褐藻胶降解酶产生菌的筛选与鉴定
重组褐藻胶裂解酶酶解工艺的优化及产物分析
重组褐藻胶裂解酶酶解工艺的优化及产物分析王新侠;乔超超;倪辉;肖安风;蔡慧农;朱艳冰【摘要】为探索假交替单胞菌（ Pseudomonas syringae）重组褐藻胶裂解酶降解褐藻胶的动态过程变化，采用DNS法和苯酚－硫酸法分别测定体系还原糖和总糖，根据二者比例，得出酶解产物随时间变化的平均聚合度，从而研究各因素对褐藻胶降解过程的影响，确定褐藻胶酶解工艺条件。
结果表明，重组褐藻胶裂解酶降解褐藻胶的适宜工艺条件为：水解温度25℃， pH 7�5，初始底物质量浓度7 g ／L，加酶量0�48 U，静置条件下酶解反应210 min。
在此工艺条件下，产生的还原糖的质量浓度达0�878 g／L，平均聚合度为3。
酶解终产物的质谱鉴定结果显示为单糖、二糖和四糖。
%The aim of the study is to determine the dynamic process and technical conditions of alginate degradation by the recombinant alginate lyase from Pseudomonas syringae. The contents of the reducing sugar and the total polysaccharide were determined by 3 , 5-dinitrosalicylic acid assay and phenol-sulfuric acid method, respectively. According to the ratio of reducing sugar and total sugar, the variation regularity of av⁃erage polymeric degree of the enzymatic hydrolysates were obtained. The influence factors in the enzymatic process were studied, and the optimal conditions for alginate degradation by the recombinant alginate lyase were determined. The results showed that optimalco nditions for enzymatic hydrolysis were: temperature 25 ℃, pH 7�5, initial substrate concentration 7 g/L, enzyme 0�48 U, and reaction time 210 min. Under these condition, the concentration of reducing sugar reached 0�878 g/L and the average polymetric degree fell to 3 .The enzymatic hydrolysates were identified by mass spectrometer and the final products mainly included monosaccharide, disaccharide and tetrasaccharide.【期刊名称】《集美大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(021)005【总页数】7页(P338-344)【关键词】褐藻胶;酶解;工艺优化;褐藻胶寡糖;聚合度【作者】王新侠;乔超超;倪辉;肖安风;蔡慧农;朱艳冰【作者单位】集美大学食品与生物工程学院，福建厦门361021;集美大学食品与生物工程学院，福建厦门361021;集美大学食品与生物工程学院，福建厦门361021; 福建省食品微生物与酶工程重点实验室，福建厦门361021; 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室，福建厦门361021; 厦门市食品生物工程技术研究中心，福建厦门361021;集美大学食品与生物工程学院，福建厦门361021; 福建省食品微生物与酶工程重点实验室，福建厦门361021; 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室，福建厦门361021; 