基因工程大实验报告 (终稿)
内蒙古大学生命科学学院生物系本科生基因工程实验论文
分类号: Q78 编号:
本科生基因工程实验论文
指导教师： X X X
学 生： X X
专 业： 生 物 科 学
年 级： 2009
2012 年 8 月 24 日
纳豆激酶基因表达载体的构建及在
大肠杆菌中的表达 内蒙古大学生命科学学院生物系2012年本科生基因工程大实验论文
1
目 录
摘要 ...................................................................................................................... .2
绪论 ....................................................................................................................... 3
材料与方法 ........................................................................................................... 4
1材料 ............................................................................................................. 4
1.1试剂及仪器 ....................................................................................... 4
1.2菌种 .................................................................................................. 5
1.3质粒 .................................................................................................. 5
1.4常用溶液的配制 .............................................................................. 5
2方法 ............................................................................................................. 6
2.1引物的设计 ...................................................................................... 6
2.2 NK基因的PCR扩增 ........................................................................ 7
2.3 DH5a和BL21(DE3)感受态的制备 ................................................. 7
2.4 pMD19-T-NK的构建及转化和鉴定 ................................................ 8
2.5 pET-trx、pET-NK、pUC-Nk的酶切与回收 .................................. 9
2.6 pET- trx-NK的构建及转化和检测 ............................................. 11
2.7 pET-trx-NK的诱导表达 .............................................................. 12
2.8 pET-trx-NK表达的SDS-PAGE检测 ............................................ 13
结果 ..................................................................................................................... 15
1. NK基因的PCR扩增 ................................................................................ 15
2. pMD19-T-trx的构建与鉴定 .................................................................. 16
3. pET-trx、pET-NK、pUC-Nk的酶切与回收 .......................................... 16
4. pET-trx-NK的构建与检测 .................................................................... 18
5. pET-trx-NK的诱导表达与SDS-PAGE检测 .......................................... 19
讨论 ..................................................................................................................... 20
参考文献 ............................................................................................................. 21
致谢 ..................................................................................................................... 21
感想 ..................................................................................................................... 22 内蒙古大学生命科学学院生物系2012年本科生基因工程大实验论文
2
纳豆激酶基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达
摘要
纳豆激酶是一种枯草杆菌蛋白激酶。经研究发现纳豆激酶具有纤溶活性和溶栓能力,
可治疗和预防血栓病。此外，纳豆激酶还具有降低血液黏度、降血脂、降胆固醇, 改善血液循环状况, 维持血细胞的正常形态和功能等作用。本文主要介绍利用基因工程实验技术操作纳豆激酶基因，将已经连接在pMD18-T载体上的纳豆激酶酶源基因用PCR扩增出837bp的纳豆激酶的基因片段，与T载体连接后导入感受态的DH5α菌中筛选鉴定。用双酶切切下纳豆激酶的成熟基因片段，插入带有6个组氨酸标签的原核表达载体pET-trx，导入 BL(21)DE3感受态菌中诱导表达纳豆激酶蛋白质，用SDS-PAGE鉴定。
关键词：纳豆激酶，基因表达，载体，大肠杆菌
Constructing Expression Vector and Expressing nattokinase in E.coli
ABSTRACT
Nattokinase is a kind of subtilopeptidase. The study found that Nattokinase
has activity of fibrinoltic which can treat and prevent thrombosis. In addition,
Nattokinase can also lower blood viscosity, blood fat, cholesterol, improve blood
circulation and maintain normal blood cells form and function and so on. Main of
this article describe the gene engineering operation in nottokinase gene which has
already connected with pMD-18-T vector amplified by PCR in which can get
837bp nattokinase gene fragments ,then linking with T vector that transform it
into DH5α bacteria which were screened after identification. The mature peptide
can be cutted by double-digested and insert with six histidine-tagged prokaryotic
expression vector pET-trx. At last, induced the protein expression of nattokinase
in the expression of E.coli BL (21) DE3. Eventually , identify that by SDS-PAGE.
