内皮祖细胞的研究进展
内皮祖细胞在慢性肾脏疾病患者心血管疾病发生中的新进展
中国血液净化2012年5月第11卷第5期Chin
JBloodPurif,May,2012，'Col，lI．No．5
内皮祖细胞在慢性肾脏疾病患者心血管疾病
发生中的新进展
蔫丽娜
综述方炜审校
中图分类号：R692．5文献标识码：Adoi：10．3969／j．issr1．1671—4091．2012．05．012
以往研究认为内皮祖细胞(endothelial
pro—
geni
torcel1S，EPCs)仅存在于胚胎发育阶段，
之后的研究发现EPCs也存在于成体。目前的研究
结果发现，EPCs主要来源于胚胎的中胚层和出生后
的骨髓，是一群被发现的同时存在于胎肝、脐带
血和成人外周血中、能够分化为内皮细胞的多潜能
细胞，这群细胞具有修复损伤内皮细胞以及增强组
织缺血后血管发生(yasculogenesis)和血管新生
(angiogenesiS)的作用。
1EPCs生物学特性
EPCs的主要来源包括胚胎中胚层、骨髓、脐
血以及外周血。目前有关EPCs的特异性表面标志
物尚缺乏统一的意见。1997年。Asahara：¨首次利
用CD34及VEGFR一2(vascular
endothelialgrowth
factor
receptor2／kinaseinsertdomain
receptor，VEGFR2’／KDR+)表面标志物经免疫磁珠
法从人外周血中成功分离、纯化出能分化为血管内
皮细胞的前体细胞，并将其命名为血管内皮祖细
胞。CD34是相对分子质量为l
10000的唾液酸粘蛋
白，选择性表达于造血干细胞及某些激活的血管内
皮细胞，其功能是作为内皮细胞及造血前体细胞相
互作用的粘附分子。VEGFR-2即Flk—l(鼠)或KDR
(kinaseinsert
domainreceptor)(人)，血
管系统最早出现的细胞标志，是胚胎期血管发生的
关键受体。此外，EPCS还表达造血干细胞标志
CDl
33，CDl33(ACl33)是一种胆固醇结合糖基
化跨膜多肽．相对分子质量为I
基因修饰的内皮祖细胞在疾病治疗中的应用进展及磁共振示踪
里 学杂志Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ ２００８ Ｍａｙ；３１（３）：１９８—２０１
分子影像学 基因修饰的内皮祖细胞在疾病治疗中的 应用进展及磁共振示踪 Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｔｒａｃｋｉｎｇ ‘
聂芳滕皋军 【摘要】 内皮祖细胞是内皮细胞的前体细胞，不仅参与人胚胎血管生成，同时也参与出生后血管新生和内 皮损伤后的修复过程，可用于缺血性疾病、血管损伤性疾病及肿瘤等的治疗，基因与细胞联合治疗为内皮祖细 胞开创了新的应用前景。就基因修饰的内皮祖细胞应用于疾病治疗的最新进展作一综述，并探讨治疗中应用超 顺磁性氧化铁纳米颗粒（ＳＰＩＯ）作为基因载体和磁共振示踪剂的可行性。 【关键词】 内皮祖细胞；细胞移植；基因治疗；磁性氧化铁颗粒；磁共振成像；模型，动物 干细胞或祖细胞的研究是目前生命科学研究 中最具活力的研究领域之一，其中，内皮祖细胞 （ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ，ＥＰＣｓ）在人类疾病转归 和治疗中发挥着重要作用，许多研究者对其来源、 特征及对疾病的影响等诸多方面进行了研究。近年 来，ＥＰＣｓ移植治疗心血管疾病的研究已取得了一定 成效，而基因修饰的ＥＰＣｓ移植技术在此基础上也 得以发展，并呈现出良好的应用前景。 １ ＥＰＣｓ概述 Ｉ．Ｉ ＥＰＣｓ的定义、来源及特征ＥＰＣｓ是指能分化 为内皮细胞的前体细胞，亦称为成血管细胞（ａｎ— ｇｉｏｂｌａｓｔ），是一类具有游走、增殖并能分化为血管内 皮细胞，但缺乏成熟血管内皮细胞表型，也未形成 血管的前体细胞。１９９７年，Ａｓａｈａｒａ等Ｈ 从人外周血 中分离出ＥＰＣｓ并首次公开报道，从此揭开了该研 究序幕。