葡萄酒中8种生物胺的测定
葡萄酒中8种生物胺的测定
采用高效液相色谱法，柱前衍生，以1,7-二 氨基庚烷为内标，测定葡萄酒中色胺、苯乙 胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺和亚精 胺含量。
生物胺简介
生物胺是一系列含氮低分子有机碱,
可分为单 胺和多胺两类, 包括酪胺、组胺、腐胺、尸胺、 苯乙胺、色胺、精胺和亚精胺等多种物质。 生物胺除了存在于各种动植物的组织中，还 普遍存在于多种食品中，尤其是发酵食品如 奶酪、发酵香肠、啤酒、黄酒、葡萄酒中等。
X
标准谱图
0.80 0.70
酪胺 - 26.646 亚精胺 - 27.449
0.60
0.20
0.10
0.00 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 分钟 26.00 28.00 30.00 32.00 34.00 36.00 38.00 40.00 42.00 44.00
样品处理—萃取
量取葡萄酒5mL，加入适量氯化钠使溶液饱和。 准确量取上述饱和后的试样提取液5mL，置于 15ml离心管中，用0.1mol/L NaOH溶液调节pH 至12.0。 加入5mL的正丁醇－氯仿(1:1)混合液，涡旋振荡 5min，3600r/min离心10min，吸取上层有机相， 再重复萃取2次，合并萃取液，混匀，取3mL萃 取液并加入0.2mL1mol/L HCl ，混合后40℃水 浴下氮气吹干，加入1mL 0.1mol/L HCl 复溶， 待衍生。
流动相A为甲醇溶液，B为超纯水。
标准色谱图
1－色胺，2－β-苯乙胺，3－腐胺，4－尸胺， 5－组胺，6－1,7二氨基庚烷(内标)，7－酪胺， 8－精胺，9－亚精胺
气相色谱-电子捕获检测器分析葡萄酒中的8种生物胺
气相色谱-电子捕获检测器分析葡萄酒中的8种生物胺杨静;王琨;周元【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2023(42)2【摘要】该研究建立了气相色谱-电子捕获检测器(GC-ECD)分析葡萄酒中8种生物胺(腐胺、尸胺、精胺、亚精胺、酪胺、β-苯乙胺、组胺和色胺)的方法。
取0.5 mL葡萄酒样品与0.5 mL 0.2 mol/L碳酸钠溶液以及4 mL二氯甲烷混合,加入20μL衍生剂氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯和10μL催化剂三乙胺,于40℃反应10 min进行葡萄酒中生物胺的提取衍生,随后使用HP-5毛细管色谱柱采用升温程序(初始柱温120℃保持1 min,以3℃/min升至270℃,保持1 min)分离目标物并采用GC-ECD进行检测,外标法定量。
方法学评价结果表明,8种生物胺的检出限(LOD)为0.2~0.8 mol/L,定量限(LOQ)为0.7~2.0 mol/L,平均加标回收率为91.2%~102.1%,精密度试验结果相对标准偏差(RSD)为1.8%~3.3%。
表明该方法具有较高的准确度、精密度和灵敏度。
【总页数】7页(P228-234)【作者】杨静;王琨;周元【作者单位】杨凌质量技术检测检验所;西北农林科技大学食品科学与工程学院【正文语种】中文【中图分类】TS262.6【相关文献】1.羟胺衍生物的辐解研究Ⅰ.羟胺衍生物辐解产物中气态烃类的气相色谱分析2.基质固相分散气相色谱电子捕获检测器测定葡萄酒中5种农药残留3.气相色谱电子捕获检测器检测蟑螂头部痕量章鱼胺的衍生物4.气相色谱-电子捕获检测器和气相色谱-质谱法分析地表水中氯苯类和硝基苯类化合物5.气相色谱-电子捕获检测器法分析不同产地、不同香型白酒中活性羰基化合物因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酿造工艺对葡萄酒生物胺的影响
摘要生物胺是广泛存在于葡萄酒等发酵食品中的含氮化合物，对人体血管和神经系统有直接或间接的影响。
高浓度的生物胺会引起恶心、头痛、呼吸窘迫、心悸、皮疹和血压的变化，从而影响葡萄酒的饮用安全性。
葡萄酒中生物胺常规的HPLC分析方法涉及多种提取溶剂的使用以及反复的提取-干燥-复溶过程，有机试剂消耗量大，提取时间长。
本研究通过单因素实验，对葡萄酒中8种生物胺（色胺、2-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺和精胺）的HPLC分析方法进行优化，并在葡萄酒发酵过程中对其生物胺含量进行监测，寻找其工艺控制关键点。
