酶抑制分光光度法
酶抑制分光光度法
蔬菜农药残留速测检测方法--酶抑制分光光度法，其原理是：有机磷和氨基甲酸酯类农药具有抑制昆虫中枢和周围神经系统中的乙酰胆碱酯酶活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死的原理来检测此类农药在食品中的综合残留量。此种方法主要是从家蝇或其他动物组织中提取乙酰胆碱酯酶（AChE），将乙酰胆碱酯酶与蔬菜样本提取液混合，以碘化乙酰硫代胆碱（ATChI）为底物，二硫双硝基苯甲酸（DTNB）为显色剂，经一段时间比色后，根据吸光值，计算乙酰胆碱酯酶受抑制程度。
造成蔬菜和水果农药残留问题主要是有机磷和氨基甲酸酯类农药。如果蔬菜的提取液中不含农药或残留量很低，酶的活性就不被抑制，试验中加入的基质就被水解，水解产物与加入的显色剂反应产生颜色或水解产物本身有颜色。如果蔬菜提取液中含有农药并残留量较高时，酶的活性被抑制，基质就不被水解，当加入显色剂时就不显色或颜色变化很小。在分光光度计测定吸光度的变化，计算出抑制率就可以判断农药（有机磷和氨基甲酸酯类）的残留情况。抑制率与农药浓度呈正相关。残留农药对乙酰胆碱酯酶活性有抑制，浓度越高，抑制率越高。仪器通过测定酶与底物、显色剂显色反应变色速率，并与空白对照比较求得酶抑制率，从而判定农药残留量是否超标。农药残留速测检测结果判断标准（国标）中明确，酶抑制率≥50%时，蔬菜中某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒超标。
酶抑制率法对部分农药的检出限
农药名称
检出限／（㎎／㎏）
农药名称
检出限／（㎎／㎏）
敌敌畏
0.1
氧化乐果
0.8
对硫磷
1.0
甲基异柳磷
5.0
辛硫磷
0.3
灭多威
0.1
甲胺磷
2.0
丁硫克百威
0.05
马拉硫磷
4.0
敌百虫
0.2
乐果
3.0
呋喃丹
0.05
AChE
化学反应式：
I(CH3)3NCH2CH2SOCCH3+H2O I(CH3)3NCH2CH2SH+CH3COOH
（ATChI）
碘化硫代胆碱与5,5,-二硫双硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-硫基-2-硝基苯甲酸（黄色），用溶液吸光度测出乙酰胆碱酯酶的催化活度。
clsi m07-a9 的标准方法
clsi m07-a9 的标准方法
CLSI M07-A9是由临床与实验室标准研究所（Clinical and
Laboratory Standards Institute）发布的有关定量酶抑制法的标准方法。
定量酶抑制法是一种用来测量化合物与特定酶之间相互作用的方法。该方法可以用于评估潜在药物与酶抑制剂之间的互作以及确定酶激动剂的浓度。在该方法中，通过测量酶活性的减少来确定酶抑制剂与酶的结合状态和亲和力。
在CLSI M07-A9中，详细描述了定量酶抑制法的步骤、试剂、设备和数据分析方法。以下是一些相关参考内容，不包含任何链接：
1. 方法原理：
定量酶抑制法基于酶抑制剂与酶结合后导致酶活性降低的原理。通过测量正常酶活性与被抑制的酶活性之间的差异，可以了解抑制剂与酶的相互作用。
2. 试剂和设备：
- 酶：选择与研究目的相符的酶，确保质量可靠且具有稳定的酶活性。
- 抑制剂：选择潜在药物或其他化合物作为抑制剂，确保稳定性和高纯度。
- 基质：使用适当的底物来启动酶反应，并确保底物与酶的反应过程是特异性和可重复的。
- 试剂盒：准备包括酶、抑制剂和基质的试剂盒，确保每个试剂的质量和成分一致。
- 酶反应板：使用特定的酶反应板来容纳试剂，确保实验操作的可重复性和准确性。
- 分光光度计：选择适当的分光光度计来测量酶活性的变化。
3. 方法步骤：
- 实验前准备：准备标准曲线，根据需要稀释抑制剂和酶。