厦门市食品生物工程技术研究中心，福建厦门361021;集美大学食品与生物工程学院，福建厦门361021; 福建省食品微生物与酶工程重点实验室，福建厦门361021; 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室，福建厦门361021; 厦门市食品生物工程技术研究中心，福建厦门361021;集美大学食品与生物工程学院，福建厦门361021; 福建省食品微生物与酶工程重点实验室，福建厦门361021; 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室，福建厦门361021; 厦门市食品生物工程技术研究中心，福建厦门361021【正文语种】中文【中图分类】S188我国海藻资源丰富。
褐藻胶裂解酶及其裂解产物的研究进展
食品研究与开发２００６．Ｖｏｌ．２７．ＮＯ．１１褐藻胶是褐藻酸盐、褐藻酸及其衍生物的统称，是从海带、马尾藻、巨藻等褐藻间质中提取的多糖聚合物。
主要由１，４－β－Ｄ－甘露糖醛酸（Ｍ）及其Ｃ５差向异构体１，４－α－Ｌ－古罗糖醛酸（Ｇ）两种糖醛酸单体聚合而成。
聚合方式有四种：可以由多聚β－Ｄ－甘露糖醛酸（ＰｌｏｙＭ）或多聚α－Ｌ－古罗糖醛酸（ＰｌｏｙＧ）构成均聚物，也可以由ＭＧ交替（ＰｏｌｙＭＧ）或Ｍ、Ｇ以不同比例随机构成杂聚物［１］。
近年来，褐藻胶的开发利用引起了人们广泛重视，对褐藻胶裂解酶及其降解产物的研究成为热点。
本文就这两方面作较为详细的总结与阐述。
１褐藻胶裂解酶１．１来源褐藻胶裂解酶主要有三个来源：第一类是动物源的褐藻胶裂解酶，包括海洋软体动物和棘皮动物等。
１９８４年，国内的朱仁华等［２］从朝鲜花冠小月螺、单齿螺和褐疣荔枝螺３种海螺中分离得到褐藻胶裂解酶的粗酶提取液，用粘度法测定了酶活力，尤以朝鲜花冠小月螺的分解活性最高。
１９８７年，Ｋｌｏａｒｅｇ等［３］从海兔内脏中制备出褐藻酸酶，用于墨角藻合子的去壁，制备出了原生质体。
１９８９年，Ｙａｍａｇｕｃｈｉ等［３］从海螺、鲍的内脏中制备出褐藻解壁酶，用于某些褐藻的细胞解离。
第二类是植物源的褐藻胶裂解酶，包括巨藻、泡叶藻、掌状海带、克氏海带等海藻。
１９６６年，ＬｉｎＹ．Ｔ．等［４］从海洋褐藻ＦｕｃｕｓｇａｒｄｎｅｒｉＳｉｌｖａ中分离提纯出褐藻酸酶。
１９９９年，Ｋｒａｉｗａｔｔａｎａｐｏｎｇ等［５］自腐败海藻ｋｏｍｂｕ中分离出一株褐藻胶酶高产菌Ｎ－１，并对其降解酶基因进行了克隆和测序。
第三类是微生物源的褐藻胶裂解酶，包括海洋细菌、土壤细菌和真菌等。
１９８４年，Ｊｅｆｆｒｅｙ等［６］以褐藻酸钠为惟一碳源，从土壤和海水中分离出产生褐藻酸裂解酶的芽孢杆菌，胞外酶表现出明显的内切甘露糖醛酸裂解酶性质，酶的分子量约为４０ｋＤ。
２００１年，Ｉ－ｗａｍｏｔｏ［７］等人研究发现埃氏别单胞菌（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓｓｐ．）可以产生一种褐藻酸胞内裂解酶，分子量为３３．９ｋＤ，ｐＩ为３．８，在ｐＨ７．５￣８．０时，具有最高活性。
高效产褐藻胶裂解酶菌株产酶条件优化及降解寡糖结构分析
第２期
国晶晶ꎬ等: 高效产褐藻胶裂解酶菌株产酶条件优化及降解寡糖结构分析
２５３
通过对菌株形态、 生理生化鉴定及 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因 鉴定ꎬ 并优化其产酶条件ꎬ 进行发酵罐中试发酵ꎬ 利用菌株产粗酶液制备褐藻胶低聚糖或寡糖ꎬ 并对 降解的低聚糖或寡糖进行结构分析ꎬ 以期找到高效 产褐藻胶裂解酶的微生物菌株ꎬ 为后续褐藻胶寡糖 的分离纯化和生理活性研究提供数据资料ꎮ
第 ３４ 卷第 ２ 期 ２０ １ ９ 年 ４ 月
大连海洋大学学报 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＤＡＬＩＡＮ ＯＣＥＡＮ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
Ｖｏｌ.３４ Ｎｏ.２ Ａｐｒ . ２ ０ １ ９
ＤＯＩ:１０.１６５３５ / ｊ.ｃｎｋｉ.ｄｌｈｙｘｂ.２０１９.０２.０１５
文章编号:２０９５ － １３８８( ２０１９) ０２ － ０２５２ － ０８
