高效液相色谱法测定果汁中的防腐剂和甜味剂的含量

从表 １ 可以看出， 实验的重复性很好， 用膜过 滤和离心处理以后的样品测定， 其相对误差小于 ２％ ， 测 定 结 果 基 本 吻 合 ， 可 以 用 高 速 离 心 的 方 法 来代替膜处理的方法对样品进行净化。 ２．４ 回收率试验
称 取 样 品 Ａ０３ 约 ５ｇ 于 ２５ｍｌ 的 容 量 瓶 中 ， 加 入 ５ｍｌ 的 １００μｇ／ｍｌ 的 混 标 ， 分 别 依 上 述 的 离 心 和 膜过滤前处理方法处理以后， 进行高效液相色谱分 析， 测定回收率。实验结果见表 ２、表 ３。
２ 结果与讨论
２．１ 苯甲酸、山梨酸和糖精钠的色谱图（ 图 １）
ｍＡｕ
８０
６０
４０
２０
１３．４８７ 山梨酸
８．３６７ 苯甲酸
１６．７４８ 糖精钠
０
５
１０
１５
２０ ｍｉｎ
图 １ 苯甲酸、山梨酸和糖精钠的液相色谱图
２．２ 标准曲线绘制 用逐级稀释法配制 ０．５μｇ／ｍｌ、１．０μｇ／ｍｌ、５．０μｇ／ｍｌ、
糖精化学名称为邻苯甲酰磺酰亚胺， 化学式为 （ Ｃ６Ｈ（４ ＣＯ）（ ＳＯ２） ＮＨ） 。市场销售的商品糖精实际是 易溶性的邻苯甲酰磺酰亚胺的钠盐， 简称糖精钠、 糖 精 。 糖 精 钠 的 甜 度 约 为 蔗 糖 的 ４５０～５５０ 倍 ， 故 其十万分之一的水溶液即有甜味感， 浓度高了以后 还会出现苦味。
７
２５００
２０００
６
１５００
＋
１０００
５
＋
５００
４
１２
３
＋
＋
０
５０
Ａｍｏｕｎ（ｔ !ｇ／ｍｌ）
图２ 苯甲酸的标准曲线
１００．４４５ １００
它们的线性相关系数 都 达 到 了 ０．９９９ 以 上 ， 说 明这几种物质在此浓度范围内有很好的线性关系， 可用于定量分析。 ２．３ 果 汁 中 苯 甲 酸 、 山 梨 酸 和 糖 精 钠 的 比 对 实 验 结果
年 第 １０ 卷 第 ７ 期
４０
０ 前言
苯甲酸和山梨酸作为最常用的防腐剂， 在饮料 中的使用很普遍。防腐剂用于抑制食品微生物繁殖 或杀灭， 可防腐、保鲜和保持其良好品质。
苯甲酸为弱酸型防腐剂， 呈白色鳞状片或针状 结晶， 化学性质稳定， 常温下在水中溶解度小， ２５℃时溶解度 为 Ｏ．３４ｇ／１００ｍｌ， 熔 点 为 １２１～１２３℃， 苯甲酸为一元芳香羧酸， 酸性较弱， 其抑菌作用随 环境 ｐＨ 不同而有很大差异 ， 作 用 随 酸 度 的 增 加 而 加强， 在碱性环境中则失去抗菌作用。未解离的分 子状态的苯甲酸在酸性溶液中比在中性溶液中大 １００ 倍 。 而 解 离 度 又 与 溶 液 的 ｐＨ 有 关 。 苯 甲 酸 只 有以未解离的分子状态才容易透过细胞膜， 进入细 菌内发挥抗菌作用。
检测与分析
Ｄｅ ｔｅ ｃｔｉｏｎ ＆ Ａｎａ ｌｙｓ ｉｓ
高效液相色谱法测定果汁中的 防腐剂和甜味剂的含量
张晓亮
（ 本溪市信息中心， 辽宁本溪 １１７０００）
摘要： 以国标法（ ＧＢ／Ｔ５００９．２８－ １９９６ 食品中糖精钠的测定方法， ＧＢ／Ｔ５００９．２９－ １９９６ 食品中苯甲酸和山梨酸的测定方法） 为基础， 通过大量分析对比高速离心法对样品净化在实践中应用的可行性。实验证明， 此法可以比常规检验中使用的膜 过滤的方法省时， 更可以节约试验费用。 关键词： 防腐剂和甜味剂； 高速离心法； 膜过滤法 中图分类号： Ｏ６５２．７ 文献标识码： Ａ