结果表明：（1）优化后的葡萄酒生物胺检测方法，在0.1-50 mg/L浓度范围内，各目标生物胺的线性较好（R2为0.9983-0.9999），日内和日间稳定性分别小于4.86%和5.22%，检测限为0.001-0.050 mg/L，定量限为0.005-0.167 mg/L，样品在1.0、5.0、10.0 mg/L 三种浓度下的加标回收率为73.02-111.61%。
该方法简单、快速、灵敏、高效、可靠，可用于葡萄酒中生物胺的检测与定量。
（2）腐胺、酪胺、2-苯乙胺是葡萄酒中主要生物胺，组胺、色胺、尸胺次之，亚精胺、精胺含量最低。
红葡萄酒中生物胺总含量（2.37-87.05 mg/L）远远高于白葡萄酒（1.81-8.70 mg/L）。
国外葡萄酒中生物胺含量及种类分布较国内葡萄酒集中，国内葡萄酒分布广泛。
（3）对葡萄酒发酵过程中生物胺含量进行监测，结果表明，在玫瑰香、小味儿多和贵人香葡萄发酵过程中，2-苯乙胺、腐胺含量增加，尸胺、亚精胺含量降低，发酵过程中未检出精胺，所酿葡萄酒中含量最高的生物胺是腐胺。
（4）不同工艺处理对葡萄酒酿造过程中8种生物胺的影响，因葡萄品种、生物胺种类的不同而不同。
苹果酸乳酸发酵、酒精发酵、加糖为玫瑰香葡萄酒发酵过程中生物胺的工艺关键控制点；加糖处理、酒精发酵、添加焦磷酸钾和果胶酶为小味儿多葡萄酒发酵过程中生物胺的工艺关键控制点；酒精发酵、压榨为贵人香葡萄发酵过程中生物胺的工艺关键控制点。
贺兰山东麓葡萄酒中生物胺特征分析
482024.2SINO-OVERSEAS GRAPEVINE & WINE摘 要：为探究贺兰山东麓产区葡萄酒中生物胺的轮廓特点，建立同时测定葡萄酒中腐胺、组胺、亚精胺、色胺、尸胺、酪胺和2-苯乙胺的液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS ），以揭示贺兰山东麓葡萄酒样品中生物胺含量水平。
结果表明，各生物胺组分在对应线性范围内均呈现较好的线性关系（r >0.999），平均回收率为82.3%～106.7%，7种生物胺定量限为10～20 μg •L -1，满足分析要求。
数据分析显示，红葡萄酒、白葡萄酒和桃红葡萄酒的生物胺总量分别为0.39～15.70、0～3.18、0～3.48 mg •L -1。
红葡萄酒中生物胺含量大小排序为酪胺>亚精胺>腐胺>2-苯乙胺，而白葡萄酒和桃红葡萄酒中为亚精胺>腐胺>尸胺。
通过分析生物胺指数得出，红葡萄酒生物胺含量高于白葡萄酒和桃红葡萄酒。
在红葡萄酒中，‘赤霞珠’‘美乐’‘黑比诺’和‘蛇龙珠’葡萄酒中各生物胺含量略有差异，其中‘蛇龙珠’葡萄酒中酪胺含量明显高于其他生物胺成分。
该研究为贺兰山东麓葡萄酒的生物胺监管和溯源提供了数据支撑。
关键词：贺兰山东麓；葡萄酒；液相色谱-串联质谱法；生物胺中图分类号：TS262.61 文献标志码：A DOI ：10.13414/ki.zwpp.2024.02.007收稿日期：2023-06-30基金项目：宁夏市场监管厅科技项目（2022SJKY0012）作者简介：李瑞雪，硕士，工程师，主要从事食品相关色谱类检验检测和分析工作。
E-mail:****************Characteristics of Biogenic Amines in Wines fromthe Eastern Foot of Helan MountainsLI Ruixue, WANG Zelan, GONG Hui, XIE Fang(Ningxia Food Testing Institute/Key Laboratory of Quality and Safety of Chinese Wolfberry andWine for State Market Regulation, Yinchuan 750001, China)2024(2): 48-55Abstract: To investigate the profile of biogenic amines (BAs) in wines from the eastern foot of Helan Mountains,the liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method was established to simultaneously determine putrescine, histamine, spermidine, tryptamine, cadaverine, tyramine and 2-phenylethylamine in wines, and BAs