实验四细菌的接种培养法与生长现象的观察
百度文库 1 实验四 细菌的接种培养法与生长现象的观察 【目的和要求】 1．掌握无菌技术，建立无菌观念；明确无菌操作时注意要点。 2．掌握细菌的接种、分离培养方法和接种环的制作方法。 3．熟悉细菌生长现象的观察方法。 【试剂与器材】 1．菌种：葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌等。 2．培养基：固体、半固体、液体培养基。 3．其他：温箱、酒精灯、接种环、接种针、L形玻棒、打火机、记号笔等。 【实验内容】 一、细菌的接种工具 1．接种环和接种针：其结构包括环（针）、金属柄、绝缘柄三部分（见图4-1）。其中环（针）部分最佳材料为白金丝，因其受热和散热速度快，硬度适宜，不易生锈且经久耐用，但因为价格昂贵而限制了其应用。目前实验室常用的是经济实用的300~500W电热镍鉻丝。一般要求接种环长5~8cm，直径为2~4mm，定量接种环的容量为0.001ml。
图4-1 接种环和接种针 接种环（针）在使用之前需检查镍鉻丝是否呈直线，若有弯曲，需用吸管或接种环的另一端将其压直；若环不圆，可将镍鉻丝前端放在吸管尖部缠绕一圈，再将镍鉻丝突出的部分朝内压紧。 接种环用于固体、液体培养基的接种，接种针用于半固体培养基的接种。 2．L形玻棒：由直径2~3mm的玻璃棒弯曲成L形制成。在使用之前用厚纸包扎后置高压蒸汽灭菌，或沾取无水乙醇后在火焰上烧灼灭菌。主要用于液体标本涂布接种。 二、细菌的接种方法 1．液体培养基的接种 该法主要用于细菌的增菌培养或进行细菌的生化反应。 方法：（图4-2） （1）先将接种环在火焰上烧灼灭菌，待冷却后挑取少许细菌。 （2）左手拿试管，右手持接种环，用右手其余手指将试管塞打开，试管口通过火焰烧灼灭菌。 （3）将接种环在贴近液面的管壁上上下碾磨数次，使细菌均匀分布于培养基中。 （4）将试管口灭菌后加塞，接种环烧灼灭菌后放回原处。 （5）在试管上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。 百度文库 2 图4-2 液体培养基接种法 2．半固体培养基的接种 该法可用于保存菌种、观察细菌的动力或进行细菌的生化反应。 方法：（图4-3） （1）先将接种针在火焰上烧灼灭菌，待冷却后挑取少许菌落。 （2）左手拿试管，右手持接种针，将试管塞打开后，试管口通过火焰灭菌，将接种针从培养基的中心向下垂直穿刺接种至试管底上方约5mm处（勿穿至管底），然后由原穿刺线退出， （3）将试管口灭菌后加塞，接种针烧灼灭菌后放回原处。 （4）在试管上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。
图4-3 半固体培养基接种法 3．平板划线接种法 该法可将标本中的多种细菌分散成单个菌落，有利于细菌的分纯和进一步鉴定。 方法： （1）连续划线法（图4-4） 1）先将接种环在火焰上烧灼灭菌，待冷却后挑取少许菌落。 2）左手斜持平板，用手掌托着平板底部，五指固定平板边缘，在酒精灯旁以拇指、食指和中指将平板盖撑开大约30~45°角，将已挑取细菌的接种环先在平板一侧边缘均匀涂布，然后运用腕力将接种环在平板上自上而下，来回划线。划线要密，但不能重叠，充分利用平板的面积，不能划破琼脂表面，并注意无菌操作，避免空气中的细菌污染。 3）划线完毕，将平板扣入平板盖，接种环烧灼灭菌后放回原处。 4）在平板底上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。
图4-4 固体培养基连续划线法 （2）分区划线法（图4-5） 1）先将接种环在火焰上烧灼灭菌，待冷却后挑取少许菌落。 2）同上法将平板盖打开约30~45°角，将已挑取细菌的接种环在平板一端（1区）内作来回划线，再在2、3、4区依次划线，每区的划线须有数条线与上区交叉接触，每划完一区是否需要烧灼接种环依标本中的菌量多少而定，每区线间需保持一定距离，线条要密而不重百度文库 3 复。 3）划线完毕，将平板扣入平板盖，接种环烧灼灭菌后放回原处。 4）在平板底上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。
图4-5 固体培养基分区划线法 4．斜面培养基接种法（图4-6） 斜面培养基主要用于细菌的纯培养，以进一步鉴定细菌或保存菌种。 （1）将接种环（或接种针）在火焰上烧灼灭菌，待冷却后以无菌操作挑取少许菌落。 （2）左手拿试管，打开试管塞后，试管口通过火焰灭菌，再将取有细菌的接种环由斜面底部向上划一直线，再由下至上在斜面上作曲线划线。 （3）试管口灭菌后加塞，接种环烧灼灭菌后放回原处。 （4）在试管上做好标记，经35℃培养18~24h后观察结果。
