结核感染t细胞检测方法
(仅供参考)结核感染T细胞检测
结核感染T细胞检测（T-SPOT.TB）一、背景结核病是由结核分枝杆菌（MTB）引起的传染性疾病。
全世界每年大约有8，000，000新增的结核病例。
据此估计，三分之一的世界人口已被结核杆菌感染并成为潜在的或活动性结核患者。
亚洲结核发病率约占世界结核病发病率的７０％，我国结核发病率则位居世界第二位。
２０００年第四次全国结核病流行病学抽样调查结果估计，我国活动性结核患者约有４５０万人，占全球结核患者总数的１／４，其中痰菌阳性的结核患者约有２００万人，痰涂片阳性的结核患者约１５０万人。
每年约有１３万人死于结核病。
由于卡介苗的使用，现在结核病的发病率比过去有所下降，但是由于艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的使用，酗酒与贫困，难民迁移等诸多因素的影响，结核及其它分枝杆菌所致的感染发病率又呈上升趋势。
如何能够快速、准确的诊断结核病，有效的控制结核病的继续蔓延，已经成为我们首要重视的问题。
然而，目前结核诊断的标准仍局限于临床检查结核细菌培养和涂片直接镜检再辅以X线检查和结核菌素皮肤测试观察。
这些方法均依赖于病人的临床症状，不能达到早期检测潜在结核感染的目的。
结核感染T细胞检测试剂用于肺结核和肺外结核诊断与鉴别诊断具有独特优势：（1）具有非常高的灵敏度和特异性（2）不受环境分枝杆菌感染和卡介苗（BCG）接种影响（3）基本不受机体免疫抑制影响，适用于HIV感染和免疫抑制剂治疗人群（4）简单的实验室血液检查，24小时快速报告结果二、产品的检测原理和方法结核感染T细胞检测试剂盒（T-SPOT.TB）为英国Oxford Immunotec公司生产，应用的方法学为酶联免疫斑点技术（ELISPOT），产品的检测原理和检测方法如下。
这类反应统称为γ干扰素释放试验（γ Interferon Release Assay, IGRA），目前已经列入美国、欧洲等地结核病诊疗指南，用于结核病辅助诊断。
2．2 产品的检测方法2．2．2 检测过程略：见操作说明三、国内、外已批准上市及应用现状目前结核感染T细胞检测试剂（T-SPOT.TB）已获得欧盟CE认证、美国FDA认证。
结核感染T细胞检测技术
2014/6/13
Tuberculosis
14
MTB感染的诊断技术
血清抗体检测：由于MTB的抗原性较弱，且与其它分支杆菌具有较强
的交叉免疫，其血清抗体检测的灵敏度和特异性均较低，不适合临床应用
结核菌素实验（TST）：原理为通过皮试检测机体对MTB的T细胞
免疫反应，所用抗原主要为结核菌提取物（PPD）
受机体免疫力抑制 没有临床症状
5%
再次激活
有临床症状 具有传染性
终身处于感染状态
潜伏感染
2014/6/13 Tuberculosis
活动性结核
18
结核感染T细胞检测技术背景
γ-干扰素释放实验
• 结核杆菌特异抗原
早期抗原靶6（ESAT-6） early secreted antigenic target 6 培养滤液蛋白10（CFP 10） culture filtrate protein 10
Good micrper ml of sputum
Slide Courtesy: Van Deun A, Nov 2003
2014/6/13
Tuberculosis
11
MTB培养速度缓慢
－－生长缓慢：增代时间为18－20小时，从1CFU到肉眼可 见的菌落需3－5周
乙肝 肺结核 痢疾 梅毒
5000 4000 3000 2000 1000 0
肺结核 狂犬病 乙肝 艾滋病
结核病在法定传染病报告中发病率和病死率始终占据前2的位置
2014/6/13 Tuberculosis 5
我国的结核病防治遭遇瓶颈
5次全国流行病学调查结核病患病率变化曲线
900 800 700 600 500 400 300 200 100 0 1979年 1984-1985年 1990年 2000年 2010年
结核嵌入pcr技术原理
结核嵌入PCR技术原理介绍结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性感染疾病，是全球主要的公共卫生问题之一。
传统的检测方法需要较长的时间，并且对于特殊样本（如胸腔积液）的检测效果较差。
结核嵌入PCR（T-SPOT.TB）技术是一种新型的分子生物学检测方法，能够高效、准确地检测结核感染。
本文将详细介绍结核嵌入PCR技术的原理及其在结核病诊断中的应用。
结核嵌入PCR技术原理结核嵌入PCR技术是一种基于T细胞的免疫学原理的检测方法。
其原理如下：1. 血液采集首先，从患者的外周静脉采集一定量的血液样本。
这些血液样本中含有T细胞，其中部分T细胞已经感染了结核分枝杆菌。