KEY WORDS: nattokinase, gene expression, vector，E. coli
基因实验报告
一、实验目的
1. 了解基因的概念和作用；
2. 掌握基因实验的基本原理和方法；
3. 通过实验，验证基因在遗传中的作用。
二、实验原理
基因是生物体内决定生物性状的基本单位，基因的变异是生物进化的重要基础。基因实验是通过分子生物学技术对基因进行操作和检测，以研究基因的结构、功能和调控机制。本实验主要采用PCR（聚合酶链反应）技术，对目的基因进行扩增和检测。
三、实验材料
1. 样本：水稻种子、DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、DNA模板、引物、缓冲液、dNTPs、Taq酶等；
2. 仪器：PCR仪、离心机、电泳仪、凝胶成像系统等。
四、实验步骤
1. 提取水稻种子DNA；
2. 设计并合成目的基因的引物；
3. 进行PCR扩增；
4. 电泳检测PCR产物；
5. 对目的基因进行测序。
五、实验结果与分析
1. 提取水稻种子DNA
通过DNA提取试剂盒，成功提取出水稻种子DNA。
2. 设计引物
根据目的基因的序列，设计一对引物，分别位于目的基因的上下游。
3. PCR扩增 将提取的DNA作为模板，加入引物、缓冲液、dNTPs、Taq酶等，进行PCR扩增。扩增条件为：95℃预变性5分钟，95℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸1分钟，共进行35个循环。
4. 电泳检测PCR产物
将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察电泳结果。结果显示，目的基因扩增成功，大小与预期一致。
5. 目的基因测序
对目的基因进行测序，测序结果与预期序列一致。
六、实验结论
通过本实验，成功提取了水稻种子DNA，并扩增出目的基因。结果表明，基因在遗传中起着重要作用，基因的变异是生物进化的重要基础。本实验为基因研究提供了技术支持。
七、实验讨论
1. 实验过程中，DNA提取、PCR扩增、电泳检测等步骤要严格按照操作规程进行，以确保实验结果的准确性；
2. 引物设计要合理，避免引物二聚体和错配，以提高PCR扩增的特异性；
最终版基因工程
✓ 名词解释
Chapter 2 核酸的制备
脱氧核糖核酸：是一种分子，双链结构，由脱氧核糖及四种含氮碱基组成。可组成遗传指令，引导生物发育与生命机能运作。
核糖核酸：存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。由至少几十个核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接而成的一类核酸,因含核糖而得名,简称RNA。
ccc-DNA：以超螺旋形式存在的环状DNA分子
oc-DNA：当DNA一条链的一个磷酸二脂键断开时，则成为开环DNA分子，即oc-DNA
l-DNA：当两条链中相对应的两个磷酸二脂键同时断开时，则成为线性DNA，即l-DNA
DNA变性：双链DNA在一定条件下因氢键断开而解链成无规则单链的过程
DNA复性：DNA分开的两条单链又会重新结合成双链DNA的过程称为复性。
PCR：聚合酶链式反应，是一种在体外对特定DNA片段进行高效扩增的技术，原理类似于体内的DNA复制过程。
引物：是一小段单链DNA或RNA，作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链。其3’端必须具有游离的—OH基团。
Chapter 3 基因工程工具酶
限制性内切核酸酶：是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二脂键断开的内切脱氧核糖核酸酶。
DNA连接酶：能催化双链DNA片段紧靠在一起的3’羟基末端与5’磷酸基团末端之间形成磷酸二脂键，使两末端连接的酶。
逆转录酶：是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）的酶。
DNA聚合酶：以DNA为复制模板，能将DNA由5’端开始复制到3’端的酶。
Klenow片段（Klenow酶）：E.coli DNA聚合酶Ⅰ经胰蛋白酶或枯草杆菌蛋白酶部分水解生成两个片段，较大的片段包括326~928残基，称为大肠杆菌DNA聚合酶I大片段或Klenow片段。该片段保留了DNA聚合酶I的5ˊ-3ˊ聚合酶和3ˊ-5ˊ外切酶活性，但缺少完整酶的5ˊ-3ˊ外切酶活性。
基因工程实验
基因⼯程实验
实验⼀⼤肠杆菌基因组DNA的提取及电泳鉴定
⼀、琼脂糖凝胶电泳注意的问题：1. 缓冲系统：在没有离⼦存在时，电导率最⼩，DNA不迁移，或迁移极慢，在⾼离⼦强度的缓冲液中，电导很⾼并产热，可能导致DNA变性，因此应注意缓冲液的使⽤是否正确。长时间⾼压电泳时，常更新缓冲液或在两槽间进⾏缓冲液的循环是可取的。2. 琼脂糖：不同⼚家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使⽤。
3. 凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相⼀致，溶解的凝胶应及时倒⼊板中，避免倒⼊前凝固结块。倒⼊板中的凝胶应避免出现⽓泡，影响电泳结果。4. 样品加⼊量：⼀般情况下，0.5cm宽的梳⼦可加0.5ug的DNA量，加样量的多少依据加样孔的⼤⼩及DNA中⽚段的数量和⼤⼩⽽定，过多的量会造成加样孔超载，从⽽导致拖尾和弥散，对于较⼤的DNA此现象更明显。5. 电泳系统的变化会影响DNA的迁移，加⼊DNA标准参照物进⾏判定是必要的。
6. DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平⾏对照样品应使⽤同样的缓冲条件以消除这种影响。
7. DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分⼦的形状及⼤⼩。采⽤不同浓度的凝胶有可能分辨范围⼴泛的DNA分⼦，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分⼦的范围来决定凝胶的浓度。⼩⽚段的DNA电泳应采⽤聚丙烯酰胺凝胶电泳以提⾼分辨率。
⼆、如果提取的DNA中含有蛋⽩质和RNA污染,应如何解决?
