氨在肝性脑病中的作用
试验目的
肝性脑病是继发于严重肝脏疾病的一系列精神神经综合症。
有关肝性脑病的发病机制有多种学说 其中氨中毒学说受到重视。
正常情况下 血氨的来源与清除保持动态平衡 而氨在肝中合成尿素是维持此平衡的关键。
病理情况下当肝功能严重受损时 或慢性肝硬化等疾病使肠壁吸收肠道内生成的氨过多 或经侧支循环进入体循环 均可导致血氨升高。
增高的血氨可通过血脑屏障进入脑组织 通过干扰脑组织对能量代谢 使脑内神经递质发生改变等作用 引起脑的功能障碍从而出现相应的症状和体征。
谷氨酸可与血中过多的氨结合而成为无毒的谷氨酸钠 由尿排出 进而降低血氨。
谷氨酸还可参与脑细胞的代谢 改善中枢神经系统的功能肠道给予醋酸溶液可使肠道PH降低 减少氨的吸收。
步骤
1、麻醉家兔称重 按5ml/kg体重剂量自耳缘静脉注射200g/L氨
基甲酸乙酯。
待家兔麻醉后背位固定于兔手术台上。
2、急性肝功能不全动物模型复制从胸骨剑突下沿腹正中线行长8cm的切口 打开腹腔 暴露肝脏 向下压肝脏 剪断肝与横膈之间的镰状韧带 使肝叶游离辨明肝脏各叶 用粗棉线绕肝左外叶、左中叶、右中叶根部一周 不结扎肝脏。
找出十二指肠 找其上壁血管较少的一处做一荷包环形缝合 在环形中间剪一个小口 沿小肠方向插入导管并向下推进4~5cm 切口荷包缝合固定导管 用止血钳关闭腹腔切口。
2、实验观察①观察并记录兔的一般情况 呼吸 频率、幅度
角膜反射 对刺激的反映等指标。
然后每隔5min向十二指肠导管中注入25g/L复方氯化铵溶液5ml 动态观察并记录各项指标的变化 直至出现全身性抽搐、角弓反张为止 记录所用的复方氯化铵溶液的总量 并计算每公斤体重的用量。
3、结果时间和用量
讨论
1、氯化铵经肠道水解为氢离子和氨，氨经肠道弥散入血，氨在肝脏可形成尿素，另外氨与谷氨酸钠结合为谷氨酰胺，由于肝脏被结扎，其解毒能力减弱，造成血氨升高，没有结扎肝脏的动物也造成死亡，说明肝脏的解毒能力有一定的限度！
2、氯化铵(NH4Cl)进入肠道后分解成NH3即氨，当大量的氨经肠道吸收进入血，使血氨增高而产生肝性脑病；肝脏大部分结扎后，造成肝脏鸟氨酸循环障碍，肝脏对氨的清除能力下降，高浓度的氨通过血脑屏障进入脑组织，引起肝性脑病。
由于肝脏大部在注射氯化铵前已被结扎，因此肝脏不能对氯化铵进行代谢、清除。
氨的毒性作用：（1）干扰脑细胞的能量代谢：进入脑内的氨与α- 酮戊二酸、谷氨酸结合生成毒性较低的谷氨酰胺，但此过程使脑组织A TP 生成减少、消耗增加，导致大脑能量严重不足，难以维持中枢神经系统的兴奋活动而昏迷。
(2) 影响脑内神经递质的平衡：血氨增高使脑内的神经递质平衡失调，兴奋性递质谷氨酸，乙酰胆碱减少，抑制性递质谷氨酰胺，氨基
丁酸增多，导致中枢神经系统功能紊乱。
(3) 对神经元细胞膜的直接抑制作用：氨对神经细胞膜上的Na+ - K+ - A TP 酶可能有干扰；氨可与K+ 竞争进入细胞内。
这些作用均可影响Na+ 、K+ 在神经细胞膜内、外的正常分布，从而干扰神经兴奋及传导活动。
氨中毒
氨中毒在肝性脑病发病中的作用【摘要】目的：①复制家兔急性肝功能不全模型，用十二指肠灌注复方氯化铵法，观察氨中毒对家兔脑功能影响；②用耳缘静脉注射谷氨酸钠法治疗肝性脑病，探讨其治疗机制。
了解降低肠道pH及注射复方谷氨酸钠是针对氨中毒的一项基本治疗措施。
方法：全班分为7大组，其中第一，二组为假手术组，其他组为模型组，第二，六，七组为症状明显抢救组，第一，三，四，五组为早期治疗组。
结果：结扎肝脏并注射复方氯化铵溶液，家兔出现肝性脑病，注射复方谷氨酸钠可解氨毒，醋酸也具有缓解作用；不结扎肝脏则不出现肝性脑病。
结论：血氨升高容易引起肝性脑病，肝脏对氨具有解毒作用，肝功能不全在肝性脑病的发生中占极大地作用。
复方谷氨酸钠可以治疗肝性脑病。
