水处理生物学实验8 细菌纯种分离、培养和接种技术
南昌大学实验报告
学生姓名：学号：专业班级：
实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩：
实验八细菌纯种分离、培养和接种技术
一、实验目的：
1、学习从环境（土壤、水体、活性污泥、垃圾、堆肥等）中分离、培养微生物，掌握一些常用的分离和纯化微生物的方法；
2、学会几种接种技术。
二、实验基本原理：
自然界中的微生物总是杂居在一起，即使一粒土或一滴水中也生存着多种微生物。
要研究其中的某一种微生物，首先必须将它分离出来。
受污染的土壤或水体中，微生物的数量和污染物的降解之间存在着显著的关系.为了提高污染物降解速率,常需接种一些能降解目标污染物的高效菌。
从经过富集、驯化培养的样品中筛选目标菌株，往往是获得高效降解菌的有效方法。
根据目标微生物特定的营养要求，设计相应的选择培养基。
是快速高效获得目标菌的关键步骤。
土壤是微生物生活的大本营，有“微生物的天然培养基”之称，同其他生物环境相比它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离纯化的到许多有价值的菌株，事实上，生产、工程上很多有益菌株都是从土壤中分离得到的。
从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
微生物纯种分类的方法有很多，常用的方法有两类一类是单细胞挑取法，采用这种方法能获得微生物的克隆纯种，但对仪器条件要求较高，一般实验室不能进行。
另一类是单菌落分离（平板分离法），该方法简便是微生物学实验中常采用的的方法。
通过形成单菌落获得纯种的方法有平板划线法、平板浇注（稀释混合平板法）、平板表面涂布法。
此次实验采取的是平板分离法，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。
其原理包括两方面：
1、在适合于待分离微生物的生长条件下（如营养、酸碱度、温度与氧等）培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
2、微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。
因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。
但是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。
因此，纯培养的确定除观察其菌落的特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定。
有的微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。
三、主要仪器设备及耗材：
1.器材：
培养皿、载玻片、盖玻片、普通光学显微镜、量筒、滴管、吸水纸、烧杯、三角瓶、电炉、玻璃棒、接种环、镊子、搪瓷杯、恒温培养箱、高温灭菌锅、移液枪（枪头）、电子天平、滤纸、pH试纸等。
2.试剂：
配制牛肉膏蛋白胨培养基的原料（牛肉膏、NaCl、琼脂、蛋白胨）、结晶紫染液、番红染液、碘液、95％乙醇、5％孔雀绿染液、0.5％番红水染液、3％过氧化氢水溶液、蒸馏水等。
3.土样：学生自主实时选择土样，地表10cm左右。
四、实验步骤：
1、玻璃器皿的准备
玻璃器皿在实验前必须洗涤干净，根据实验要求准备相应数量，移液管、培养皿等包装好后灭菌。
可采用干热灭菌法处理。
2、配制牛肉膏蛋白胨培养基：
配方：
牛肉膏 0.3% ………………………………… 1.5 g
蛋白胨 1% …………………………………… 5g
NaCl 0.5% ………………………………… 2.5g
琼脂 2% …………………………………… 10g
pH ………………………………………… 7.0~7.2
水 500ml
配制好的培养基分装好后，必须马上进行灭菌处理（高压蒸汽法）。
3、准备稀释水
稀释水也必须灭菌，可与培养基灭菌一起进行。
4、制备土壤稀释液：
称取土样10g ，放入盛有90ml 无菌水的带有玻璃珠的三角瓶中，入振荡培养箱中振荡摇匀20min ，使土样和水充分混合，取1支1ml 无菌移液管从三角瓶中吸取1ml （此操作要求无菌操作），加入另一盛有9ml 无菌水的试管中，混合均匀，以此类推分别制成制成0.01、0.001、0.0001等不同稀释度的土壤溶液。
稀释过程如图1示：(同学们不必画图)
图1 稀释过程示意图 土壤样品
土壤样品
5.平板分离法分离
浇注平板法（稀释混合平板法）
分别取上述不同稀释液少许（0.5～1ml），与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。
如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。