图4-6 斜面培养基接种法 5．涂布接种法 本法主要用于活菌计数和药敏试验。 （1）活菌计数：取一定稀释度的菌液0.1ml滴在平板上，用无菌L型玻璃棒将液滴涂布均匀，盖上平板盖，经35℃培养18~24h后计数菌落，则每毫升所含活菌数=菌落数×10×稀释倍数。 （2）直接涂布法：多用于纸片法和管碟法药敏试验。先配制一定浓度的菌液，用无菌棉签蘸取菌液后，在管壁上将多余的液体挤去，在MH琼脂平板上按三个方向均匀涂布3次，最后沿平板边缘涂一周。盖上平板盖，置室温放置5min使平板表面稍干，然后用无菌镊子将药敏纸片贴在培养基表面，或向竖在平板表面的牛津小杯内加入不同浓度的药物，经35℃培养18~24h后观察结果，测定抑菌圈直径，按判断标准判定结果。 6．倾注培养法 此法常用于标本或样品中活菌计数。 （1）方法： 1）将标本用无菌生理盐水稀释成不同浓度：10-1、10-2、10-3、10-4、10-5等。 2）取不同稀释度的标本各1ml分别注入直径90mm无菌平皿，迅速加入溶化并冷却至约50℃的营养琼脂15ml，轻轻转动平板使之充分混匀，待凝固后翻转平板。 3）置35℃温箱孵育18~24h，计数菌落形成单位（colony forming unit，CFU），按下式算出每ml标本中的细菌数： 百度文库 4 1ml标本中的活菌数=全平板CFU×稀释倍数 7．细菌接种的注意事项 （1）细菌接种过程中需注意无菌操作，避免污染，因此每一步操作均需严格按要求进行。操作时不宜说话或将口鼻靠近培养基表面，以免呼吸道排出的细菌污染培养基。 （2）所有操作均需在酒精灯火焰附近进行，平皿盖、试管塞、瓶塞均应拿在手上打开（具体见前述），禁止将盖或塞事先取下放置在桌面上。 （3）取菌种前灼烧接种针（环）时要将镍鉻丝烧红，烧红的接种针（环）稍事冷却再取菌种，以免烧死菌种。 （4）取菌时注意菌落不要取得太多，应蘸取而不宜刮取，否则平板划线很难分离出单个菌落。 （5）平板划线时注意掌握好划线的力度和角度，用力不能过重，接种环和培养基表面大约呈30~40°角，划线要密而不重复，充分利用培养基，并注意不能划破平板。半固体培养基接种时注意穿刺线要直，并沿原穿刺线退出。 （6）接种完毕后，需在培养基上做好标记再放置温箱孵育。废弃的有菌材料（如玻片、有菌的平板、试管、吸管等）均需灭菌后再清洗。发生有菌材料污染应及时进行消毒处理。 三、细菌的培养方法 1．需氧培养法 该法适用于需氧菌和兼性厌氧菌。将接种后的培养基（试管放试管架上，平板底上盖下）置35℃培养箱，培养18-24h。大多数细菌生长速度快，在孵育18~24h后即可见到生长现象，但若标本中的菌量少或生长速度慢的细菌（如结核分支杆菌），则需培养3~7天甚至4~8周后才能观察到生长现象。 2．CO2培养法 （1）CO2孵育箱：能自动调节箱内CO2的浓度和温度，使用方便。 （2）烛缸法：取一有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨口处上涂上凡士林。将接种后的培养基放入缸中，并在缸内放一支点燃的蜡烛，加盖密封。随着缸内蜡烛燃烧产生的CO2增加，蜡烛逐渐自行熄灭，此时缸内的CO2浓度约为5~10%，置35℃培养箱孵育18~24h后观察结果。（见图4-7）
图4-7 烛缸法 （3）化学法（重碳酸钠-盐酸法）：按每升容积重碳酸钠0.4g与1mol/L盐酸0.35ml比例，分别将二种试剂置于容器内，将容器放置在标本缸中，密封后倾斜容器，使二种试剂接触混合产生CO2。该法适用于奈瑟菌和布鲁菌等苛养菌的培养。 3．微需氧培养：先用真空泵将容器内的空气排尽，再注入5%O2、10%CO2、85%N2的混合气体，然后置于35℃培养箱孵育后观察结果。该法适用于空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等微需氧菌的分离培养。 4．厌氧培养法： （1）厌氧罐培养法：用理化方法使容器内形成无氧环境，用于专性厌氧菌培养。常用百度文库 5 的方法有抽气换气法和气体发生袋法。 1）抽气换气法：将已接种的培养基放入真空干燥缸或厌氧罐中，再放入催化剂钯粒和指示剂美蓝。先用真空泵将缸内抽成负压99.99kPa（750mmHg），再充入无氧氮气，反复三次，最后充入80%N2、10%H2和10%CO2混合气体，若缸内呈无氧状态，则指示剂美蓝为无色。每次观察标本后需重新抽气换气，用过的钯粒经160℃2h干烤后可重复使用。 