备和材料：酶标读数仪、洗板机、100ul加样器、37℃恒温孵育箱，一次性加样吸头、试剂槽、过程记录单等。
4.3.实验室环境条件：实验检测的室温应保持在18℃-25℃之间。
4.4.实验操作步骤：4.4.1.准本：自2℃-8℃冰箱中取出试剂盒，在室温中平衡30分钟,包被板平衡至室温后才可打开外包装铝箔袋，以防止板条吸收口气中的水蒸气，将20倍浓缩洗涤液用纯化水20稀释后备用。
剩下的试剂及时封存于2℃-8℃冰箱中，以备后用。
4.4.2.设定：将待测样品按序排列设定加样顺序号。
每板试验设空白对照1孔（若用双波长检测，可不设空白对照孔），阴性对照3孔，阳性对照2孔。
4.4.3.加样：将所需数量的板条固定于板架。
除空白对照孔外，在相应孔中加入阴性、阳性对照和待检样本各50微升。
4.4.4.温育第一次：贴上封口胶，置37℃温育60分钟。
4.4.5.洗涤：小心撕去封口胶。
4.4.6.手工洗操作：弃去各孔中液体、拍干。
每孔注满洗液，静置5~10秒后弃尽，洗涤5次，拍干。
4.4.7.洗板机操作：每孔加入350ul洗液，每次洗涤间隔5~10秒，洗涤5次，拍干。
4.4.8.加酶：除空白孔外，每孔加入酶工作液50ul。
梅毒实验室诊断技术及梅毒实验室检测技术规范简介 ppt课件
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非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理
梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主迅速对螺旋体表面的 脂质作出免疫应答，在3周-4周产生抗类脂抗原的抗 体（反应素）。抗体主要是IgM和IgG混合抗体。 未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经 正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。
问题2：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检 测方法
梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA） 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT) 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） 化学发光免疫分析法（CLIA）
ppt课件 32
TPPA/TPHA
TPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试验
非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断
RPR
VDRL
滴度：出现凝集 反应的血清最高 稀释倍数。
ppt课件
TRUST
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非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义
早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗
后3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度， 6个月下降4个稀释度。
一期梅毒1年后转为阴性 二期梅毒2年后转为阴性。 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约
有6 ～ 12个规则的螺旋
基本结构为一原生质的圆柱体， 为两层膜所围绕 行动缓慢而有规律 - 围绕其长轴旋转中前后移动
- 伸缩其圈间之距离而移动
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概述-传播途径
性接触是主要的传染途径
未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染 性
随着病期的延长，传染性越来越小
NJKM-SOP0301.17---梅毒TRUST检测作业指导书--Version4.0
梅毒TRUST检测作业指导书1、试验原理：梅毒非特异抗体检测是采用抗原抗体凝集反应。
其原理如下：采用VDRL抗原（牛心磷脂、卵磷脂及胆固醇）重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成，供在白色卡片上进行实验，以检测血清或血浆中反应素用。
2、样本收集和贮存：标本仅限于血清或血浆。
适宜标本量为血清或血浆500ul，最少标本用量为血清或血浆200ul，三天内检测的标本应在2-8℃保存，三天内不检测的标本应贮存在-20℃，同时避免反复冻融血清。