ＥＰＣｓ起源于胚外中胚层卵黄囊的血岛，位 于血岛外层的细胞分化形成原始的血管内皮细胞， 中心的细胞则成为原始的造血细胞口］。研究发现， ＥＰＣｓ参与胚胎期的血管生成，并存在于成体骨髓、 外周血及脐血中［３］，内源性和外源性因素的刺激可 动员骨髓ＥＰＣｓ进入外周血，参与缺血组织的血管 重建和损伤血管的再内皮化过程。所以，内皮祖细 胞同其他干细胞一样是一种功能性定义，指所有能 分化为成熟内皮细胞的细胞群。 单从形态学上无法分辨ＥＰＣｓ，而是要依靠细胞 作者单位：２１０００９南京，江苏省东南大学附属中大医院放射科 ｌ９８ 表面标记来识别。迄今为止，尚无鉴定ＥＰＣｓ的统一 标准。一般来说，ＥＰＣｓ的特征是表达以下３种标记 物：ＣＤ１３３、ＣＤ３４和ＫＤＲ（ｋｉｎａｓｅ ｄｏｍａｉｎ ｉｎｓｅｒｔ ｃｏｎ． ｔａｉｎｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）。随着分化，ＥＰＣｓ明显失去对 ＣＤ１３３的表达，开始表达ＣＤ３１、血管内皮钙连蛋白 和ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子等内皮特异性标记Ｈ］。新近的 研究证实ＥＰＣｓ是一组细胞群，有完整的分化等级 （ｈｉｅｒａｒｃｈｙ），最初具有极度活跃的增殖能力，经过连 续的祖细胞分化，逐渐失去有丝分裂能力，最终成 为成熟的内皮细胞。由此看来，外周血的ＥＰＣｓ实际 是不同分化阶段的祖细胞集合，因而表面标记有所 不同 。 １．２ ＥＰＣｓ的分离及培养方法 最初，ＥＰＣｓ是通过 免疫磁珠分离得到ＣＤ３４ 细胞，然后采用贴壁培养法 获得，虽然这种方法分离得到的ＣＤ３４ 细胞较纯，但 数量少，而且一部分ＣＤ３４一干细胞也可能分化为内 皮样细胞。随后，许多研究采用密度梯度离心法分离 单个核细胞，然后用直接贴壁筛选法来分离ＥＰＣｓ， 并用添加了血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）、碱性纤维 母细胞生长因子（ｂＦＧＦ）等各种促内皮细胞生长因 子的特殊内皮细胞培养基进行培养扩增。最近有报 道用一种ＳｔｅｍＱｕｉｃｋＴＭ Ｅ的过滤装置分离单个核细 胞，可较密度梯度离心法获得纯度更高的ＥＰＣｓ［６］。 １．３ ＥＰＣｓ的应用 ＥＰＣｓ具有特异性归巢于缺血 缺氧、血管损伤组织，促进新血管形成的特性。实验 证明，
内皮祖细胞预防冠脉支架内再狭窄的研究进展
２００８年０１月第２５卷第０１期ｌ：＇ｒａｃ Ｊ Ｍｅｄ＆—ｌ：＇ｈ—ａｒｍ．Ｖｏｌ ２５，２００８－０１ Ｎｏ．０１ 内皮祖细胞预防冠脉支架内再狭窄的研究进展 张俭①耿强②综述边树怀②审校 （ｏ１４８医院。山东淄博２５５３００；②河北省人民医院老年病研究所老年病一科，河北石家庄０５００５１） 【关键词】内皮祖细胞 支架术／７－，￣狭窄 【中图分类号Ｊ Ｒ６５４ ２ 【文献标识码Ｊ Ａ １９７７年９月Ｇｒｕｅｎｔｚｌｎｇ进行了世界上第一例经皮经腔 冠状动脉成形术（ＦＦＣＡ），开创了介人心脏病学的新纪 己。以 ＰＴＣＡ为基础的冠心病介入治疗技术迅速发展，成为冠心病 血管重建治疗的重要手段，其巾冠状动脉内支架植入术成为 经皮冠状动脉介入治疗（ＰＣＩ）发展过程巾最重要的进展之 一。但是支架的植入导致了血管壁、血管内皮细胞的损伤和 血管平滑肌细胞的增生。加速支架术后血管 狭窄。虽然，药 物洗脱支架（ＤＥＳ）能不Ｉ刮程度的抑制平滑肌细胞过度增生 使再狭窄发病率 著降低ＩＪＩ。但ＤＥＳ同时通过减少内皮祖细 胞（ＥＰＣ）的数目、抑制其增殖活性等机制减少了支架表面冉 内皮化的发生口Ｉ。ＥＰＣ足一种能直接分化为血管内皮细胞的 前体细胞．不仅参与胚胎时期血管生成，还 出生后血管新 生和血管内皮损伤愈合密切相关。具有广阔的临床研究Ｊ１ｉｆ 景。本文主要就内皮祖细胞在损伤的血管巾加速内皮化与预 防冠脉支架内再狭窄巾的作用进行综述。 ｌ ＥＰＣ的生物学特性 胚胎发育过程中ＥＰＣ来源于胚胎卵黄蜒血岛内的造血 干细胞，成人外周血巾的ＥＰＣ主要来源于骨髓。ＦＰＣ＿兀『以从 脐带血、胎肝或成体的骨髓、外周血巾分离得到。