2）气体发生袋法（Gas-pak法）：该法需以下二种容器：厌氧罐——是由透明聚碳酸酯或不锈钢制成，盖内有金属网状容器，其内装有厌氧指示剂美蓝和用铝箔包裹的催化剂钯粒；气体发生袋——是一种铝箔袋，其内装有硼氢化钠-氯化钴合剂、碳酸氢钠-柠檬酸合剂各1丸和1张滤纸条，使用时剪去特定部位，注入10ml水，水沿滤纸渗入到二种试剂中，发生下列化学反应，产生H2和CO2。立即将气体发生袋放入罐内，密封罐盖，使气体释放到罐中。 C6H8O7+3NaHCO3→Na3(C6H5O7)+3H2O+3CO2↑ NaBH4+2H2O→NaBO2+4H2↑ （2）厌氧袋法：厌氧袋是用无毒透明、不透气的复合塑料薄膜制成。袋中装有催化剂钯粒和2支安瓿，分别装有H2、CO2发生器（化学药品，成分同上）、指示剂美蓝。使用时将接种细菌的平板放入袋中，密封袋口，先将袋中装有化学药品的安瓿折断，几分钟后再折断装有美蓝的安瓿，若美蓝为无色则表示袋内已处于无氧状态，置35℃温箱孵育。 （3）需氧菌共生法：将已知专性需氧菌（如枯草芽胞杆菌）和待检厌氧菌分别接种到2个大小相同的平板上，将两者合拢，缝隙用透明胶密封，置35℃温箱培养，需氧菌生长过程中消耗氧气，待氧气耗尽后，厌氧菌即开始生长。 （4）平皿焦性没食子酸法：按每100ml容积加入焦性没食子酸1g和2.5mol/LNaOH 10ml（也可用Na2CO3）的比例，先将焦性没食子酸放入平皿盖背面的灭菌纱布中，再滴入NaOH，立即将接种细菌的平板扣上，用熔化的石蜡密封平皿和平皿盖的缝隙，置35℃温箱培养。 （5）庖肉培养基法：将庖肉培养基上面的石蜡熔化，用毛细管吸取标本后接种于培养基中，待石蜡凝固后置37℃孵育。用于培养基中的肉渣可吸收氧气，石蜡凝固后起隔绝空气的作用，从而使培养基内呈无氧状态。 （6）厌氧手套箱培养法：厌氧手套箱是目前国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作。箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。使用时将物品放入箱内，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气、换气（H2，CO2，N2）使之达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。箱内保持厌氧状态，是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中残余氧化合成水的原理。该箱可调节温度，本身是孵箱或将孵箱附在其内。该法适于作厌氧菌的大量培养研究。 四、细菌生长现象的观察 1．液体培养基中的生长现象： 浑浊生长（如葡萄球菌）、沉淀生长（如链球菌）、菌膜生长（如枯草杆菌）。 观察要点：注意观察培养基的透明度、管底和液面上是否有细菌生长。 2．半固体培养基中的生长现象： （1）无鞭毛的细菌：仅沿穿刺线生长，穿刺线清晰，周围培养基透明（如葡萄球菌）。 （2）有鞭毛的细菌：沿穿刺线向四周扩散生长，穿刺线边缘呈羽毛状，周围培养基变浑浊（如大肠埃希菌）。 观察要点：注意观察穿刺线是否清晰、周围的培养基是否混浊。 3．固体培养基中的生长现象： 菌落：由一个细菌生长繁殖而形成的一个肉眼可见的细菌集团。因来源相同，同一个菌
分区划线法
培养基
常用玻璃器材的准备 培养基的成分和作用 培养基的种类 培养基的制备
细菌的接种与培养
无菌技术 细菌检验的操作需在无菌室或超净工作 台内进行。 无菌室、超净工作台使用前后需进行消 毒。 细菌检验使用的物品使用前后需严格灭 菌 标本的采集 无菌试管、平皿的使用
细菌接种的基本程序
1.光滑型菌落（Smooth type Colony） ：又称S型 2.粗糙型菌落（Rough type Colony）：又称R型 3.粘液型菌落（Mucoid type Colony）又称M型
菌落（S型）
culture plate
菌落(R型)
细菌在液体培养基中的生长现象
混浊 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于厌氧菌
细菌在固体培养基中的生长现象
菌落 ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形 成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透 明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型 （ M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。
