钼蓝比色法测定特菜中还原型维C含量的研究
食品中维生素C含量的测定实验
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精选资料，欢迎下载 实验3 食品中维生素C含量的测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）
一、实验原理
维生素C又称抗坏血酸，还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
2，6-二氯酚靛酚的钠盐水溶液呈蓝色，在酸性溶液中呈玫瑰红色，当其被还原时就变为无色，因此，可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。当抗坏血酸完全被氧化后，稍多加一点染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比。
二、试剂和器材
偏磷酸醋酸溶液：取15g（用时研细）溶于40mL醋酸及20mL水的混合液中，然后用水稀释至500mL，过滤后储入试剂瓶中。
标准2，6-二氯酚靛酚溶液：取0.25g2，6-二氯酚靛酚溶于700mL蒸馏水中（用力搅动），加入300mL磷酸缓冲液（预先配制9.078g/L KH2PO4-11.867g/L
Na2HPO4·2H2O水溶液，用时以KH2PO4：Na2HPO4·2H2O=4：6的比率将其混合，pH值为6.9-7.0），翌日过滤，滤液储于棕色瓶中，临用时，以抗坏血酸溶液标定。
标准维生素C溶液：以少量偏磷酸醋酸溶液溶解0.1g维生素C于100mL容量瓶中，再以该液稀释至刻度。
2，6-二氯酚靛酚液的标定：在3个100mL锥形瓶中，各置5mL偏磷酸醋酸液，再各加2mL标准维生素C溶液，摇匀。用上面所制的标准2，6-二氯酚靛酚液滴定，呈玫瑰红色保持30s不褪色为止。记下所用2，6-二氯酚靛酚溶液体积平均值，再以同样方法做一空白实验，取7mL偏磷酸醋酸液加水若干毫升（相当于以上所用的2，6-二氯酚靛酚溶液的低定量），仍用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定。将第一次滴定的量减去空白实验的量，即为标准维生素的反应量，求出1mL 2，6-二氯酚靛酚对应于维生素C的质量（mg）。
研钵、容量瓶、剪刀、锥形瓶、微量滴定管
果蔬中还原性维生素C的含量测定
实习四 果蔬中还原性维生素C的含量测定
（一）目的
学习和掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中抗坏血酸含量的原理与方法。
（二）原理
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
2,6-二氯酚靛酚是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如下：
当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
（三）实验材料、主要仪器和试剂
1．实验材料
取新鲜水果（蔬菜）样品100g，加100g 2％草酸溶液，用组织捣碎机打成匀浆。称取10g匀浆，移入100mL容量瓶，用1％草酸定容至刻度，摇匀后静置备用。 CCCCCHCH2OHOOHOHHOHONO-OClClNOHOClCl+（蓝 色）OH-H+抗坏血酸2,6-二氯酚靛酚（红 色）CCCCCHCH2OHOOOHOHONOHOHClClH还原型2,6-二氯酚靛酚（无 色）+脱氢抗坏血酸2．仪器
（1）天平
（2）组织捣碎机
（3）容量瓶（50mL）
（4）刻度吸管（5mL，10mL）
（5）锥形瓶（100mL）
（6）微量滴定管（10mL）
3．试剂
（1）2％草酸
（2）1％草酸
（3）标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL）：精确称取50.0mg抗坏血酸，用1％草酸溶液溶解并定容至500mL。临用现配。