２００７
! 果汁冷杀菌技术
《
! 微胶囊技术及其在果蔬饮料和茶饮料中的应用
回收率 （ ％） １０２．６ １０２．０ １０７．４
４ 结论
从实验结果可以看出， 本文用高速离心机对样 品进行净化的方法与国标中的膜过滤的方法测定结
Ｄｅ ｔｅ ｃｔｉｏｎ ＆ Ａｎａ ｌｙｓ ｉｓ
果基本吻合， 准确度、灵敏度和检测限都很好地满 足了要求， 回收率十分理想。该方法可以节省易耗 品， 又大大缩短了样品的前处理时间。
ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｏ－ ｌｉａｎｇ （Ｂｅｎｘｉ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｂｅｎｘｉ １１７０００， Ｌｉａｏｎｉｎｇ， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ＧＢ／Ｔ５００９．２８ － １９９６ “ Ｔｈｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｏｄｉｕｍ Ｓａｃｃｈａｒｉｎ ｉｎ Ｆｏｏｄ” ａｎｄ ＧＢ／Ｔ５００９．２９ － １９９６“Ｔｈｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｅｎｚｏｉｃ Ａｃｉｄ ａｎｄ Ｓｏｒｂｉｃ Ａｃｉｄ ｉｎ Ｆｏｏｄ”， ｔｈｅ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｈｉｇｈ－ ｓｐｅｅｄ ｃｅｎ－ ｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓａｍｐｌｅｓ ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ａ ｌｏｔ ｏｆ ａｎａｌｙｓｅｓ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｈａｓ ｔｈｅ ａｄｖａｎｔａｇｅｓ ｏｆ ｓａｖｉｎｇ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｃｕｔｔｉｎｇ ｄｏｗｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｏｓｔ ｏｖｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｕｓｅｄ ｉｎ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｄｅｔｅｒ－ ｍｉｎａｔｉｏｎｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ａｎｄ ｓｗｅｅｔｅｎｅｒ； ｈｉｇｈ－ ｓｐｅｅｄ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ； ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ
２００７
!!!!!