菌落的三个类型：
无动力 现象
有动力 现象
细菌培养法
一般培养（需氧培养）： ★培养温度：37℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h
斜面接种法及接种后菌落生长 示意图
取菌的方法
接种后菌落生长示意图菌苔(lawn)
【实验结果观察记录】
细菌生长情况的观察 观察琼脂平板表面生长的各种菌落， 注意其大小、形 状、边缘、表面结 构、透明度、颜色等性状。
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本
沾取标本
接种
灭菌接种环
杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境
细菌培养实验报告模板(3篇)
第1篇一、实验目的1. 熟悉细菌培养的基本原理和方法。
2. 学习观察细菌的生长特征。
3. 掌握无菌技术操作，提高实验技能。
二、实验原理细菌是单细胞微生物，具有繁殖速度快、形态多样等特点。
在适宜的培养基和条件下，细菌可以生长繁殖，形成肉眼可见的菌落。
通过细菌培养，可以观察其生长特征，为后续研究提供基础。
三、实验材料1. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、营养肉汤培养基等。
2. 细菌：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
3. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、移液器、无菌操作台等。
4. 实验试剂：无菌水、无菌棉签、无菌生理盐水等。
四、实验方法1. 培养基制备：按照说明书配制牛肉膏蛋白胨培养基和营养肉汤培养基，高压蒸汽灭菌后备用。
2. 细菌接种：将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基和营养肉汤培养基中。
3. 恒温培养：将接种后的培养基放入恒温培养箱中，分别于37℃和30℃下培养24小时。
4. 观察记录：观察细菌在培养基上的生长情况，记录菌落形态、大小、颜色等特征。
5. 无菌技术操作：在无菌操作台中，进行接种、移液等操作，防止污染。
五、实验结果1. 金黄色葡萄球菌在牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好，形成圆形、金黄色、表面光滑的菌落。
2. 大肠杆菌在营养肉汤培养基上生长良好，形成乳白色、浑浊的菌液。
六、实验分析1. 通过本次实验，掌握了细菌培养的基本原理和方法。
2. 观察到金黄色葡萄球菌和大肠杆菌在不同培养基和温度下的生长特征，为后续研究提供了基础。
3. 在实验过程中，注意无菌技术操作，防止污染。
七、实验讨论1. 细菌在不同培养基和温度下的生长情况有何差异？2. 如何提高细菌培养的效率？3. 在实验过程中，如何避免污染？八、实验总结通过本次细菌培养实验，我们了解了细菌的基本特征和生长规律，掌握了无菌技术操作，为后续研究奠定了基础。
在实验过程中，我们要注重细节，严格按照操作规程进行，确保实验结果的准确性。
细菌分离培养、接种技术及培养方法-精品医学课件
革兰染色法
Gram staining
临床微生物与免疫学检验教研室
一、实验目的
1.掌握细菌涂片制作方法； 2.掌握革兰染色法和细菌的基本形态； 3.了解革兰染色法的临床意义。
二、革兰染色原理
原理
细胞壁学说 等电点学说 化学学说
革兰阳性菌 细胞壁肽聚糖形成网状 结构，乙醇处理时，脱水 引起网状结构孔径变小， 通透性降低，结晶紫-碘 复合物不易脱去
实验步骤和方法
1)连续划线分离法：①将接种环火焰灭菌，待冷后取标 本少许；②左手持平板，五指固定平皿盖边缘，向外反 转手掌，装有培养基的平板于手掌内用拇指、小指和 无名指固定，并将平板边缘稍微提高呈现30～45度角， 置酒精灯前上方5～6cm；③右手持已取材的接种环， 先在平板一端涂布，然后快速大幅度左右来回以密而 不重的曲线形式作连续划线接种，使整个平板布满曲 线④划线完毕，将平板作好标记，置35℃孵育18-
革兰阴性菌
细胞壁肽聚糖含量低， 脂类物质含量高，乙醇处 理时，脂类物质溶解，细 胞壁的通透性增加，结晶 紫-碘复合物易脱去
三、实验器材和试剂