磷铋钼蓝分光光度法测定水果、蔬菜及饮料中L-抗坏血酸
磷铋钼蓝分光光度法测定水果、蔬菜及饮料中L-抗坏血酸
李晓东
【摘 要】Bi3+与Mo(Ⅵ)和PO43-在硫酸介质中反应生成黄色的磷铋钼杂多酸,然后被L-抗坏血酸还原为磷铋钼蓝,据此建立了分光光度法测定水果、蔬菜及饮料中L-抗坏血酸的方法.优化的试验条件如下:① 测定波长为710 nm;② 1.95×10-2mol·L-1磷酸二氢钾溶液的用量为3.0 mL;③6.51×10-2mol·L-1钼酸铵溶液的用量为4.0 mL;④2.06×10-4mol·L-1硝酸铋溶液的用量为1 mL;⑤ 硫酸的浓度为0.16 mol·L-1;⑥ 反应温度为室温.L-抗坏血酸的质量浓度在4~120 mg·L-1内与其对应的吸光度呈线性关系,表观摩尔吸光率为3.59×103L·mol-1· cm-1,检出限(3s/k)为0.2 mg·L-1.方法用于水果、蔬菜及饮料样品的分析,加标回收率为98.0%~102%,测定值的相对标准偏差(n= 11)为1.1%~2.3%.%In sulphuric acid
medium,Bi3+,Mo(Ⅵ)and PO43- can react to produce yellow phosphorus
bismuth molybdenum heteropoly acid,which is then reduced to
phosphorus bismuth molybdenum blue byL-ascorbic acid.Based on this
reaction,a spectrophotometric method for determination ofL-ascorbic acid
in fruits,vegetables and beverages was established.The optimized
conditions found were as follows:①wavelength of determination was 710
维生素C含量的测定
食品保鲜技术课程实验报告
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年月 维生素C含量的测定
一、 实验目的与原理
维生素C又称抗坏血酸，分子式C6H8O6还原型维生素C是新鲜果蔬营养成分的重要部分。
（一）二氯酚靛酚法：天然的抗坏血酸有还原型和脱氢型两种，还原型抗坏血酸分子结构中有烯醇（COH=COH）存在，故为一种极敏感的还原剂，它可失去两个氢原子而氧化为脱氢型抗坏血酸。染料2,6—二氯酚靛酚钠（C12H6O2NCl2Na）作为氧化剂，可以氧化抗坏血酸而其体身亦被还原成无色的衍生物。2,6—二氯酚靛酚钠盐易溶于水，其碱性或中性水溶液呈蓝色，在酸性溶液中呈桃红色，这个变化用来鉴别滴定的终点。由于抗坏血酸在许多因素影响下都易发生变化，因此，取样品时应尽量减少操作时间，并避免与铜、铁等金属接触以防止氧化。
（二）碘量法：抗坏血酸具有还原性，可被I2定量氧化，因而可用I2标准溶液直接测定。通过消耗碘溶液的体积及其浓度，计算试样中维生素C的含量。化学反应式如下：
KIO3+5KI+3H2SO4=3K2SO4+3I2+3H2O
二、仪器和用品
1、实验材料
果蔬样品、维生素C标准溶液，1%草酸溶液、2,6-二氯靛酚溶液、10%KI溶液，淀粉液、0.001N标准3KIO溶液
2、仪器
滴定管、容量瓶、移液管、烧杯、研钵、漏斗、分析天平容量瓶，滴管
三、实验步骤
1.试剂制备与标定
①标准抗坏血酸溶液：精确称取抗坏血酸20mg，用1％草酸溶解于100ml容量瓶中，用1%草酸定容。用移液管移取5ml到50ml容量瓶中，并加1％草酸定容。
②2,6—二氯酚靛酚溶液配制及标定：称取2,6—二氯酚靛酚即2,6—二氯吲哚酚纳50mg，溶于200ml热水中（热水中溶解52mgNaHCO3），冷却后加水50ml，过滤后盛于棕色药瓶内，避光保存。 标定：吸取标准抗坏血酸溶液5ml，加1％草酸5ml、20ml蒸馏水，以2,6—二氯酚靛酚染料溶液滴定，至桃红色15秒不褪即为终点。滴定的溶液的体积相当于0.1mg维生素C，计算出每一毫升染料溶液能氧化的抗坏血酸毫克数。