- 反应过程：将酶、底物和抑制剂加入到酶反应板中，确保反应条件一致，并设定适当的反应时间。
- 反应停止：通过加入适当的试剂停止酶反应，例如酸、碱或其他重金属离子。
- 测量光吸收：使用分光光度计测量产生的反应产物的光吸收，并记录吸光度值。
- 数据分析：根据标准曲线和酶活性的变化计算抑制剂与酶的亲和力等参数。
4. 数据分析方法：
- IC50值：通过绘制抑制效应与抑制剂浓度的曲线来计算半最大抑制浓度（IC50），该值表示抑制剂与酶结合的亲和力。
改进的分光光度计法测定食源性多肽血管紧张素转化酶的抑制活性
浙江大学学报（农业与生命科学版） ３７（２）：２１９～２２３，２０１１
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．
文章编号：１００８—９２０９（２０１１）０２—０２１９—０５ ＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８—９２０９．２０１１．０２．０１５
改进的分光光度计法测定食源性
多肽血管紧张素转化酶的抑制活性
高丹丹，曹郁生，麦曦
（南昌大学中德联合研究院食品科学与技术国家重点实验室，江西南昌３３００４７）
摘 要：在传统检测食源性多肽血管紧张素转化酶（ＡＣＥ）抑制肽体外活性方法的基础上，结合纸层析 测定马尿酸的方法对其进行改进，建立了一种新的分光光度法用于测定样品中ＡＣＥ的抑制活性．结果 表明：该方法确定的显色反应吸收波长为４５９ ｎｍ；最佳显色温度为４０℃；最佳显色时间为３０ ｍｉｎ；最佳
显色剂质量分数为０．５ ；用卡托普利和有ＡＣＥ抑制活性的棉籽蛋白肽作为样品进行检测验证，结果 表明，此方法简便、灵敏、准确、重复性好，可用于筛选食源性ＡＣＥ抑制肽．
关 键 词：血管紧张素转化酶；多肽；吸光值；抑制活性 中图分类号：ＴＳ ２０１．２ 文献标志码：Ａ
ＧＡＯ Ｄａｎ ｄａｎ，ＣＡＯ Ｙｕ—ｓｈｅｎｇ，ＭＡＩ Ｘｉ（Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｓｉｎｏ—Ｇｅｒｍａｎ Ｊｏｉｎｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｎａｎｃｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３００４ ７，Ｃｈｉｎａ） Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ａｓｓａｙ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ Ｉ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｆｏｏｄ－ ｄｅｒｉｖｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．），２０１１，３７（２）：２１９－２２３ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ Ｉ— ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ（ＡＣＥ）ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｐｌａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｐａｐｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｐｐｕｒｉｃ ａｃｉｄ（ＨＡ）ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｕｒｉｎｅ．Ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｏｆ ＨＡ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ａｔ ４５９ ｎｍ，ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ４０℃，ｔｉｍｅ ｆｏｒ ３０ ｒａｉｎ，ａｎｄ ｔｈｅ ＤＡＢ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ０．５ ． Ｃａｐｔｏｐｒｉｌ ａｎｄ ｃｏｔｔｏｎｓｅｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｓｈｏｗｉｎｇ ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ＡＣＥ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｉｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｐｒｏｖｅｄ ｔＯ ｂｅ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，ａｎｄ ｉｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ＡＣＥ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｆｏｏｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．
乙酰胆碱酯酶法在农药残留检测中的应用及质量控制
湖南农业科学２０１０，（３）：７１～７３，７６
乙酰胆碱酯酶法在农药残留检测中的应用及质量控制
李卫霞
（重庆三峡学院生物系，重庆万州４０４０００）
摘要：对乙酰胆碱酯酶法的基本原理、类型及其在农药残留检测中的应用进行了概述，并对农药残留检测质量控制过程中存 在的问题作了重点讨论。 关键词：乙酰胆碱酯酶；农药残留；质量控制 中图分类号：￥４８１．８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—０６０Ｘ（２０１０）０３—００７１—０３
随着工农业生产的迅速发展，环境污染问题日
益显著，人们对于食品安全问题也日益关注。我国
是农药使用的大国，农药残留的现象普遍存在，然
而现有的一些检测方法已无法满足高灵敏度的要 求，因此建立一种快速灵敏的农药残留检测方法具
有十分重要的意义。酶法操作简单，速度快，不需要
昂贵仪器，适应于现场监测和对大规模食品的筛选 检测，被广泛用于野外农药残留快速检验。可用于
农药残留检测的酶有羧酸酯酶、丁酰胆碱酯酶及乙
酰胆碱酯酶，前两种酶受干扰因素多，假阳性率高，
专一性低［１－２］。乙酰胆碱酯酶（ａｃｅｔｖｌｃｈ０ｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ， ＡＣｈＥ）由于具有较好敏感性及较高的活性，在有机
磷和氨基甲酸酯类农药检测中应用广泛。
１乙酰胆碱酯酶法原理
乙酰胆碱酯酶是生物神经传导中的一种关键
性酶，能够高效水解神经递质乙酰胆碱，保证神经
冲动在突触问的正常传导，它的活性受到有机磷或 氨基甲酸酯类农药的特异性抑制，故而成为监控有
机磷农药的靶酶［３１。乙酰胆碱酯酶催化的反应如下： ＨＯ（ＣＨ３）３ＮＣＨ２ＣＨ２ＯＯＣＣＨ３（乙酰胆碱）＋
Ｈ２０一Ｈ０（ＣＨ３）３ＮＣＨ２ＣＨ２０Ｈ（胆碱）＋ＣＨ３ＣＯＯＨ 利用这一特性，用滤纸片或电极作为载体，将 乙酰胆碱酯酶吸附在上面，加入显色剂，如果酶的
