肝癌小鼠脾脏免疫细胞的变化及其意义

玉屏风散对 Hepa1-6肝癌荷瘤小鼠T淋巴细胞表型的影响

姚霏;张露蓉;江国荣

【期刊名称】《河北中医》

【年(卷),期】2014(000)005

【摘要】目的：探讨玉屏风散对肝癌荷瘤小鼠T淋巴细胞表型的影响。方法以皮下接种肿瘤细胞建立荷瘤C57BL/6小鼠模型，随机分为模型对照组、玉屏风散组（20、25、30 g生药/kg），并选取不荷瘤小鼠为正常对照组，每组各5只。玉屏风散组按20 mL/kg灌以生药浓度为1．00、1．25、1．50 g/mL）的玉屏风散浓缩液，每日1次，正常对照组与模型对照组灌以等容积0．9％氯化钠注射液，连续给药2周。2周后处死小鼠制备脾细胞悬液，应用免疫荧光标记法，采用流式技术检测和分析小鼠脾脏中CD4＋CD25＋、CD4＋CD69＋、CD8＋CD69＋、CD8＋CD44＋、CD8＋CD44＋CD62 L-及CD8＋CD44＋CD62 L＋T细胞比例的变化。结果与正常对照组比较，玉屏风散组脾CD4＋CD25＋T细胞比例均下降（ P＜0．05， P＜0．01）；CD4＋CD69＋、CD8＋CD69＋、CD8＋CD44＋、CD8＋CD44＋CD62L-和CD8＋CD44＋CD62L＋T细胞比例均增加（P＜0．05，P＜0．01）。与模型对照组比较，玉屏风散组脾CD8＋CD44＋和CD8＋CD44＋CD62 L-T细胞比例均无变化（ P＞0．05）；玉屏风散20 g生药/kg组、25 g生药/kg组CD8＋CD69＋T细胞比例增加（ P＜0．05）；玉屏风散30 g生药/kg组CD4＋CD25＋T细胞比例有降低趋势，差异无统计学意义（P＞0．05）；CD4＋CD69＋和CD8＋CD69＋T细胞比例均下降（P＜0．05，P＜0．01）；CD8＋CD44＋CD62 L＋T细胞比例增加（ P＜0．01）。结论玉屏风散通过降低CD4＋CD25＋调节性T细胞比例，促进CD8＋T细胞活化，增加记忆型CD8＋T细胞比例，从而改善肝癌小鼠免疫紊乱状态，发挥抗肿瘤作用。

小鼠脾细胞石蜡切片形态描述

小鼠脾是小鼠体内最大的免疫器官，是淋巴细胞的主要来源。为了研究小鼠脾中淋巴细胞的分布和组成，我们对小鼠脾组织进行了石蜡切片，并进行了形态描述。

观察小鼠脾切片的总体形态。小鼠脾呈半月形，分为红髓区和白髓区。在石蜡切片上，我们可以清晰地看到这两个区域的分界线，红髓区呈现出深红色，而白髓区则呈现出灰白色。

接着，我们观察了小鼠脾中的淋巴结构。在白髓区中，我们可以看到大量的淋巴细胞，它们呈现出圆形或椭圆形，大小不均。淋巴细胞周围有一些小的细胞团，这些细胞团是淋巴滤泡，其中心有一个深染色的区域，称为发生中心。在发生中心中，可以看到许多淋巴母细胞正在分裂增殖。

在红髓区中，我们可以看到大量的红细胞和巨核细胞，它们呈现出深红色和紫色。红髓区中也有一些小的淋巴滤泡，但数量明显较少。在红髓区和白髓区之间，有一些窄小的区域，称为边缘区，这些区域中有许多淋巴细胞和巨噬细胞，它们是淋巴和血液的交界处。

我们观察了小鼠脾中的其他细胞类型。在白髓区中，除了淋巴细胞和淋巴滤泡外，还可以看到一些树突状细胞和浆细胞。在红髓区中，除了红细胞和巨核细胞外，还可以看到一些巨噬细胞和粒细胞。