content level of wines was revealed. As results showed, each BAs has good linearity with r >0.999, the average recoveries varied between 82.3%-106.7%. LOQs of seven BAs were 10-20 μg •L -1. According to statistical analysis, total BAs in red wine, white wine and rose wine were 0.39-15.70 mg •L -1, 0-3.18 mg •L -1 and 0-3.48 mg •L -1, respectively. Based on analysis of mean concentration of each BAs, it was found that C Tyramine >C Spermidine >C Putrescine >C 2-Phenylethylamine in red wine, and C Spermidine >C Putrescine >C Cadaverine in both white wine and rose wine. The biogenic amine index (BAI) value of red wine was greater than that of both white wine and rose wine, the content of BAs in 'Cabernet Sauvignon' 'Merlot' 'Pinot Noir' and 'Cabernet Gernischet' wine were slightly different, the content of tyramine in 'Cabernet Gernischet' wine was significantly higher than that of other BAs. The results of BAs in wines are useful for monitoring quality of wines and their traceability.Key words: the eastern foot of Helan Mountains; wine; liquid chromatography-tandem mass spectrometry; biogenic amines贺兰山东麓葡萄酒中生物胺特征分析李瑞雪，王泽岚，龚慧，谢芳（宁夏回族自治区食品检测研究院/国家市场监管重点实验室（枸杞及葡萄酒质量安全），宁夏银川 750001）SINO-OVERSEAS GRAPEVINE & WINE宁夏贺兰山东麓以适宜的水热系数、独特的气候环境和优越的地质地貌等优势，赋予了葡萄酒一定的品质轮廓特点及差异性特征，被认为是我国重要的优质葡萄酒产区之一[1]。
高效液相色谱法检测葡萄酒中的8种生物胺
ｋ ｉ ｎｄ ｓ ｏ ｆ ｂｉ ｏ ｇ ｅ ｎ ｉ ｃ ａ ｍｉ ｎｅ ｓ ｉ ｎ ｗｉ ｎｅ
Ｚ ＨＡＮＧ Ｗｅ ｎ － ｈ ａ ｏ ，Ｚ ＨＡＮＧ Ｗｅ ｉ ，Ｚ ＨＡＮＧ Ｌ ｉ － ｆ ｅ ｎ ｇ ，ＸＩ Ａ Ｆ ａ ｎ ｇ ，ＹＩ Ｎ Ｇｏ ｎ ｇ — ｊ ｕ，Ｚ ＨＡＮＧ Ｄｉ ｎ ｇ （ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｈｙ ｇ ｉ ｒ ｎ ｉ ｃ Ｍｏ ｎ ｉ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ ，Ｈｅ ｎ ａ ｎ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｉ ａ ｌ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏｒ ｆ Ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ
食品中生物胺含量的测定
中华人民共和国国家标准GB xxxx —xxxx中华人民共和国卫生部 发布食品安全国家标准 食品中生物胺含量的测定（征求意见稿）前言本标准代替GB/T 5009.208—2008《食品中生物胺含量的测定》。