2. T细胞分离通过特定的分离方法，将血液样本中的T细胞分离出来。
这些分离得到的T细胞中含有被结核分枝杆菌感染的T细胞。
3. T细胞培养将分离得到的T细胞培养在特定的培养基中，提供适宜的环境使其继续增殖。
4. 抗原激活在培养过程中，向T细胞中加入结核分枝杆菌的特定抗原，刺激感染了结核分枝杆菌的T细胞。
5. T细胞分泌被刺激的T细胞会分泌干扰素-γ（IFN-γ），这是一种由T细胞产生的细胞因子。
6. 干扰素-γ检测通过特定的试剂盒，可以检测到样本中的IFN-γ水平。
这个试剂盒中包含与IFN-γ特异性结合的抗体，可以形成特定的复合物。
7. 结果解读根据试剂盒中复合物的形成情况，可以判断患者是否感染了结核分枝杆菌。
如果复合物形成，则表示患者感染了结核分枝杆菌；反之，则表示患者未感染。
结核嵌入PCR技术在结核病诊断中的应用结核嵌入PCR技术具有以下优点，使其在结核病诊断中得到广泛应用：1. 高敏感性结核嵌入PCR技术可以检测到非常低浓度的结核分枝杆菌DNA，因此具有很高的敏感性。
这使得该技术可以在早期感染时进行准确的诊断，提高了结核病的检测率。
2. 高特异性结核嵌入PCR技术通过特定的抗原激活T细胞，只检测感染了结核分枝杆菌的T细胞分泌的IFN-γ。
因此，该技术具有很高的特异性，可以避免误诊。
结核感染t细胞检测方法
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢生活常识分享结核感染t细胞检测方法导语：我们都晓得结核方面的疾病是会传染的，如果患者不能及时接受治疗的话，就会将疾病通过痰传染给其他人，这显然是大家不愿意看到的。
结核感染我们都晓得结核方面的疾病是会传染的，如果患者不能及时接受治疗的话，就会将疾病通过痰传染给其他人，这显然是大家不愿意看到的。
结核感染的疾病是需要通过结核感染t细胞检测的，很多人对这个检测还不是很了解，下面来听听结核疾病方面的专家是怎么说的吧！结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性感染性疾病。
我国是结核病高负担国家，现有结核病患者499万，传染性患者72万，在法定传染病报告中结核病的发病率和病死率始终占据前两名的位置。
在1979年、1984-1985年、1990年、2000年、2010年5次全国性结核病流行病学抽样调查显示，结核病的发病呈下降趋势，但近20年来我国的结核病患病率下降缓慢，2000年到2010年发病率有上升趋势。
目前，纳入规范治疗管理的结核病患者治愈率达到80%以上，而结核病面临的主要问题是发现率低。
目前以用于肺结核检查方法包括涂片抗酸染色、MTB培养、结核病的分子诊断技术、血清抗体检测、结合菌素实验，这些方法具有各自的优点，但都具有一定方法局限性。
结核感染T细胞检测技术是结核病诊断的新技术。
其基本原理是：结核感染者体内存在特异的效应T 淋巴细胞，经体外全血培养，通过结核分枝杆菌特异性重组抗原刺激感染者效应T淋巴细胞增殖，并释放λ-干扰素(IFN-λ)，通过检测IFN-λ水平，从而判断其是否具有针对结核分枝杆菌特异性的T细胞反应。
该方法特异性好，不受卡介苗接种和环境分枝杆菌的影响;同时灵敏度高，在免疫力低下/受抑制人群中有很高的检出率。
该方法的局限性在于对采集标本要求较高，需要采集新鲜全血，无溶血标本，并需要体。
结核分枝杆菌γ-干扰素释放试验及临床应用专家意见
三、结核分枝杆菌抗体检测
结核分枝杆菌抗体检测
采用痰涂片查抗酸杆菌、血清检测结核分枝杆菌抗体、X线胸片摄影三种方法，同时对108例确诊为肺结核的病人 进行检测、结果分析。
病毒类药物急诊临床应用指导意见
结核分枝杆菌抗体检测
1.胶体金法检测的结核分枝杆菌抗体及 X 线胸片阳 性率分别为 72.2%和 77.8%，均高于痰涂片 的阳性率 42.6%，经卡方检验结果表明，前两法显著优于后者（P＜0.05），其中在46例痰涂片 阳性标本中结核分枝杆菌抗体阳性数为42例，阳性率为91.3%，而在62例痰涂片阴性标本中结 核分枝杆菌抗体阳性数为36，阳性率为58.1%，说明痰涂片阳性病人受损较大，病变较重， 抗 体产生早而多。 2.在胶体金法检测结核分枝杆菌抗体与 X 线胸片检查，经卡方检验结果表明无显著性差异 （P>0.05），由于检测结核分枝杆菌抗体标本是血清，反映全身机体免疫状况，且预防及治疗 上与效价成 反比，能够诊断肺外结核，具有与X胸片相同的临床应用价值。
张莺莺,周贝贝,王晴. γ-干扰素释放实验在结核病诊断中的临床应用[J]. 皖南医 学院学报,2017,36(2):121-124,127. DOI:10.3969/j.issn.10020217.2017.02.006.
