大鼠Langendroff离体心脏局部缺血再灌注模型建立及功能评价
2013年12月第23卷第12期中国比较医学杂志CHINESEJOUＲNALOFCOMPAＲATIVEMEDICINEDecember，2013Vol．23No．12
［基金项目］国家自然科学基金（81273691）。［作者简介］陈婵娟（1985－），女，在读博士生，主要研究方向：中医气血痰瘀理论在心血管疾病中的应用及中医药对心血管疾病的预防与治疗。E-mail：ccjqlgcj@126．com。［通讯作者］鲁卫星（1959－），男，主任医师，博士生导师，主要研究方向：中医气血痰瘀理论在心血管疾病中的应用及中医药防治心血管疾病的研究。E-mail：weixinglu918@sina．com檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵殝
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。研究报告
大鼠Langendroff离体心脏局部缺血
再灌注模型建立及功能评价
陈婵娟1，潘昡1，赵明镜2，鲁卫星3
（1.北京中医药大学，北京100029；2.北京中医药大学东直门医院，北京100007；
3.北京中医药大学第三附属医院心内科，北京100029）
【摘要】目的建立大鼠Langendorff离体心脏局部缺血再灌注模型的方法并进行功能评价。方法将26
只Wistar大鼠随机分成2组，对照组（control，n=12）和模型组（model，n=14）。两组均建立标准的Langendorff离
体心脏灌注模型：K-H液持续灌注（95%O2+5%CO2过饱和，左心室插入球囊压力管），K-H液持续灌注平衡20
min后对照组K-H液持续灌注105min；模型组同对照组平衡20min后穿线结扎冠状动脉左前降支第一对角支下
缘部位，造成局部停灌（缺血）30min，而后剪断结扎线复灌（再灌注）75min。伊文思蓝、TTC染色观察心肌梗死、缺
血面积；记录左心室压力及心率变化过程，比较各组平衡20min、局部缺血30min、再灌15min、再灌30min、再灌
75min的血流动力学指标及灌流液中肌酸激酶（creatinekinase，CK）和乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase，LDH）漏
出量。结果对照组血供正常，模型组局部缺血、梗死明显；对照组、模型组平衡末心肌酶学及血流动力学各参数
无明显差异（P＞0.05），模型组局部缺血、再灌注各个观测时刻心肌酶学及血流动力学参数均与对照组有显著差
异（P＜0.05），说明模型组经历局部缺血、再灌注损伤，心肌酶漏出明显升高，心脏收缩功能、舒张功能受损，心肌
耗氧量升高。结论大鼠Langendorff离体心脏局部缺血灌注模型稳定可靠，掌握制作要点及注意事项后，可顺利
快速地成功制备，为心肌局部缺血再灌注损伤的研究提供更接近临床疾病状态的实验途径。
【关键词】大鼠；Langendorff离体心脏；局部缺血再灌注；模型制备与评价
【中图分类号】Ｒ33【文献标识码】A【文章编号】1671-7856（2013）12-0021-06
doi：10.3969．j．issn．1671.7856.2013.012.006
EstablishmentandassessmentofaLangendorffperfused
ratheartmodelofischemia-reperfusion
CHENChan-juan1，PANXuan1，ZHAOMing-jing2，LUWei-xing3
（1.BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijig100029，China；
2.DongzhimenHospitalAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine，Beijig100007；
3.DepartmentofCardiology，theThirdAffiliatedHospitalofBeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100029）
【Abstract】ObjectiveToexploreandsummarizeaLangendorffperfusedratheartmodelofischemia-reperfusion．
MethodsTwenty-sixWistaradultratsweredividedintotwogroupsrandomly：controlgroup（n=12）andmodelgroup
（n=14）．Eachratunderwentopen-chestsurgery．TheheartswereremovedandimmediatelycannulatedandeffectivelyperfusedinLangendorffapparatus．Afluid-filledlatexballoonwasinsertedvialeftatriumintotheleftventriclefor
measurementoftheleftventricularfunction．Heartsofthecontrolgroupreceivedcontinuousperfusionwithoutischemiafor
105min．Heartsofthemodelgroupreceived20mincontinuousperfusionforstabilizationandthenunderwent30min
ischemiabyleftanteriordescendingcoronaryartery（LAD）ligationand75minreperfusion．ThenEvansblueandTTC
stainingwereusedtoobservethemyocardialinfarctionarea．ComparedthelevelsofperfusateCKandLDH，hemodynamic