水果和蔬菜中维生素C含量的测定
水果和蔬菜中维生素C含量的测定
实验18 水果和蔬菜中维生素C含量的测定
一、目的
学会测定果蔬中Vitc含量的方法。
二、材料、用具及仪器药品
1(材料，各种蔬菜或水果
2(用具及仪器、研钵或捣碎机。100ml锥形瓶、50ml容量瓶，10ml移液管，5ml移液管，100ml量筒，微量滴定管，漏斗、滤纸，电子天平
3(试剂
(1)2%草酸溶液:草酸2g，溶于100ml蒸馏水
(2)1%草酸溶液:溶1g草酸于100ml蒸馏水。
(3)标准抗坏血酸溶液:准确称取50.mg纯抗坏血酸，溶于是1%草酸溶液，并稀释至500ml。贮棕色瓶，冷藏，最好临用时配制。
(4)2.6-二氯酚靛酚钠溶液:溶31mg2.6-二氯酚靛酚在300ml热水中，冷却后加水稀释至500ml，滤去不溶物，贮在棕色瓶内，冷藏(大约可保存一星期)。每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定。
三、原理
果蔬中含有维生素C(又称抗坏血酸)，维生素C能还原染料2.6-二氯酚靛酚钠(蓝色)为还原型2.6-二氯酚靛酚钠(无色)。因此，可用2.6-二氯酚靛酚钠滴定样品中的维生素C，根据滴定时所用去染料数，计算出样品中的维生素C含量。滴定终点的判定是以被滴定溶液在一定时间范围内显现的粉红色不褪色为准，这是由于2 .6——二氯酚靛酚钠具有在酸性溶液中显粉红色，而在中性或碱性溶液中呈蓝色的特性。 四、方法步骤
1、提取:用水洗净新鲜白菜叶柄，用纱面或吸水纸吸干表面水份，然后称取10.0g，加2%草酸20ml，置于组织搅碎机中打成浆状或用研钵研匀浆。倒入100ml容量瓶中以2%草酸溶液稀释至刻度，静置10分钟，过滤滤液备用。
2、滴定
(1)(标准液滴定:准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml(含0.1抗坏血酸)置100ml锥形瓶中，加9ml%草酸，微量滴定管以2.6-二氯酚靛酚钠滴定至淡红色，并保持15秒即为终点。由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多少mg抗坏血酸。(最好做两份)
综合分析实验：实验3：果蔬中维生素C测定
果蔬中维生素C含量的测定
维生素C 又名抗坏血酸, 是维持机体正常生理功能的重要维生素之一, 而人体不能自身合成, 只能从食物和药物中摄取, 因此, 食品、药物中维生素C的分析具有重要意义。蔬菜水果中维生素C（抗坏血酸）含量的测定方法有很多，常用的方法有荧光比色法、光度比色法、电化学法、滴定法、酶法、色谱法等。辣椒中的维生素C的含量较高，有些品种理论值可高达198mg/100g，橙子中维生素C的含量也达70 mg/100g，西红柿中维生素C的含量也约20 mg/100g，但品种不同差别较大。本实验利用荧光法和固蓝盐B比色法分别测定西红柿和橙子中维生素C的含量。
固蓝盐B比色法是利用在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼-2-羟基丁酰内酯衍生物，可在其最大吸收波长（420nm）处测定吸光度，与标准系列比较定量。
荧光比色法是基于维生素C 被氧化剂如活性炭或Cu2+氧化为脱氢抗坏血酸（DHAA），DHAA 进一步与苯甲酸及十六烷基三甲基溴化铵产生荧光协同增敏作用, 通过对体系荧光强度的测定进行维生素C的定量分析。本实验选取Cu2+做氧化剂，该法样品处理简单、快速, 体系的稳定性好。
2% 乙酸的配制：量取20.0mL冰醋酸，加水稀释至1000mL。
西红柿样品处理：准确称取80g 左右西红柿，剪碎放入榨汁机中（榨汁机中预先加入50mL 2%乙酸），搅成匀浆，用布氏漏斗抽滤，滤液转移到250mL棕色容量瓶，用蒸馏水定容。
橙子样品处理：将橙子去皮和籽后，准确称取50g左右，剪碎放入榨汁机中（榨汁机中预先加入50mL