IRGA在LTBI的诊断及应用
LTBI是指机体感染MTB后，对其抗原刺激产生持续性免疫应答反应但没有发生结核病临床表现和影像
抗结核新药和新治疗方案使用新药 Nhomakorabea使用方法
MDR_TB治疗的抗结核新药 BEAT-TBⅢ期临床试验
贝达喹啉、德拉马尼、普托马尼
HIV感染、类风湿性关节炎或其他全身性炎症性免疫介导 的疾病治疗、使用生物或非生物改良制剂、皮质类固醇等 情况而影响免疫学检测结果，可考虑同时使用 IGRA 和 TST以提高检测的敏感度，任何一个检测阳性均判定为感 染状态。
结核T-SPOT
结核T-SPOT传统手段：结核菌素皮试：低敏感性：免疫力低下人群中其敏感性大大降低。
低特异性：与卡介苗接种和其他环境分枝杆菌有交叉，易造成“假阳性”结果。
细菌学检查：常规培养：2月；快速培养：1周。
阳性率取决于采集标本中细菌数量，不利于早期诊断。
病理学检查：阳性率低，对取材标本有较高要求，有创伤，对肉芽肿性病变需进一步鉴别。
结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主，感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T 淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-γ），因此，检测效应T淋巴细胞可用于结核病或结核潜伏感染者的诊断。
由于效应T细胞存活时间很短，而且具有特异性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状。
T-SPOT.TB 高特异性ESAT-6（早期靶原6）&CFP10（培养滤液蛋白10）均来自结核分枝杆菌基因组RD1区域。
仅结核分枝杆菌复合群（人型，牛型，非洲型）存在RD1区基因。
卡介苗和大多数环境分枝杆菌缺失RD1区基因。
T-SPOT.TB 不会受卡介苗接种影响。
通常阴性对照没有或仅有很少斑点。
根据抗原A或/和抗原B孔的反应判断结果；阴性对照孔斑点数为0-5，阳性样本应为：（抗原A或抗原B斑点数）-（阴性对照孔斑点数）≥6.当阴性对照孔斑点数≥6 spot，阳性样本应为（抗原A或抗原B斑点数）≥2×（阴性对照孔斑点数）如果阳性对照孔结果良好，但抗原A或抗原B均达不到阳性样本判断标准，则结果为阴性。
阳性结果说明患者体内存在针对结核杆菌的效应T淋巴细胞。
阴性结果提示患者可能不含针对结核杆菌的效应T淋巴细胞。
T-SPOT.TB 检测单个反应细胞可以检测样品中每一个反应的T细胞即使在免疫功能低下的患者，只要单个的T淋巴细胞有反应，也同样可以被检出。
T-SPOT.TB 检测所有类型的T细胞亚型CD4和CD8T细胞均被检测即使HIV患者中CD4T细胞被清除，只要CD8细胞有针对抗原的反应，也同样被检出。
(优质医学)结核感染T细胞检测及意义
暴露 感染
1%
疾病进展
9%
L潜ate伏ncy
LTBI
90%
自愈
复燃治愈 活动性结核病
2-5% 5-10% >10%
一直存在活菌 需预防性服药
未根治
细菌全部被清除
不发展为结核病
不需要预防性服药
结核病的免疫主要是细胞免疫
K, ,2010,15:433-450
结核检测的方法比较
高特异性
1区编码的6和10两个特异性抗原
该抗原具 有较强的细胞免疫原性，且在所有制备卡介 苗的菌
株及环境中绝大多数非结核分枝杆菌中均不存在该抗原，不
受卡介苗和非分支杆菌影响
IFNg
TNFa
CK
国内外相关研究
快速简便，是一种值得推广的检测方法：
张华，黄圣文，罗振元.结核分枝杆菌干扰素体外释放定量试验诊断结核感染的临床应用.中华医学院感 染学杂志 2009年第19卷第14期
APC
细胞 因子
细胞 因子
活化/细 胞因子
流式细胞术
体外刺激：1 抗原 T cell