收稿日期: ２０１８－０６－０９ 基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (３１４７１６１０) ꎻ 国家重点研发计划 (２０１８ＹＦＤ０９０１１０４) ꎻ 现代农业产业技术体系专项 ( ＣＡＲＳ－５０) 作者简介: 国晶晶 (１９９３—) ꎬ 女ꎬ 硕士研究生ꎮ Ｅ－ｍａｉｌ: ４７８７７１１８７＠ ｑｑ������ ｃｏｍ 通信作者: 汪秋宽 (１９６２—) ꎬ 女ꎬ 教授ꎮ Ｅ－ｍａｉｌ: ｗｑｋ３２０＠ ｄｌｏｕ������ ｅｄｕ������ ｃｎ
海星 Ａｓｔｅｒｏｉｄｅａ ｓｐ������ 作为海洋无脊 椎 动 物ꎬ 隶 属于棘皮动物门ꎬ 主要食用海参、 牡蛎等以海藻等 作为主要食物的海洋动物ꎬ 其体内可以存在与消化 酶共同参与褐藻胶消化及吸收的微生物菌群ꎮ 目 前ꎬ 从海星内脏中筛选得到产褐藻胶裂解酶的菌株 鲜有报道ꎮ 本研究中ꎬ 主要以褐藻胶作为唯一碳 源ꎬ 在海星内脏中筛选出一株产褐藻胶裂解酶菌株ꎬ
动物组织检测褐藻胶裂解酶方法
动物组织检测褐藻胶裂解酶方法说到褐藻胶裂解酶，很多人可能会一脸懵，心想：这是什么神奇的东西，听起来好像是从外星球来的。
不过，说白了，褐藻胶裂解酶其实就是大自然的一个小秘密，它能把某些大分子物质“打碎”，让它们变得更小、更易于利用。
它的主要作用是分解褐藻中的褐藻胶，这种物质广泛存在于海藻中，尤其是在一些海带、裙带菜这样的海藻里。
听起来是不是有点像科幻片里那种超能物质？但它的应用非常实际，尤其是在生物学和环境科学的领域，简直是“神器”啊！这项技术最早是为了帮助分解海藻中的复杂糖类物质，让它们更容易被微生物或其他生物体吸收。
想象一下，海洋中的这些海藻，长得又大又强壮，内部那些繁复的化学结构不容易被自然界里的其他生物消化。
如果我们能找到一种办法，把它们分解成简单的糖类，那多好！褐藻胶裂解酶就是这么一个“拆解专家”，它能把那些复杂的糖链分解成小块，供微生物和动物们使用。
有了这个酶，咱们就能更好地理解海藻中的化学成分，也可以更高效地利用这些资源。
比如，褐藻胶裂解酶被用在食品加工中，用来提高某些产品的口感和品质；也能用在医药领域，帮助提取海藻中的有效成分，甚至有研究发现，它对环境污染治理也有一定的作用。
嘿，说到这，你是不是开始觉得这东西不简单了？但是，话说回来，做这项实验也不是那么容易的。
你得知道怎么从动物组织里提取出这种酶。
普通的实验室操作已经不能满足要求了，需要更精细的技术手段。
通常，研究人员会从一些动物体内，特别是海洋动物或者某些能吃海藻的陆生动物体内，提取出含有这种酶的组织。
想象一下，得从这些动物的肠道或者消化系统里找出酶，那可不是件轻松的事，像找针一样！不过，科学家们常常有办法把这些复杂的步骤搞得井井有条，就像解锁一道难题，总能找到一条路。
提取出来的酶要经过一些特殊的处理，才能保证它的活性。
就像我们做饭一样，调味料少了不行，火候掌握不好也不行。
酶也是有“脾气”的，它们在特定的温度、酸碱度条件下才能发挥作用。
高效褐藻胶降解菌的筛选与产酶条件优化
1115北京市科技专项(Z161100005016034)资助收稿日期: 2016-05-12; 修回日期: 2016-05-31; 网络出版日期: 2017-10-24北京大学学报(自然科学版) 第53卷 第6期 2017年11月Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Pekinensis, Vol. 53, No. 6 (Nov. 2017) doi: 10.13209/j.0479-8023.2017.122高效褐藻胶降解菌的筛选与产酶条件优化李婷婷1,2 陈倩2 石萍1 耿旭3,†1. 深圳市重金属污染控制与资源化重点实验室, 北京大学深圳研究生院环境与能源学院, 深圳 518055;2. 北京市新型污水深度处理工程技术研究中心, 北京大学环境工程系, 北京 100871;3. 中美食品安全联合研究中心, 西北农林科技大学, 杨凌 712100;† 通信作者, E-mail: sgeng@摘要 以海藻酸钠为唯一碳源, 从天然腐烂海带中筛选得到一株高效褐藻胶降解菌株53#, 经形态学观察和16S rRNA 鉴定, 确定为类芽孢杆菌Paenibacillus agaridevorans 。
采用正交试验方法, 以pH 、温度、NaCl 浓度和海藻酸钠初始浓度为影响因素, 对该菌株的产酶条件进行优化, 得到53#菌的最佳产酶条件: pH=8, 25℃, NaCl 浓度15 g/L, 海藻酸钠初始浓度15 g/L 。
在最佳产酶条件下, 褐藻胶裂解酶最大酶活可达390.53±17.32 U/mL 。