日Ｉ】ｉｆ ＥＰＣ 分离方法主要有密度梯度离心法和应用包被竹ＣＤＩ３３或 ＣＤ３４抗体的免疫磁珠分选法［３１。分离后的细胞在加有生Ｋ 子的培养基培养。可以促进内皮样细胞的发育。体外培养时 加人多种生长因子，用特殊的粘附Ｊ 物（如纤维连接蛋白），在 体内与细胞外基质或周闱成熟的内皮接触。都 能影响来自 骨髓的ＥＰＣ增殖、分化。ＥＰＣ具有新生血管和修复损伤血管 内皮的作用，此外还能分泌多种生 冈子．如表皮生长Ｉ 子、 成纤维细胞生长因子、肝细胞生长Ｉ 子、白介素一８等Ｉ Ｉ。ＥＰＣ 还可以依靠其归巢机制特异性的粘附至缺血或血管损伤处 进行内皮再生和修复。 ２ ＥＰＣ在血管内皮化中的作用 血管内皮足人体巾最大的调节器，它涉及了血管调节、 血小板聚集、纤维蛋白溶解和血管生长，血管内皮细胞通过 一氧化氮和前列环素抑制了血小板的聚集１『Ｉ＝『处于抗粘附状 态，保护着血管内表面１５１。血管内皮损伤后依赖自身修复的过 程是非常缓慢的，损伤后再生的血管内皮细胞表型发生变 化，不能有效的抑制新生内膜增生。循环中的ＥＰＣ能被趋化 至血管损伤部位，并进一步分化为成熟的内皮细胞参与损伤 内皮的修复。通过移植白体或动员骨髓巾的ＥＰＣ可以使血 管内皮损伤后结构功能的快速恢复成为可能。 血管内皮损伤是ＰＣＩ术后支架内再狭窄的一个重要病 理基础，加快损伤后的再内皮化，恢复内皮功能进ｌ『Ｉ『稳定血 管内环境，可以有效预防血栓形成、血管痉挛、减少平滑肌细 胞增殖，因此可以早期预防ＰＣ１术后支架内再狭窄．保持梗 ・ｌ０７・ 综述与讲座 塞相关动脉的持久开通。传统的观点认为，血管内皮的修复 是依靠损伤边缘的内皮细胞冉尘完成的，现在更多的研究发 现．血管损伤后，循环血液巾的ＥＰＣ能够向损伤血管归巢， 并增殖分化为血管内皮细胞，加速损伤血管内皮的修复［６１。 Ｗｅｍｅｒ等ｌ ｌ将ＥＰＣ经静脉注入颈动脉内膜剥离的大鼠 体内，与末经ＥＰＣ处理的对照组比较，ＥＰＣ增强了大鼠颈动 脉ＩＩｌ导丝导致的内皮剥脱处的再内皮化，Ｉ司时减少了内膜的 增生。Ｇｒｉｅｓｅ等Ｉ 报道，与未经ＥＰＣ处理的刘照组比较．在自 体移植ＥＰＣ后４ｄ即可见刮球蜒导致的兔颈动脉内皮损伤 处近乎完全的冉内皮化，４周后，ＥＰＣ处理组的新生内膜形 成ｔＢＸ，ｆ照组 著减少。内皮源性的舒张功能也较对照组有较 大改善。 ３ ＥＰＣ相关支架及在预防支架后再狭窄中的应用 虽然ＰＴＣＡ和冠脉内支架植入术使冠心病患者的临床 症状和远期预后有了明 改善。但是术后支架内血栓形成和 狭窄 １ｉｆ尚无良好的办法。Ｇｅｏｒｇｅ等ｌ 牺过比较冠脉造影 示支架内冉狭窄的患者和具有相Ｉ百ＪＩ临床症状尤支架内再 狭窄的患者，发现两组患者循环巾具有相同水平的ＥＰＣ。但 支架内再狭窄患者的ＥＰＣ粘附能力 著降低。与支架内局 限性再狭窄的患者比较，支架内弥漫性狭窄的患者ＥＰＣ水 平明 减少，Ｇｅｏｒｇｅ等的这一研究结果说明ＥＰＣ参与了血 管内皮损伤后的修复与支架内 狭窄的发展。 Ｓｈｉｒｏｔａ等Ｉ Ｉ认为在血管损伤部位内皮细胞迅速再生可 以减少或预防局部血栓形成和再狭窄，为了通过迅速内皮冉 生来预防这些并发症，他们设计了两种ＥＰＣ种植支架：一种 足光处理明胶包被支架；另一种是薄层多微孑Ｌ的聚氨酯薄膜 和光处理明胶两层包被的支架，将这两种支架放人含有从犬 外周血巾提取的ＥＰＣ的基质巾培养７ｄ后，结果发现两种支 架上均覆盖了单层ＥＰＣ，并且大部分ＥＰＣ在支架扩张后仍 在支架上保持其连续性，之后他们又将这两种支架置人于一 种人造模拟血管组织中，经过培养７ｄ后。观察发现从支架上 迁移而来的ＥＰＣ，在管腔表面繁殖并形成内皮覆盖了人造模 拟血管组织，这个体外试验表明ＥＰＣ可通过冉内皮化修复 损伤的血管，从 抑制血栓形成和 狭窄。 Ａｏｋｉ等ＩＨＩ给１６例冠心病患者置入了ＥＰＣ捕获支架 （ＣＤ３４抗体包被支架），在Ｉ期研究巾，术后３０ｄ内没有主要 心脑血管事件（ＭＡＣＣＥ）发生；Ⅱ期研究巾，术后９个月观察 ＭＡＣＣＥ发生牢为６＿３％，结果 示ＥＰＣ捕获支架在预防支架 内再狭窄方面是安全可行自４。Ｂｌｉｎｄｔ等ｌＩ２研究证实载有整合 素连接环精一甘一天冬氨酸肽（ｃＲＧＤ）的支架能通过ｕ发引ＥＰＣ 而抑制冠状动脉新内膜形成和加速动脉内皮化，载有ｃＲＧＤ 的支架通过加速血管内皮化能够减少支架内 狭窄。 Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ等 将白体ＥＰＣ种植于人工血管聚酯表面．