随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。
平板划线分离将已经熔化的培养基倒入培养皿中制成平板，用接种环沾取少量待分离的材料，在培养基表面平行或分区划线，然后，将培养皿放入恒温箱里培养。
在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。
划线法特点：快速、方便。
注意：分区划线（适用于浓度较大的样品），连续划线（适用于浓度较小的样品）。
（同学们不必画图)）
图2 划线法分离示意图
涂布平板法由于将含菌材料先加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。
其做法是先将已熔化的培养基倒人无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落
6 其他一些接种技术
五、思考讨论题
如何从环境中分离目标微生物？
（理解选择性压力法在分离细菌中的作用，富集培养基的应用等）
六、实验体会及对实验改进的建议。
水处理生物学实验8 细菌纯种分离、培养和接种技术
南昌大学实验报告学生姓名：学号：专业班级：实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩：实验八细菌纯种分离、培养和接种技术一、实验目的：1、学习从环境（土壤、水体、活性污泥、垃圾、堆肥等）中分离、培养微生物，掌握一些常用的分离和纯化微生物的方法；2、学会几种接种技术。
二、实验基本原理：自然界中的微生物总是杂居在一起，即使一粒土或一滴水中也生存着多种微生物。
要研究其中的某一种微生物，首先必须将它分离出来。
受污染的土壤或水体中，微生物的数量和污染物的降解之间存在着显著的关系.为了提高污染物降解速率,常需接种一些能降解目标污染物的高效菌。
从经过富集、驯化培养的样品中筛选目标菌株，往往是获得高效降解菌的有效方法。
根据目标微生物特定的营养要求，设计相应的选择培养基。
是快速高效获得目标菌的关键步骤。
土壤是微生物生活的大本营，有“微生物的天然培养基”之称，同其他生物环境相比它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离纯化的到许多有价值的菌株，事实上，生产、工程上很多有益菌株都是从土壤中分离得到的。
从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
微生物纯种分类的方法有很多，常用的方法有两类一类是单细胞挑取法，采用这种方法能获得微生物的克隆纯种，但对仪器条件要求较高，一般实验室不能进行。
另一类是单菌落分离（平板分离法），该方法简便是微生物学实验中常采用的的方法。
通过形成单菌落获得纯种的方法有平板划线法、平板浇注（稀释混合平板法）、平板表面涂布法。
此次实验采取的是平板分离法，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。
其原理包括两方面：1、在适合于待分离微生物的生长条件下（如营养、酸碱度、温度与氧等）培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
实验四：细菌的接种、培养和分离技术
实验四：细菌的接种、培养和分离技术一、实验目的与要求：（1）掌握从环境土壤、水体、活性污泥等中分离培养细菌的方法;从而获得若干种细菌纯培养技能（2）掌握细菌纯种分离的方法：稀释平板分离法和平板划线法..（3）掌握几种接种技术：斜面接种技术、穿刺接种、稀释平板涂布法等..二、实验原理在土壤、水、空气或人及动、植物体中;不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起;当我们希望获得某一种微生物时;就必须从混杂的微生物类群中分离它;以得到只含有这一种微生物的纯培养;这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化..为了获得某种微生物的纯培养..一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同;而供给它适宜的培养条件;或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长;而抑制其他菌生长的环境;从而淘汰其他一些不需要的微生物;再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物;直至得到纯菌株..三、实验器材1、牛肉膏蛋白胨培养基2、盛9ml无菌水的试管;盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶;1ml和5ml无菌吸管;无菌培养皿；3、接种环;土样;酒精灯等..