【关键词】氨中毒肝性脑病复方氯化氨复方谷氨酸钠AbstractObjective::①Copy rabbit model of acute hepatic dysfunction, duodenal perfusion with ammonium chloride compound, observation ammonia poisoning effect on brain function in rabbits; ②by ear vein injection of monosodium glutamate treatment of hepatic encephalopathy disease, to explore its therapeutic mechanism. Understand the lower intestinal pH and injection of sodium glutamate compound for ammonia poisoning is a basic treatment.Methods: The class is divided into 7 major groups, the first and second group, sham operation group, model group, the other group, the second, sixth, seventh group symptoms rescue groups, the first, three, four, five group early treatment group.Results: ligation and injection of compound ammonium chloride solution, the liver, hepatic encephalopathy in rabbits injected with compound sodium glutamate can be toxic ammonia, acetic acid also has a relief role; did not undergo hepatic encephalopathy is not the liver.Conclusion: The elevated blood ammonia easily lead to hepatic encephalopathy, a liver detoxification of ammonia, hepatic dysfunction in the pathogenesis of hepatic encephalopathy significantly accounted for the role. Sodium glutamate compound can be treated with hepatic encephalopathy.Key words Ammonia poisoning Hepatic encephalopathyAmmonium chloride compound Compound sodium glutamate【引言】肝性脑病过去称肝性昏迷，是严重肝病引起的，以代谢紊乱为基础，中枢神经系统功能失调的综合征，其主要临床表现是意识障碍，行为失常和昏迷。
氨在肝性脑病发病过程中的作用
1、肝脏在氨的代谢中起重要作用
2、氨在肝性脑病发病过程中有一定的作用
3、谷氨酸钠和醋酸对肝性脑病有一定的缓解作用
集体备课建议及意见：
见表氨中毒实验结果动物氯化铵用量mlkg中毒发生时间min中毒症状抢救效果实验兔1230呼吸急促痛觉消失角膜反射消失震颤角弓反张死亡对照兔2050呼吸急促痛觉不敏感角膜反射减弱震颤角弓反张震颤停止角膜反射恢复呼吸平稳实验讨论