1.标本 ：金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的培养物。 2.试剂 ：革兰染液。 3.其他 ：载玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、显微镜。
四、操作步骤
1. 细菌涂片制备 ⑴涂片：取洁净载玻片一张，按无菌的方法取1~2环生 理盐水于载玻片上，按无菌的方法各取葡萄球菌和大肠埃 菌 培养物少许，在生理盐水中均匀研磨，涂好的菌膜直径 1cm左右。 ⑵干燥：室温下自然干燥或于酒精火焰半尺高处烘干。 ⑶固定：火焰加热法。目的是杀死细菌，并使菌体与载 玻片粘附牢固，染色时不致于被染液和水冲掉。
培养方法
2 二氧化碳培养法 (1)二氧化碳孵箱：能自动调节二氧化碳的含量和温度， 使用较为方便。 (2)烛缸法：取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨 口处涂以凡士林。将接种细菌的培养基放入缸中，点燃 缸内蜡烛，加盖密封。当蜡烛燃烧时会消耗缸内氧气并 产生CO2，随着缸内氧气的逐渐减少，蜡烛会自行熄 灭，此时缸内CO2浓度约为5％左右。 (3)化学法(重碳酸钠一盐酸法)：（自学）
医学微生物学实验报告
医学微生物学实验报告（本科）实验室：姓名：学号：班级：海南医学院微生物学与免疫学教研室编写二OO四年四月第一次实验【实验内容】实验一微生物的形态与结构的观察实验二微生物的分布【结果记录及判定】实验一微生物的形态与结构的观察1、细菌正常形态及特殊结构的观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：特殊结构：霍乱弧菌破伤风梭菌芽胞形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：肺炎链球菌荚膜伤寒沙门菌鞭毛形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：炭疽杆菌脑膜炎球菌2、病毒包涵体观察及记录（示教）：绘图并描述描述：狂犬病毒包涵体（H-E染色）3、真菌的形态观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：白假丝酵母菌皮肤癣菌4、革兰染色法结果观察及记录：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌大肠埃希菌实验二微生物的分布结果记录：1、空气中的细菌种类（种）：数量（个）：2、水中细菌数检测（1）自来水中细菌的种类（种）：数量（个）：（2）污水中细菌的种类（种）：数量（个）：3、物品和手指上的细菌检查（记录本人结果）物品表面的细菌种类（种）：数量（个）：手指表面的细菌种类（种）：数量（个）：结论：成绩：_________________批改教师签名：____________批改时间：________________第二次实验【实验内容】实验三微生物的分离培养实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌【结果记录及判定】实验三微生物的培养1、细菌分离培养方法（分区划线接种法），生长现象为：2、纯种细菌接种技术（1）琼脂斜面接种培养，大肠埃希菌生长现象：（2）液体培养基接种法，大肠埃希菌生长现象：（3）半固体培养基接种技术①标本名称：大肠埃希菌半固体培养基②标本名称：痢疾志贺菌半固体培养基穿刺线：穿刺线：培养基：培养基：结论：结论：3、沙保弱琼脂平板上的真菌菌落观察及描述（示教）：类酵母型菌落：丝状菌落：实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌一、紫外线灭菌法（示教）玻璃盖遮住平板的一半现象：现象：分析：分析：二、机械除菌法（示教）：1、未经过滤的液体培养基培养后的现象：2、经过过滤的液体培养基培养后的现象：分析：成绩：_________________批改教师签名：____________第三次实验【实验内容】实验六细菌的致病性实验七化脓性感染的细菌学检查【结果记录及分析】实验六细菌的致病性一、透明质酸酶试验（示教，实验动物：家兔）测量试验侧与对照测的黑墨水扩散范围（cm×cm）：实验侧：对照侧：分析：二、破伤风外毒素的毒素作用（实验动物：小鼠）实验现象：实验侧：对照侧：分析：实验七化脓性感染的细菌学检查一、病原性球菌的形态观察（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌链球菌形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌二、病原性球菌的鉴别：三、血清学试验抗“O”试验（乳胶凝集法）实验现象：阳性对照：阴性对照：标本1：标本2：结果判定：标本1为________，标本2为_________。