年 第 １０ 卷 第 ７ 期
４１
检测与分析
表 ３ 样品经离心处理后的回收率
项目
原测定值 （ μｇ／ｍｌ）（ ｎ＝３）
苯甲酸
２４．２０
山梨酸
２４．９６
糖精钠
３３．６７
加标量 （ μｇ／ｍｌ）
２０．００ ２０．００ ２０．００
加标测定值 （ μｇ／ｍｌ）（ ｎ＝３）
４４．７２ ４５．３６ ５５．１４
糖精钠是有机化工合成产品， 制造糖精的原料 主要有甲苯、氯磺酸、邻甲苯胺等， 均为石油化工 产品。甲苯易挥发和燃烧， 甚至引起爆炸， 大量摄 入人体后会引起急性中毒， 对人体健康危害较大；
氯磺酸极易吸水分解产生氯化氢气体， 对人体有 害， 并易爆炸； 糖精生产过程中产生的中间体物质 对人体健康也有危害。糖精在生产过程中还会严重 污染环境。
表 ２ 样品经膜过滤处理后的回收率
项目
原测定值 （ μｇ／ｍｌ）（ ｎ＝３）
加标量
加标测定值
（ μｇ／ｍｌ） （ μｇ／ｍｌ）（ ｎ＝３）
回收率 （ ％）
苯甲酸 山梨酸 糖精钠
２３．９０ ２４．４２ ３３．４０
２０．００ ２０．００ ２０．００
４４．３ｌ ４４．５８ ５５．４４
１０２ １００．８ １１０．２
因此， 美国等发达国家的法律规定， 在食物中 使用糖精时， 必须在标签上注明“使用本产品可能 对健康有害， 本产品含有可以导致实验动物癌症的 糖精”的警示。西方一些发达国家都对糖精严格控 制使用， 其控制标准一般为不超过消费食糖总量的 ５％ ， 且主要用于牙膏等工业用途。
上述添加剂过量使用会危害人们的身体健康， 因此国家标准中对其使用量有明确的规定， 作为卫 生指标， 防腐剂（ 主要是苯甲酸和山梨酸） 和糖精钠 是饮料必测项目。防腐剂常用测定方法主要有气相 色 谱 法 ［２］， 液 相 色 谱 法 ［１］、 薄 层 色 谱 法 ［３］和 比 色 法 ［１］ 等。本文采用的方法， 以国标法（ ＧＢ／Ｔ５００９．２８－ １９９６ 食 品 中 糖 精 钠 的 测 定 方 法 ， ＧＢ／Ｔ５００９．２９－ １９９６ 食 品中苯甲酸和山梨酸的测定方法） 为基础， 用高速离 心的方法代替膜过滤的方法对样品净化， 经过大量 实验证明， 此法省时， 更可以节约试验费用。
Ａ０１
Ｏ．１３７４ ０．００３０ ０．１３８９ ０．００１６ １．０９
山
Ａ０２ 梨 Ｏ．１１４８ ０．００４１ ０．１１６２ ０．００２２ １．２２
酸
Ａ０３
０．１２２１ ０．００３０ ０．１２３５ ０．００１６ １．１５
Ａ０１ 糖
Ａ０２ 精 钠
Ａ０３
０．１８８５ ０．００３５ ０．１８８６ ０．００１８ ０．０５ ０．１０９１ ０．００４０ ０．１１０９ ０．００４６ １．６５ ０．１６４８ ０．００４２ ０．１６６５ ０．００１７ １．０３
１０．０μｇ／ｍｌ、２０．０μｇ／ｍｌ、５０．０μｇ／ｍｌ 和 １００．０μｇ／ｍｌ 的 系列标准溶液。进样绘制标准曲线。
苯甲酸的标准曲线见图 ２， 相关系数 ０．９９９９４。
Ａｒｅａ
!
３０００ ３．２５ｅ＋００３
! ! ! ! ! ! !
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!