筛选得到的类芽孢杆菌Paenibacillus agaridevorans 53#具有易于培养、产酶速度快和酶活力高等优点, 能够实现褐藻胶的高效糖化, 在褐藻生产生物乙醇领域具有潜在利用价值。
关键词 褐藻胶降解; 褐藻胶裂解酶; 类芽孢杆菌; 生物乙醇 中图分类号 X172Screening of Alginate Degrading Bacteria and Optimizationof Its Enzyme-Producing ConditionsLI Tingting 1,2, CHEN Qian 2, SHI Ping 1, GENG Shu 3,†1. Shenzhen Key Laboratory for Heavy Metal Pollution Control and Reutilization, School of Environment and Energy, Peking University Shenzhen Graduate School, Shenzhen 518055;2. Beijing Engineering Research Center for Advanced Wastewater Treatment, Department of Environmental Engineering , Peking University, Beijing 100871;3. Sino-US Joint Food Safety Research Center, Northwest A&F University,Yangling 712100; † Corresponding author, E-mail: sgeng@Abstract 53#, a strain of efficient alginate degrading bacteria, is isolated from rotted kelp using sodium alginate as the only carbon resource. Strain 53# is identified as Paenibacillus agaridevorans based on physiological characteristics and 16S rRNA sequencing. The optimaltion yield condition of strain 53# is identified at pH=8, T =25ºC, NaCl 15 g/L, and sodium alginate 15 g/L by orthogonal experiment and analysis, and the highest enzyme activity is 390.53±17.32 U/mL. Strain 53# has the advantages such as being cultivated easily, producing enzyme fast and having high enzyme activity. It can achieve a high efficiency for saccharification of alginate and thus has potential value to be utilized in the production of bioethanol from brown algae. Key words alginate degradation; alginate lyase; Paenibacillus ; biofuel近年来, 海洋藻类以生长速度快, 光合作用效率高, 不含难降解木质素, 不与粮食作物争夺土地和淡水资源等优点成为第三代生物能源原料[1]。
海洋弧菌褐藻胶裂解酶的分离纯化及性质
ΙΣΣΝ 2
生物化学与生物物理学报
≤×
≤
≤
° ≠≥ ≤ ≥ ≤
ΧΝ 2
±
海洋弧菌褐藻胶裂解酶的分离纯化及性质
宋 凯 于文功 3 韩 峰 韩文君 李京宝
≤×
≤
≤
° ≠≥ ≤ ≥ ≤
∂
Ταβλε 3 Συβστρατε σπεχιφιχιτψ οφ αλγινατε λψασε φρο µ ς ιβριο σπ . ΘΨ101
≥∏ ≥∏
° °
√√
利用自制的
和
对酶的底物特
异性进行初步研究 结果表明 ςιβριο σπ ± ≠ 产
生的褐藻胶裂解酶对两种底物具有相同的活性 表
为一个酶活
力单位 ∀
温度对酶活性的影响 酶液分别在 ε !