对于出现以下情况之一的标本应拒收：送检血清或血浆低于最少用量；蛋白变性标本；标本中含有颗粒物质；严重溶血、严重脂血的标本；有微生物污染的标本。
3、安全防范：3．1检测试剂盒及内容物视为有传染性物质，属于生物危害物品。
3．2移液过程禁止用口。
3．3 在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。
^3．4使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服。
使用后请彻底洗手清洁。
3．5患者样本及其他潜在感染材料试验后应放入医用垃圾桶内。
4、试剂：4．1 储存与稳定性：试剂应在2-8℃保存，效期1年。
4．2试剂盒组成：（上海荣盛）TRUST抗原悬液×1瓶阳性对照血清 1mL×1支阴性对照血清 1mL×1支实验专用卡片 120人份专用滴管及针头 1套'说明书 1份5、仪器设备：5. 1振荡器5. 2微量移液器6、操作步骤：6. 1分别吸取阴性和阳性对照，各滴加l滴(50UL)（或用加样枪吸取50 UL)到反应卡的二个圈内铺匀。
6. 2吸取血清或血浆50UL (不需灭活)均匀涂满到白色卡片的另一个卡圈内。
6. 3轻轻摇匀抗原悬液，用加样枪吸取50 UL于血清圈内。
6. 4按每分钟100转振荡或摇动卡片8分钟后，立即肉眼观察结果。
6. 5结果记录于《免疫室夜班项目操作表2》。
7、结果解释？7．1肉眼见到较大或较小的红色凝聚物，定为阳性反应。
代表该标本中可以检测出反应素。
检验科室内质控的操作详解演示文稿
d) 检查不同的质控批数。
✓ 用22S规则检验同一质控物。当同一质控物 本批次的测定值和前面测定值同时超过 X+2S或X-2S 质控限时，判断为失控；不 能报告病人的测定结果。
✓ 用41S规则检验不同质控物。当与包括本 批次两次测定值在内的连续的4个质控测 定值同时超过X+1S或X-1S时 ，判断为失 控；不能报告病人的测定结果。
b. 当G上限和G下限处于G0.05n和G0.01n这间时处于警告。 c. 当G上限和G下限>G0.01n时为失控。
4. 更换质控品：
➢ 要更换质控品时，应在“旧”批号质控品 使用结束之前，将新批号质控品与“旧” 批号质控品同时进行测定，重复上面提及 的过程，设立新质控图的中心线（均值） 和质控限。
第十一页，共27页。
d. R4s：在同一批内最高质控测定值与最低质控 测定值之间的差值超过4S，对随机误差敏感。
e. 31s：3个连续的质控测定值同时超过X+1S或X-
1S，对系统误差敏感。 f. 41s：4个连续的质控测定值同时超过X+1S或X-
1S，对系统误差敏感。
g. 7T：7个连续的质控测定值呈现出向上或向下的趋 势。
h. 10X：10个连续的质控测定值落在均值的同一侧是
系统误差。
第十二页，共27页。
② Westgard多规则质控方法（针对一个批次的质 控品或两个质控品）
➢ 经典的Westgard多规则质控方法:Levey-Jennings质控方法 是临床检验质控工作最简单、也最常用的方法，其质控
规则仅为单独的12s或1 3s，即仅以一个规则（X±2s或 X±3s作为质控限）来判断分析批在控或失控。换 言之，此种质控方法仅涉及一种质控规则而未同时 涉及多个质控规则。它方便易行但却相对的简单粗 糙，往往不能满足更高的质控要求。为此， Westgard等在Levey-Je nnings质控方法和Havend等人 工作的基础上，建立了同时使用多个规则来进行临 床检验质量控制的方法，即通常所称的Westgard多 规则质控方法 。
传染病免疫检验室内质控的标准操作规程
SOP_13-7传染病免疫检验室内质控的标准操作规程【目的】规范传染病免疫检验室内质量控制。
【SOP文件的更改】该标准操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后生效。
【操作步骤】一、室内质控品的选择理想的室内质控品至少应具备以下特点：人血清基质；无传染性；瓶间变异小， CV％<1％；冻干品复溶后稳定性好，多数项目2-8℃稳定7天，-20℃稳定30天；有效期应在1年以上。
二、质控品的正确使用与保存严格按质控品说明书操作和保存，不使用超过保质期的质控品；冻干质控品的复溶确保所用溶剂的质量和所加溶剂量的准确性，复溶时应轻轻摇匀，使内容物完全溶解，切忌剧烈振摇，防止泡沫产生，复溶时间不得少于20分钟；质控品要在与患者标本同样测定条件下进行测定；每天至少做一次质控品。
三、室内质控图的绘制1.均值和质控限的确定在开始室内质控时，首先要确定质控图的均值和质控限，将质控品与常规标本一起测定。
根据20次质控结果（每天开一瓶，一天测一次），对数据进行离群值检验(剔除超过3s外的数据)，计算出平均数和标准差，作为暂定均值和暂定标准差。
以此暂定均值和标准差作为下一个月室内质控图的均值和标准差进行室内质控；一个月结束后，将该月的在控结果与前20个质控测定结果汇集在一起，计算累积平均数和累积标准差（第一个月），以此累积平均数和标准差作为下一个月质控图的均值和标准差。