高脂大鼠内皮祖细胞生物学特性的实验研究
志２０１０年７月第１７卷第 期一Ｃｈｉｎ Ｊ Ｎｅｕ—ｒｏｉ ｍｍｕｎｏｌ￣＞．Ｎｅｕｒｏｌ—２０１０，Ｖｏ１．１７，Ｎｏ．４ 经
高脂大鼠内皮祖细胞生物学特性的实验研究
孔朝红 刘煜敏 朱江 道文欣 ・ ２５３ ・
摘要：目的研究高脂大鼠内皮祖细胞（ＥＰＣ）的生物学特性，并探讨其在体外最佳５一溴脱氧尿嘧啶核苷 （ＢｒｄＵ）标记方案。方法制备高脂模型大鼠，体外分离培养ＥＰＣ，观察健康对照组和高脂组大鼠ＥＰＣ生长及
增殖状况。将ＥＰＣ传代培养后，检测不同浓度ＢｒｄＵ和不同孵育时间对其ＢｒｄＵ标记率的影响。结果 与健康 大鼠来源的ＥＰＣ相比，高脂大鼠ＥＰＣ形态较小，培养相同时间时ＣＤ３４表达率较低，而ＣＤ４５、ＣＤ１３３表达率较 高；细胞吞噬及增殖分化能力较差。ＢｒｄＵ为１５￣ｔｍｏｌ／Ｌ、孵育时间为６０ ｈ时其标记率达较高水平，可满足研究 需要。结论在高脂状态下大鼠ＥＰＣ的生物学功能受损，其ＢｒｄＵ的最佳标记方案为１５ ｇｍｏｌ／Ｉ ，孵育时间为
６０ ｈ。 关键词：内皮祖细胞；高脂血症；生物学特性；尿嘧啶核苷 中图分类号：Ｒ３２９．２ ８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—２９６３（２０１０）０４—０２５３—０５
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｈｙｐｅｒｌｉｐｅｍｉａ ｒａｔｓ ＫＯＮＧ Ｚｈａｏ—ｈｏｎｇ， ＬＩＵ Ｙｕ—ｒａｉｎ ，ＺＨＵＪｉａｎｇ，ＤＡＯ Ｗｅｎ—ｘｉｎ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｚｈｏｎｇｎａｎ Ｈｏｓｐｉ～
ｔａｌ，Ｗｕｈａｎ Ｈｕｂｅｉ ４３００７１，，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＬＩＵ Ｙｕ—ｒａｉｎ，Ｅｍａｉｌ：１ｙｍ９３８１＠１２６．ＣＯｒｎ
ＡＢＳＴＲＡＣＴ： Ｏｈｉｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｂｉｏｎｏｍｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ（ＥＰＣ）ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ
人外周血内皮祖细胞的分离、培养、扩增和鉴定
人外周血内皮祖细胞的分离、培养、扩增和鉴定
目的：研究人外周血内皮祖细胞的分离、培养、扩增和鉴定方法。方法：采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，用EGM-2培养基在多聚赖氨酸包被的培养板中进行诱导培养，动态地观察贴壁细胞的生长状况，免疫组织化学技术检测培养细胞表面标志物的表达。结果：人外周血单个核细胞经体外培养至第2天，呈贴壁生长，细胞形态为大小相近的圆球体；第4天一些细胞开始出现尾状物，形态呈蝌蚪样改变，部分细胞聚集形成细胞簇；至第7天细胞形态变长，呈梭形改变，细胞间相互围绕呈环形，并有集落出现，免疫组织化学染色CD133、CD34、VEGFR-2和Ⅷ因子表达均呈阳性。结论：运用本实验方法可以成功实现人外周血内皮祖细胞的分离、培养和扩增。
标签：内皮祖细胞；外周血；细胞培养