蛋⽩污染可以考虑⽤酚氯仿多抽提⼏次,记得吸上清的时候⼩⼼点,宁可浪费也别吸到界⾯.⼀般后续还需要⽤氯仿/异戊醇抽提来去除酚.这样基本蛋⽩污染就可以去⼲净.实在不⾏,抽提⼀次后,就⽤蛋⽩酶K消化30min,再抽提.
如果DNA多,RNA污染就添加RNase A消化,你可以中途取少量跑胶检测,RNA去⼲净了再抽提,再沉淀DNA.
三、如果提取的DNA产量较低，分析原因并提出解决办法。1）样本材料⽼化或反复动容导致DNA含量下降。
基因实验报告模板
一、实验名称
二、实验目的
三、实验原理
四、实验材料与仪器
五、实验方法
1. 基因提取
2. 基因扩增
3. 基因克隆
4. 基因表达分析
5. 基因功能验证
六、实验步骤
1. 基因提取
（1）取适量组织样本，加入提取缓冲液；
（2）加入蛋白酶K，于60℃水浴中消化；
（3）加入酚-氯仿，充分混匀，离心；
（4）取上清液，加入等体积的异丙醇，混匀，静置；
（5）离心，弃上清液，加入70%乙醇洗涤沉淀；
（6）离心，弃上清液，风干沉淀；
（7）加入适量TE缓冲液，溶解DNA。
2. 基因扩增
（1）设计引物，根据基因序列，确定引物序列；
（2）配置PCR反应体系，包括模板DNA、引物、dNTPs、Taq聚合酶等；
（3）进行PCR反应，包括变性、退火、延伸等步骤； （4）琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。
3. 基因克隆
（1）选择合适的克隆载体，如pET、pGEX等；
（2）将PCR产物与克隆载体连接；
（3）转化宿主菌，如大肠杆菌；
（4）筛选阳性克隆，进行测序验证。
4. 基因表达分析
（1）构建表达载体，将目的基因克隆至表达载体；
（2）转化宿主菌，如大肠杆菌；
（3）提取表达蛋白，进行SDS-PAGE电泳；
（4）检测蛋白表达水平。
5. 基因功能验证
（1）根据基因功能，设计实验方案；
（2）进行相关实验，如基因敲除、基因过表达等；
（3）分析实验结果，验证基因功能。
七、实验结果
1. 基因提取
（1）琼脂糖凝胶电泳检测DNA，观察DNA条带；
（2）记录DNA浓度。
2. 基因扩增
（1）琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，观察条带；
（2）记录PCR产物大小。
3. 基因克隆 （1）测序结果与基因序列比对，验证克隆成功；
（2）记录克隆载体序列。
4. 基因表达分析
（1）SDS-PAGE电泳检测表达蛋白，观察条带；
（2）记录蛋白表达水平。
5. 基因功能验证
（1）根据实验结果，分析基因功能；
基因工程研究寒假基因工程研究实践报告
基因工程研究寒假基因工程研究实践报告
基因工程研究实践报告
尊敬的导师：
经过一个月的寒假基因工程研究实践，我将在此向您提交我所进行的实验以及所获得的研究结果。以下是我报告的详细内容：
一、引言
基因工程作为现代生物技术的重要分支，对于疾病治疗、农业改良和环境保护等方面具有巨大的潜力。因此，我对基因工程展开了独立的寒假研究，并期望能够通过实验探索基因工程的相关领域。
二、实验材料与方法
1. 实验材料：细菌培养基、DNA片段、限制酶、连接酶、荧光标记剂等；
2. 方法：包括DNA提取、限制酶切、凝胶电泳、连接反应和转化等步骤。
三、实验步骤
1. DNA提取：从植物样品中提取目标基因的DNA；
2. 限制酶切：将目标DNA和限制酶一起反应，切割出感兴趣的DNA片段； 3. 凝胶电泳：将切割后的DNA片段与DNA分子量标准在凝胶上进行电泳分离与检测；
4. 连接反应：将目标DNA片段连接到目标载体上；