四、操作步骤1、倒平板将加热融化的牛肉膏蛋白胨培养基倒平板;并标明培养基的名称..2、贴标签接种前在试管上贴上标签;注明菌名、接种日期、接种人姓名等..贴在距试管口径2-3厘米的位置..3、点燃酒精灯..4、接种取接种环右手拿接种环如握钢笔一样、在火焰上将环端烧红灭菌;然后将有可能伸入试管的其余部分;均用火烧过灭菌..环冷却将灼烧过的接种环伸入菌种管;先使环接触边壁;使其冷却..取菌种待环冷却后轻轻沾取经稀释10倍的土壤悬液-环;然后将接种环移出菌种管;注意不要使环的部分碰到管壁;取出后不可使环通过火焰..接种在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环在平板上划线..划线的方法很多;但无论哪种方法划线;其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释;使形成单个菌落..常用的划线方法有下列二种：⑴用接种环以无菌操作挑取土壤悬液一环;先在平板培养基的一边作第一次平行划线3-4条;再转动培养皿约70°角;并将接种环上剩余物烧掉;待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线;再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线图A..划线完毕后;盖上皿盖;倒置于温室培养..⑵将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线图 B..划线完毕后;盖上皿盖;倒置温室培养..环灭菌将接种环烧红灭菌..5、挑菌将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到上述三种培养基的斜面上;分别置25℃和28℃温室中培养;待菌苔长出后;检查菌苔是否单纯;也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物;若有其他杂菌混杂;就要再一次进行分离、纯化;直到获得纯培养..四、注意事项1、实验操作过程中无菌操作..。
细菌分离培养、接种技术及培养方法-精品医学课件
革兰染色法
Gram staining
临床微生物与免疫学检验教研室
一、实验目的
1.掌握细菌涂片制作方法； 2.掌握革兰染色法和细菌的基本形态； 3.了解革兰染色法的临床意义。
二、革兰染色原理
原理
细胞壁学说 等电点学说 化学学说
革兰阳性菌 细胞壁肽聚糖形成网状 结构，乙醇处理时，脱水 引起网状结构孔径变小， 通透性降低，结晶紫-碘 复合物不易脱去
实验步骤和方法
1)连续划线分离法：①将接种环火焰灭菌，待冷后取标 本少许；②左手持平板，五指固定平皿盖边缘，向外反 转手掌，装有培养基的平板于手掌内用拇指、小指和 无名指固定，并将平板边缘稍微提高呈现30～45度角， 置酒精灯前上方5～6cm；③右手持已取材的接种环， 先在平板一端涂布，然后快速大幅度左右来回以密而 不重的曲线形式作连续划线接种，使整个平板布满曲 线④划线完毕，将平板作好标记，置35℃孵育18-
革兰阴性菌
细胞壁肽聚糖含量低， 脂类物质含量高，乙醇处 理时，脂类物质溶解，细 胞壁的通透性增加，结晶 紫-碘复合物易脱去
三、实验器材和试剂
1.标本 ：金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的培养物。 2.试剂 ：革兰染液。 3.其他 ：载玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、显微镜。
四、操作步骤
1. 细菌涂片制备 ⑴涂片：取洁净载玻片一张，按无菌的方法取1~2环生 理盐水于载玻片上，按无菌的方法各取葡萄球菌和大肠埃 菌 培养物少许，在生理盐水中均匀研磨，涂好的菌膜直径 1cm左右。 ⑵干燥：室温下自然干燥或于酒精火焰半尺高处烘干。 ⑶固定：火焰加热法。目的是杀死细菌，并使菌体与载 玻片粘附牢固，染色时不致于被染液和水冲掉。
培养方法
2 二氧化碳培养法 (1)二氧化碳孵箱：能自动调节二氧化碳的含量和温度， 使用较为方便。 (2)烛缸法：取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨 口处涂以凡士林。将接种细菌的培养基放入缸中，点燃 缸内蜡烛，加盖密封。当蜡烛燃烧时会消耗缸内氧气并 产生CO2，随着缸内氧气的逐渐减少，蜡烛会自行熄 灭，此时缸内CO2浓度约为5％左右。 (3)化学法(重碳酸钠一盐酸法)：（自学）
环境工程微生物学实验八 细菌纯种分离、培养和接种技术
南昌大学实验报告学生姓名：学号：专业班级：实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩：实验八细菌纯种分离、培养和接种技术一、实验目的：1、学习从环境（土壤、水体、活性污泥、垃圾、堆肥等）中分离、培养微生物，掌握一些常用的分离和纯化微生物的方法；2、学会几种接种技术。