内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells， EPCs）是血管内皮细胞的前体细胞，亦称血管母细胞（angioblast），EPCs不仅参与胚胎血管生成，而且也参与出生后的血管新生过程。近些年来人们对EPCs在血管形成、心脑血管疾病和创伤愈合等方面的作用进行了广泛的研究[1]，EPCs移植技术已成为治疗心脑血管疾病的一种新兴的方法[2]，具有广阔的临床应用前景。但由于EPCs的来源有限，目前的培养方法尚不能满足基础研究和临床治疗的需要，在本实验中，笔者研究从来源相对广泛的人外周血中分离培养EPCs，为EPCs的应用提供一种便捷有效的分离方法。
1 材料和方法
1.1 材料：主要试剂和仪器：内皮细胞培养基（Endothelial Cell Growth
Medium-2，EGM-2）（Lonza公司）。人淋巴细胞分离液（天津灝洋生物制品有限公司）。鼠抗人CD133单克隆抗体、血管内皮生长因子受体2（Vascular Endothelial
Growth Factor Receptor 2，VEGFR-2）（北京博奥森生物技术有限公司）。鼠抗人CD34单克隆抗体、Ⅷ因子、鼠兔通用型二抗、浓缩型二氨基联苯胺（Diaminobenzidine， DAB）试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）。多聚赖氨酸、多聚甲醛（Sigama公司）。Olympus倒置显微镜（日本）。
血管内皮祖细胞及其在肿瘤中作用的研究进展
・７６・ 第２１卷第１期 ２００８年１月 医学研究生学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅｓ Ｖｏｌ＿２１ Ｎｏ．１ Ｊａｎ．２ｏｏ８ ・综 述・ 血管内皮祖细胞及其在肿瘤中作用的研究进展 谢晓综述，梅举审校 （第二军医大学长海医院心胸外科，上海２００４３３） 摘要：血管内皮祖细胞是一类能够迁移、增殖，并分化为成熟血管内皮细胞的前体细胞。它们不仅参与胚胎发育 过程的血管发生及血管新生，而且与肿瘤发生、发展及转移起关键作用。作者对血管内皮祖细胞及其在肿瘤发生 和治疗中的作用作一综述。 关键词：内皮祖细胞；肿瘤 中图分类号：Ｒ７３０．２３１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－８１９９（２００８）０ｌ－００７６－０３ Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ｔｏ ｔｕｍｏｒ ＸＩＥ Ｘｉａｏ ｒｅｖｉｅｗｉｎｇ，ＭＥＩ Ｊｕ ｃｈｅｃｋｉｎｇ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｃｈａｎｇｈａｉ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００４３３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ，ｍａｎｙ ｓｔｕｄｉｅｓ ｈａｖｅ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｔｈａｔ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ （ＥＰＣ）ｃａｎ ｍｉｇｒａｔｅ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅ ａｎｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ ｉｎｔｏ ｍａｔｕｒｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｙ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ａｎ— ｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｎｏｔ ｏｎｌｙ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｂｕｔ ａｌｓｏ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｍｅｔａ— ｃｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ＥＰＣ ａｒｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｕｍｏｒ．Ｔｈｉｓ ｒｅｖｉｅｗ ｓｕｍｍａｒｉｚｅｓ ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ ｔｈｉｓ ｆｉｅｌｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ；Ｔｕｍｏｒ ０引 言 １ ＥＰＣ的来源和生物学特性 骨髓含有一群能迁移至外周血中并分化为成熟 内皮细胞的祖细胞，这些细胞被称为血管内皮祖细 胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ，ＥＰＣ）。在某些情况 下可被动员至外周血，归巢至靶组织参与生理和 （或）病理性血管形成。ＥＰＣ在肿瘤发生及治疗中 可能发挥了不可替代的作用，国内外众多学者对此 开展了大量的研究。 收稿日期： 基金项目： 作者简介： 通讯作者： １．１ ＥＰＣ的来源８０多年前，Ｆｌｏｒｅｎｃｅ等最早提出 内皮细胞及造血细胞来源于同一祖细胞。他们研究 了小鸡胚盘中血液及血管的初步形成，提出存在血 管母细胞／血管祖细胞（ａｎｇｉｏｂｌａｓｔ），并认为其由原 始中胚层分化而来。胚胎第１５ ｄ左右，卵黄囊胚外 中胚层的间充质细胞聚集成细胞团，形成血岛。血 岛中央的细胞为造血干细胞，周边的细胞为ＥＰＣ。 ２００７－０９－２８；修订日期：２００７—１０—１８ 国家自然科学基金资助项目（批准号：３０５７１８４３） 谢晓（１９８０．），男，安徽巢湖人，医师，医学硕士，从事心胸外科专业。 梅举（１９６３．），男，安徽巢湖人，教授，主任医师，医学博士，从事心胸外科专业。
内皮祖细胞与冠心病的相关性研究进展
国际检验医学杂志２００８年１月第２９卷第１期Ｉｎｔ Ｊ ＬａｂＭｅｄ，Ｊａｎｕａｒｙ ２００８，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．１ 内皮祖细胞与冠心病的相关性研究进展 张阳东综述 田亚平审校 【摘要】血液中的内皮祖细胞具有增殖、分化为成熟血管内皮细胞的潜能。其水平变化与冠心 病的发生发展密切相关，不同类型冠心病及冠心病治疗后内皮祖细胞将伴随发生相应变化，因此研究 外周血液中内皮祖细胞水平的变化对冠心病的预防、诊断及治疗具有重要意义。 【关键词】冠状动脉疾病； 干细胞； 内皮，血管 中图分类号：Ｒ５４１．４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—４１３０（２００８）０１—５７ Ｏ３ 内皮祖细胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ，ＥＰＣｓ） 是血管内皮细胞的前体细胞，又称为血管母细胞，不 仅参与胚胎血管生成，而且也参与出生后血管的发生 过程，ＥＰＣｓ在缺血性疾病、防止血管再狭窄、血管创 伤愈合、肿瘤的生长等过程中都有重要治疗作用和广 阔的临床应用前景。冠心病（ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ ，ｃＡＤ）是当今危害我国人民健康和生命的主要疾病， 其患病率呈逐年上升趋势。ｃＡＤ的发病是遗传因素 和环境因素共同作用的结果，主要是由于动脉粥样硬 化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ＡＳ）斑块导致的。ＡＳ的形成受多 方面因素的影响。本文就目前有关ＥＰＣｓ与ＣＡＤ的 相关性作一综述。 ＥＰＣｓ的生物学特性 ＥＰＣｓ是来源于骨髓的一种前体细胞，它类似于 血管母细胞，能增殖、分化为成熟的血管内皮细胞。 原始ＥＰＣｓ的标志为ＣＤ１３３＋／ＣＤ３４＋／血管内皮生 长因子受体～２＋（即鼠的Ｆｌｋ—ｌ、人的ＫＤＲ），同时不表 达ＶＥ一钙粘素和血管性假性血友病因子。