小鼠脾组织石蜡切片可以清晰地显示出小鼠脾的总体形态、淋巴结构和其他细胞类型。这对于深入了解小鼠免疫系统的结构和功能，以及研究某些疾病的发病机制等方面具有重要意义。

小鼠脾细胞石蜡切片形态描述 2

小鼠脾细胞石蜡切片形态描述

小鼠脾细胞是一种重要的免疫细胞，具有较强的免疫功能，同时也是一种具有创新价值的生物材料。为进一步了解小鼠脾细胞的形态特征，本文对小鼠脾细胞的石蜡切片形态进行了详细描述。

首先，小鼠脾细胞的石蜡切片在显微镜下呈现出丰富多样的形态。可以清晰地看到小鼠脾细胞呈现出不同的大小和形状，其中大部分细胞呈现出椭圆形或圆形，大小在10-20μm之间，但也有少部分细胞大小不一。

其次，小鼠脾细胞石蜡切片的染色特点也很明显。一般采用的染色方法为伊红染色，使红细胞呈现出红色，而脾细胞则呈现出紫黑色。细胞质和核仁的染色非常清晰，使得形态特征更加明显。

再次，小鼠脾细胞石蜡切片在分布上也存在明显的规律。可以发现，在小鼠脾细胞石蜡切片中，细胞会按照某一规律进行排列，有的细胞密集排列在一起，有的则分散排列。同时，小鼠脾细胞石蜡切片中还可以清晰地看到脾小体的结构，包括中央动脉和周围血窦，这为研究脾小体的结构和功能提供了依据。

最后，从生物医学研究的角度来看，小鼠脾细胞石蜡切片具有重要的应用价值。通过对小鼠脾细胞的形态特征进行研究，可以更深入地理解小鼠脾细胞的功能和作用，为研究相关疾病提供重要的参考依据。总之，小鼠脾细胞石蜡切片的形态特征丰富多彩，呈现出不同的大小、形状和染色，有明显的分布规律，具有重要的生物学意义和应用价值。

小鼠脾脏指数计算公式

脾脏指数计算公式：

脾脏指数 = 脾脏重量（mg）/ 小鼠体重（g）

脾脏指数的计算需要用到小鼠的脾脏重量和小鼠的体重。脾脏重量可以通过解剖小鼠并使用秤或天平测量来获得，而小鼠的体重可以通过使用天平将小鼠置于上面进行测量来获得。

计算例子：

假设小鼠脾脏重量为150毫克，小鼠体重为30克。

脾脏指数=150/30=5

计算结果显示，小鼠的脾脏指数为5

脾脏指数的意义：

脾脏指数是评估小鼠免疫功能和脾脏大小的一种重要指标。脾脏是免疫系统的重要组成部分，承担着抗原处理和抗体产生等重要功能。研究显示，脾脏指数的变化可以反映小鼠免疫应答的强度和免疫功能的状态。一般来说，脾脏指数越高，表示小鼠脾脏大小越大，免疫功能越强。

脾脏指数的影响因素：

总结：

脾脏指数是一种常用的实验室动物指标，用于评估小鼠脾脏大小和免疫功能。通过测量小鼠脾脏重量和体重，可以计算出脾脏指数。脾脏指数的变化可以反映小鼠免疫应答的强度和免疫功能的状态。同时，需要考虑到其他因素对脾脏指数的影响，如免疫刺激、疾病状态和个体差异等。