活性没有被抑制，则生成的产物可以使显色剂显 色，如果被测样品中含有农药残留则酶活性被抑制
不能生成水解产物，显色剂不显色。根据颜色的变
紫外分光光度法测定中药中黄嘌呤氧化酶抑制活性研究
紫外分光光度法测定中药中黄嘌呤氧化酶抑制活性研究
罗六保;谢志鹏
【期刊名称】《化学世界》
【年(卷),期】2009()5
【摘 要】黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制剂是一类重要的抗痛风药物。寻求具有强XOD抑制活性的天然药物及其活性成分具有重要意义。采用紫外分光光度法对一系列中药中XOD抑制活性进行了直接测定。考察了抑制活性最强药物各部分的活性,并对其主要活性部位分离出了一个活性成分,最后采用IR、MS1、H NMR和13C
NMR分析手段对其进行了鉴定。结果表明,丹皮具有最强XOD抑制活性,乙酸乙酯部分为其主要活性部位,没食子酸为其活性成分之一。
【总页数】4页(P273-275)
【关键词】黄嘌呤氧化酶抑制活性;紫外分光光度法;中药;活性部位;活性成分
【作 者】罗六保;谢志鹏
【作者单位】江西应用技术职业学院应用化学系;江西理工大学化学系
【正文语种】中 文
【中图分类】O657.32
【相关文献】
1.中药提取物中黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选 [J], 黎莉;戴立珍;杨靖;方继德
2.红花中黄酮类成分对黄嘌呤氧化酶抑制活性的研究 [J], 于思慧;宋慧鹏;高雯;张慧 3.离心超滤质谱法筛选中药复方二妙丸中黄嘌呤氧化酶抑制剂 [J], 徐晨;刘舒;刘志强;宋凤瑞
4.9种中药提取物黄嘌呤氧化酶抑制活性研究 [J], 杨道茂;欧阳明安
5.9种通络祛风中药提取物对黄嘌呤氧化酶的体外抑制活性研究 [J], 李芮; 马良会;
王栋; 张春雷; 周孟; 廖尚高
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紫外-荧光分光光度法联用测定熊果酸对胰脂肪酶的抑制作用
紫外-荧光分光光度法联用测定熊果酸对胰脂肪酶的抑制作用
单萍;赵淑娥
【摘 要】在pH 8.0的Tris-HCl缓冲体系中,应用紫外-荧光分光度法作为研究手段,结合酶抑制动力学,研究了熊果酸对胰脂肪酶的抑制作用、抑制类型和抑制动力学常数,并探讨了熊果酸对胰脂肪酶表面疏水性的影响.结果表明,熊果酸是一种的竞争型胰脂肪酶抑制剂(半抑制率IC50为1.87±0.05 mg/mL,抑制常数Ki为0.68±0.03 mg/mL),且失活动力学时间进程能够证明熊果酸能很快的与胰脂肪酶发生作用并迅速的降低酶的活性;荧光光谱分析显示木犀草素能显著增强酪氨酸酶的表面疏水性,使胰脂肪酶活性位点的内部疏水性区域暴露出来,诱发了胰脂肪酶的解折叠,最终导致胰脂肪酶活性的降低.
【期刊名称】《江西科学》
【年(卷),期】2014(032)003
【总页数】4页(P309-311,407)
【关键词】紫外-荧光分光光度法;熊果酸;胰脂肪酶;抑制作用;表面疏水性
【作 者】单萍;赵淑娥
【作者单位】江西省工业和信息化委员会信息中心,330046,南昌;江西省分析测试研究所,330029,南昌
【正文语种】中 文
【中图分类】O657.3
0 引言