index，heartratesofthecontrolandmodelgroupsatdifferenttimepoints：endof20mincontinuousperfusion，endof30
minischemia，reperfusion15min，30minand75min．ＲesultsHeartsofthecontrolgroupshowednormalbloodsupply，
whilethemodelgroupshowedevidentlocalischemiaandinfarction．Therewasnosignificantdifferencebetweenthecontrol
andmodelgroupsinmyocardialenzymesandhemodynamicindexesattheendof20mincontinuousperfusion（P＜0.05）．
Intherestofthetime，themyocardialenzymologyandhemodynamicindexesinthemodelgrouphadsignificantdifferences
comparedwiththatofthecontrolgroup（P＜0.05），whichindicatedlocalischemia，reperfusioninjury，andincreased
myocardialenzymeleakage，impairmentoftheheartsystolicanddiastolicfunction，andincreaseofmyocardialoxygen
consumptioninthehearts．ConclusionsLangendorffperfusedratheartmodelsofischemia-reperfusionisstableand
effective．Aftermasteringthesurgicalskillsandkeepingaboveattentions，themodelcanbeestablishedsuccessfullyand
quickly．Thismodelismoreclosetoclinicconditions，andprovidesanewexperimentalapproachinresearchofmyocardial
ischemia-reperfusioninjury．
【Keywords】Ｒat，Langendorffperfusedheart；Ischemia-reperfusioninjury；Modelestablishment；Modelassessment
缺血再灌注损伤广泛存在于心、脑、肾、周围血
管病等多种组织器官，是临床上缺血性心血管疾病
的防治、心脏介入术疗效不佳和器官移植领域亟待
解决的问题［1］。抗缺血再灌注损伤药物的研究和
开发正处于实验阶段，由于大鼠的冠脉走形及血液
循环途径上比较接近人类、冠状动脉侧支循环少，
心肌缺血及梗死出现早，模型稳定性好，故大鼠在
体心肌缺血再灌注损伤模型被广泛用于该病发生
发展机制的探索、可行性干预措施的研究等［2］。由
于离体心脏不受神经体液的调节，影响因素比较
少，可控性及可复制性较强，是心肌缺血/再灌注形
态、功能及电生理学研究的重要模型［3］。以往离体
心脏缺血再灌注模型大多是全心停灌造模［4］，这与
临床上冠心病心肌梗死介入术后再通的疾病状态
有较大差异，不能达到模拟临床疾病状态的目的。
本文采用26只Wistar大鼠建立Langendorff离体心
脏模型，通过结扎冠状动脉左前降支造成离体心脏
局部缺血再灌注模型，提供更接近临床疾病状态的
离体心脏局部缺血再灌注模型的建立和功能评价
的方法
1材料和方法
1.1材料
1.1.1实验动物：雄性Wistar大鼠26只，体重（300
～350）g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提
供，许可证号：SCXK（京）2009-0007。
1.1.2药品：肝素钠（江苏常州千红生化制药股份有限公司）、戊巴比妥钠（美国Biotopped公司）、余
市场分析纯均购于北京化学试剂公司及国药集团
化学试剂有限公司。
1.1.3设备及材料：Langendorff（澳大利亚AD
InstrumentsPtyLtd实验室，ML870B2Langendorff
System）、恒温水浴（LETIC公司，LE13206）、电子天
平（上海精科天平厂，JA1003）、PH仪（上海精密科
学仪器有限公司，PHS-3B）、蠕动泵（Gilson公司，
Miniplus3）、多导生理仪（美国BiopacMP150）、医用
二元气（95%O2+5%CO2）、带线缝合针（上海医
用缝合针厂有限公司，规格圆3/82.5×85/0）、自
制球囊及导管。
1.2实验方法
1.2.1Krebs-Henseleit重碳酸盐缓冲液的配置：以
配置1LK-H液为例［5］：氯化钠118、碳酸氢钠25、氯
化钾4.7、磷酸二氢钾1.2、葡萄糖11.1、硫酸镁
1.2、无水氯化钙1.25（单位：mmol/L），将前6种分
析纯依次溶于常温去离子水，氯化钙单溶后缓慢倒
入，充分搅拌至完全溶解。调PH至7.3～7.4生理
范围，定容至1L。
1.2.2分组及Langendorff模型制备
大鼠心肌缺血再灌注模型构建的改良
大鼠心肌缺血再灌注模型构建的改良
陈冰心;任澎;段明军;田飞
【期刊名称】《中国比较医学杂志》
【年(卷),期】2010(020)005
【摘 要】目的 改良大鼠心肌缺血再灌注模型的构建方法,增强实用性.方法 32只SD雄性大鼠随机分为四组(A组:伪手术组;B组:缺血组;C组:缺血30 min再灌注组;D组:缺血60 min再灌注组).缺血过程在人工机械通气条件下完成,术前术中监测心电图变化,模型成功72 h后抽血进行心肌酶谱分析,并观察左室压变化.结果 造模成功率为91%.B、C、D组各心肌酶含量明显高于A组(P<0.05),C、D组低于B组(P<0.05).B、C、D组左室压值低于A组(P<0.05),C、D组高于B组(P<0.05).结论 改进后的模型制备方法简便易行,成功率高,评价指标符合临床应用.