免疫细胞与肝癌的免疫逃逸

医学信息2011年5月第24卷第5期MedicalInformation.May.2011.Vol.24.No.5临床医学学反应或酶反应后,能够回复到原来的具有治疗活性的母体药物。前体药物可以延长药物在结膜囊的滞留时间。这些药物本身很难通过血-眼屏障被血液吸收，但是它们转化为前体药物后通过屏障，再转化为有活性的药物。Shirasaki[12]报道了多种药物通过采用了前体药物的方法,改善了药物的角膜通透力。9水凝胶（Hydrogel）水凝胶由亲水的高分子组成，在水中聚合交联成3D网络结构。水凝胶在穹窿部有较长的停留时间，提高了药物在眼中的生物利用度。温度、PH和离子强度等环境因素可以改变水凝胶的黏性。Gordon等[13]比较了多西环素眼药水制剂与水凝胶制剂在治疗硫芥子气所致的兔眼内糜烂剂损伤的效果，发现眼药水可迅速减轻损伤所致的角膜水肿，但水凝胶制剂则可显著抑制角膜的新生血管化，结果证明水凝胶直接作为眼部糜烂剂所致损伤的日常用药值得进一步研究。Eljarrat-Binstock等[14]发现庆大霉素水凝胶通过离子电渗进入兔子的眼睛。使用离子电渗处理的药物，其药物浓度峰值是普通眼部药物的12-15倍高。10小结眼用给药系统围绕着提高药物的生物利用度,降低给药次数,提高患者的顺应性方面已经取得了长足的进展,同时降低药物在眼部或全身的毒性及不良反应，并使一些全身毒副作用大的药物在眼内的应用成为可能,为慢性、顽固性眼内疾病的治疗带来了希望。眼用微粒给药系统将成为今后眼用制剂发展的新趋势，但开发研究更有效的给药方式和剂型仍需进一步的努力探索。参考文献：[1]PaganelliF,CardilloJA,MeloLA,etal.Asingleintraoperativesub-tenon'scap－suleinjectionoftriamcinoloneandciprofloxacininacontrolled-releasesystemforcataractsurgery[J].InvestOphthalmolVisSci,2009,50(7):3041-3047.[2]AraujoJ,VegaE,LopesC,etal.EffectofpolymerviscosityonphysicochemicalpropertiesandoculartoleranceofFB-loadedPLGAnanospheres[J].ColloidsSurfBBiointerfaces,2009,72(1):48-56.[3]ZhangR,HeR,QianJ,etal.Treatmentofexperimentalautoimmuneuveoretini－tiswithintravitrealinjectionoftacrolimus(FK506)encapsulatedinliposomes[J].InvestOphthalmolVisSci,51(7):3575-3582.[4]LiT,ZhangM,HanY,etal.Targetingtherapyofchoroidalneovascularizationbyuseofpolypeptide-andPEDF-loadedimmunoliposomesunderultrasoundexpo－sure[J].JHuazhongUnivSciTechnologMedSci,2010,30(6):798-803.[5]LiR,JiangS,LiuD,etal.Apotentialnewtherapeuticsystemforglaucoma:sol－idlipidnanoparticlescontainingmethazolamide[J].JMicroencapsul,2010,[Epubaheadofprint].[6]RafieF,JavadzadehY,JavadzadehAR,etal.Invivoevaluationofnovelnanoparticlescontainingdexamethasoneforoculardrugdeliveryonrabbiteye[J].CurrEyeRes,2010,35(12):1081-1089.[7]BaspinarY,BertelmannE,PleyerU,BuechG,SiebenbrodtI,BorchertHH.Cornealpermeationstudiesofeverolimusmicroemulsion[J].JOculPharmacolTher2008,4:399-402.[8]林艳琼,甘勇,甘莉,等.地塞米松眼用微乳的研究[J].中国药学杂志,2006,41(5):358-362.[9]刘毅，孙考祥，姚文军，等.树状体聚合物PAMAM包覆葛根素脂质体角膜渗透性研究[J].中国中药杂志，2010,35(1):30-34.[10]TabanM,LowderCY,KaiserPK.Outcomeoffluocinoloneacetonideimplant(retiserttrademark)reimplantationforchronicnoninfectiousposterioruveitis.Retina2008;[Epubaheadofprint].[11]JainD,CarvalhoE,BanthiaAK,etal.Developmentofpolyvinylalcohol-gelatinmembranesforantibioticdeliveryintheeye[J].DrugDevIndPharm,2010,37(2):167-177.[12]ShirasakiY.Moleculardesignforenhancementofocularpenetration[J].JPharmSci,2008,97(7):2462-2496.[13]GordonMK,DesantisA,DeshmukhM,etal.Doxycyclinehydrogelsasapoten－tialtherapyforocularvesicantinjury[J].JOculPharmacolTher,2010,26(5):407-419.[14]Eljarrat-BinstockE,RaiskupF,StepenskyD,etal.Deliveryofgentamicintotherabbiteyebydrug-loadedhydrogeliontophoresis.InvestOphthalmolVisSci2004;45:2543-2548.编辑/雅兰