肥胖严重危害人体健康，其产生与体内脂肪酶的活性有着密切的关系。在食物的消化吸收过程中，人体所摄入的大部分脂肪都是在脂肪酶的作用下，降解为甘油二酯、单甘油酯、甘油和脂肪酸，而后在小肠被吸收利用[1]。在这一过程中，胰脂肪酶起着重要的作用。如能有效控制胰脂肪酶的活性，便可减少食物中脂肪的消化吸收，从而有望控制和治疗肥胖。虽然半合成的胰脂肪酶抑制剂类药物奥利司他已作为减肥药物广泛应用于临床，但长期服用该药会出现腹泻、脂肪性大便、胃肠胀气等副作用[2]，而植物来源的天然化合物具有结构多样性、毒性较低、来源广泛等特点，因此从植物中筛选新的副作用更小的胰脂肪酶抑制剂一直是研究热点。近年来，中草药以其丰富的天然药源，轻微的不良反应，确切的疗效，独特的作用机理，独立的知识产权，较低的医疗成本等吸引人们的注意[3]。
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④分光光度法利⽤底物和产物光吸收性质的不同，可直接测定反应混合物中底物的减少量或产物的增加量。⼏乎所有的氧化还
原酶都使⽤该法测定。如还原型辅酶Ⅰ(NADH2)和辅酶Ⅱ(NADPH2)在340nm有吸收，⽽NAD和NADP在该波长下⽆吸收，脱氢
酶类可⽤该法测定。该法测定迅速简便，⾃动扫描分光光度计的使⽤对酶活⼒的快速准确的测定提供的极⼤的⽅便。
酶在⾷品加⼯中的作⽤就像⼀把双刃剑，我们要趋利避害。酶的积极作⽤我们要加强，在⾷品加⼯过程中添加酶制剂，使其作
⽤充分发挥;消极作⽤我们要尽量避免，可以通过加热等⽅法将酶灭活，消除其不利影响。
为了将酶更好地应⽤于⾷品加⼯，研究酶的性质是⼗分必要的。⽽紫外-可见分光光度法是研究酶性质的重要⽅法之⼀。下⾯
我们来介绍⽤-可见分光光度计测定酶活的具体⽅法。
紫外-可见分光光度法测定酶活：
1. β⼀半乳糖苷酶
β⼀半乳糖苷酶，⼜称乳糖酶(Lactase)。能⽔解乳糖来降低乳制品的乳糖含量，从⽽提⾼乳制品的可消化性，⽤于低乳糖⽜奶
和⾮结晶型浓缩⽜奶的⽣产及奶酪风味的改变，同时还可⽤于⽣产低聚半乳糖。
【酶活测定】以ONPG为底物测定β-半乳糖苷酶活⼒。
【酶活定义】以ONPG为底物，37℃保温酶解，每分钟释放lµmol/L邻硝基酚的酶量，定义为1个酶活⼒单位。
2. 超氧化物歧化酶
超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，简称SOD)是⼀种⼗分重要的⽣物体防⽌氧化损伤的酶类，是⽣物体内超氧阴离⼦清
除剂，保护细胞免受损伤。SOD⼴泛存在于各类⽣物体内，所有好氧微⽣物细胞中都含有SOD。⾃1969年Mccord等⼈⾸次发
现了SOD ⽣物活性后，医学界对其医疗作⽤做了许多研究，证明它具有抗衰⽼、抗肿瘤、抗辐射、抗缺⾎、提⾼⼈体免疫⼒
等作⽤，被专家称为21世纪最有前途的药⽤酶。欧美国家已开始将其应⽤于医疗、⾷品、保健、化妆品等领域。
【酶活测定】在25℃4.5ml 50mmol/L pH8.3的K2HPO4- KH2PO4缓冲液中加⼊待测SOD样液，再加⼊10ul 50mmol/L的连苯
蔬菜农药残留快速检测技术介绍及注意事项
蔬菜农药残留快速检测技术介绍及注意事项
发布时间：2009-9-30 责任编辑：ggxnongab 点击：165 来源：甘谷县农安办
农药是把“双刃剑”，它是当前农业生产用于防治病、虫、杂草对农作物危害不可缺少的有毒化学物质，对促进农业增产有极其重要的作用。但是由于长期大量地不合理使用农药，极易形成农药残留。农药残留指使用农药后残留于生物体、农副产品和环境中的微量农药及其有毒的代谢物的总量。鉴于目前我国出现的农产品安全性问题以农药残留污染最为常见和严重，监控农药的合理使用，杜绝农药残留超标产品上市销售成为农产品质量安全工作的重中之重。控制农产品中农药残留量的关键环节之一就是对农产品中农药残留量及时、准确的分析检测，因此，在流通领域中加强对农残的快速检测已成为十分必要的监管措施。
一、农药残留检测方法
农药残留检测方法大致可分为三大类：生物测定法、化学分析法、兼生物及化学的免疫分析法和生化检测法。
（一）、农药残留的生物测定技术
利用指示生物的生理生化反应来判断农药残留及其污染情况，该方法一般作为引起中毒农产品现场检测。