二、实验基本原理：自然界中的微生物总是杂居在一起，即使一粒土或一滴水中也生存着多种微生物。
要研究其中的某一种微生物，首先必须将它分离出来。
受污染的土壤或水体中，微生物的数量和污染物的降解之间存在着显著的关系.为了提高污染物降解速率,常需接种一些能降解目标污染物的高效菌。
从经过富集、驯化培养的样品中筛选目标菌株，往往是获得高效降解菌的有效方法。
根据目标微生物特定的营养要求，设计相应的选择培养基。
是快速高效获得目标菌的关键步骤。
土壤是微生物生活的大本营，有“微生物的天然培养基”之称，同其他生物环境相比它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离纯化的到许多有价值的菌株，事实上，生产、工程上很多有益菌株都是从土壤中分离得到的。
从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
微生物纯种分类的方法有很多，常用的方法有两类一类是单细胞挑取法，采用这种方法能获得微生物的克隆纯种，但对仪器条件要求较高，一般实验室不能进行。
另一类是单菌落分离（平板分离法），该方法简便是微生物学实验中常采用的的方法。
通过形成单菌落获得纯种的方法有平板划线法、平板浇注（稀释混合平板法）、平板表面涂布法。
此次实验采取的是平板分离法，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。
其原理包括两方面：1、在适合于待分离微生物的生长条件下（如营养、酸碱度、温度与氧等）培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
微生物的纯种分离培养及接种技术
四、实验报告要求
1) 实验名称，学生姓名，学号，班号和实验日 实验名称，学生姓名，学号， 期 2) 实验目的和要求 3) 实验仪器，设备和材料 实验仪器， 4) 实验原理 5) 实验步骤 6) 实验原始记录 7) 实验数据计算结果 8) 实验结果分析，讨论实验指导书中提出的思 实验结果分析， 考题， 考题，写心得体会
2.稀释平板分离法 2.稀释平板分离法 (1) 取样 … (2) 稀释水样 以无菌操作按十倍稀释法用无菌吸量管 和无菌水将10 倍的水样稀释至10 和无菌水将10-3倍的水样稀释至10-4、10-5、10-6倍。 (3) 平板制作 将三套无菌培养皿编号，将上述三种浓 将三套无菌培养皿编号， 度的水样各吸0.5ml 于相应的培养皿中。加热融化培养基， 度的水样各吸0.5ml 于相应的培养皿中。加热融化培养基， 待其冷至约45℃时以无菌操作倾注10~15ml 养皿中， 待其冷至约45℃时以无菌操作倾注10~15ml 入培 养皿中， 马上将培养皿平 放桌上 轻轻转 动使之混合均匀， 动使之混合均匀， 成平板。 冷却后 成平板。 倒置， 37℃ 倒置，于 37℃培 样 品 48小时后观察 养48小时后观察 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 结果。 结果。
实验四
微生物的纯种分离培养 及接种技术
一．实验目的
通过学习学习微生物的纯 种分离，培养和接种技术， 进而学会微生物生理生化 反应的实验，为废水处理 服务。在水处理的细菌检 查中，细菌的分离，培养 和接种也是一个重要的环 节。微生物的纯种分离的 方法有两种：稀释平板法 和平板划线法。
二. 实验器材
细菌的分离纯化和接种实验
细菌的分离纯化和接种实验引言细菌的分离纯化和接种实验是微生物学研究中常用的实验方法之一。
通过这个实验，我们可以将混合细菌群体中的某种特定细菌分离出来，并进行纯化和培养。
本文将介绍细菌的分离纯化和接种实验的步骤和注意事项。
材料和方法实验材料•需要分离的混合细菌样品•无菌培养基•培养皿•灭菌的培养液•灭菌的试管和移液器•灭菌的培养箱•实验台实验步骤1.准备工作–消毒实验台和所需实验用具，保证实验环境无菌。
–准备好无菌培养基和培养皿。
2.分离细菌–从混合细菌样品中取一小部分，加入无菌培养基中。
–用无菌的移液器均匀涂抹混合液在无菌培养皿上。
–将培养皿密封好，放入灭菌的培养箱中进行培养。
3.纯化细菌–经过一段时间的培养，观察培养皿中的菌落情况。
–选择一个孤立的菌落，用无菌的移液器将其转移到另一个无菌培养皿中。
–重复上述步骤，直至获得纯化的菌落。
4.培养细菌–将纯化的菌落转移到新的无菌培养基中。
–用无菌的移液器均匀涂抹细菌液在无菌培养皿上。
–将培养皿密封好，放入灭菌的培养箱中进行培养。
5.接种实验–准备好待接种的培养基和细菌培养液。
–用无菌的移液器取适量的细菌培养液，加入到待接种的培养基中。
–轻轻摇动培养基，使细菌均匀分布。
–将接种好的培养基放入培养箱中进行培养。