本标准中附录A为资料性附录。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB/T 5009.208—2008食品安全国家标准食品中生物胺含量的测定1范围本标准规定了食品中色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺和精胺含量的测定方法。
本标准适用于酒类（葡萄酒、啤酒、黄酒等）、调味品（醋酱油等）、水产品（鱼类及其制品、虾类及其制品）、肉类及乳制品中生物胺的测定。
2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
3原理以1,7-二氨基庚烷为内标，以5%三氯乙酸为提取溶液，振摇提取，以正已烷去除脂肪，经过三氯甲烷-正丁醇（1+1）液液萃取净化后，以丹磺酰氯为衍生剂，60℃衍生30min, 采用高效液相色谱的C18柱分离，紫外检测器检测，内标法定量。
4试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为超纯水。
4.1 甲醇（CH3OH）:色谱纯。
4.2 丙酮（C3H6O）:色谱纯。
4.3 乙醚（C4H10O）:重蒸。
4.4 正丁醇（C4H10O）。
4.5 三氯甲烷(CHCl3)。
4.6 正已烷（C6H14）:色谱纯。
4.7 谷氨酸钠（C5H8NNaO4）。
4.8 碳酸氢钠（NaHCO3）。
4.9 氯化钠（NaCl）。
4.10 氢氧化钠（NaOH）。
4.11 浓盐酸（HCl，37%）。
4.12 三氯乙酸（C2HCl3O2）。
4.13 组胺盐酸盐（histamine dihydrochloride,C5H9N3·2HCl，CAS号：51-45-6）标准品（纯度>99%,计算时应折算掉盐酸盐，C5H9N3/C5H9N3·2HCl=155/184）。
葡萄酒中生物胺的检测技术
226中国航班理论与争鸣Theory and contentionCHINA FLIGHTS葡萄酒中生物胺的检测技术夏磊|烟台市产品质量监督检验所摘要：生物胺由前体氨基酸形成，主要通过微生物脱羧作用。
这些化合物的存在在生物学中起着至关重要的作用，因为大量的它们会导致健康问题。
因此，葡萄酒中生物胺的来源、检测和数量对葡萄酒的生产至关重要。
本研究以近5年来的文献为基础，综述了生物胺的分析方法，并从微生物学和生物学因素的角度描述了生物胺的来源，总结了生物胺降解的策略。
本综述中提供的信息对提醒葡萄酒产品的质量不高很重要，需要整个生产链和政府的努力来实现消费者安全。
关键词：生物胺；控制；检测生物胺（BAs）是一类具有生物活性的低分子量有机化合物，通常存在于各种发酵食品(如奶酪、牛奶、啤酒、葡萄酒等)中。
这些低分子氮化合物的形成主要通过四种酶的反应:（1）脱羧，（2）转胺（3）还原胺化和（4）降解。
根据BAs 的结构将其分为三类:脂肪族；芳香族；杂环。
在葡萄酒行业，BAs 的产生是不可避免的。
在葡萄酒生产和贮藏的不同阶段，不同微生物的作用形成了BAs。
在发酵过程中，乳酸乳酸发酵(MLF)，即乳酸菌(LAB)将苹果酸转化为乳酸，对脱酸、影响风味的化合物和发酵稳定性有重要影响。
一般认为，在酒精发酵(AF)结束时，BAs 浓度较低，主要在MLF 时升高。
在葡萄酒中起着重要的作用。
不仅因为高水平的BAs 摄入会导致多种人体症状，而且在葡萄酒中发生BAs 也可能导致变质。
为了保证葡萄酒产品的健康安全的储存方法，BAs 的水平可以是一个重要的质量和安全指标。
因此，应努力避免胺的形成，建立快速检测方法并控制其含量。
1 葡萄酒中BAs 的健康风险生物胺被认为是生物体的正常成分，在生物细胞中具有生理功能。
然而，过量摄入会导致多种健康问题，如头痛、脸红、瘙痒、皮肤刺激、呼吸障碍、心率加速、高血压、低血压和呕吐等。
如今，葡萄酒中最具代表性的BAs 是组胺酪胺、和苯乙胺等。
葡萄酒中组胺含量检测不确定度评定
DOI ：10.13746/j.njkj.2020063收稿日期：2020-04-05葡萄酒中组胺含量检测不确定度评定肖超，陈大鹏，彭小东（贵州省产品质量检验检测院，贵州贵阳550014）摘要：根据GB 5009.208—2016食品安全国家标准食品中生物胺的测定，对葡萄酒中组胺含量进行检测，并采用GUM 法评定测定结果的扩展不确定度。
根据计算公式分析不确定度来源，建立测量模型和不确定度来源因果图，计算出各不确定度分量，找出对组胺检测不确定度影响较大的因素并加以有效控制，对提高葡萄酒中组胺检测结果的准确度具有重要意义。