（二）、农药残留的化学检测
用于农药残留的化学检测方法有分光光度法、极谱法、原子吸收光谱法、薄层层析法、气相色谱法、液相色谱法、同位素标记法、核磁共振波谱法、色质联用法等，这些分析方法有的灵敏度不高，有的需要昂贵的仪器，还有的需要特殊的设备。
（三）、农药残留的生化检测
有机磷与氨基甲酸酯农药共为神经系统乙酰胆碱脂酶抑制物，因此可以利用农药靶标酶-乙酰胆用碱酯酶（AChE）受抑制的程度来检测有机磷和氨基甲酸酯类农药。该方法具有快速方便、前处理简单、无需仪器或仪器相对简单，适用于现场的定性和半定量测定，目前已开发出了相应的各种速测卡和速测仪。我国现阶段的农药残留快速检测就是用了该方法，已上升为农业部行业标准，标准号为NY/T448-2001,名称为蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法，但方法只能用于测定有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂，其灵敏度和所使用的酶、显色反应时间和温度密切相关，经酶法检测出阳性后，需用标准仪器检验方法进一步检测，以鉴定残留农药品种及准确残留量。
浊点萃取-酶抑制-分光光度法测定蔬菜中有机磷农药残留量
浊点萃取-酶抑制-分光光度法测定蔬菜中有机磷农药残留量
肖珊美;罗小会
【期刊名称】《理化检验-化学分册》
【年(卷),期】2015(051)005
【总页数】3页(P713-715)
【作 者】肖珊美;罗小会
【作者单位】金华职业技术学院制药与材料工程学院,金华321017;金华职业技术学院制药与材料工程学院,金华321017
【正文语种】中 文
【中图分类】O657.32
农药对农副产品的产量提高具有显著的作用，但农药的不规范使用所引起的环境污染和对人体健康的危害已经引起了越来越多的关注。食品安全与人类生活密切相关，蔬菜水果中农药残留引起中毒事件屡有发生，为保护消费者健康，必须加强农药残留的检测和控制［1］。
测定有机磷农药残留普遍采用的方法有色谱法以及气相色谱-质谱法或液相色谱-质谱法，这些方法具有测定结果准确、灵敏度高等优点，但成本较高，耗时较长，且需要具有一定专业技术水平的人员才能进行操作，不适合现场检测［2-4］；酶抑制法是基于农药能抑制某些特定的生物酶（如乙酞胆碱酯酶、羧酸酯酶等）的活性，并借助特定的显色反应，通过肉眼观察或仪器读数进行判定，以定性或定量检测样品中农药残留的状况。酶抑制法因其操作过程简便，检测速度快，不需要昂贵仪器、检测成本低等优点，已经作为一种常用的农残检测方法得到广泛使用。但其灵敏性和重复性还有待提高［5-6］。
提高富集倍数可以同样倍率地提高检测灵敏度，如果提高富集倍数的方法是快速、方便、高效的，就可以用于快速检测的前处理。浊点萃取是一种新型的液液萃取技术，它以表面活性剂胶束水溶液的增溶特性和浊点现象为基础，通过改变温度、盐浓度等条件引发相分离，从而将疏水性物质与亲水性物质分离。该方法具有环保、快速、富集倍数大、经济、可实现联用等优点，已在金属离子络合物的萃取，蛋白质分离与纯化等方面得到广泛应用，近年来在农药残留、环境污染物、抗生素等方面应用也有报道［7-9］。但是将浊点萃取技术应用于农药残留快速检测尚未见报道。
几种残留有机磷检测方法比较论文
几种残留有机磷检测方法的比较
[摘要] 蔬菜瓜果是人们生活中不可缺少的重要食品。随着生活水平的日益提高，人们的消费观念发生了根本性改变。消费者对蔬菜瓜果的品种、结构和内在品质的要求越来越高，不仅要求品种多样、品质新鲜，而且要求卫生、安全、营养搭配齐全。但蔬菜瓜果的农药残留量又是人们面临的一个新问题，如何快速、安全可靠地检测出蔬菜瓜果的农药残留量，是降低人们农药中毒，保护消费者食品安全的有力保障。本文例举了几种蔬菜瓜果农药残留量的检测方法及其优缺点。