玉屏风散对Hepa1-6肝癌荷瘤小鼠免疫调节的影响

张露蓉;姚霏;江国荣

【期刊名称】《东南大学学报（医学版）》

【年(卷),期】2014(033)001

【摘要】目的:探讨玉屏风散对肝癌荷瘤小鼠机体免疫的调节作用.方法:采用皮下接种Hepa1-6肿瘤细胞建立肝癌荷瘤C57 BL/6小鼠模型;应用流式细胞技术检测和分析荧光标记的免疫细胞亚群.结果:玉屏风散20、25、30 g生药·kg-1对Hepa1-6肝癌荷瘤C57小鼠的抑瘤率分别为18.86％、28.81％、37.44％.与模型对照组比较,玉屏风散组胸腺重量和胸腺指数无变化,脾重和脾脏指数均呈上升趋势,脾脏中CD19+B细胞数量、CD19+ CD80+B细胞比例、巨噬细胞比例和数量、CD4+T和CD8+T细胞数量以及肿瘤组织中CD4+T和CD8+T细胞比例均显著增加(P ＜0.05,P＜0.01),而脾脏中CD19+B细胞、CD4+T和CD8+T细胞的比例均无变化(P＞0.05).结论:玉屏风散对肝癌荷瘤小鼠机体免疫具有广泛调节和增强作用,为玉屏风散在临床抗肝癌中的合理应用提供了实验依据.

【总页数】6页(P34-39)

【作者】张露蓉;姚霏;江国荣

【作者单位】苏州市中医医院中医药研究所,江苏苏州215009;苏州市中医医院中医药研究所,江苏苏州215009;苏州市中医医院中医药研究所,江苏苏州215009

【正文语种】中文

【中图分类】R735.7;R73-361 【相关文献】

1.玉屏风散对 Hepa1-6肝癌荷瘤小鼠T淋巴细胞表型的影响 [J], 姚霏;张露蓉;江国荣

2.玉屏风散对荷瘤小鼠肿瘤生长及IL-2与IL-2R基因表达的影响 [J], 张红军;鞠宝玲;胡艳君;宋宝辉

3.siRNA干扰肝癌相关抗原Cdc25C表达对Hepa1-6肝癌细胞增殖和迁移的影响及机制研究 [J], 栗彦飞;王栎雯;周开焕;宁建铭;文海名;陈帝荣;李丞熙;莫发荣