关键词：葡萄酒；组胺；不确定度中图分类号：TS262.6；TS261.7文献标识码：A文章编号：1001-9286（2020）06-0093-05Evaluation of the Uncertainties in the Determination of Histamine in WineXIAO Chao,CHEN Dapeng and PENG Xiaodong(Guizhou Institute of Products Quality Inspection &Testing,Guiyang,Guizhou 550014,China)Abstract :Histamine in wine was measured according to the provisions of histamine measurement in national standard GB 5009.208—2016.The expanded uncertainties in the measurement were analyzed by GUM method.The uncertainty sources were ana-lyzed according to the formulas,and the mathematical model and the cause-effect diagram of the uncertainty sources were set up.Through calculation of each uncertainty component,the main factors influencing the uncertainties in histamine measurement were found,then effectively controlled.The study was of great significance in improving the measurement accuracy of histamine in wine.Key words :wine;histamine;uncertainty葡萄酒，是一种将葡萄汁加以发酵后所得的、含酒精的碱性饮料。
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缓冲溶液pH 值
生物胺和衍生剂在碱性环境下才能发生衍生
化反应, 选择一个合适的pH 体系很重要。 饱和碳酸氢钠的体系可以得到得到最大衍生 产物生成量。
衍生温度和时间
生物胺的作用
微量的生物胺是生物体内正常的活性成分，
在生物活性细胞中具有重要功能，其中多胺 对细胞的生长和增殖具有重要作用。 生物胺作为药用( 鹿茸中的药用成分) 有重要 的生理功能, 如: 促进生长、增强代谢活力、 加强肠道免疫系统、控制血压, 并在神经系统 中有活性, 在消除自由基方面也有一定的作用 等。
60℃培养箱中反应30min，确定为最佳反应
温度和时间。实验重现性好。
流动相A为甲醇溶液，B为超纯水。
标准色谱图
1－色胺，2－β-苯乙胺，3－腐胺，4－尸胺， 5－组胺，6－1,7二氨基庚烷(内标)，7－酪胺， 8－精胺，9－亚精胺
计算
= A×f/V×1000 X——试样中生物胺的含量，单位为毫克每升 （mg/L）； A——试样中各组分生物胺对应的量，单位为 微克（μg）； f——试样稀释倍数； V——取样量，单位为毫升（mL）。
葡萄酒中8种生物胺的测定
采用高效液相色谱法，柱前衍生，以1,7-二 氨基庚烷为内标，测定葡萄酒中色胺、苯乙 胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、精胺和亚精 胺含量。
生物胺简介
生物胺是一系列含氮低分子有机碱,
可分为单 胺和多胺两类, 包括酪胺、组胺、腐胺、尸胺、 苯乙胺、色胺、精胺和亚精胺等多种物质。 生物胺除了存在于各种动植物的组织中，还 普遍存在于多种食品中，尤其是发酵食品如 奶酪、发酵香肠、啤酒、黄酒、葡萄酒中等。
标准系列
分别移取0.5mL的1.0、2.5、5.0、10.0、
15.0、25.0、50.0 mg/L生物胺标准系列溶液， 分别置10ml具塞试管中。 依次加入20µL（100mg/L）内标使用液，加 入1.5mL饱和碳酸氢钠溶液、1.0mL （5mg/mL丙酮）丹磺酰氯衍生剂，振荡使混 匀。置60℃培养箱中反应30min，以下操作 同试样的衍生步骤。
样品处理—衍生