【总页数】6页(P24-28,后插2)
【作 者】陈冰心;任澎;段明军;田飞
【作者单位】石河子大学医学院,石河子,832000;新疆自治区人民医院心内科,乌鲁木齐,830000;石河子大学医学院,石河子,832000;新疆自治区人民医院心内科,乌鲁木齐,830000;新疆医科大学第一附属医院实验动物科学研究部,乌鲁木齐,830054;新疆自治区第三人民医院心内科,乌鲁木齐,830002
【正文语种】中 文
【中图分类】R542.2
【相关文献】 1.改良式大鼠心肌缺血再灌注模型的复制 [J], 唐晓敏;汪克明
2.一种改良的SD大鼠心肌缺血再灌注模型的建立 [J], 李言明;刘晶;张成成;马晓华;宫剑滨
3.骨髓间充质干细胞预移植1周后构建心肌缺血再灌注损伤大鼠模型 [J], 徐凤;王爱玲;陈峰;周美玲
4.改良构建兔心肌缺血再灌注模型的体会 [J], 于宗良;陈乐;许浩军;周伟伟;何敖林;邓志勇;谷惠敏;杨向军
5.大鼠心肌缺血再灌注损伤模型建立的改良方法 [J], 王平安; 杨珂伟; 王静; 焦成
大鼠非人工呼吸机下心肌缺血再灌注无复流模型的建立和评价
大鼠非人工呼吸机下心肌缺血再灌注无复流模型的建立和评价
付雯雯;于晓风;薛岩;于萍;吴雪记;徐华丽;睢大筼
【摘 要】目的:建立大鼠非人工呼吸机下心肌缺血再灌注无复流模型,通过对形态学、血液生化学和血液流变学等指标进行评价,为研究心血管系统疾病发病机制和评价治疗心血管疾病药物药效学奠定基础.方法:选择健康雌性Wistar大鼠50只随机分为假手术组(20只)和模型组(30只).模型组大鼠结扎冠状动脉左前降支2h,再灌注2h,建立大鼠非人工呼吸机下心肌缺血再灌注后无复流模型;假手术组大鼠仅穿线不结扎.通过检测大鼠心肌缺血面积(AAR)、心肌梗死面积(AAI)和心肌无复流面积(AAN),血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,全血黏度及血浆黏度、血小板黏附率(PAR)和聚集率(PAG)等对模型的建立进行评价.结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌AAR、AAI和AAN均明显增加(P<0.01),血清CK-MB、AST和LDH活性均明显升高(P<0.01),全血低切(20/s)、中切(60/s)和高切(120/s)黏度及血浆黏度均明显增加(P<0.01),PAR,1、3和5 min
PAG及最大聚集率(MPAG)也明显升高(P<0.05或P<0.01).结论:成功建立了大鼠非人工呼吸机下心肌缺血再灌注无复流模型,该模型操作简便、动物损伤小、成模率高、实验周期短、实验费用低.
【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2019(045)005
【总页数】6页(P1058-1062,前插3)
【关键词】非人工呼吸机;心肌缺血再灌注损伤;无复流现象;疾病模型,动物
【作 者】付雯雯;于晓风;薛岩;于萍;吴雪记;徐华丽;睢大筼 【作者单位】吉林大学药学院药理学教研室,吉林长春130021;吉林大学药学院药理学教研室,吉林长春130021;吉林大学药学院药理学教研室,吉林长春130021;吉林大学第一医院烧伤外科,吉林长春130021;吉林大学药学院药理学教研室,吉林长春130021;吉林大学药学院药理学教研室,吉林长春130021;吉林大学药学院药理学教研室,吉林长春130021;吉林大学药学院药理学教研室,吉林长春130021
通心脉方对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用
江西中医药２０１１年６月第６期总４２卷第３４２期
通心脉方对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用
★ 郑晓丹 严世芸 秦仲君 （１．上海中医药大学附属曙光医院心内科上海２０００２１；２．上海中医药 大学基础医学院上海２０１２０３；３．江西九江学院基础医学院病理生理教研室九江３３２０００） 摘要：目的：观察通心脉方（ＴＸＭ）对大鼠离体心脏缺血再灌损伤的影响。方法：４８只ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为６组：正常灌流组， 缺血再灌注组（ＩＲ），ＴＸＭ大、中、小剂量组，卡维地洛组。前两组予以生理盐水１０ ｍＬ／（ｋｇ・ｄ） 灌胃，ＴＸＭ大、中、小剂量组分 别予以含生药１１．４、５．７、２．９ ｇ（ｋｇ・ｄ）Ｉ１醇提物灌胃，卡维地洛组予以卡维地洛２ ｍｇ（ｋｇ・ｄ） 灌胃，共１５天。采用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ 离体心脏灌流方法，停灌５０分钟后复灌６０分钟模拟缺血再灌注模型。