小鼠脾细胞的应用领域

背景：

小鼠脾细胞MS是从正常成年CD-1小鼠脾脏中分离出来的。MS清除脾脏巨噬细胞，分离后直接冷冻保存，MS对支原体、细菌、酵母和真菌呈阴性。

脾是重要的淋巴器官，位于腹腔的左上方，呈扁椭圆形，暗红色、质软而脆，当局部受暴力打击易破裂出血。

脾位于左季肋区胃底与膈之间，恰与第9-11肋相对，其长轴与第10肋一致。正常情况下，左肋弓下缘不能触及。

脾分为内、外两面，上、下两缘，前、后两端。内面凹陷与胃底、左肾、左肾上腺、胰尾和结肠左曲为邻，称为脏面。脏面近中央处有一条沟，是神经、血管出入之处，称脾门。

脾脏的实质分为白髓、红髓和边缘区三部分。白髓由密集的淋巴细胞构成，是机体发生特异性免疫的主要场所。当抗原侵入脾引起体液免疫应答时，白髓内淋巴小结会大量增多。

红髓主要由脾血窦和脾索组成，红髓内血流缓慢，使抗原与吞噬细胞的充分接触成为可能，是免疫细胞发生吞噬作用的主要场所。

边缘区（MZ）位于红髓和白髓的交界处，此区淋巴细胞较白髓稀疏，以B细胞为主，但有较多的巨噬细胞（Mφ），是脾内捕获抗原、识别抗原和诱发免疫应答的重要部位。

脾储存和净化红细胞，代谢血红蛋白，回收铁。脾脏也为免疫系统提供了一个关键的功能，它对血液中的抗原产生一种初级免疫反应，并合成抗体。脾细胞是来源于脾脏的单核细胞，包括T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞和NK T细胞。原代小鼠脾细胞（MS）可用于分离CD4+T细胞、CD8+T细胞和CD45R+B细胞。

应用：

用于FGF-1改构体对小鼠脾细胞增殖、凋亡、IL-2产生的影响研究。

FGF-1的生物学效应非常广泛，在组织和器官发育、血管发生、血细胞生成、肿瘤发生、伤口愈合中等发挥重要的作用。FGF-1对免疫系统也有重要的影响，能提高多种刺激诱导的T细胞增殖、凋亡及细胞因子的产生。

方法：

1、采用～3H-TdR掺入的方法检测分析MrhFGF-1和野生型hFGF-1对脾细胞增殖的影响。

动物细胞培养技术小鼠脾脏细胞

山东大学实验报告 2014/11/4

姓名：XX 系年级：2013级XX班学号：201300XXXXXXX

实验题目: 动物细胞培养同组者: XXXXX

动物细胞培养技术

【实验目的】

1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体方法，并对小鼠脾细胞进行原代培养；

2.掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用；

3.学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法；

4.学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数，计算细胞存活率；

【实验原理】

（一）. 动物细胞培养技术

动物细胞培养技术是指从动物体内取出组织或细胞，在体外模拟动物体内的生理坏境，在无菌，适当温度和一定的营养条件下，使之生存，生长和繁殖，并维持其结构和功能的方法。

细胞培养的意义:⑴.具有其他生物技术无可比拟的优点；⑵.培养条件易改变和控制，便于单因子分析；⑶.便于人们直接对细胞内结构、细胞生长及发育等过程的观察；⑷.在生物学的各个领域（如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等）已被广泛应用

细胞培养的局限性：（1）.在脱离机体复杂环境下，细胞培养条件与躯体环境有一定距离；(2).观察到的结果有时难以正确反映机体内的状况；(3).细胞培养得到的产物少。

培养细胞的生存条件有水的质量、无菌环境，最适温度、渗透压、气体条件、最适PH、营养条件和培养基质等。

细胞培养的方法：1. 原代培养：直接从生物体内获取细胞，组织或器官，进行体外培养直至第一次传代为止。2. 传代培养：当培养的细胞增殖达到一定密度之后，则需要再做培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1:2或其他比例转移到另一个容器中的扩大培养。

原代细胞培养的方法有：单层细胞培养法和组织块培养法

细胞传代培养包括：贴附生长细胞的传代：洗细胞——酶消化——接种——观察

悬浮生长细胞的传代：A.直接传代 B.离心传代

脾细胞的功能与免疫调节

脾脏是人类体内最大的淋巴器官之一，它是一种重要的免疫器官，包含了大量的脾细胞。而脾细胞是脾脏最重要的细胞成分之一，它承担着多个功能，对免疫调节和身体健康起着至关重要的作用。下面，我们将从脾细胞的功能、种类、分类等方面来探讨一下脾细胞在免疫调节中的重要意义。

一、脾细胞的功能

1.免疫调节功能

脾脏是免疫系统的一部分，而脾细胞是免疫系统中的重要组成部分。脾细胞能够识别和攻击身体内的病原体或异物，同时也能够识别和攻击自身的异常细胞，从而保证身体免疫系统的免疫功能。脾细胞在免疫应答中起着关键性的作用，能够产生免疫球蛋白，促进细胞因子的产生和调节，从而协同完成免疫系统的总体表现。