5. 转化：将连接好的重组DNA导入大肠杆菌，让其进行繁殖。
四、实验结果与分析
通过实验，我成功地进行了DNA的提取、限制酶切、凝胶电泳、连接反应和转化等步骤。在凝胶电泳结果中，我观察到预期大小的DNA片段，并且在荧光检测中也发现了目标基因的表达。
五、讨论与思考
通过这个寒假的基因工程研究实践，我不仅学到了实验操作的技能，更重要的是对基因工程的原理和应用有了更深入的了解。同时，我也认识到基因工程的发展在生物科学领域具有非常重要的意义，它为人类的生活和健康带来了无限的希望。
六、结论
基于我的寒假基因工程研究实践，我认为基因工程是一门极具潜力的科学领域，它为疾病治疗、农业发展和环境保护等提供了新的途径和选择。通过自己的实践，我也更加深刻地体会到了实验研究的重要性和挑战性。 感谢导师在研究实践过程中给予我的指导和支持，我将继续深入学习基因工程的理论与实践，为推动生物科学领域的发展贡献自己的力量。
敬上。
生物基因工程实习报告
一、实习背景
随着科学技术的不断发展，生物基因工程作为一门新兴的综合性学科，在我国得到了广泛的应用和发展。为了更好地了解生物基因工程的理论和实践，提高自己的专业素养，我于2022年7月1日至2022年7月31日在XX生物科技有限公司进行了为期一个月的生物基因工程实习。
二、实习目的
1. 深入了解生物基因工程的基本原理和操作技术；
2. 掌握实验室基本操作技能，提高实验操作水平；
3. 培养团队合作精神和创新能力；
4. 为今后从事生物基因工程相关领域的研究和工作打下坚实基础。
三、实习内容
1. 实习单位介绍
XX生物科技有限公司是一家专注于生物基因工程领域的高新技术企业，主要从事基因测序、基因编辑、基因治疗等方面的研发和应用。公司拥有先进的实验室设备和技术团队，为我国生物基因工程领域的发展做出了重要贡献。
2. 实习项目
（1）基因测序：学习并掌握DNA提取、PCR扩增、Sanger测序等基因测序技术，对样本进行基因测序，分析基因序列信息。
（2）基因编辑：学习CRISPR/Cas9等基因编辑技术，对目标基因进行定点修改，验证基因编辑效果。
（3）基因治疗：了解基因治疗的基本原理和操作流程，参与基因治疗项目的实施。
3. 实习过程
（1）第一阶段：学习生物基因工程基本原理和操作技术，熟悉实验室设备。
（2）第二阶段：参与基因测序、基因编辑、基因治疗等项目的具体实施，提高实验操作水平。
（3）第三阶段：总结实习过程中的经验教训，撰写实习报告。 四、实习收获
1. 理论知识方面：通过实习，我对生物基因工程的基本原理和操作技术有了更深入的了解，为今后从事相关领域的研究和工作打下了坚实基础。
2. 实践技能方面：在实习过程中，我熟练掌握了DNA提取、PCR扩增、Sanger测序、CRISPR/Cas9等实验操作技能，提高了自己的实验操作水平。
3. 团队合作方面：在实习过程中，我与团队成员共同完成了多个项目，培养了良好的团队合作精神。
基因工程实训总结
。
-可编辑修改- 《基因工程实训》总结报告
实习总结
第一天，我们是进行实验试剂的配置，以备实验过程中大家共同使用。每组都有自己的任务，我们组是配置最后检测重组蛋白的制备SDS-PAGE电泳胶的试剂。以及酵母划板培养。
试剂的配置是很关键的一步，如果没有依据要求配制试剂的话，可能会导致实验失败。比如，最后一天在电泳时，样品一直都没有沉到点样孔底部，而marker却能沉下去，可能是因为sample
buffer 的配置出了问题。最终我们用了老师的buffer，效果有所改善。却还是有上浮的迹象，也有可能是缓冲液的密度太大。