枯草芽孢杆菌实验报告
微生物技术综合实验年级：13级生物工程（专升本）班级：学号：姓名：徐红贞指导老师：刘凤霞教授日期：二零一三十月五号目录1实验目的及原理 (1)1.1实验目的 (1)1.2实验原理 (1)2实验材料 (1)2.1实验仪器 (1)2.2实验试剂 (1)2.3培养基 (2)2.3.1 生长培养基 (2)2.3.2鉴定培养基 (2)2.3.3摇瓶培养基 (2)3试验方法 (2)3.1仪器的准备 (2)3.2培养基的配置 (2)3.3初步筛选及鉴定 (2)3.3.1采集土样 (3)3.3.2富集培养 (3)3.3.3稀释分离、纯化 (3)3.3.4初筛 (3)3.4复筛及鉴定 (4)3.4.1革兰染色 (4)3.5酶活力的测定 (4)3.5.1摇瓶培养 (4)3.5.2酶液稀释 (4)3.5.3酶液测定 (4)4结果分析 (5)4.1平板涂布分离 (5)4.2平板划线分离 (5)4.3初筛 (5)4.4复筛 (5)4.5摇瓶培养 (6)4.6酶活力测定 (6)5参考资料 (7)6附录 (8)微生物上游技术综合实验枯草芽孢杆菌的分离、纯化、筛选及鉴定1.实验目的及原理1.1实验目的（1）学习从土壤中分离、纯化枯草芽孢杆菌的原理和方法。
（2）学习掌握枯草芽孢杆菌的鉴定方法。
（3）掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力的测定的原理和方法。
（4）培养学生综合应用微生物实验方法的能力。
（5）培养学生自行设计实验流程、综合分析问题解决问题和判断实验结果的能力。
1.2实验原理选择合适与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
将土壤稀释液倒在不同类型的培养基平板上，在适宜的环境中培养几天，细菌或是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。
将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养基中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。
细菌的培养与分离技术
细菌的培养与分离技术● 考点◇ 基本条件◇ 细菌的接种与分离技术◇ 细菌培养的方法◇ 细菌的生长现象◇ 细菌L型的检查【内容讲解】细菌培养是将细菌接种到培养基内，并在适当的环境内，使细菌生长和繁殖。
分离培养是指从标本中培养出细菌或者从混有多种细菌的标本中将各个菌种分别同时培养出来。
一、基本条件（一）细菌实验室（二）无菌实验室（三）基本设备和器具（一）细菌实验室标本接种、培养、分离、鉴定及药敏试验等工作都要在此完成。
1.细菌室必须安装严密的门窗，以防室内环境受到外界的污染。
且室内禁用风扇，避免细菌的播散。
2.细菌室必须安装供空气消毒的紫外线灯，置于操作台上面lm处，每天开始工作前照射20min。
对其消毒效果要定期检查，及时更换失效的灯管。
3.室内应备有消毒剂，用于试验中发生菌液洒溅时的及时消毒处理。
同时还应备有供工作人员浸手用的盛有消毒剂的水盆、肥皂及自来水源等。
4.室内操作台须每日用消毒剂擦洗，地面至少一周用消毒剂擦洗l次。
5.对接收的标本、无菌器具、用过的物品等应明显分开并放在指定位置。
同时要对用过的物品及时进行灭菌处理。
6.细菌室根据当地的气温特点，安装空调机，以适合细菌实验工作。
同时室内应设置必要的消防设备。
（二）无菌实验室无菌实验室是细菌实验室内用于无菌操作的小室，其内部装饰、消毒条件要求更严格。
1.无菌室应完全封闭，人员出入应有两道门，其间应隔有缓冲区。
2.用前应以紫外线消毒30min，定期用乳酸或甲醛熏蒸，彻底消毒。
3.在无菌室中一般仅限于分装无菌的培养基及传染性强的细菌的接种，不进行有菌标本的分离及其他操作。
4.无菌室内应仅限操作人员进入，而且进入无菌室应着隔离衣和专用鞋，操作时戴口罩，随时保证室内的无菌状态。
5.条件有限的实验室，可用超净工作台代替无菌实验室进行相应的操作。
超净工作台应选择垂直气流通风方式。
6.无菌室应配备空调设备，保证不因室温而影响工作。