观察左室舒张末压（ＬＶＥＤＰ）、左室发展压（ＬＶＤＰ）、左 室压力上升和下降最大变化速率（－４－ｄｐ／ｄｔ ｍａｘ）、冠脉灌注压（ＣＰＰ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）、丙二醛 （ＭＤＡ）及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）含量的变化。采用光镜观察，标本用甲醛固定，石蜡包埋，苏木精一伊红染色，２００倍光镜观察心 肌形态结构。结果：与ＩＲ组比较，ＴＸＭ大、中剂量组及卡维地洛组心功能明显改善，ＳＯＤ、ＣＡＴ酶活性显著升高而ＭＤＡ及 ＬＤＨ含量显著降低，缺血再灌注光镜下心肌损伤明显改善。结论：ＴＸＭ对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。其机制可 能与清除自由基，抑制脂质过氧化有关。 照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各１０ ， 分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：在此条件 下对照品、供试品在约１０分钟相同时间有一色谱 峰；阴性对照对样品溶液色谱在此保留时间无吸收 峰，表明阴性对照品溶液对测定无干扰，选择性较 好。 线性关系考察：精密称取马钱苷对照品９．９３ ｍｇ，置１０ ｍＬ量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度， 摇匀，制成每１ ｍＬ含马钱苷９９３ Ｉｘｇ溶液。取此对 照品加甲醇稀释成以下浓度：９．９３、１９．８６、３９．７２、 ９９．３、１９８．６ Ｉｘｇ／ｍＬ，分别吸取１０ Ｌ，注入液相色谱 仪中，按确定色谱条件测定，将样品浓度与峰面积进 行回归处理，回归方程为：Ｙ＝０．８７８ ７５９＋ ８．１９７ ０３４ ３１２Ｘ，ｒ＝０．９９９ ９９（／２＝６），马钱苷对照品 在９．９３—９９３ Ｉｘｇ／ｍＬ范围内浓度与峰面积呈良好 的线性关系。 精密度试验：精密吸取供试品溶液１０ ，按上 述色谱条件，重复进样６次，测定供试品溶液中马钱 苷峰面积值。结果供试品峰面积的ＲＳＤ为１．７３％ （ ＝６），表明仪器精密度良好。 稳定性试验：取同一批供试品精密吸１０ Ｌ，按 上述色谱条件，分别于０、０．５、１、２、４、８、１２小时测定 供试品溶液中马钱苷峰面积值。结果峰面积变化不 大，ＲＳＤ为１．８１％（ ：７），表明供试品溶液稳定性 良好。 重现性试验：取同一批样品适量，研细，各约２ ｇ，共６份，精密称定，照含量测定项下方法进行测定 计算马钱苷的含量。结果样品中马钱苷平均含量为 ０．４３０ ０ ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为１．４３％（ｎ＝６）。 加样回收率试验：取本品适量，研细，取约１ ｇ， 共６份，精密称定，置具塞三角瓶中，在６份样品中 分别精密加入马钱苷对照品（１７．７２ ｇ／ｍＬ）２５ ｍＬ， 按确定方法制成供试品溶液，吸取ｌ０ 注入液相 色谱仪中进行含量测定，计算回收率。结果平均回 收率９９．６２％，ＲＳＤ为１．２７％。 样品测定：取６批样品，依法配制供试品溶液。 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各１０ ，注 入液相色谱仪，含量。结果见表２。 表２样品含量测定结果
四逆汤有效部位抗心肌缺血_再灌注损伤作用_孙慧兰
大鼠蛛网膜下腔给药方式进行初步的神经毒素鉴定
的报道[4]。迄今还没有关于雷氏大疣蛛毒素对肿瘤
细胞抑制作用的研究报道。本研究使用人肝癌细胞
株SMMC-7721作为腺源性代表细胞株,用雷氏大
疣蛛毒素进行体外抑瘤实验。结果表明,雷氏大疣蛛
毒素对人肝癌细胞株SMMC-7721有增殖抑制作
用,且抑制作用有浓度依赖性。
细胞分裂增殖的实质就是DNA的复制,通过
细胞不断经历细胞周期来实现。而细胞周期受细胞
内信号传导和多种因素的精细调节。特别是G2/M
期细胞对外界环境因素敏感并能被刺激,从而加快
或减缓细胞增殖。当细胞周期发生障碍时,细胞增殖
将受到抑制,而DNA合成障碍是细胞周期发生障
碍的较常见的原因。本研究中流式细胞仪测定结果
显示,经雷氏大疣蛛毒素作用后,SMMC-7721细胞
周期发生了变化,其中G2/M期细胞增多,S期细胞
减少,说明雷氏大疣蛛毒素的作用在G2/M期。用
同位素[3H]-TdR作为DNA合成的前身物质,加入
到培养液中,从细胞摄取[3H]-TdR的多少,借助放
射性活性测定方法来确定雷氏大疣蛛毒素对
SMMC-7721细胞DNA合成的影响。实验结果表
明雷氏大疣蛛毒素明显抑制SMMC-7721细胞
DNA的合成。以上结果提示,雷氏大疣蛛毒素抑制SMMC-7721细胞的增殖,是通过抑制细胞DNA
合成,作用于SMMC-7721细胞株的G2/M期,从
而阻滞细胞周期的进程来实现的。
以WesternBlot实验进行检测与细胞增殖周
期关系密切的c-myc蛋白的表达情况,发现c-myc