2%乙酸），搅成匀浆，匀浆液转移到250mL棕色容量瓶定容。定容液用漏斗过滤，干滤法（漏斗、滤纸承接烧杯干燥）,注意每次过滤前摇匀容量瓶溶液再过滤，过滤滤液约60mL左右备用。
Vc储备液配制：准确称取0.2g左右维生素C溶解于蒸馏水中，并转移到100mL棕色容量瓶里，定容，放在暗处保存。
钼蓝比色法
钼蓝比色法
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概述
磷脂是由一分子甘油与两分子脂肪酸，一分子磷酸和一个氨基醇残基所组成的复杂的含磷类脂化合物。它能在含水很少的油脂中溶解。磷脂不稳定比油脂更易氧化，其氧化产物会加速油脂氧化速度和程度。高温下磷脂会产生黑色絮状沉淀，同时磷脂是一种乳化剂，使油脂易产生包络空气而产生泡沫，在加工过程中产生溢锅现象，磷脂的主要成分脑磷脂、卵磷脂，既具有油溶性又具有亲水性。因此，检测毛油和成品油中的磷脂含量，对于掌握生产操作和保证油脂质量是不可缺少的。
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检测方法
①280℃加热试验法（见第十二节）
②浊度仪测磷脂：
（1）通电自检。
（2）精炼厂各工序出来的油品，先摇匀，然后按如下表称量油样于干净比色皿中。
表33
工段名称转换公式（PPM）样品重量指标控制（PPM）脱臭P=（1.72×NTU）-0.528 5.01g<5
脱色P=（1.27×NTU）-0.225 5.01g<10
中和油P=（8.26×NTU）-4.49 1.002g<10
四级豆油P=（5.89×NTU）+316.40.198g<200
a、加丙酮至刻度线，上盖。
b、摇匀，滴一滴硅硐油于比色皿外表面，用擦镜纸擦匀。
c、装入浊度仪，按ENTER键，稳定5min后，读取结果。
d、计算出油品实际浊度，NTU=NTU1-NTU0，脱色，脱臭浊度按公式计算，D001查表（NTU0为丙酮的空白浊度）。 e、用丙酮清洗比色皿。
③钼蓝比色法:
(1)实验原理：将含磷脂的试样加氧化锌一起灼烧，使有机磷转变为无机磷，以磷酸盐的形式留在灰分中，在将灰分加酸溶解，使磷酸根离子与钼酸钠作用生成磷钼酸钠，遇硫酸联氨被还原成蓝色的络合物——钼蓝。
含磷脂的试样＋ZnO→Zn3(PO4)2+CO2+NO2+H2O
Zn3(PO4)2＋HCl→ZnCl＋H3PO4
H3PO4+Na2MoO4+H2SO4→ (Na3PO4*12MoO3)+
Na2SO4+H2SO4+H2O
维生素c还原法
维生素c还原法
维生素C又称抗坏血酸，其纯品为白色无臭结晶，熔点为190～192℃，溶于水或乙醇中，不溶于油剂。在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件下较稳定。还原型（L-抗坏血酸）可被氧化为氧化型（L-脱氢抗坏血酸），还有一定的生理作用，如果进一步水解则生成2，3-二酮古乐糖酸，失去生理作用。总抗坏血酸包括还原型、氧化型抗坏血酸和2，3-二酮古乐糖酸。
根据它具有的还原性质可以测定Vc的含量。常用的测定方法有2，6-二氯靛酚法、2，4-二硝基苯肼法、铅-硫化氢法、碘酸法以及荧光分光光度法。2，6-二氯靛酚法用于测定还原型Vc，其它方法多用于测定总Vc的含量。
方法原理
抗坏血酸（VC）结构中有烯二醇结构存在，因此具有还原性，能将蓝色染料2，6-二氯靛酚还原为无色的化合物，Vc则被氧化为脱氢Vc，反应式如下
2，6-二氯靛酚具有酸碱指示及氧化还原指示的两种特性。在碱性介质中呈深蓝色，而在酸性介质中呈浅红色（变色范围pH4～5），其氧化态时呈深蓝色（碱介质中）或浅红色（酸性介质），还原态时为无色。根据这个特性，用碱性蓝色染料的标准溶液滴定植物样品酸性浸出液中Vc到刚变浅红色为终点，由染料的用量即可计算Vc的含量。滴定终点的红色是刚过量的未被还原的（氧化型）染料溶液在酸性介质中的颜色。
通常测定Vc浸提和测定都是在20g·L-1的草酸溶液中进行的，目的是保持反应时一定的酸度，避免Vc在pH高时易被空气氧化（阵）。此染料不致氧化待测液中非Vc的还原性物质，所以对Vc的测定有一定的选择性。