生理科学实验教师预实验结果分析
实验者
陈博
职称
实验师
日期
2012.11
实验内容
当肝功能丧失后，体内过多的氨无法代谢，导致血氨升高，过多的氨通过血脑屏障入脑，通过以下几个方面对脑组织造成损害：（1）干扰脑组织的能量代谢。氨与脑内α－酮戊二酸反应生成谷氨酰胺，使三羧酸循环中间产物α－酮戊二酸减少，以致ATP生成不足。ATP不足，导致脑细胞活动所需能量不足，不能维持中枢神经系统的兴奋活动，从而引起昏迷。（2）使脑内神经递质发生改变。脑氨增多可使脑内兴奋性神经递质递质减少，抑制性神经递质增多，致使神经递质之间的作用失去平衡，导致中枢神经系统功能发生紊乱。（3）氨对神经细胞膜有抑制作用，能干扰神经传导活动。氨可能通过以上几个方面引起肝性昏迷。
实验分为实验组和对照组，实验组家兔进行气管插管、十二指肠处插导尿管、肝结扎及肝大部分切除；对照组的手术操作同实验组，但不进行肝结扎及肝大部切除。模型制备后，家兔各项生命指标均在正常范围内，说明病理模型制备成功。然后通过十二指肠插管，每隔5分钟向十二指肠注射4ml的氯化铵，由于十二指肠处溶液为碱性，氯化铵在碱性溶液中分解产生氨气，引起氨的吸收增加。实验兔由于肝细胞大量破坏，肝功能不全，尿素合成发生障碍，血氨升高。随着氯化铵注入量的增多，出现呼吸急促，痛觉不敏感甚至消失，角膜反射消失，当注射到第6次氯化铵，家兔出现全身震颤，角弓反张等典型中毒症状。对照兔由于肝功能未受影响，肝脏具有一定的代偿功能，因此注射到第10次氯化铵时才出现上述症状。
氨在肝性脑病发病中的作用
氨在肝性脑病发病中的作用
实验目的：
1、采用肝大部分切除术，造成急性肝功能不全的动物模型；
2、用十二指肠灌注复方氯化铵溶液，观察血氨升高在肝性脑病发病机理中的作用。
实验设计思想：
因有胃肠道出血、肾功能不全和电解质紊乱、精神性药物的使用、便秘、过高蛋白质饮食、肝功能的急剧恶化等，对于没有明确诱因的自发性肝性脑病也要高度怀疑有无不正常的循环通路的存在；（3）降低肠道氮质负荷，包括灌肠、使用非吸收性双糖和抗生素；（4）长期治疗必要性和疗效的评估，肝硬化病人有发生肝性脑病的高风险，需要对病人的诱因控制情况、肝性脑病发作的可能性，以及是否需要肝移植等情况进行综合评估，以制定长期治疗方案。
结论
结扎肝脏后，注射氯化铵溶液，使血氨升高而引起肝性脑病；肝脏对氨具有清除作用，所以不结扎肝脏不会发生氨中毒。
机能学实验--氨在肝性脑病发生中的作用
观察项目
氨在肝性脑病发生中的作用观察
组 出现大抽搐所需 出现大抽搐
血氨浓度
别 NH4Cl用量(ml) 所需时间(min) 第1次 第2 次 呼吸
肌张力
甲兔 乙兔
20
注意事项
原则上选择体重相差不超过250g的家兔进行对照 专人测定血氨 肝叶结扎线置于肝叶根部，避免勒破肝脏 复方NH4Cl切勿漏入腹腔 乙兔与甲兔同时推注复方NH4Cl或晚于甲兔？？ 发生大抽搐时迅速放血
秤、扩散瓶2个
药品
1％利多卡因，1％肝素，2.5%复方氯化铵溶液， 0.5mol/L硫酸，纳氏试剂，饱和碳酸钾
12
实验方法
甲兔：结扎大部肝叶＋注射复方NH4Cl
乙兔：不结扎肝叶 ＋注射复方NH4Cl
13
称重、分组----甲兔和乙兔重量相同/相近
固定----------四肢伸展仰卧位？
剪毛、麻醉（各2ml）----颈部、上腹部局部麻醉？
22
观察项目
呼吸运动、肌张力、抽搐。
氨在肝性脑病发生中的作用观察
组 出现大抽搐所需 出现大抽搐
血氨浓度
别 NH4Cl用量(ml) 所需时间(min) 第1次 第2次
甲兔
乙兔
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氨对脑代谢功能的影响
1、干扰脑细胞能量代谢 2、使脑内神经递质改变 3、氨对神经细胞膜的抑制作用
24
参考结论：