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参考文献
［１］ 食品中糖精钠的测定方法 ＧＢ５００９．２８［Ｓ］． ［２］ 用高效液相色谱仪检测食品中防腐剂和糖精钠方法的改进［Ｊ］． 轻 工标准与质量， ２０００（ ６） ． ［３］ 食品中山梨酸、苯甲酸的测定方法 ＧＢ５００９．２９［Ｓ］．
Ｄｅｔｅｒ ｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒ ｅｓｅｒ ｖａｔｉｖｅｓ ａｎｄ ｓｗｅｅｔｅｎｅｒ ｓ ｉｎ ｆｒ ｕｉｔ ｊｕｉｃｅ ｂｙ ＨＰＬＣ
１ 实验部分
１．１ 标准和试剂 甲醇： 色谱纯 醋酸铵： 分析纯
［收稿日期］ ２００７－ ０４－ １３ ［作者简介］ 张晓亮（ １９５３－ ） ， 女， 毕业于辽宁商业专科学校食品分析专业， 工程师。
２００７
Ｄｅ ｔｅ ｃｔｉｏｎ ＆ Ａｎａ ｌｙｓ ｉｓ
检测与分析
氨水（ １∶１） ： 氨水加等体积水混合 碳酸氢钠： 分析纯 苯 甲 酸 标 准 储 备 液：准 确 称 取 苯 甲 酸 ０．１０００ｇ， 加 ２％碳酸氢钠溶液 １ｍｌ， 搅拌溶解， 转移至 １００ｍｌ， 为储备液（ １．００ｍｇ／ｍ１） 。 山 梨 酸 标 准 储 备 液 ： 准 确 称 取 ０．１０００ｇ 山 梨 酸 标 准 品 于 小 烧 杯 中 ， 加 碳 酸 氢 钠 溶 液（ ２０ｇ／Ｌ） ５ｍｌ， 加热溶解后， 再转移至 ｌ００ｍｌ 的容 量 瓶 中 ， 用 水 定 容到刻度。作为山梨酸的储备溶液。 糖 精 钠 标 准 储 备 液 ： 准 确 称 取 ０．０８５１ｇ 无 水 糖 精 钠（ １２０℃ 烘 干 ４ｈ） 放 入 １００ｍｌ 容 量 瓶 中 ， 加 水 溶 解 ， 并 加 水 定 容 １００ｍｌ 为 储 备 液（ １．００ｍｇ／ｍｌ） （ 以 Ｃ７Ｈ４ＮＮａＳＯ３·２Ｈ２Ｏ 计） 。 分 别 取 含 量 为 １．００ｍｇ／ｍｌ 的 山 梨 酸 、 苯 甲 酸 、 糖精钠标准储备溶液各 １０ｍｌ 于 １００ｍｌ 的容量瓶中， 加水定容到 ｌ００ｍｌ。 １．２ 高效液相色谱条件 ＨＰ－ １１００ 型 高 效 液 相 色 谱 仪（ 四 元 梯 度 泵 、 真 空 在 线 脱 气 机 、 自 动 进 样 器 、 二 极 管 阵 列 检 测 器） （ １） 色谱柱： ｃｌｏｖｅｒｘｉｌ Ｃ１８４．６ＩＤ×１５０ｍｍ （ ２） 流动相： 甲醇（ ５％ ） ∶醋酸铵溶液（ ９５％ ） （ ３） 流速： １ｍｌ／ｍｉｎ （ ４） 测量波长： ２３０ｎｍ １．３ 样品来源及其前处理 样品为实验室提供的 ３ 种橙汁， 每种均含苯甲 酸、山梨酸和糖精钠 ３ 种添加剂。分别精确称取样 品 各 约 ５ｇ， 用 配 制 好 的 氨 水 溶 液 调 ｐＨ 约 为 ７， 然 后 在 ２５ｒｎｌ 的 容 量 瓶 中 用 水 定 容 到 刻 度 。 样 液 用 超 声 波 提 取 ４０ｍｉｎ， 取 部 分 样 液 ， 然 后 用 转 速 为 １６０００ｒｐｍ 的 速 度 离 心 ５ｍｉｎ， 上 清 液 等 待 进 样 。 另 取一部分样液用 ０．４５μｍ 的微孔滤膜过滤， 等待进 样。
表１ 苯甲酸、山梨酸和糖精钠的比对实验结果
样品 检测 膜过滤样
离心样 标准
标准பைடு நூலகம்差
编号 项目 （ ｇ／ｋｇ） ｎ＝４
（ ｇ／ｋｇ） ｎ＝４ 偏差
相对误 差（ ％）
Ａ０１ 苯
Ａ０２ 甲 酸
Ａ０３
０．１８１７ ０．００６９ ０．１８２２ ０．００５４ ０．６２ ０．０９９５ ０．００７９ ０．１０１４ ０．００５６ １．９０ ０．１１５０ ０．００５２ ０．１１５９ ０．００３９ ０．７８