取上述待衍生的试样溶液0.5mL 置10mL具塞试管中， 加入1.5mL饱和碳酸氢钠溶液、1.0mL（5mg/mL丙酮） 丹磺酰氯衍生剂，振荡使混匀。 置60℃培养箱中反应30min，中间振荡2次，取出， 分别加入100µL谷氨酸钠（50mg/ml饱和碳酸氢钠溶 液），振荡混匀，60℃保温15min。 取出，每个试管中加入1mL超纯水，在40℃水浴用氮 气除去丙酮。加入3mL乙醚，振荡2min，静置分层后， 吸取出上层有机相（乙醚层），重复萃取2次，合并 乙醚萃取液，氮气吹干。 加入1.0mL甲醇使残留物溶解，振荡混匀，0.22µm微 孔滤膜过滤，滤液待测。
X
标准谱图
0.80 0.70
酪胺 - 26.646 亚精胺 - 27.449
0.60
0.20
0.10
0.00 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 分钟 26.00 28.00 30.00 32.00 34.00 36.00 38.00 40.00 42.00 44.00
液相色谱参考条件
色谱柱为C18柱，
(150 mm×4.6mmID， 5µm)，紫外检测波长254nm，进样量10µL， 柱温30℃，流速：1.5mL/min。 梯度洗脱程序
时间 流动相 A 流动相B 0 55 45 7 65 35 14 70 30 20 70 30 27 90 10 30 100 0 35 100 0 36 55 45 45 55 45
组胺 - 22.623
0.30
色胺 - 12.614
苯乙胺 - 14.860
0.40
内标1，7-二氨基庚烷 - 23.664
0.50
腐胺 - 16.336
尸胺 - 17.798
AU
精胺 - 30.014
葡萄酒样品谱图
0.20 0.18 0.16 0.14 0.12 0.10 0.08
色胺 - 12.356
葡萄酒中的生物胺
葡萄酒中的生物胺含量与葡萄品种、气候条件、 葡萄卫生状况、酒种、酿造工艺、储存条件等诸 多因素相关。 曾有报道研究了葡萄牙产区不同年份的葡萄酒中 生物胺变化 在2003 年的葡萄酒中，酪胺和异戊胺的含量较 高 在2004 年的葡萄酒中，腐胺为主要的生物胺 这 可能是由于不同年份气候条件的变化，自然的微 生物菌群与葡萄组分的不同而引起这种差异。
过量摄入的危害
当人体摄入过量的生物胺时，就会引起诸如
头痛、恶心、心悸、血压变化、呼吸紊乱等 过敏反应，严重的还会危及生命。 生物胺中以组胺对人体健康影响最大，海产 鱼中的青皮红肉鱼类含组胺较高，当鱼不新 鲜或腐败时，鱼体中游离的组胺酸经脱羧酶 作用产生组胺。
许多国家已经作出了葡萄酒中组胺的限量 范围。 澳大利亚、匈牙利和瑞士--10 mg/L 法国--8 mg/L 比利时--6 mg/L 荷兰--3.5 mg/L 德国--2 mg/L 我们国家鱼类中组胺的限量 鲐鱼—100mg/100g 其他含组胺的鱼类—30mg/100kg
腐胺 - 16.347
0.22
内标1，7-二氨基庚烷 - 23.698
AU
组胺 - 22.659
酪胺 - 26.658
18.00
0.04 0.02 0.00 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00
尸胺 - 18.000
0.06
20.00
22.00 24.00 分钟
样品处理—萃取
量取葡萄酒5mL，加入适量氯化钠使溶液饱和。 准确量取上述饱和后的试样提取液5mL，置于 15ml离心管中，用0.1mol/L NaOH溶液调节pH 至12.0。 加入5mL的正丁醇－氯仿(1:1)混合液，涡旋振荡 5min，3600r/min离心10min，吸取上层有机相， 再重复萃取2次，合并萃取液，混匀，取3mL萃 取液并加入0.2mL1mol/L HCl ，混合后40℃水 浴下氮气吹干，加入1mL 0.1mol/L HCl 复溶， 待衍生。
26.00
亚精胺 - 27.458
28.00
1 - 25.663
30
38.00
40.00
42.00
44.00
注意问题:反应过程中决定作用的条件
衍生剂 浓度
缓冲溶 液pH 值
衍生温 度
衍生时 间
衍生剂浓度
不同浓度的Dns-Cl
对生物胺衍生效果不同， 实验显示5mg/mL对于本实验足够，高浓度的 Dns-Cl 只会造成试剂浪费。
高效液相色谱法测定8种生物胺原理
生物胺自身没有荧光和紫外的发色基团,因此
需要经过衍生化处理，才能在色谱仪器检测 出来。 丹磺酰氯（Dns-Cl）可以和伯胺或仲胺基上 的活泼氢发生反应，脱掉一分子的HCl，生成 具有紫外和荧光的衍生物。
以1,7-二氨基庚烷为内标，经过氯仿－正丁醇
（1：1）液液萃取净化后，以丹磺酰氯为衍 生剂，60℃衍生30min，采用C18柱分离，紫 外检测器检测，外标法定量。