ε ! ε ! ε ! ε ! ε ! ε ! ε 下保温
迅速冷却至 ε 紫外吸收法测定酶活性 同
时 分别测定酶液在不同温度下的活性 以确定酶
反应的最适温度 ∀
对酶活性的影响 缓冲液体系为
° 2柠 檬 酸
∗
°2
°
∗
× 2≤
∗
甘氨酸2
∗
∀酶分
别溶于上述缓冲液中 ε 保温
Ταβλε 1 Α συ µ µ αρψ οφ αλγινατε λψασε πυριφιχατιον (φρο µ 4 .0 Λ χυλτυρε)
× °∏
≤∏ ∏ ∏
≥
⁄∞ ∞ ≥
ƒƒ
≥∏ ¬
产褐藻胶裂解酶芽胞杆菌的筛选、鉴定及其降解效果评价
产褐藻胶裂解酶芽胞杆菌的筛选、鉴定及其降解效果评价黄惠琴;宋鑫;刘敏;胡永华;鲍时翔【摘要】褐藻胶是广泛存在于褐藻中的一类多糖, 降解为褐藻寡糖后能表现出更多的生物活性.从海洋样品中筛选出产褐藻胶裂解酶芽胞细菌16株, 基于形态、生理生化特征和16S r DNA系统发育分析初步鉴定菌株HB12274为解淀粉芽胞杆菌植物亚种 (Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum) .TLC结果显示, 海藻酸钠经粗酶液降解形成2～7聚合度的褐藻寡糖和单糖, 菌株与马尾藻叶片共培养时能明显降解叶状体结构.为褐藻胶裂解酶的生产和工业应用提供了新的菌株来源.%Algin is a kind of polysaccharide widely existing in brown algae, and after degraded into algin oligosaccharide, it shows more bio-activities.In this study, a total of 16 algin lyase-producing Bacillus strains were screened from marine samples.Based on morphology, physiological and biochemical properties, and 16S r DNA sequencing and phylogenetic analysis it is characterized that strain HB12274 was Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum.The polymerization degree of the main product-algin oligosaccharide degraded by the crude enzyme was between 2-7 and monosaccharide.When leaves of Sargassum cultured with the strain the thalamus structure could be obviously degraded.This study provides a new strain resource for the production and industrial application of algin lyase.【期刊名称】《微生物学杂志》【年(卷),期】2018(038)006【总页数】5页(P54-58)【关键词】褐藻胶裂解酶;筛选;鉴定;芽胞杆菌;酶活【作者】黄惠琴;宋鑫;刘敏;胡永华;鲍时翔【作者单位】中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 海南海口 571101;海南省海洋生物资源功能性成分研究与利用重点实验室, 海南海口 571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 海南海口 571101;海南省海洋生物资源功能性成分研究与利用重点实验室, 海南海口 571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 海南海口 571101;海南省海洋生物资源功能性成分研究与利用重点实验室, 海南海口 571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 海南海口 571101;海南省海洋生物资源功能性成分研究与利用重点实验室, 海南海口 571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 海南海口 571101;海南省海洋生物资源功能性成分研究与利用重点实验室, 海南海口 571101【正文语种】中文【中图分类】Q93-331褐藻胶是一种极具应用价值的多糖类物质，广泛存在于褐藻纲的藻类植物中，是细胞壁的重要组成成分，也部分存在于细胞质和细胞间质中[1]。
褐藻酸降解菌的分离、特征及对海带的生理效应