重复上述操作过程，连续三至五个月。
以最初20个数据和三至五个月在控数据汇集的所有数据计算的累积平均数和标准差作为质控品有效期内的常规均值和标准差，并以此作为以后室内质控图的均值和标准差。
对稳定性较短的质控品，均值的建立可在3至4天内，每天分析每个水平质控品3至4瓶，每瓶进行2至3次重复。
收集数据后，计算平均数、标准差和变异系数。
对数据进行离群值检验(剔除超过3s的数据)。
如果发现离群值，需重新计算余下数据的平均数和标准差。
梅毒血清学检测操作规范
实验室应保持整洁、 干燥、通风良好， 定期进行消毒和清 洁工作。
实验室废弃物应按 照医疗废物处理规 定进行分类、存放 和处置。
实验室应建立安全 管理制度，对工作 人员进行安全培训 和考核，确保实验 室安全运行。
正确处理医疗废物和废液
医疗废物分类：感染性废物、病理性废物、损伤性废物、药物性废物和化学性废物 医疗废物处理：使用专用容器收集，及时送往医疗废物处理中心 废液处理：使用专用容器收集，加入消毒剂后，按照医疗废物处理方式处理 注意事项：避免医疗废物和废液对环境和人体造成危害
穿刺：用采血针穿刺静脉，轻轻回 抽，使血液流入采血管
止血：用止血带压迫穿刺部位，止 血后取下止血带
记录：记录采血时间、部位、样本 量等信息
标记样本并记录相关信息
标记样本：在采 集样本时，需要 使用唯一标识符 对样本进行标记， 确保每个样本的 唯一性和可追溯 性
记录相关信息： 在采集样本时， 需要记录与样本 相关的信息，如 患者姓名、性别、 年龄、采集时间、 采集部位等，以 便后续的检测和 分析
样本容器：采集 的样本需要存放 在适当的容器中， 容器需要保持清 洁、干燥，并使 用适当的标签进 行标识
样本保存：采集 的样本需要按照 规定的温度和时 间进行保存，以 确保样本的稳定 性和可靠性
保证样本质量和安全
采集前准备：确保采集器具无菌、干燥、密封 采集方法：选择合适的采集部位，避免污染 采集时间：在合适的时间段内采集，避免影响结果 样本保存：低温保存，避免细菌繁殖
记录和文档管理
记录检测过程和结果
记录检测过程：详细记录检测的操作步骤、试剂使用、仪器校准等信息 记录检测结果：准确记录每个样本的检测结果，包括阴阳性、滴度等数据 记录保存：将检测记录妥善保存，以便后续查阅和审核 记录规范：遵循统一的记录规范，确保记录清晰、准确、完整
梅毒实验室检测课件解析PPT幻灯片课件
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荧光螺旋体抗体吸收试验 （FTA-ABS）
原理
将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸 收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒 患者血清形成抗原抗体复合物，再加入异硫氰酸 荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅 毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。 在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光， 即为阳性反应。
测速:100转/MIN （±2转）
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检测流程（定性）
① 加样：
吸取50μl血清（浆）放在卡片圈中，并均匀地 涂布在整个圈内。
② 加抗原：
将抗原轻轻摇匀，用试剂盒提供的针头加1滴抗 原。
③ 反应：
将卡片置梅毒自动旋转仪8分钟立即在亮光下观 察结果。
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检测流程（定量）
① 稀释液准备：
5
梅毒的分期
6
梅毒的诊断
梅毒的诊断
早期梅毒（一期、二期和早期隐性梅毒）和晚期 梅毒（三期和晚期隐性梅毒）
必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析
梅毒的实验室检查
结果对诊断有决定性意义
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常用梅毒实验室检测方法
病原学检测 血清学检测
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病原学检查
取材方法
一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平 湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋 巴结穿刺术得到的组织液
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TPPA/TPHA原理
TPPA试验原理与TPHA试验基本相同
TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒 TPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞
特点
梅毒螺旋体(Nichols株)全抗原
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操作步骤
1. 试剂准备：试验前将试剂和待检标本恢复到室温。 2. 加稀释液：每份样本做4孔，加标本稀释液加至微量反应板
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：TPPA；组合项目申请：RPR+TPPA，临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.8下列标本为不合格标本2.1.8.1标本量不足。
2.1.8.2严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.8.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.8.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1标本保存时间：立即测定或放置2～8℃冰箱内。
2.2.2已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
3、方法原理凝集法。
将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶离子上.这种致敏离子和样品中的梅毒螺旋体抗体进反应发生凝集,产生粒子凝集反应,由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体,并且可用来测定抗体效价。
4、试剂及其他用品准备溶解液8ml/瓶×1，血清稀释液60ml/瓶×1，致敏粒子(冷冻干燥) 0.6ml/瓶×5，未致敏粒子 (冷冻干燥) 0.6ml/瓶×5，阳性对照血清 (液状) 0.6ml/瓶×5。
5 质控品与室内质控规则5.1 质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。
5.2 质控品测定：在每一批标本中测定阴性和阳性对照各一次。
5.3质控规则：阴性和阳性对照符合即可。
5.4如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。
6操作步骤6.1将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中，共计4滴（100ul），从第2孔至最后一孔各滴入1滴（25ul）。
梅毒常用的实验室诊断、疗效监测的检测方法应用评价
梅毒常用的实验室诊断、疗效监测的检测方法应用评价摘要】目的为检测方法和检测程序的选择提供科学依据，对梅毒目前常用的实验室诊断，疗效监测的检测方法进行卫生经济学评价。
方法对226个临床标本和30个标准血清盘标本，分别采用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）、梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、斑点金免疫层析试验（VIGCA）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）5类共6种方法进行盲法检测。
结果 TPPA、TPHA、ELISA-1、ELISA-2、DIGCA 5种特异性抗体检测方法对FTA-ABS的灵敏度分别为96.18%、92.83%、92.65%、98.21%、98.67%。
特异度分别为99.46%、99.89%、99.16%、99.42%、99.45%。
Youden,s指数分别为92.31%、90.25%、90.43%、97.15%、97.37%。
一致率分别为99.26%、99.58%、98.81%、99.13%、99.45%。
对30个血清盘标本，TPPA、TPHA、ELISA-1、ELISA-2、ELISA-3、DIGCA-1、DIGCA-2 7种特异性抗体检测方法对血清盘相应预期结果的灵敏度分别为92.00%、40.00%、100.00%、100.00%、100.00%、65.40%、64.00%。
特异度分别为100.00%、100.00%、86.00%、100.00%、85.70%、94.70%、100.00%。
Youden,s指数分别为92.00%、40.00%、86.80%、100.00%、86.80%、60.30%、66.70%。
一致率分别为93.00%、57.10%、95.60%、100.00%、95.70%、75.50%、75.50%。
TRUST-1、TRUST-2 2种非特异性抗体检测方法进行检测。
结果对血清盘相应预期结果的灵敏度都是83.50%，特异度分别为96.50%、93.20%。