本法适用于测定一般水果、蔬菜样品的还原型Vc，不包括脱氢Vc。如样品中含有Fe2+、Sn2+、Cu2+、SO3 2—、S2O3 2— 、SO2等还原性杂质，则有干扰。
主要仪器 高速组织捣碎机（8000～12000r-min ）、电动离心机（4000r*min-2）、半微量滴定管。
试剂
（1）20g·L-|草酸溶液。称取草酸（化学纯）20g溶于水中，稀释至1L，贮于避光处（生2）。
钼蓝比色法测定笃斯越橘成熟果实中还原型抗坏血酸含量及体系优化
钼蓝比色法测定笃斯越橘成熟果实中还原型抗坏血酸含量及体系优化
作者：谭智文，宋春艳，郑美香，等
来源：《湖北农业科学》 2015年第7期
谭智文，宋春艳，郑美香，崔百会，宗成文
（延边大学农学院，吉林 延吉 １３３００２）
摘要：以笃斯越橘（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｕｌｉｇｉｎｏｓｕｍ）成熟果实为试材，以钼蓝比色法测定笃斯越橘果实还原型抗坏血酸（Ｒｅｄｕｃｅｄ ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ，ＡｓＡ）含量进行条件优化。结果表明， ３％偏磷酸－乙酸用量为１００ μＬ、５％硫酸和５％钼酸铵用量均为２００ μＬ、以去离子水补充至１ ５００ μＬ，３０ ℃干热恒温浴显色４０ ｍｉｎ，取出室温下放置１ ｈ后，在７００ ｎｍ下测定，所得数据稳定，准确性适合用于笃斯越橘果实ＡｓＡ含量的测定；测得含量为（４０．２０±６．２３） ｍｇ／１００
ｇ ＦＷ。
关键词：笃斯越橘（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｕｌｉｇｉｎｏｓｕｍ）；钼蓝比色法；还原型抗坏血酸；测定与优化
中图分类号：Ｏ６５６．３１
文献标识码：A
文章编号：0439－８114（２０15）07－1713-04
DOI:10.14088/ki.issn0439-8114.2015.07.047
越橘属植物超过４５０种［１］，广泛分布于欧洲、北美洲、中美洲、非洲东南部中部及马达加斯加岛以及亚洲等地。笃斯越橘（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｕｌｉｇｉｎｏｓｕｍ）为杜鹃花科越桔属落叶灌木［２，３］，是我国一种野生种越橘［４］。笃斯越橘果可鲜食、也可加工，能够提制天然食品色素，浆果酸甜，果汁含有ＶＣ、ＶＥ［５，６］、Ｚｎ、Ｃｕ等，具有很大的开发前景［６］。目前，关于越橘属植物在抗性生理、光合生理、花色苷功能及分子生物学方面有较多研究［７］。对于越橘果实还原型抗坏血酸（ＡｓＡ）含量的测定及相关方法鲜有报道。
抗坏血酸（ＶＣ）是人体必需的水溶性维生素，在许多新鲜水果、蔬菜中主要以还原型ＶＣ（ＡｓＡ）存在［８］。
维生素C的测定方法
维生素C的测定方法
谈谈常见的维生素C的测定方法有哪些？举例说明测定原理。
在化学中常见的维生素C的测定方法有很多种，这里举例三种
第一种：碘量法滴定
原理是用碘滴定维生素C，所滴定的碘被维生素C还原为碘离子，随着滴定过程中维生素C全被氧化，所滴入的碘将以碘分子形式出现。碘分子使指示剂（淀粉）的溶液产生蓝色，即为滴定终点。
第二种：荧光法
原理是维生素C先被活性炭氧化为脱氢抗坏血酸(DHAA)，DHAA
再与荧光底物邻苯二胺(OPDA)结合生成荧光产物，通过对该荧光产物
的检测实现对维生素C的定量分析。
第三种：光度分析法（有两种测定方法）
①2，4-二硝基苯肼法：维生素C中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4-二硝基苯肼作用生成红色脎，脎的含
量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色测定。
②钼蓝比色法：因偏磷酸和钼酸铵反应生成的磷钼酸铵经还原
型的维生素C还原后生成亮蓝色的络合物，通过分光比色可以测定样
品中还原型维生素C的含量。