乙兔
与甲兔出现大抽搐时注射的复
方NH4Cl量和时间相同时，从颈总 动脉再次放血1ml测血氨。
小结 第一次取血时间 第二次取血时间、弃掉肝素 停止注射复方NH4CL 注射器的使用
继续推注复方NH4Cl直至乙兔出 现大抽搐，记录所用复方NH4Cl总 量和时间。
氨中毒在肝性脑病发病中的作用
氨中毒在肝性脑病发病中的作用姓名（学校班级学号）【实验目的】对经不同处理的实验动物输入氯化氨，观察出现相应症状所需氯化铵用量及时间，以探讨氨在肝性脑病发病机制中的作用；了解降低肠道pH值及注射谷氨酸钠是针对氨中毒的一项基本治疗措施。
【实验材料】家兔；氨基甲酸乙酯，复方氯化铵溶液，复方谷氨酸钠溶液，醋酸，生理盐水。
【实验方法】（1）实验分组：随机选取一半数量的实验动物作为实验组动物，另一半动物作为正常对照组动物。
（2）麻醉：家兔称重，按5ml/kg体重剂量自耳缘静脉注射200g/LL氨基甲酸乙酯，家兔麻醉后背位固定于兔台上。
（3）急性肝功能不全动物模型复制：从剑突下沿腹正中线行长约8cm的切口，打开腹腔；暴露肝脏，向下压肝，剪断肝与横膈之间的镰刀状韧带，再将肝叶上翻，钝性分离肝胃韧带，使肝叶完全游离，辨明肝脏各叶。
用粗棉线绕肝左外叶、左中叶、右中叶和方形叶根部一周并结扎，以阻断肝血流。
找出十二指肠，切开一小口，插入导管向下推进约4—5cm，切口荷包缝合固定导管，组织钳关闭腹壁切口。
（4）实验观察：①观察并记录兔一般情况，呼吸，角膜反射，对刺激的反应等指标。
然后每隔5min向十二指肠导管口注入25g/L复方氯化铵溶液5ml，动态观察并记录各项指标的变化，直至出现全身性抽搐、角弓反张为止，记录所用的复方氯化铵的总量，并计算每公斤体重的用量。
②治疗：按20ml/kg剂量自耳缘静脉缓慢注入25g/L复方谷氨酸钠溶液，并按5ml/kg体重向十二指肠注入10g/LL醋酸进行治疗处理，观察症状有无缓解。
【实验结果】呼吸频率增加、角膜反射减弱、瞳孔变大、对刺激的反应减弱、家兔的肌紧张加剧，以至于出现抽搐甚至角弓反张等表现。
立即给复方谷氨酸钠溶液和醋酸，实施抢救，兔角弓反张消失,恢复角膜反射，瞳孔变小，对刺激的反应增强，逐渐恢复正常。
【实验讨论】家兔大部分肝结扎，复制急性肝功能不全的动物模型，造成肝解毒功能急剧降低，在此基础上经十二指肠灌入复方氯化铵溶液，导致肠道中氨生成增多并吸收入血。
氨在肝性脑病发病机制中的作用
Which is the toxic to brain cell?
Difficulty to be absorbed,and go across into BBB
Have no toxic effect on brain cell
Easy to be absorbed, and pass through into
Brain NH3
结论
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丁
16/18 29.4 /26.8
25 52.9
注意事项
剪镰状韧带时勿伤及膈肌和血管 肝叶扎紧
12指肠插管的方向 各组液体滴速尽量保持一致(60滴/分)
NH4
+
OHH+
NH3
function Impaired
Portosystemic shunting
Liver
KrebsHeneseleit
BBB
3
乙组：肝叶不结 扎+滴注氯化铵
4
丙组：肝叶结扎 +滴注氯化钠
5 丁组：肝叶结扎 +耳缘推注谷氨 酸钠溶液 20ml/kg+滴注 氯化铵
结果
抽搐
死亡
时间 用量（ml/kg）
时间 用量（ml/kg）
甲
12 25.6
24 46.6
乙
22 35.7
35 40.7
丙
注意比较丙组与甲组；甲组与乙组；丁组与甲组
051Leabharlann 指肠荷包 缝合并插管06腹壁全层连 续缝合，关 腹腔