6.结果分析–经过一段时间的培养，观察接种后的培养基中细菌的生长情况。
–记录菌落的数量和形态特征，如颜色、形状等。
注意事项•实验过程中要保持实验环境的无菌状态，严禁对细菌样品和培养基进行交叉污染。
•实验操作要轻柔，避免对细菌造成机械损伤。
•实验结束后，要对实验用具进行正确的处理和消毒，防止细菌的传播和感染。
结论细菌的分离纯化和接种实验是微生物学研究中常用的实验方法。
通过这个实验，我们可以从混合细菌群体中分离出特定细菌，并进行纯化和培养。
这些分离纯化的细菌可以用于后续的微生物学研究和实验，为我们深入了解细菌的特性和功能提供了重要的基础。
在实验操作过程中，我们要严格遵守无菌操作的要求，保证实验的可靠性和准确性。
细菌的纯种分离培养和接种技术实验报告
细菌的纯种分离培养和接种技术实验报告一、实验目的本实验旨在掌握细菌的纯种分离培养和接种技术，了解细菌的形态特征及生长习性，并能够正确使用细菌培养基和培养设备。
二、实验原理1. 细菌纯种分离：将混合菌涂于琼脂平板上，经过培养后，可以观察到不同形态和颜色的菌落。
选取单个菌落进行多次传代，最终得到纯种菌株。
2. 细菌培养基：含有必需营养物质的液体或固体培养基，可以提供适宜的环境促进细菌生长繁殖。
3. 细菌接种：将细菌转移到新的培养基中，以便于观察其生长情况。
三、实验步骤1. 准备工作：清洁工作台、消毒琼脂平板和试管等设备。
2. 分离纯种：取一支无菌铅笔，在琼脂平板上划出几条直线。
用无菌铅丝在混合液体中沾取少量后，在平板上均匀涂抹，避免相互重叠。
将琼脂平板倒置在恒温箱中，以适宜的温度和时间进行培养。
3. 传代：观察到菌落后，用无菌铅笔在菌落周围划出一圈。
用无菌铅丝沾取少量菌落，划过圈内，再均匀涂抹于新的琼脂平板上。
重复以上步骤多次，直至得到纯种细菌。
4. 培养：将培养基加热消毒后倒入试管中，待其冷却后，在试管口处焊接一根无菌铁针。
用无菌铁针沾取少量细菌接种于培养基中，放入恒温箱中进行培养。
5. 观察：观察培养基上的细菌生长情况、形态特征和颜色等。
四、实验注意事项1. 实验前要进行必要的清洁和消毒工作。
2. 操作时要保持无菌状态，避免污染。
3. 培养箱应设置适宜的温度和湿度，并定期消毒。
4. 实验结束后要及时清理和消毒设备和工作台。
五、实验结果经过分离和传代，成功得到纯种细菌。
在培养基上观察到细菌的形态特征、颜色和生长情况，并能够正确进行接种操作。
六、实验总结本实验通过对细菌纯种分离培养和接种技术的学习和掌握，使我们更加深入地了解了细菌的形态特征和生长习性，同时也提高了我们的操作技能。
在今后的学习和研究中，这些知识和技能将会发挥重要作用。
实验细菌的接种及分离培养完整PPT
微生物的分离—平板划线法 实验细菌的接种及分离培养
一般培养（需氧培养）： 从液体培养液接入液体培养液 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 沉淀：多见于链状排列的细菌
一般培养（需氧培养）：
意义：该法主要是借助划线而将混杂的细菌在琼脂表面分散开，使单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个菌落，以达到分离
、变形杆菌培养物； 纯种的目的。
用接种针垂直地穿入培养基中心至底部 沉淀：多见于链状排列的细菌
实验器材：接种环、接种针、酒精灯； 从液体培养液接入液体培养液
菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。
实验细菌菌分离与培 养的各种基本技术；
2、进一步熟悉和掌握无菌操 作技术。
实验材料
★培养温度：37℃（采用恒温培养箱） 当细菌分离成纯种后，常需要接种到相关的培养基中，以测试其各种生物学性状。
标本和菌种：咽拭子、葡萄球菌培养物 然后沿着原接种线将针拔出
养箱 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌
氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等
细菌在固体培养基中的生长现象
菌落： ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形
成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透
明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型
（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物
。
菌落
菌落与菌苔
细菌在液体培养基中的生长现象
混浊 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于厌氧菌
细菌在液体培养基中的生长现象
实验三 细菌纯种分离、培养和接种技术