IFNg
TNFa
CK
活化标志物
细胞因子
两种比较
高孟秋,刘菲,纪滨英等.两种γ-干扰素释放分析在结核病临床诊断中的比较研 究.中华结核和呼吸杂志，2012，35（10）：762-765
产品特性
高灵敏度，检出率85%以上
Υ干扰素释放试验（）临 床应用
目录
contents
1. 结核病的诊断现状 2. 产品介绍 3. 的临床应用 4. 检测方法及结果解释
结核病现状
•结核病()是由结核分枝杆菌( )引起的一种慢性肉芽肿性炎。 •以肺结核最常见，死亡人数仅次于艾滋病。也可见于全 身各器官。肺外结核占整个发病率的1020%，死亡率占结 核病全部死亡率的14.117.6%。 •全世界约三分之一的人群感染，《2014年全球结核病报告》 显示：2013年有900万新发病例， 150万人死亡。 •中国是结核病高发区，发病数居全球第二，现有600万活 动性肺结核，且患者人数逐年增加，始终位居全国甲乙类 传染病的前列。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
结核感染t细胞检测方法
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢
结核感染t细胞检测方法
导语：我们都晓得结核方面的疾病是会传染的，如果患者
不能及时接受治疗的话，就会将疾病通过痰传染给其他人，这
显然是大家不愿意看到的。结核感染
我们都晓得结核方面的疾病是会传染的，如果患者不能及
时接受治疗的话，就会将疾病通过痰传染给其他人，这显然是
大家不愿意看到的。结核感染的疾病是需要通过结核感染t细
胞检测的，很多人对这个检测还不是很了解，下面来听听结核
疾病方面的专家是怎么说的吧！
结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性感染性疾病。我国是
结核病高负担国家，现有结核病患者499万，传染性患者72
万，在法定传染病报告中结核病的发病率和病死率始终占据前
两名的位置。在1979年、1984-1985年、1990年、2000年、
2010年5次全国性结核病流行病学抽样调查显示，结核病的
发病呈下降趋势，但近20年来我国的结核病患病率下降缓慢，
2000年到2010年发病率有上升趋势。目前，纳入规范治疗管
理的结核病患者治愈率达到80%以上，而结核病面临的主要
问题是发现率低。
现在以用于肺结核搜检方法包括涂片抗酸染色、MTB培
养、结核病的份子诊断技术、血清抗体检测、结合菌素实验，
这些方法具有各自的优点，但都具有一定方法局限性。结核感
染T细胞检测技术是结核病诊断的新技术。其基本原理是：
结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，经体外全血培
养，通过结核分枝杆菌特异性重组抗原刺激感染者效应T淋
巴细胞增殖，并释放λ-干扰素(IFN-λ)，通过检测IFN-λ水平，
从而判断其是否具有针对结核分枝杆菌特异性的T细胞反应。
该方法特异性好，不受卡介苗接种和环境分枝杆菌的影响;同
时灵敏度高，在免疫力低下/受抑制人群中有很高的检出率。
该方法的局限性在于对采集标本要求较高，需要采集新鲜全血，
无溶血标本，并需要体生活常识分享
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢外预处理培养，但只要
患者配合，这些问题都可以解决。
阴性就可以排除结核分枝杆菌感染的可能。
结核感染T细胞检测阳性的患者说明感染结核分枝杆菌，
检测结果
希望上面文章的讲解可以帮助人人深入地了解结核感染t
细胞检测的相关常识，发觉本人得了结核类疾病当前，务必要
实时去做上面的这个搜检，然后承受针对性的治疗。现在医学
技术先进了，治愈结核类的疾病其实不算一件难事，希望人人
可以主动共同大夫治疗。