蛋白表达减弱,浓度关系依赖性明显。所以可进一步
推测:雷氏大疣蛛毒素药理作用机制之一可能是使
SMMC-7721细胞周期相关蛋白c-myc表达减弱,
导致细胞周期阻滞。
经过本研究证实,蜘蛛毒素抑制肝癌细胞的增
殖确实是一个崭新的科研领域,具有基础理论与医
疗实践双重意义。
References:
[1] ZhaoWL,JiHF,XuK.Cytopathicactionofspider(Ly-cosasingoriensis)venomanditsfractionontheculturedhu-manlungadenocarcinomacell(SPC-A1)[J].ZoolRes(动物学研究),1991,1:67-71.[2] MosmannT.Rapidcolorimetricassayforcellulargrowthandsurvival:applicationandcytotoxicityassay[J].JIm-munolMethods,1983,65:55-63.[3] ZhuMS.AspeciesofGenusMacrothele(Araneae:Hexathekidae)fromChina[J].JHebeiUniv(河北大学学报),2000,4:358-361.[4] ZhengXZ,LiangSP.Purificationandpreliminarytoxinre-searchofraventoxin-Ⅱ,aneurotoxicpeptidefromthevenomofthespiderMacrotheleraveni[J].LifeSciRes(生命科学研究),2001,3:217-220.
资料 大鼠脑缺血再灌注模型的建立
大鼠脑缺血再灌注模型的建立
首席医学网 2009年10月27日 16:34:55 Tuesday
医师杂志征稿 急救医师学术年会 冠心病诊疗研讨会 网站运营 核心论文年内发表 泌尿外科主任研讨 世界神经内镜大会 内蒙中医药 超值牙科管理课程 世界糖尿病大会 神经病学国际论坛 心血管介入研讨会 欧洲放射学年会 美国骨科年会 中医药学术大会
作者：先雄斌 杨朝鲜 作者单位：(泸州医学院神经生物学研究室，四川 泸州 646000)
【关键词】 脑缺血/再灌注;模型
脑血管病具有发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高和并发症多的特点，是中、老年人致死和致残的主要疾病。缺血性脑血管病约占全部脑血管病人的70%～80%。因此建立稳定的、可重复、损伤小的大鼠脑缺血再灌注模型具有极其重要的价值。以往模型的建立〔1，2〕均缺乏详细操作过程及各操作细节的注意要点，因而建模的重复性和成功率相对较低。本文成功制备了大量SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，现介绍如下。
1 对象与材料
1.1 实验动物的选择 由于SD大鼠具有成本低、种系纯合性好、抗感染能力较强，与人类的脑血管解剖相似,以及与Wistar大鼠比较,SD大鼠可见恒定的顶颞皮质梗死灶，梗死体积大于Wistar大鼠，变异较小，周边不完全坏死区(半暗带)所占体积明显小于Wistar大鼠等优点〔3〕,因此本文采用成年SD大鼠(第三军医大学实验动物中心),清洁级，体重250～320
g，雌雄不限。
1.2 器械和药品 线剪1把、眼外科剪2把、弯镊4把、4#手术缝线、6×17三角形缝针、0.2 mm直径的尼龙线、游标卡尺1把、持针钳1把。多聚L赖氨酸、戊巴比妥钠、速尿(20 mg/支)、硫酸庆大霉素(80 mg/支)等。
1.3 阻塞线的制备 把0.2 mm直径的尼龙盘线剪成6 cm每段，一端靠近酒精灯火焰加热，并放于显微镜下观察，要求末端成光滑球面且直径不要大于0.30 mm。过大者可能造成较难通过颈静脉孔，不光滑者可能刺破血管，导致蛛网膜下腔出血，且可引起血小板聚集和血栓形成，导致微血管循环的逐渐恶化。然后把合格的尼龙线放入0.1%的多聚L赖氨酸(1 g多聚赖氨酸溶于1 000 ml蒸馏水中充分混匀)中浸泡过夜。目的是使其与血管壁黏着紧密。
缺血再灌注损伤大鼠心肌线粒体蛋白质组学的研究
缺血再灌注损伤大鼠心肌线粒体蛋白质组学的研究
魏义勇;李科;喻守佳;喻田
【摘 要】目的 运用蛋白质组学的研究方法探讨心肌缺血冉灌注损伤的机制.方法
建立Langendorff大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型,随机分为正常组(Nor组)和缺血再灌注损伤组(IR组),每组9只.提取心肌线粒体蛋白质行双向凝胶电泳,质谱鉴定差异大于2倍的蛋白质点.结果 Nor组和IR组比较,共发现4个差异蛋白质:其中NADH脱氢酶铁硫蛋白2(NDUFS2)表达上调,ATP合酶α亚基(ATPA)、电子传递黄素蛋白α亚基(ETFA)和细胞色素C1亚基2表达下调.结论 ATPA、ETFA、细胞色素C1亚基2和NDUFS2可能与心肌缺血再灌注损伤有关.
