猪细小病毒的分子生物学研究

。
界 各 地 并 在 大 多 数 猪 场 呈 地 方 性 流 行 严 重 地 影 响 着 养 猪业
，
的 发 展 该 病 的 严 重 危 害及 该 病 病 原 独 特 的 生 物 学 特 性 受 到
，
了 国 内外许 多学 者 的 关 注 人 们 发 现 该 病 毒 经 常 与 其 他
。
一
些
病毒
，
，
例 如 猪 圆 环 病 毒2
维普究
崔 尚金 实验 室 猪传染病 学 研 究 室
，
戚 亭 黑龙 江
( 中 国 农 业 科学 院 哈 尔 滨兽 医 研 究所 兽 医生 物技 术 国 家 重 点
，
哈尔滨
10 0 0 5 1
)
猪 细 小 病毒 病 是 由猪 细 小 病 毒 ( p o r c
。
to n o m o u s ly
一
r e
p lic
a tin
g p
a r v o v
ir
u s
) 通 过 对 细 小 病 毒 属的 基 因组
级 结构
序 列 比 较 发 现 猪 细 小 病 毒 和 自主 细 小 病毒 属 的 其 他 ~l} l l b 病
，
毒 如 小 鼠细 小 病毒 ( M
，
V M 19
，
，
3
’
一
端 的 10 2
n
t
的
回 文 序 列 中断
，
折 叠 形 成 Y 型 结 构 ；5 端 有
n t
，
’
一
个 12 7
t
的回文
。
序 列 中 间被
，
一
个2 4
的 短 回 文 序列 中断 折 叠 形 成 u 型 结 构
，
这 种 末端 结 构
对P P V
基 因组 复 制是 非 常 重 要 的
，
P PV D N A
in
e
pa
rv o v
ir u
s
，
PPV
)
感 染 所 引 起 的 猪 的 重 要 传染病 之
，
一
。
该 病 的 主 要 特 征 为受 感
、
染 的母 猪 特 别 是 初 产母 猪 及 血 清 学 阴 性 经 产 母 猪 发 生 流产
、 、 、
不 孕 产 死 胎 畸 形 胎 木 乃 伊 胎 及 弱 仔 等 该 病 广 泛 存 在于 世
，
、
，
的 翻 译 以 及 几 种 主 要 的 结 构 蛋 白 和 非结 构 蛋 白 的 特 点 旨 在
，
为将 来研 究 猪 细 小病 毒 基 因组 结 构 编 码 蛋 白的 结 构 特 征 致
， ，
病 机 制 等 等奠 定 基 础
1
P P V
e
。
的基 因组结构 和复制型
e
DNA
(r
p Iic
PPV
，
型 和 猪 繁 殖 与呼 吸 综 合 征 病 毒 混 合 感
，
染 导致断奶仔 猪多系统衰竭综 合征 等 从 而 导致该病毒是 猪 病研 究 的 主要 热 点之
一
。
本 文 着 重 介 绍 了 猪 细 小 病 毒 的 基 因组 结 构 病 毒 基 因 组
，
复 制 型 D N A 特 点 病毒 基 因 的 转 录 转 录 后 的 编辑 转 录 产 物
Ｍｏ ｉ ｒ ｄｔ 在猪睾丸传代细胞培养物 中抽提 到非染色体性 Ｄ ｏ ＮＡ，
即 复制 型 ＤＮ 其 大 小为 ５０ ０ｂ 。 高 度纯 化 的 病 毒 颗 粒 中 ， Ａ， ０ ｐ 在
０ｋ 。 装 从 Ｐ 可抽 提 到单 一 的 Ｐ Ｖ 因型 Ｄ Ａ， Ｐ基 Ｎ 大小 相 当于 １ ０ ～２３ ０ ｐ 分 子 质 量 ６ ｕ 结 构 多 肽 形 成 后 ， 配 成 病 毒 粒 子 。 Ｐ Ｖ基 ０ ０ 。 ８ ｂ
、
) 大 鼠 细 小 病 毒H
、
一
1
、
犬 细 小病毒
DV
(C P V ) 人 类 细 小 病毒B
、
貂 阿 留 申细 小 病毒 ( A
)的基 因
re a
n
组 有很 高 的 同 源 性 负链 D N A 上 不 含有 开 放 阅读 框 ( o p e n
，
d
—
in g fr a
m e
，
ORF
) 基 因组 两 端 均 有 发夹 结 构
以ＲＦ ＤＮＡ为 模板 ， 成病 毒ｍＲＮＡ和子 代病 毒 基 因组 。 合
３ ＰＰＶ的 结 构 和 非 结 构 蛋 白
Ｐ Ｖ基 因组编码 ２ Ｐ 条结 构多肤 ， Ｐ ￣ＶＰ 。 Ｖ ｌ ｌ ２ 分子 质量 分别
为 ８ ｕ Ｍ ４ｋ ， ４ｋ ￣ ６ ｕ 另有 一 条 结 构 多肽 Ｖ ３ Ｐ 由ＶＰ 水 解 而 产 生 ， ２
完
全 依 赖 于 宿 主D N A
的 复 制 机 制 进 行 自身 复 制 并 且 几 乎 只 能
。
在 细 胞 周 期 的 S 期 的 晚 期 和 G 2 期早期 进 行
由于 P P V
22
DNA
’
的 3 端 自我 折 回 产 生 了 D N A 多 聚 酶 作 用
猪业 科学
S WI NE
I NDUS T R Y S C I E NC E
2008
年 第2 期
维普资讯
３ － — Ｔ） １ ２ ８ 一 Ｇ／ ，Ｔ ０ 所 需 的 引 物 一 Ｈ ， 其 复 制 不 需 要 ＤＮＡ环 化 ， 不 需 要 ＲＮＡ Ｏ 故 也 ２ ３ＡＴ Ｇ 和 一 个 拼 接 受 体 位 点 （ ３ ６ Ａ ＧＡ）Ｐ ４ 经 ． ｂ ２ｍＲ １ｍＲＮＡ； ＶＰ ｆ ２ １ ］ 引物 ， 宿 主 ＤＮ 在 Ａ多聚 酶 ｃ的 作 用 下 ， 【 自病 毒 基 因 组 ３ 端 发 夹 过 Ｄ型 拼 接 产 生 约 ２９ｋ 的ＶＰ Ｎ ＶＰ ’ ＮＡ分 别从 ２２ ７ｎ￣ ２８ ０ｎ处 的 Ａ Ｇ起 始 翻 译 ， 同 终 ８ ｔ１ ｔ ］ １ Ｔ 共 结构的３ＯＨ 一 起始合成互补链（ 正链）将感染的亲代ＤＮＡ 负链） ｍＲ ， （ 转 变 为双 链 复 制 型 Ｄ ＮＡ（ ｐｉａｉｅ ｏｍ ＤＮ ， ＦＤ ｒ ｌ ｔ ｒ Ａ Ｒ ＮＡ）再 止 于 ４５ ７ｎ处 的 Ｔ ｅ ｃ ｖｆ ， ４ ｔ ＡＡ， 生 ２ 结 构 蛋 白ＶＰ 和 ＶＰ 。 产 种 １ ２
a
t iv
f
o r m
D NA
) 的特点
，
基 因组 为单 链 线 状 D N A 分 子 大 小 约 5 0 0 0 个 核 苷 酸
。
(n t ) 成 熟 的 病 毒 粒 子 仅 含 有 负 链 D N A
PP V
为 细 小 病 毒科 细
u
小病 毒 属 的 成 员 是
，
一
种 自主 复 制 性 细 小 病 毒 ( a