[关键词] 蔬菜瓜果；农药残留；检测；方法；优缺点
近年来，由于蔬菜瓜果的品种与栽培技术等方面改变，害虫的抗药性也普遍提高，农药的用量与施药的次数不断增加，尤其是有些菜农和果农大量使用杀虫剂，致使不少蔬菜瓜果的农药残留严重超标。农药残留在人体内不断累积，已引起各种严重疾病。因此，研究出有机磷农药快速、可靠、灵敏和实用的农药残留分析方法，使其不受时间、地点、场合等条件限制，有利于及时发现问题，采取措施，控制高残留农药蔬菜瓜果的摄入，降低农药中毒发生率，保障消费者的食品安全。
一、检测方法
1.酶抑制法
酶抑制法是研究最多且相对成熟的一种对部分残留农药进行快速检测的技术。这种方法又可以分为电化学法、酶抑制分光光度法
和酶片显色法三种。
（1）电化学法。现今常用的电化学传感器有单酶传感器和双酶传感器两种。单酶传感器是将乙酰胆碱酯酶固定在电极表面，酶催化底物乙酰或丁酰巯基胆碱生成巯基胆碱，巯基胆碱是电活性物质，通过有机磷对乙酰胆碱酯酶抑制前后生成的巯基胆碱的检测来测定有机磷的含量。双酶传感器是用乙酰胆碱酯酶与胆碱氧化酶共同修饰制备酶电极，通过对生成的双氧水的检测达到对有机磷检测的目的。
（2）酶抑制分光光度法。在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对某些酯酶催化水解的正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。用分光光度计测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。所需仪器设备简单、灵敏度高、前处理简单、检测时间短，可及时的监测含残毒的蔬菜。
分光光度法检测蔬菜中有机磷农药残留的研究
植物护理学 现代农业科技２０１０年第ｌｌ期
分光光度法检测蔬菜中有机磷农药残留的研究
王棚
（四川省农业科学院分析测试中心，四川成都６１００６６）
摘要酶抑制原理的分光光度法是当前较简便、合理、快速检测农药残留的一种方法。不同种类的酶会严重影响该方法的灵敏度．于 是人们通过筛选多种动物来源的胆碱酯酶来提高分光光度法的灵敏度。鉴于此，利用酶抑制分光光度法快速检测蔬菜中有机磷的农药残 留这一问题进行了研究，结果表明该方法具有较好的实用性。 关键词 乙酸胆碱酯酶；有机磷农药；分光光度法；蔬菜 中图分类号ＴＳ２５５．７；￥４３６．３；￥４８１Ｌ８ 文献标识码Ａ 文章编号１００７—５７３９（２０１０）１１－０１６８—０２
农药残留通常检测蔬菜中有机磷的农药残留普遍采
用方法有免疫分析法、质谱联用法、气相色谱法、波谱法和 高效液相色谱法等，尽管这些方法能够比较准确地检测出
蔬菜中有机磷农药的残留量，但是由于传统的农药残留检
测方法成本高、耗时长、有较大的抗体制备难度，因此不能
很好地满足现场快速检测农药残留的需要 。相对而言，酶
抑制分光光度检测法则不需要昂贵的仪器设备。能有效为
有机磷农药的检测提供一条简便、快速的途径，对大量样品
筛选或现场检测非常适用。
１材料与方法
１．１主要仪器和试剂 在ＷＦＪ一７２００型分光光度计上进行分光光度法试验，溶
液的酸度用ＰＨＳ一３Ｃ型酸度计测定。备好乙酞硫代胆碱
（ＡｓＣｈ）和二硫代二硝基苯甲酸（ＤＴＮＢ），农药是５０％对硫磷
乳油、４０％辛硫磷乳油和４０％氧化乐果乳油，以丙酮为溶剂
分别配制成１ ０００ ｍｇ／Ｌ的储备液，可以根据所标示的有效
成分计算农药浓度。
１．２酶的提取 在砍掉鸡的头后，立刻将鸡脑取出，并用ｐＨ值为７．５
的磷酸盐缓冲溶液（０．００１ ｍｏＩ．／Ｌ）将鸡脑的余血冲洗干净，
然后将鸡脑捣破弄碎，均匀成浆；随后将０．７％的１．０ ｍＬ曲
拉通Ｘ一１００倒入，待均匀搅拌之后，放到离心管中以２ ５００