【期刊名称】《遵义医学院学报》
【年(卷),期】2017(040)006
【总页数】4页(P613-616)
【关键词】缺血再灌注损伤;线粒体;蛋白质组学
【作 者】魏义勇;李科;喻守佳;喻田
【作者单位】遵义医学院附属医院麻醉科,贵州遵义563099;遵义医学院附属口腔医院麻醉科,贵州遵义563099;遵义市第一人民医院ICU,贵州遵义563000;遵义医学院附属医院麻醉科,贵州遵义563099
【正文语种】中 文
【中图分类】R332 体外循环下心内直视手术以及心脏移植术已成为治疗众多心脏疾病的重要手段，但手术时发生的心肌缺血/再灌注损伤，包括心律失常、心肌梗死面积的扩大、心肌顿抑和心力衰竭等，将会严重影响患者愈后。因此，心肌缺血再灌注损伤被认为是引起人类死亡的主要原因之一[1]，但具体机制仍不清楚。本研究拟通过分析缺血再灌注损伤大鼠心肌线粒体蛋白质表达的变化，试图找到相关的靶蛋白，进一步研究心肌缺血再灌注损伤的具体发生机制，以期为研发新药奠定理论依据。
本研究证实缺血再灌注严重损害了大鼠的心功能，与既往的研究结果一致[5]。本实验通过Nor组与IR组比较发现有4个线粒体蛋白质表达差异大于2倍。NDUFS2是复合体Ⅰ的一个亚基，复合体Ⅰ由45种蛋白质组成，有两个膜臂。NDUFS2位于复合体Ⅰ亲水性膜臂接近线粒体基底部，属亲水性蛋白质。NADH脱氢酶的亚基构成了复合体Ⅰ催化核心，NDUFS2便是其催化核心之一[6]。ATP合酶是线粒体氧化磷酸化的关键酶，从F0基底部使c亚基构成的环朝顺时针方向旋转，从而带动γ亚基旋转，它的旋转引起F1的β亚基3个催化位点构象周期性变化，使ADP+Pi不断合成ATP[7-8]。ATPA是ATP合酶的重要亚基；ETFA在脂肪酸氧化电子传递链中自FADH2转移一对电子给黄素-硫蛋白，在酯酰-辅酶A的β-氧化过程中，把辅酶Q还原为QH2，从而一个接一个的把电子转移给线粒体电子传递链。细胞色素是一类含血红素的Fe蛋白，在把电子从氧分子传递到氧的过程中起着重要作用。细胞色素C1是细胞色素C的一种，主要存在于线粒体内膜，其含量减少和缺失将影响细胞的呼吸功能。
大鼠脑缺血模型及缺血再灌注模型
大鼠全脑缺血模型 制备方法 评价
二血管阻断法 阻断双侧颈总动脉（common
carotid artery，CCA）
加动脉放血造成低血压而形成前脑缺血。若单纯结扎
双侧CCA 而不降低血压，则难以使脑血流量（cerebral
blood flow，CBF）降低至缺血和能量代谢紊乱的程度。 该法手术简便易于操作，成功率高。
缺点：仅形成不完全脑缺血，造成的低血压严重干扰其
他器官的血供及实验结果；不能在动物清醒状态下进
行，无法进行神经行为学的观察。因此，该模型对探讨
缺血性脑损伤的发病机制、评价抗脑缺血药物的疗效
更有价值。
颅内加压法 小脑延池内注入人工脑脊液，使颅内压升高超过
动脉血压2.7~9.3 kPa（1 kPa≈0.133 mmHg），同时给予
神经节阻滞剂三甲噻方，防止颅内高压反射性引起高
血压。
颈部加压法 麻醉动物，颈部套一止血带，加压至80~93 kPa，减
少脑血流量，造成脑缺血。
断头法 断头造成全脑不可逆缺血，取下脑组织冰冻贮存，
常用于生化和代谢分析。
低氧法 结扎单侧CCA 合并全脑缺氧，PaO2 维持在2.8 kPa。
由于脑部不是真正的缺血，采用这一模型得到的结论
不适用于脑缺血，但可比较缺氧与脑血流量减少引起
效应的不同。
胸内血管夹闭法 开胸，夹闭左侧CCA、头臂干、左侧锁骨下动脉，造
成全脑缺血。
大鼠局灶性脑缺血模型 制备方法 评价
栓塞法 颈动脉注射血凝块栓复制栓塞性脑卒中模型的
方法过去只用在中型体积动物，现已在大鼠中应用。
Kudo 等［12］采用<100 μm 的同源血凝块栓悬液，注入
CCA，在颈外动脉（external
carotid artery，ECA）的颈内
动脉（internal carotid artery，ICA）开口处置一可逆性插
管，栓子则由ICA进入MCA，导致同侧大脑皮层、海马、