青岛海洋大学硕士学位论文褐藻酸降解菌的分离、特征及对海带的生理效应姓名：***申请学位级别：硕士专业：生态学指导教师：***2002.6.1褐藻酸降解菌的分离、特征及对海带的生理效应摘要本文对病烂海带表面的褐藻酸降解菌进行了分离和筛选，得到四株（菌株Ａ１、Ａ２、Ａ３和Ａ４）降解能力较强的菌株。
以菌株Ａ１和Ａ３为研究对象，对其生长条件和产酶条件进行了研究。
对菌株Ａ１的胞外酶一褐藻酸酶进行了初步分离及部分酶学性质研究。
同时，对褐藻酸降解菌感染及褐藻酸酶作用引起的海带生理变化进行了初步分析，以期为海带病害的发病机理和病害防治提供基础资料。
研究结果表明：１．利用选择性培养基共分离到２３株褐藻酸降解菌，通过降解能力测定，筛选出４株高降解能力的菌株（Ａ１、Ａ２、Ａ３和Ａ４）。
菌株Ａ１和Ａ３经鉴定均为别单胞菌属（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ）。
２．最佳生长和产酶条件：初始培养基褐藻酸钠含量Ｏ．６－－０．７％，ＮａＣｌ浓度１．５％，氮源一Ａ１：０．５％ＮＨｃｌ、Ａ３：Ｏ．５％（Ｎ｝Ｉ‘）。
ＳＯ；，ｐＨ７．５，培养温度２０‘（２，培养时间７２ｈ。
３．菌株Ａｌ褐藻酸酶反应的最适温度３５℃，４０＂Ｃ以下相对稳定，最适ｐＨ７．０，在ｐＨ６．５～８．０之间较稳定，最适ＮａＣｌ浓度０．３５Ｍ，最佳保温时间４０ｒａｉｎ；ｌｍｍｏｌ／Ｌ的Ｍｎ”对酶反应有激活作用，而ｚｎ”、ｃｕ’、Ａｇ＋、Ｐｂ２＋和Ｆｅ３＋对酶反应有抑制作用。
４．褐藻酸降解菌的感染引起了海带细胞内可溶性蛋白质含量、可溶性糖含量和叶绿索ａ含量的变化。
／褐藻酸酶的处理同样引起了可溶性糖含量和叶绿素ａ含量的变化，但可溶性蛋白质含量的变化不明显。
说明褐藻酸降解菌的感染和褐藻酸酶的处理均不同程度地弓ｌ起了海带的生理变化。
，了关键词：褐藻酸降解菌；培养条件；褐藻酸酶；病烂；海带ＴｈｅＪＳＯＩａｔｉＯｎａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｊｓｔｊＣＳｏｆｔｈｅＡ１９ｉｎｉＣＡｃｉｄＤｅｃｏｍｐｏｓｉｎｇＢａｃｔｅｒｉａａｎｄＰｈｙｓｉＯＩｏｇｉｃａＩＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅＢａｃｔｅｒｉｕｍｏｎＬａｍｉｎａｒｉａｊａｐｏｎｉｃａＡｂｓｔｒａｃｔＩｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｔｈｅａｌｇｉｎｉｃａｃｉｄｄｅｃｏｍｐｏｓｉｎｇｂａｃｔｅｒｉｕｍｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｄｅｃａｙｉｎｇｔｈａｌｌｉｏｆＬａｍｉｎａｒｉａＴｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｇｒｏｗｔｈａｎｄｐｒｏｄｕｃｉｎｇａｌｇｉｎａｓｅｏｆｓｔｒａｉｎＡｌａｎｄｓｔｒａｉｎＡ３ｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄＴｈｅｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅＩｌｚｙｍｅｏｆｓｔｒａｉｎＡ１ｗａｓａｎａｌｙｓｅｄ．ＡｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｂａｃｔｅｒｉｕｍａｎｄｔｈｅｋｅｌｐｗａｓａｌｓｏｓｔｕｄｉｅｄＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｓｈｏｗｎ：１ＴｗｅｎｔｙｔｈｒｅｅｓｔｒａｉｎｓｏｆａｌｇｉｎｉｃａｃｉｄｄｅｃｏｍｐｏｓｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄＦｏｕｒｓｔｒａｉｎｓｏｆｔｈｅｍｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｄｅｇｒａｄｅａｌｇｉｎａｔｅａｃｔｉｖｅｌｙｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔ．ＳｔｒａｉｎＡｌａｎｄＡ３ｗｅｒｅｐｒｏｖｉｓｉｏｎａｌｌｙｄｅｓｉｇｎａｔｅｄａｓＡｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ．２ＴｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｇｒｏｗｔｈａｎｄａｌｇｉｎａｓｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗｅｒｅｓｏｄｉｕｍａｌｇｉｎａｔｅＯ６～Ｏ．７％，ＮａＣｌｌ．５％，ＮＨ４Ｃｌ０５％ｆｏｒｓｔｒａｉｎＡＩ，（Ｎｎ４ｈｓ０４０５％ｆｏｒｓｔｒａｉｎＡ３．ｃｕｌｔｕｒｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ２０℃，ｐＨ７．５ａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｔｉｍｅ７２ｈ３．ＴｈｅａｌｇｉｎａｓｅｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｓｔｒａｉｎＡｌｂｙａｍｍｏｎｉｕｍｓｕｌｆａｔｅｓａｌｔｉｎｇｏｕｔａｎｄｄｉａｌｙｓｉｓＴｈｅｅ１１ｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓＳｔａｂｌｅａｔ４～４０℃ａｎｄｐＨ６．５～８０．ＴｈｅｏｐｔｉｍｕｍｒｅａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｐＨｗｅｒｅ３５℃ａｎｄ７０ｒｅｓｐｃｔｉｖｅｌｙ．１ｍｍｏｌ几Ｍｎ”ｃｏｕｌｄｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｅｎｚｙｍｅ，ｂｕｔＺｎ”，Ｃｕ２＋，Ａｇ＋，Ｐｂ２＋ａｎｄＦｅ３＋ｃｏｕｌｄｉｎｈｉｂｉｔｉｔ４．Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｓｏｌｕｔｅｄｓｕｇａｒ，ｓｏｌｕｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌａｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｉｎｔｈｅｔｈａｌｌｉｏｆｌａｍｉｎａｒｉａ．ＳｏｌｕｔｅｄｓｕｇａｒｃｏｎｔｅｎｔｏｆＬａｍｉｎａｒｉａｉｎｃｒｅａｓｅｄａｔｆｉｒｓｔａｎｄｔｈｅｎｒｅｄｕｃｅｄｗｈｅｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｕｒｔｈｅｒｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄＢｕｔｓｏｌｕｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔｓｈｏｗｅｄｔｈｅｏｐｐｏｓｉｔｅｔｒｅｎｄ．Ｔｈｅｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌａｄｅｃｒｅａｓｅｄｇｒａｄｕａｌｌｙｉｎｔｈｅｗｈｏｌｅｐｈａｓｅｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ａｎｄａｌｇｉｎａｓｅｃｏｕｌｄｃａｕｓｅｔｈｅｓｉｍｉｌａｒｅｆｆｅｃｔ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｉｔｗａｓｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄｔｈａｔａｌｇｉｎｉｃａｃｉｄｄｅｃｏｍｐｏｓｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａａｎｄａｌｇｉｎａｓｅｃｏｕｌｄｒｅｓｕｌｔｉｎｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｉｎｔｈｅｔｈａｌｌｉｏｆｌａｍｉｎａｒｉａＫｅｙｗｏｒｄｓ：ａＩｇｉｎｉＣａｃｉｄｄｅｃｏｍｐｏｓｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａ：ｃｕＩｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｌｇｉｎａｓｅ：ｄｉｓｅａｓｅ：Ｌａｍｉｎａｒｉａｊａｐｏｎｉｃａ褐藻酸降解菌的分离、特征及对海带的生理效应刖茜１．海带幼苗培育中的主要病害海带（Ｌａｍｉｎａｒｉａｊａｐｏｎｉｃａ）是海洋水产资源的重要组成部分，是我国大规模养殖的重要经济藻类，我国海带总产量居世界第一，约占世界海藻总产量的１／２。
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Abstract: In order to enrich the source of alginate degrading enzyme producing strains, using alginate as the sole carbon source, the strain with high degradation ability to alginate was screened from the rotten kelp collected from Changxing Island. The strain was identified by morphological obser vation, physiological and biochemical tests and molecular biological technique. The results indicated that strain E-10 with high degradation ability to alginate was screened and identified as Rheinheimera aquimaris, and the activity of alginate degrading enzyme was 14 U/L. Key words： alginate; alginate degrading strain; screening; identification