（三）基本设备和器具温箱、C02培养箱、厌氧培养设备；显微镜；高压蒸气灭菌器、干烤箱；冰箱和冷藏柜；接种器具，包括接种环和接种针；pH计；火焰灯或酒精灯；平皿、试管、吸管等玻璃器皿，以及离心机、天平等。
鸡胚接种实验报告
一、实验目的1. 掌握鸡胚接种病毒的方法和步骤。
2. 了解病毒在鸡胚中的生长和繁殖情况。
3. 学习病毒分离和培养的基本原理。
二、实验原理鸡胚接种是一种常用的病毒分离和培养方法。
病毒接种于鸡胚后，能够在鸡胚中繁殖，从而便于观察和分析病毒的生物学特性。
本实验主要采用尿囊腔接种法，将病毒接种于鸡胚尿囊腔内，观察病毒在鸡胚中的生长和繁殖情况。
三、实验材料1. 实验动物：9-11日龄的鸡胚。
2. 实验试剂：新城疫病毒悬液、生理盐水、碘酒、酒精、消毒棉球等。
3. 实验仪器：照蛋器、无菌手术刀、镊子、注射器、剪刀、平皿等。
四、实验方法1. 鸡胚准备：取9-11日龄的鸡胚，用碘酒和酒精消毒鸡胚蛋壳，用手术刀在鸡胚气室处划一小孔，用注射器吸取适量新城疫病毒悬液。
2. 尿囊腔接种：将鸡胚置于卵盘上，气室端向上，用注射器将病毒悬液注入鸡胚尿囊腔内，注入量约为0.1-0.2ml。
3. 孵育：将接种后的鸡胚放入37℃孵卵箱中孵育48-72小时。
4. 观察：定期观察鸡胚的生长发育情况，记录死亡、畸形等现象。
5. 病毒分离：取出死亡鸡胚，无菌操作下取出尿囊液，进行病毒分离和培养。
五、实验结果1. 接种后，部分鸡胚出现死亡现象，死亡时间集中在接种后24-48小时。
2. 死亡鸡胚的尿囊液中检测到新城疫病毒。
3. 成活鸡胚生长发育正常，未出现明显异常。
六、实验讨论1. 鸡胚接种是一种简单、有效的病毒分离和培养方法，适用于多种病毒的研究。
2. 尿囊腔接种法是一种常用的鸡胚接种方法，适用于新城疫病毒、流感病毒等多种病毒。
3. 本实验结果表明，新城疫病毒能够在鸡胚中繁殖，为新城疫病毒的研究提供了有力支持。
七、实验结论1. 鸡胚接种是一种简单、有效的病毒分离和培养方法。
2. 尿囊腔接种法适用于新城疫病毒等多种病毒的分离和培养。
3. 本实验成功分离和培养了新城疫病毒，为新城疫病毒的研究提供了有力支持。
八、实验心得1. 实验过程中，无菌操作至关重要，需严格按照无菌操作规程进行。
细菌的结合实验实验报告
一、实验目的1. 掌握细菌结合实验的基本原理和方法。
2. 学习利用细菌结合实验检测细菌间的相互作用。
3. 了解不同细菌结合实验在微生物学研究中的应用。
二、实验原理细菌结合实验是一种检测细菌间相互作用的实验方法。
实验过程中，将两种细菌混合培养，观察并记录细菌间的结合现象。
若两种细菌之间存在结合，则表现为菌落生长缓慢或形成卫星现象；若不存在结合，则菌落生长正常。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌等。
2. 实验试剂：牛肉膏蛋白胨培养基、生理盐水、无菌水、酒精灯、接种环、显微镜等。
四、实验步骤1. 制备实验菌株：将金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌等分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基，37℃恒温培养24小时，制成菌悬液。
2. 设置实验组：将金黄色葡萄球菌与肺炎链球菌、大肠杆菌与沙门氏菌分别混合，接种于牛肉膏蛋白胨培养基平板，37℃恒温培养24小时。
3. 设置对照组：将金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌分别单独接种于牛肉膏蛋白胨培养基平板，37℃恒温培养24小时。
4. 观察并记录实验结果：观察实验组和对照组的菌落生长情况，记录菌落生长速度、形态等。
5. 利用显微镜观察卫星现象：将实验组平板上的菌落挑取少量，制作涂片，用显微镜观察卫星现象。
五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌与肺炎链球菌混合培养时，菌落生长速度较慢，形成卫星现象。
2. 大肠杆菌与沙门氏菌混合培养时，菌落生长速度较快，未形成卫星现象。
3. 金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌单独培养时，菌落生长正常。
4. 通过显微镜观察，金黄色葡萄球菌与肺炎链球菌混合培养时，肺炎链球菌周围出现卫星现象。
六、实验结论1. 金黄色葡萄球菌与肺炎链球菌之间存在结合作用。
2. 大肠杆菌与沙门氏菌之间不存在结合作用。
七、实验讨论1. 细菌结合实验在微生物学研究中具有重要意义，可用于检测细菌间的相互作用，了解细菌间的相互关系。