ＣＤ１３３除 了表达于ＥＰＣｓ外，还表达于造血干细胞、神经干细胞 及胃肠上皮细胞等。随着ＥＰＣｓ向成熟血管内皮细胞 分化，ＣＤ１３３随之丢失。ＣＤ３４是ＥＰＣｓ向成熟内皮 细胞分化过程中丢失的另一个细胞标志，除了毛细血 管内皮细胞，大部分成熟血管内皮细胞不表达ＣＤ３４。 血管内皮生长因子受体～２主要分布于血管内皮细胞， 也分布于造血干细胞和巨噬细胞等。健康个体外周 血中ＥＰＣｓ的数量很少，它主要参与血管的动态维持 和生理性重建。 ＥＰＣｓ的动员可能涉及炎症分子、酶、细胞因子等 复杂的信号传递过程。血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ｛ａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）是血管内皮细胞的 特异通透因子、丝裂原和趋化因子，能促进ＥＰＣｓ的动 员增殖、迁移和趋化。胆固醇生物合成的限速酶３一 羟一３一甲基戊二酰辅酶Ａ还原酶的抑制剂也能动员骨 作者单位：１００８５３北京，解放军总医院生化科 ・ ５７・ ・综述・
天然药物及其活性成分保护内皮祖细胞机制的研究进展
药学实践杂志２０１３年１月２５日第３ｌ卷第１期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｖｏｌ ３１，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａｒｙ ２５，２０１３
天然药物及其活性成分保护内皮祖细胞机制的研究进展
董雅芬 ，舒菁菁 ，马 靖 ，李 菲 ，彭 程 ，金 磊。，谢和辉 ，张 川。（１．福建中医药大学，福建福 Ｉ＇１ ３５０１００；
２．第二军医大学药学院，上海２００４３３）
［摘要］ 血管内皮的完整性对预防心血管疾病的发生至关重要。正常内皮功能的维持不仅依赖于现有的内皮细胞，也 依赖于内皮祖细胞的募集。内皮祖细胞有望成为心血管疾病治疗的新靶点。天然药物及其活性成分已广泛用于治疗心血管 疾病，它们对内皮祖细胞的作用已有报道，本文对近年来天然药物保护内皮祖细胞的作用机制进行综述。 ［关键词］ 天然药物；内皮祖细胞；氧化应激；炎症 ［中图分类号］ Ｒ９７２ ［文献标志码］ Ａ ［文章编号］ １００６—０１１１（２０１３）０１—００１１—０４ ［ＤＯＩ］ ｌ０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６—０１１１．２０１３．０１．００３
Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｎ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ
ｆｒｏｍ ｎａｔｕｒａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ
ＤＯＮＧ Ｙａ—ｆｅｎ ，ＳＨＵ Ｊｉｎｇ—ｊｉｎｇ ，ＭＡ Ｊｉｎｇ ，ＬＩ Ｆｅｉ。，ＰＥＮＧ Ｃｈｅｎｇ ，ＪＩＮ Ｌｅｉ ，ＸＩＥ Ｈｅ—ｈｕｉ ，ＺＨＡＮＧ Ｃｈｕａｎ （１．Ｆｕｊｉａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｕｚｈｏｕ ３５０１００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００４３３，Ｃｈｉｎａ）
循环内皮细胞的研究新进展
循环内皮细胞的研究新进展
马 倩,操乐杰
(安徽省立医院呼吸内科,安徽合肥,230022)
关键词:循环内皮细胞;肿瘤;生物标记
中图分类号:R73015 文献标识码:A 文章编号:1672Ο2353(2008)07Ο0008Ο04
近年研究表明,血管内皮细胞[1]不仅是一个
半透膜屏障,还具有很多复杂的代谢和内分泌功
能。在对血管内皮细胞的研究过程中,人们发现
体内血管内皮损伤缺乏敏感的判定指标,并在对