第二天，我们进行了PCR扩增产物、琼脂糖凝胶电泳检测产物、HindⅢ和Xba I双酶切、含载体的DH5α扩大培养等操作。
从中我学到了PCR仪器程序设置的方法。以及对其它现有操作技术进行巩固和提升。
第三天，我们从大肠杆菌中提取了质粒载体，并且对其进行双酶切，与同样双酶切的目的基因进行连接，以及挑单克隆酵母过夜培养。
双酶切可以极大的避免载体与目的基因自身环化，提高了连接的效率。通过实验，我能够更好的理解书本上的理论知识。
第四天，连接产物转化大肠杆菌。
通过热激的方法使带有目的基因的载体进入大肠杆菌细胞中，因为DNA是吸附在细胞表面的，因此在热激过程中避免晃动过大。同样的在实验过程中，我们会注意到平时书本上不会注明的小点，但这往往也是实验成败的关键因素之一。
第五天，酵母感受态的制备与转化 。
-可编辑修改- 细胞应该处于对数生长期，是感受态细胞制备与成功转化的关键。我们在实验过程中，OD600一直都无法达到0.4~0.6的范围。可能是培养基的配置出了问题，也有可能是分光光度计本身的仪器问题。我们为了达到一定的细胞数量取了两倍体积的菌液。
第六天、第七天，提取重组质粒酶切鉴定与酵母单克隆过夜培养。
真核表达系统有蛋白质的加工修饰系统，可以得到有生物活性的蛋白质。且酵母是分泌型的表达系统，不仅不易被细胞内蛋白酶降解还可以免去破碎细胞提取蛋白的麻烦。通过实验过程中的思考，结合理论知识，尝试了解实验设计者的思路，多问几个为什么。
基因工程试验(综合).
实验一大肠杆菌基因组DNA提取与检测
、目的要求
1．学习并掌握用试剂盒提取细菌基因组 DNA；
2. 学习使用分光光度计检测基因组 DNA浓度
二、基本原理
本实验利用 TaKaRa MiniBEST Bacterial Genomic DNA Extraction Kit Ver.2.0 试剂盒提取大 肠杆菌基因组DNA。该试剂盒采用了溶菌酶裂解细胞，由细胞裂解液裂解细胞释放基因组
DNA，然后使用特殊的相分离法除去蛋白质、多糖、脂质等杂质，再结合 DNA制备膜技术纯
化细菌基因组 DNA。
三、实验材料
TaKaRa MiniBEST Bacterial Genomic DNA Extraction Kit Ver.2.0 试剂盒
无水乙醇
四、操作步骤
1. 大肠杆菌的培养： 从平板培养基上挑选单菌落接种至 1〜4 ml 的液体培养基中过夜培养。
2. 取1〜4 ml的过夜培养菌液，10,000 rpm 离心2分钟，弃上清。
3. 用150 pl的SP Buffer （含RNase A1 ）充分悬浮细菌沉淀。
注）注意不要残留细小菌块，可以使用振荡器（ Vortex） 等剧烈振荡使菌体充分悬浮。
4. 加入20 p的Lysozyme溶液，均匀混合后室温静置5分钟。
5. 加入30 p的EDTA Buffer ，均匀混合后室温静置5分钟。
6. 加入200 p的Solution A，剧烈振荡后65 C保温10分钟。
注）① 若Solution Ab现沉淀，请于65C加热溶解， 待恢复至室温后使用。② 65E保温1（分1. 实验菌株： 大肠杆菌 TG1
2. 实验试剂： LB液体培养基
3. 实验仪器： 移液枪，低温离心机，水浴锅， eppedorft,振荡器
钟后，溶液将由乳浊液变成透明液。如果此时溶液没有变成透明，说明细菌没有裂解，基因
组DNA各不能释放。
7.加入400 M的Solution B ，剧烈振荡15秒。
基因工程酶切实验报告
一、实验目的
1. 学习并掌握基因工程中常用的酶切技术；
2. 掌握DNA酶切实验的基本操作步骤；
3. 熟悉DNA酶切反应的原理及影响因素。
二、实验原理