07
观察
08
输液（60滴 /分）
09
动物大抽搐 时，记录时 间用量
10
动物死亡时， 记录时间用 量
氨在肝性脑病发病中的作用中山大学基础医学实验教学中心
每公斤体重 给药量(ml)
开始实验
小结
肝脏的功能 氨中毒机理
中山大学中山医学院 病理生理学教研室 谭红梅
实验原理
NH4+ + OH-
NH3 + H2O
脑 血脑 血液
屏障
鸟氨酸循环
肝
尿素
实验对象：家兔
实验器材：兔手术台及器械、注射器、导尿管 定时钟、纱布、棉线、缝合针等
实验药品：1%普鲁卡因、2.5%氯化铵混合液、 1%醋酸、2.5%谷氨酸钠混合液
观察指标
一般情况、角膜反射、对刺激的反应 出现痉挛时间、给药量
每次 5 ml 每 5 min 源自次 直到出现痉挛抢救十二指肠插管 1%醋酸，5 ml/kg
NH4+ + OH- NH3 + H2O
耳沿静脉 2.5%谷氨酸钠，30 ml/kg
谷氨酸钠 + NH3 谷氨酰胺
实验结果
组别
1
实
2
验
3
组
4
平均
1
对
2
照
3
组
4
平均
出现痉挛时间 (min)
总给药量 (ml)
实验步骤
家兔称重、固定 上腹正中局麻
实验组
对照组
结扎切除肝脏
假结扎肝脏
十二指肠插管 关闭腹腔松绑 注射氯化铵液
抢救
肝脏结扎示意图
尾叶
注意：切断镰状韧带时勿损伤后方的下腔静脉 在肝蒂部结扎肝脏，结扎要牢固
十二指肠插管荷包缝合法
胃
6～8 cm
注意：插管朝下，打防滑结，防治插管脱出
氯化铵混合液注射
氨在肝性脑病发病中的作用
中山大学中山医学院 病理生理学教研室 谭红梅
机能6-氨在肝性脑病发病中的作用wu
（3）十二指肠插管 沿胃幽门向下找到十二指肠，提出腹腔， 用眼科剪在肠壁上剪一小口，将细导尿管插入肠腔约4cm， 沿插管周作荷包缝合（小圆针），收缩荷包结扎固定，将肠 管回纳腹腔，检查腹内无出血，关闭腹腔（三角针）。 （4）观察指标 呼吸（频率、幅度）、角膜反射、瞳孔大小、 对刺激的反应、是否出现肌肉痉挛、抽搐及强直。观察家兔 一般状况。
P150
一、实验目的
1.学习复制急性肝功能不全的动物模型 , 观察相关指标的变化. 2.学习并了解氨在肝性脑病发生机理中的 重要作用。
二、实验原理
肝性脑病的概念:
由于急性或慢性肝功能不全，使大量毒性代谢产物在血 循环中堆积，临床上出现一系列神经精神症状，最终出 现肝性昏迷的神经精神综合征
发病机理不清，可能机制：
（5）十二指肠插管中注入复方氯化铵溶液 每隔5min 向十二指肠插管中注入2.5%复方氯化铵溶液5ml，并观 察并记录各项指标的变化，直至出现全身性抽搐、角 弓反张为止，记录所用的复方氯化铵溶液的总量。 （6）心脏采血：当家兔已出现抽搐立即进行心脏采血， 用９号针头，于前肢后缘连线与胸左交界，触及心脏搏 动最明显处，垂直胸壁刺入３cm。 （７）血氨测定：见试剂盒说明书。
乙：除肝叶不结扎外，其余操作同实验组家兔。如 前述每隔5min向十二指肠插管中注入复方氯化铵溶 液5ml，直至甲兔出现全身性抽搐为止，记录所用复 方氯化铵总量。
丙：手术操作同甲兔，只是以同样的速度向肠腔注 入生理盐水溶液，直至甲兔出现全身性抽搐为止。 观察动物有无异常，并与以上两家兔进行比较。
实验步骤
称重、固定、麻醉（局麻） 开腹腔（正中6-8cm ） 肝叶大部分接扎 十二指肠插管（荷包缝合） NH4CL灌肠 （5、10、15、20min…..）
机能实验讨论：氨在肝性脑病发病中的作用
2020.5.8二、氨在肝性脑病发病中的作用1、肝性脑病的概念及发病机制是什么？2、PPT的实验步骤中为什么要分别设立甲、乙、丙兔，其目的何在?3、结扎肝门血管以及灌入氯化铵是否能复制肝性脑病的动物模型？为什么？4.这三组家兔的血氨的变化趋势是什么?机制为何？5、肝叶結扎并注射氯化铵組会产生什么症状?其原因是什么?1、肝性脑病的概念及发生机制是什么？概念：肝性脑病（HE）又称肝性昏迷，是指严重肝病引起的、以代谢紊乱为基础的中枢神经系统功能失调的综合征，早期表现为可逆性的，主要包括人格改变，智力减弱，意识障碍等，晚期发生不可逆性肝昏迷，甚至死亡。