实验三细菌纯种分离、培养和接种技术一、实验目的(1)了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义。
(2)学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法。
(3)学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。
二、实验原理水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每mL不超过100个。
它反映的是检样中活菌的数量。
所谓大肠菌群，是指在37°C24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称。
水的大肠菌群数是指lOOmL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。
水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。
目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。
因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。
水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样。
三、实验材料1、菌落总数的测定：1)培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌生理盐水。
2)器材：灭菌三角瓶，灭菌的具塞三角瓶，灭菌平皿，灭菌吸管，灭菌试管等。
2、大肠菌群的测定：1)培养基：①乳糖胆盐蛋白胨培养基：蛋白胨20g，胆盐(或牛、羊胆盐)5g,乳糖10g，0.04%溴甲酚紫水溶液25mL,水1000mL,pH7.4。
制法：将蛋白胨、胆盐、乳糖溶于水中，校正pH,加入指示剂，分装，每瓶50mL或每管5mL,,并倒置放入一个杜氏小管，121C灭菌15min。
②伊红美蓝琼脂培养基：制法：将伊红美蓝琼脂粉溶于水中，校正pH后分装.121C灭菌15min备用。
平板划线法：接种是采用平板划线的方法将初发酵的大肠杆菌进行接种。
四、实验方法1、水样的采集：1）自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，再开放水龙头使水流5min,以灭菌三角瓶接取水样以备分析。
细菌的纯种分离
2.0g，水 100ml,pH7.2-7.4.
灭菌条件：121 摄氏度（相对蒸气压力为 0.103MPa）,20min.
(2)加棉塞、包装后灭菌。
4.斜面的制作 灭菌后如需制成斜面培养基，应在培养基冷却至 50-60 摄氏度，将试管搁置成 一定的斜度，斜面高度不超过试管总高度的 1∕3。
（三）稀释水的制备
细菌的纯种分离、培养和接种技术及菌落形态的观察
班级：09 环科二班 姓名：李建文 学号：200930260213 一、 实验目的：
（1）熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。 （2）了解配制微生物培养基的基本原理，掌握常规的配制、分装培养基的方法。
（3）学会各类物品的包装、配制（稀释水等）和灭菌技术。 （4）从湖水中分离、培养微生物，掌握常用的分离微生物的方法。 （5）学会接种技术。 （6）观察分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落形态特征。 （7）通过观察和比较细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的菌落特征，
（1） 分装试管：将培养基趁热加至漏斗中。分装时左手并排地拿数根试管，
右手控制弹簧夹，将培养基依次加入各试管，用于制造斜面培养基时，一般装
量不超过试管高度（15mm*150mm）的 1∕5.分装时谨防培养基沾在管口上，否
则会使棉塞沾上培养基而造成染菌。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，Nacl
达到初步鉴别上述微生物的能力
二、 实验原理：
1、培养基原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖 的需要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁及微量元素和水， 按一定的体积分数配制而成。调整合适的 pH，经高温灭菌后以备培养微生 物之用。本实验配制固体培养基，固体培养基的成分与液体相同，仅在液体 培养基中加入凝固剂使呈固态。通常加入质量浓度 15-20g∕L 的琼脂为固体 培养基。