微生物检验学之细菌的培养与分离技术
细菌的培养与分离技术一、基本条件二、细菌的接种与分离技术三、细菌培养的方法四、细菌的生长现象五、细菌L型的检查一、基本条件（一）细菌实验室中华人民共和国卫士行业标准中的微生物和生物医学实验室生物安全通过准则。
1.细菌室必须安装严密的门窗，以防室内环境受到外界的污染。
且室内禁用风扇，避免细菌的播散。
2.细菌室必须安装供空气消毒的紫外线灯，置于操作台上面1m处，每天开始工作前照射20min。
3.室内应备有消毒剂，用于试验中发生菌液洒溅时的及时消毒处理。
同时还应备有供工作人员浸手用的盛有消毒剂的水盆、肥皂及自来水源等，应安装冲眼器。
4.室内操作台须每日用消毒剂擦洗，地面至少一周用消毒剂擦洗1次。
5.对接收的标本、无菌器具、用过的物品等应明显分开并放在指定位置。
同时要对用过的物品及时进行灭菌处理。
6.细菌室根据当地的气温特点，安装空调机，以适合细菌实验工作。
同时室内应设置必要的消防设备。
7.细菌室必须安装生物安全柜，工作人员应在柜内处理标本及病原微生物。
（二）无菌实验室无菌实验室是细菌实验室内用于无菌操作的小室，其内部装饰、消毒条件要求更严格。
1.无菌室应完全封闭，人员出入应有两道门，其间应隔有缓冲区。
2.用前应以紫外线消毒30min，定期用乳酸或甲醛熏蒸，彻底消毒。
3.在无菌室中一般仅限于分装无菌的培养基及传染性强的细菌的接种，不进行有菌标本的分离及其他操作。
4.无菌室内应仅限操作人员进入，而且进入无菌室应着隔离衣和专用鞋，操作时戴口罩，随时保证室内的无菌状态。
5.无菌室应配备空调设备，保证不因室温而影响工作。
（三）基本设备和器具细菌实验室内必须具备的设备和器具有：用于细菌培养的温箱、CO2培养箱、厌氧培养设备；用于观察细菌形态及标本直接镜检的显微镜；用于物品灭菌的高压蒸气灭菌器、干烤箱；用于储存培养基、诊断用血清、抗生素及菌种等的冰箱和冷藏柜；用于挑取标本、接种等的接种器具，包括接种环和接种针；制备培养基时用的pH计；细菌检验操作时用于接种器具灭菌的火焰灯或酒精灯；还有各种必用的平皿、试管、吸管等玻璃器皿，以及离心机、天平等。
细菌的培养法
实验一细菌的培养法一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖，以便进一步观察和研究它们的各种生物学特性。
为了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除采用适宜的培养基并考虑到其他的培养条件（如温度、湿度、酸碱度、气体等）之外，掌握各种分离培养和接种的基本技术，也是重要环节。
在土壤、水、空气、以及人和动、植物体中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。
若要研究其中某种细菌，就必须先将各种细菌进行分离，以得到只含有这一种细菌的纯培养。
分离培养细菌的方法有多种，平板划线法即是其中之一。
该法主要是借划线而将混杂的细菌在琼脂平板表面分散开，使单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个的细菌集团（即菌落）以达到分离纯种的目的。
当细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养基中，以测试其各种生物学性状。
一般可用斜面、液体和半固体培养基来检验细菌的培养特征，因此接种方法可相应的分为三种。
斜面培养基接种法常用于细菌的大量繁殖，保存菌种，或观察其某些生化特性。
琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基均可用此法接种。
液体培养基接种法可用于观察细菌不同的生长状况，有的呈均匀混浊，有的呈沉淀生长，还有的在液体表面形成菌膜；另外还可以供测定细菌生化特性之用。
凡是肉汤、葡萄糖蛋白胨水以及各种单糖发酵管等液体培养基均用此法接种。
穿刺接种法常用于半固体琼脂培养基、醋酸铅培养基、双糖铁培养基等的接种，前者用于测定细菌的动力，后二者则用于观察细菌的生化反应。
目的要求1．学习和掌握细菌分离和培养的各种基本技术。
2．进一步熟悉和掌握微生物的无菌操作技术。
材料1．菌种和培养基平板划线接种法斜面培养基接种法液体培养基接种法穿刺接种法菌种葡萄球菌和大肠杆菌的混合菌液大肠杆菌培养物大肠杆菌培养物枯草杆菌培养物变形杆菌培养物痢疾杆菌培养物培养基* 普通琼脂平板琼脂斜面培养基普通肉汤培养基半固体琼脂培养基 *各培养基的组成及配置方法参见书后附录。