发生机制：①氨中毒学说：血氨↑，进入脑组织，引起脑的代谢和功能障碍。
②假性神经递质学说：严重肝病时，假性神经递质在脑干网状结构中堆积，使神经冲动的传递发生障碍，不能维持唤醒功能，从而发生昏迷。
③氨基酸失衡学说：严重肝病时，血浆BCAA/AAA比值↓→脑内假神经递质↑，正常递质↓→抑制性神经活动增强，严重可出现昏迷。
④GABA 学说：血氨↑，进入脑组织，增强抑制性递质介导的中枢抑制作用，中枢抑制作用增强。
2、PPT的实验步骤中为什么要分别设立甲、乙、丙兔，其目的何在？影响肝性脑病的发生的因素有血氨浓度和肝脏功能，设置甲乙丙是为了做对照，甲乙对比可以说明肝对氨的解毒作用，甲丙对比可以说明血氨在肝功能障碍时的毒性作用。
3、结扎肝门血管以及灌入氯化铵是否能复制肝性脑病的动物模型？为什么？可以，因为结扎肝门血管可以导致肝功能障碍而导致对氨的解毒作用降低甚至丧失，此时注入氯化铵可以导致血氨浓度升高进而导致肝性脑病的发生。
4、这三组家兔的血氨变化趋势是什么？机制为何？甲组的血氨浓度明显升高，因为甲组肝功能障碍，解毒能力下降，注入氯化铵会导致血氨明显升高。
乙组血氨浓度略微升高然后恢复正常，乙组肝功能正常，注入氯化铵后血氨升高，一段时间后由于肝脏的解毒功能而恢复正常。
丙组血氨浓度刚开始无明显变化，随着时间的推移而逐渐升高，丙组的肝功能障碍，没有注入氯化铵，故开始时血氨正常，但随着机体代谢产生氨，而肝脏无法代谢，导致氨在血液中堆积，使血氨逐渐升高。
氨中毒在肝性脑病发病中的作用
氨中毒在肝性脑病发病中的作用【摘要】目的对经不同处理的实验动物输入氯化氨，观察出现症状所需氯化铵用量及时间，以探讨氨在肝性脑病发病机制中的作用；了解降低肠道pH及注射谷氨酸是针对氨中毒的一项基本治疗措施。
方法：将将家兔麻醉后实施腹部手术，结扎家兔肝脏的其中3叶，十二指肠注射氯化铵，观察家兔是否出现行为异常以及出现异常所需的时间。
对出现行为异常的家兔静脉注射复方谷氨酸钠进行救治。
结果:家兔出现了有节律的抽搐，出现四肢伸直，头尾昂起，脊柱挺硬等角弓反张现象。
没有进行救治的家兔持续抽搐，死亡。
结论：肝功能健全可使氨中毒的作用时间延长，即肝有对氨的解毒作用。
当肝功能受损时，肝脏将氨转化为尿素的能力减弱，可导致血氨升高，间尔影响脑的功能。
复方谷氨酸钠溶液有缓解氨中毒的作用。
【关键词】氨中毒肝性脑病复方氯化氨复方谷氨酸钠【实验材料和方法】：材料：实验动物家兔主要试剂及仪器氨基甲酸乙酯，复方氯化铵溶液，复方谷氨酸溶液，醋酸，生理盐水，手术台，纱布，玻璃分针，哺乳动物手术器械，不同型号的注射器，粗绳线，培养皿方法:麻醉家兔称重，按5ml/kg体重剂量自耳缘静脉注射200g/L氨基甲酸乙酯，家兔麻醉后背位固定于兔台上。
急性肝功能不全动物模型复制从胸骨剑突下沿腹正中线行长约8cm的切口，打开腹腔；暴露肝脏，向下压肝，剪断肝与剑突之间的镰状韧带，再将肝叶上翻，钝性分离肝胃韧带，使肝叶完全游离，辨明肝脏各叶。
用粗棉线绕肝左外叶、左中叶、右中叶和方形叶根部一周并结扎，以阻断肝血流。
对照组动物不结扎肝脏。
找出十二指肠。
切一小口，插入导管向下推进约4~5cm，切口荷包缝合固定导管，组织钳关闭腹壁切口。
实验观察观察并记录兔一般情况，呼吸（频率、幅度），角膜反射、对刺激的反应等指标。
然后每隔5min向十二指肠导管中注入25kg/L复方氯化铵溶液5ml,动态观察并记录各项指标的变化，直至出现全身抽搐、角弓反张为止，记录所用的复方氯化铵溶液的总量，并计算每公斤体重的用量。