深层灰质结构的梗塞。也有人用碳素颗粒、花生四烯酸
地氟烷预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响及作用机制
地氟烷预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响及作用机制
梁宁;刘玲;陈萍
【期刊名称】《中国老年学杂志》
【年(卷),期】2017(037)004
【摘 要】目的 探讨地氟烷预处理在大鼠离体心脏缺血再灌注(IR)中的保护作用是否与单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)有关.方法 清洁级健康雄性大鼠50只,2~3月龄,体重250~280 g,切取离体心脏并随机分为正常对照(C)组、IR组、地氟烷预处理+IR(DR)组、地氟烷预处理+AMPK抑制剂+IR(DC)组和IR+AMPK抑制剂(CR)组各10只.DR组和DC组在给予大鼠吸入1 MAC的地氟烷30 min后立即切取心脏.采用Lan-gendorff灌注装置并以95%O2~5%CO2饱和的K-H液作为灌注液,在平衡灌注15 min后,停止灌注30 min后再灌注60 min建立IR模型.分别在停止灌注前和再灌注60 min时记录心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt)和左室内压最大下降速率(-dp/dt).采用caspase-3活性检测试剂盒测定心肌组织内caspase-3活性,酶联免疫吸附(ELISA)法检测冠脉流出液中心肌肌钙蛋白(cTn)I浓度.采用免疫组织化学法和Western印迹法检测心肌组织内AMPK(Thr-172)的磷酸化水平.结果 与C组比较,IR组离体心脏再灌注60
min时HR、LVDP、+dp/dt和-dp/dt显著降低(P<0.05),心肌组织caspase-3活性和冠脉流出液中cTnI浓度显著升高(P<0.05),而AMPK(Thr-172)的磷酸化水平无显著差异(P>0.05).与IR组比较,DR组HR、LVDP、+dp/dt和-dp/dt显著升高(P<0.05),caspase-3活性和cTnI浓度显著降低(P<0.05),AMPK(Thr-172)的磷酸化水平显著升高(P<0.05).而与DR组比较,DC组HR、LVDP、+dp/dt和-dp/dt显著降低(P<0.05),caspase-3活性和cTnI浓度显著升高(P<0.05),AMPK(Thr-172)的磷酸化水平显著降低(P<0.05).结论 地氟烷预处理使IR后心肌组织内AMPK(Thr-172)磷酸化水平升高而被激活,是其缓解心肌IR损伤的机制之一.%Objective To investigate the role of AMPK in desflurane
大鼠Langendroff离体心脏局部缺血再灌注模型建立及功能评价
２０１３年１２月 第２３卷第１２期 中国比较医学杂志 ＣＨＩＮＥＳＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１３ Ｖｏｌ＿２３ ＮＯ．１２
大鼠Ｌａｎｇｅｎｄｒｏｆｆ离体心脏局部缺血
再灌注模型建立及功能评价
陈婵娟 ，潘 眩 ，赵明镜 ，鲁卫星。
（１．北京中医药大学，北京１０００２９；２．北京中医药大学东直门医院，北京１００００７； ３．北京中医药大学第三附属医院心内科，北京１０００２９）