摘 要:为了丰富褐藻胶降解酶产生菌的来源，该研究以褐藻胶为唯一碳源，从长兴岛采集的腐烂海带中筛选能够高效降解褐藻胶
的菌株，并通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定。结果表明，经筛选和鉴定获得一株能够era aquimaris)，编号为E-10,其产褐藻胶降解酶活力为14 U/L。
收稿日期：2018-11-16
修回日期：2019-03-05
基金项目:国家重点研发计戈0项目(2017YFD0201300)；陕西省重点研发计戈0项目:硒化魔芋低聚糖制备及功能食品开发(2017TSCXL-NY-02-05)；
褐藻胶又称藻酸、海藻酸钠，是一些大型藻类的细胞
壁、细胞间质的主要组成成分叫褐藻胶是由B-D-甘露糖醛 酸(0-D-mannuronate, M)和 a-厶古洛糖醛酸(a-L-guluronate， G)两种糖醛酸残基通过0-1,4糖苷键相互连接而成的线性
高分子聚合物叫依据海藻种类、藻体组织部位、生态环境、 季节等的不同,M和G单体的含量比也具有差异孔褐藻胶 及其衍生物的独特理化性质，如良好的凝胶特性和稳定性， 使其被广泛应用于食品、纺织和化工等领域叫但天然褐藻 胶为分子质量较大的高聚物，黏度高、难溶于水，限制了 褐藻胶的应用。褐藻胶寡糖作为一种功能性寡糖,不仅解 决了天然褐藻胶应用上的瓶颈问题，且其具有多种生物活 性，如免疫调节［5］、抗凝血、抗高血脂冋、抗氧化凹等，也可 以作为一种植物生长调节剂，应用于绿色农业110-111«因此， 如何有效获得褐藻胶的降解产物一褐藻寡糖势在必行。
研究报告
中国酿造
2019年第38卷第5期
总第327期
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褐藻胶降解酶产生菌的筛选与鉴定
李 倩I，2，李悝悝2,张付云1*
(1.大连海洋大学食品科学与工程学院，辽宁大连116023;2.中国科学院大连化学物理研究所天然产物与糖工程研究组 大连市糖类农用制剂工程研究中心，辽宁 大连116023)
关键词:褐藻胶;褐藻胶降解菌;筛选;鉴定
中图分类号：Q939
文章编号：0254-5071 (2019)05-0063-04
doi:10.11882/j.issn.0254-5071.2019.05.013
引文格式:李倩，李悝悝,张付云•褐藻胶降解酶产生菌的筛选与鉴定［J］•中国酿造,2019,38(5)： 63-66.
Screening and identification of alginate degrading enzyme producing strain
LI Qian1, 2, LI Kuikui2, ZHANG Fuyun1*
(l.Department ofFood Scien^ce and Engineering, Dalian Ocean University, Dalian 116023, China; 2.Dalian Engineering Research Center ofCarbohydrate Agricultural Preparation, Natural Products and Glyco-Biotechnology,
目前，褐藻寡糖的制备方法有物理法、化学法和生物 酶法［21。常用的物理法包括辐射、热降解和超声等,但此类
方法不能将天然褐藻胶完全降解，且操作繁琐、价格昂贵, 容易造成资源浪费。化学法以酸降解为主,但该方法降解 条件难以控制，耗时长且产物品质较差，可能对褐藻胶还 原端造成一定程度的破坏，进而影响降解产物即褐藻寡糖 的生物活性；同时大量化学试剂的应用造成环境污染。生
物酶法是采用褐藻胶降解酶通过0-消去反应断裂褐藻胶
的糖苷键，产生的新还原端为饱和糖醛酸盐，该方法专一 性强、效率高、反应温和、可控性强，不会对环境造成污染， 且能为后续研究寡糖活性化学结构提供信息，并满足不同 用途的需要11，故酶法降解逐步成为优先选择的方法。
褐藻胶降解酶来源广泛［131,在细菌、真菌中均有发现［141， 其中，海洋来源的微生物是褐藻胶裂解酶的重要来源。由 于现阶段报道的微生物来源的褐藻胶降解酶中，仍然存在 酶活力低、作用位点单一等缺点［15-161«因此，筛选能够降解褐 藻胶的新菌株，对发掘具有潜在产业化价值的褐藻胶裂解 酶具有重要意义。本研究从大连长兴岛采集的腐烂海带样