DNA酶切实验是基因工程中的重要技术之一，通过限制性核酸内切酶（RE）对DNA分子进行切割，产生具有特定黏性末端或平末端的DNA片段。这些DNA片段可用于后续的基因克隆、基因表达等实验。
限制性核酸内切酶（RE）是一种能够识别并切割特定DNA序列的酶，其识别序列通常由4-6个核苷酸组成。根据酶切位点的不同，RE可分为三类：I类、II类和III类。其中，II类RE是最常用的酶切酶，具有高度特异性和稳定性。
三、实验材料
1. DNA模板：提取自细菌、动物或植物细胞的总DNA；
2. 限制性核酸内切酶（RE）：根据目的基因序列选择合适的酶切酶；
3. 10×酶切缓冲液；
4. dNTPs（脱氧核糖核苷三磷酸）；
5. Taq DNA聚合酶；
6. 1×PCR缓冲液；
7. 25℃反应体系；
8. 灭菌水；
9. 1.5%琼脂糖凝胶；
10. 电泳仪；
11. DNA回收试剂盒。
四、实验步骤 1. DNA酶切反应：取2μl DNA模板，加入4μl 10×酶切缓冲液、2μl RE、2μl
dNTPs、4μl Taq DNA聚合酶和2μl灭菌水，混匀后置于PCR仪上，进行酶切反应。反应条件根据酶切酶说明书进行调整。
2. PCR扩增：取酶切反应产物，加入2μl 1×PCR缓冲液、2μl Taq DNA聚合酶、2μl dNTPs、2μl 10×PCR缓冲液和4μl灭菌水，混匀后置于PCR仪上，进行PCR扩增。扩增条件根据目的基因序列和酶切酶说明书进行调整。
3. 琼脂糖凝胶电泳：将PCR扩增产物加入1.5%琼脂糖凝胶中，进行电泳分离。根据DNA分子大小，调整电泳电压和时间。
4. DNA回收：将凝胶中的目的DNA片段用DNA回收试剂盒回收，得到纯化的DNA片段。
基因工程实验 2
实验一 从植物中提取DNA
【实验目的】
1、掌握提取DNA的技术及原理
2、学习DNA提取的方法
【实验原理】 首先研磨粉碎的植物组织在LP缓冲液裂解完全，基因组DNA被释放出来。在加入DA缓冲液沉淀后，去除大部分杂质。然后，由于加入的P Binding缓冲液中适当的盐分及pH值得作用下，DNA被特异吸附于Biospin膜上。通过洗涤，可将蛋白质等残留的杂质去除。最后使用Elution Buffer将DNA从膜上洗脱下来，从而获得基因组DNA。
【实验材料】 自己采取某种植物的叶子
1. 实验试剂 植物DNA提取试剂盒
【实验操作】
1. 剪取约0.2-0.5g叶片于冷研钵后，迅速倒入液氮用玻棒研磨成为粉末，分装到1.5ml的离心管中。
2. 加入450μl LP缓冲液，并混合均匀。
3. 于65℃环境下温浴15分钟，温浴中可间或震荡离心管2-3次，然后移出。
4. 加入150μlDA缓冲液，混合均匀后于冰浴中放置5分钟。
5. 将混合物全部转移至Shredder spin colum，于离心机中3分钟。
6. 将滤液转移至一个新的1.5ml离心管。
7. 加750μl P Binding缓冲液，并混合均匀。
8. 将混合液转移至Spin column。于离心机离心1分钟，弃去接液管中的液体。
9. 向Spin column中加入500μl的G Binding Buffer。离心30秒，弃去接液管中液体。
10. 向Spin column中加入600μl的Wash Buffer。离心30秒，弃去接液管中液体。
11. 重复步骤10一次。
12. 再次将Spin column离心1分钟，并将Spin column 转移至一个新的1.5ml离心管中。
13. 向Spin column中加入100μl的 Elution Buffer，并于室温温育1分钟。离心1分钟，取离心管中的液体含有DNA。