2.造血功能

脾细胞是诱导造血的关键成分之一，它能够促进干细胞向成熟红细胞、白细胞和血小板分化，从而维持机体每日的血球生成。

3.存储功能

脾细胞还能够存储和释放大量的红细胞、白细胞、血小板和其他物质。这些储备物能够在机体需要时释放出来，满足身体对血流的需求。

4.其他功能

此外，脾细胞还能够产生和分泌多种激素和生长因子，参与体内多种代谢和调节过程。比如，脾细胞能够产生赤素和促性腺激素，对睾丸、卵巢等生殖细胞的生长和发育起着重要调节作用。

二、脾细胞的种类根据表面标志和功能特点的不同，脾细胞主要可以分为淋巴细胞、树突状细胞、单核细胞、红细胞和巨噬细胞等几类。

1.淋巴细胞

淋巴细胞是脾脏中最多的一类细胞，它们是免疫系统的重要组成部分，包括T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、调节性T细胞等不同类型。

2.树突状细胞

树突状细胞又称为抗原呈递细胞，是免疫系统的重要成员之一。它们能够捕获、处理和呈递抗原，从而唤醒淋巴细胞的免疫应答。

3.单核细胞

单核细胞主要包括单核细胞和巨噬细胞，是另一种重要的免疫细胞种类。它们对体内病原体和异物起着重要的清除和消毒作用。

4.红细胞

红细胞是人体中最主要的血细胞之一，它们能够携带氧气和二氧化碳，维持机体的呼吸生理功能。

鹿角脱盘5种提取部位对H_(22)荷瘤小鼠免疫功能的影响

陈思;郜玉钢;臧埔;赵岩;张连学;孙雨;王慧敏;史宇桢

【期刊名称】《上海中医药杂志》

【年(卷),期】2017(0)8

【摘要】目的评价鹿角脱盘5种提取部位对肝癌H_(22)荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法将90只SPF级昆明种小鼠随机分成正常阴性对照组、模型组、阳性对照组、鹿角脱盘酸(盐酸)、碱(氢氧化钠)、盐(氯化钠)、醇(乙醇)和水5种提取部位组和鹿角脱盘原粉组共9组,每组10只。分别以脾脏组织病理变化、外周血和脾脏CD4^+和CD8^+T淋巴细胞百分比、血清中细胞因子IL-6、IL-12和抗体IgE、IgG、IgM水平为指标,评价鹿角脱盘的盐酸、氢氧化钠、氯化钠、乙醇和水5种提取部位提高荷瘤小鼠免疫功能的作用。结果与模型组比较,鹿角脱盘5种提取部位能够保护荷瘤小鼠脾脏结构;提高脾脏和外周血CD4^+/CD8^+比值(P<0.05);提高荷瘤小鼠血清中细胞因子IL-6、IL-12和抗体IgE、IgG、IgM的水平(P<0.05)。结论鹿角脱盘碱溶液提取部位效果最好;鹿角脱盘可能通过提高荷瘤小鼠体液免疫和细胞免疫的功能,逆转肿瘤发生发展对机体免疫功能的抑制作用,发挥抗肿瘤作用。

【总页数】6页(P87-92)

【作者】陈思;郜玉钢;臧埔;赵岩;张连学;孙雨;王慧敏;史宇桢

【作者单位】吉林农业大学中药材学院;吉林省人参工程技术研究中心新产品开发研究室

【正文语种】中文【中图分类】R285.5

【相关文献】

1.鹿角脱盘对辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤 Notch2基因表达和免疫功能的影响2.胃瘤安对H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤作用及对免疫功能影响的研究3.苦参碱对H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤作用及对免疫功能的影响4.三种治法方药对肝癌H_(22)荷瘤小鼠免疫功能影响的比较研究5.夜来香花提取物对肝癌H_(22)荷瘤小鼠肿瘤生长及凋亡的影响