【摘要】 目的建立大鼠Ｌａｎｇｅｎｄｏｆｆ离体心脏局部缺血再灌注模型的方法并进行功能评价。方法将２６ 只Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成２组，对照组（ｃｏｎｔｒｏｌ，ｎ＝１２）和模型组（ｍｏｄｅｌ，ｎ＝１４）。两组均建立标准的Ｌａｎｇｅｎｄｏｆｆ离 体心脏灌注模型：Ｋ—Ｈ液持续灌注（９５％Ｏ ＋５％ＣＯ 过饱和，左心室插入球囊压力管），Ｋ—Ｈ液持续灌注平衡２Ｏ ｍｉｎ后对照组Ｋ—Ｈ液持续灌注１０５ ｍｉｎ；模型组同对照组平衡２０ ｍｉｎ后穿线结扎冠状动脉左前降支第一对角支下 缘部位，造成局部停灌（缺血）３０ ｍｉｎ，而后剪断结扎线复灌（再灌注）７５ ｍｉｎ。伊文思蓝、ＴＴＣ染色观察心肌梗死、缺 血面积；记录左心室压力及心率变化过程，比较各组平衡２０ ｍｉｎ、局部缺血３０ ｍｉｎ、再灌１５ ｍｉｎ、再灌３０ ｍｉｎ、再灌 ７５ ｍｉｎ的血流动力学指标及灌流液中肌酸激酶（ｃｒｅａｔｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ，ＣＫ）和乳酸脱氢酶（１ａｃｔａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＬＤＨ）漏 出量。结果对照组血供正常，模型组局部缺血、梗死明显；对照组、模型组平衡末心肌酶学及血流动力学各参数 无明显差异（Ｐ＞０．０５），模型组局部缺血、再灌注各个观测时刻心肌酶学及血流动力学参数均与对照组有显著差 异（Ｐ＜０．０５），说明模型组经历局部缺血、再灌注损伤，心肌酶漏出明显升高，心脏收缩功能、舒张功能受损，心肌 耗氧量升高。结论大鼠Ｌａｎｇｅｎｄｏｆｆｆ离体心脏局部缺血灌注模型稳定可靠，掌握制作要点及注意事项后，可顺利 快速地成功制备，为心肌局部缺血再灌注损伤的研究提供更接近临床疾病状态的实验途径。 【关键词】 大鼠；Ｌａｎｇｅｎｄｏｆｆｆ离体心脏；局部缺血再灌注；模型制备与评价 【中图分类号】Ｒ３３ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７１—７８５６（２０１３）１２－００２１．０６ ｄｏｉ：１０．３９６９．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１．７８５６．２０１３．０１２．００６
大鼠心肌缺血_再灌注损伤模型的改进与评价
第6卷 第4期解剖科学进展Vol16 No14
2000年PROGRESSOFANATOMICALSCIENCES2000
大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的改进与评价
王淑侠 兰小莉1 王吉文2 裴著果
(中国医科大学第二临床学院核医学科 沈阳110003)
摘要 大鼠心肌缺血再灌注损伤是模拟人类心梗及溶栓再通治疗,研究缺血预适应机制,评价抗心律失
常药物疗效常用的动物模型。本文在传统造模方法的基础上进行了一定的改进,采用在压管下加一小垫片的
方法,减少了传统推管法对心表面的机械损伤,方法简便,冠脉阻断确实。结果:大鼠左冠状动脉主干缺血
30′,再灌120′,危险区左室重量比为55%±5%,坏死区危险区为58%±6%(N=10)。心肌酶谱结果:
CK4301±251ul,CK2MB2288±328ul,LDH2329±216ul,AST371±57ul(N=5)。
关键词 心肌再灌注损伤;大鼠;模型,TTC染色法
阻断冠状动脉造成急性心肌梗塞并在预定时间
内恢复血供予以再灌注是模拟人类心梗及溶栓再通
治疗常用的实验研究方法。大鼠以其冠脉侧支循环
缺乏、心肌坏死出现早、心律失常发生率高、重复性、
稳定性好、费用低廉而成为制作该疾病模型[1],特别
是硕、博士研究生进行课题实验首选的实验动物。笔
者在进行心肌缺血预适应机制的研究中,参照以往
文献记载的方法[2～4],并根据本实验室条件,对该模
型的制作方法进行了一定的改进,现报告如下:
1 材料与方法
111 材料
健康雄性Wistar大鼠,体重240～350g(由中
国医科大学实验动物部提供);NiHonKonden型心
电图机(上海KONDEN医用电子仪器厂);小动物
呼吸机(浙江医科大学医学仪器实验厂);自制简易
血压计(由24号套管针、三通开关、U形管内装水
银,管旁边附有直尺做刻度组成);红四氮唑(TTC)
由上海第三试剂厂生产;批号970924用前以
011M1PH714的磷酸缓冲液配成1%溶液;伊文斯