此的研究中发现了循环内皮细胞(CEC)。目前,
对于CEC所达成的共识是,CEC可作为一种灵
敏的直接反映血管内皮损伤的指示物,并能通过
对其体外培养,进行深入的研究和探讨疾病的病
理生理机制。这些共识,使CEC的研究受到越来
越多的重视。
1 CEC的概念及研究进展
CEC是指外周血中测得的血管内皮细胞
(VEC),其数量的变化可反映血管内皮受损的程
度,是目前唯一可作为活体组织中反映VEC损伤
的直接而特异的标志物[2Ο3]。目前较公认的循环
内皮细胞的定义,就是在外周血中表达CD146膜
糖蛋白,在正常人血中数量极少,而在炎症、免疫
应答、感染、肿瘤形成和心血管疾病等情况数量可
明显增加的一类细胞。
李宏伟等[4]用免疫磁珠分离的方法检测了
CEC,他们分选的CECs在镜下呈圆形、卵石形,
体积显著大于其他血细胞。在光镜下判断CECs
的标准,他们采用了Mutin等[5]的标准并加以改
进;Samaden等[6]从患有弥漫性动脉粥样硬化的
老年患者外周血中分离出了具有活力的CECs并
在体外培养成功。2001年,意大利的Bertolini研
究组提议把CEC计数作为小鼠癌症模型的一个
生物反应标志物[7]。通过评定CEC的动力和活
力可以预测癌症病人“节拍器的”化疗的临床受益
情况[8]。陈亚宝等[9]选用CD1462PE、CD32APC
对外周血中的内皮细胞进行标记,他们认为
CD146+CD3-的细胞群,即为循环内皮细胞。运用多色流式细胞计量术,明确了活性CECs的表
匹伐他汀纳米颗粒改善内皮祖细胞生物学功能及修复损伤血管研究
匹伐他汀纳米颗粒改善内皮祖细胞生物学功能及修复损伤血管研究
研究背景与目的血管内皮损伤是动脉粥样硬化性疾病和介入治疗术后再狭窄的主要病理生理基础,因此,如何促进内皮的有效修复和再生是此类疾病良性转归的关键。近年来,内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)在损伤血管修复、缺血组织血管新生、正常内皮功能维持中的作用已引起广泛关注。但是在心血管疾病及其相关危险因素患者中,EPC数量减少且功能下降,修复损伤血管的能力下降,因此应用药物或其它干预因素增加EPC的数量并改善其功能是优化EPC治疗策略的重要手段。
他汀类药物作为缺血性心血管疾病治疗的基石,具有独立于降脂以外的多重心血管保护作用,其中包括对内皮祖细胞生物学功能的改善,但这种作用多建立在较大剂量、长时间他汀类药物的应用上。作为新一代的他汀药物,匹伐他汀已被证实具有更强的调脂、改善内皮功能、逆转斑块等治疗价值,但是为达到这种获益所需局部药物浓度较高、服用时间较长,仍可引起全身不良反应。纳米技术的出现为药物在体内的转运提供了新的平台,以可生物降解的高分子材料做为药物载体,可改变其包裹药物的药代动力学特征,达到提高疗效、减轻不良反应等作用。
近年来匹伐他汀纳米颗粒在促进缺血组织血管新生、逆转/稳定动脉粥样斑块及防治肺动脉高压中已显示出巨大优势。本实验旨在制备匹伐他汀纳米颗粒,观察匹伐他汀纳米颗粒对EPC生物学功能的影响,并对其增殖机制作初步探讨;在体研究内吞匹伐他汀纳米颗粒后EPC修复损伤血管功能。方法1.匹伐他汀纳米颗粒的制备及性质表征研究以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly lactic-co-glycolic acid,PLGA)为载体,匹伐他汀为包裹药物,采用超声乳化溶剂挥发法制备,电镜观察纳米颗粒形貌,纳米粒度仪测定其粒径及分布情况。
高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)计算载药量和包封率,药物释放实验观察纳米颗粒的释药特点。2.大鼠脾源性EPC培养、鉴定密度梯度离心法获得大鼠脾脏单个核细胞,在添加胎牛血清、血管内皮生长因子的DMEM低糖培养基中培养,显微镜下观察细胞形态变化。Di I-ac LDL摄取与FITC-UEA-I结合实验鉴定EPC是否具有内皮细胞的特性,流式细胞术鉴定细胞表面内皮细胞特异性抗原和干细胞抗原。