HPLC法测定虎杖白藜芦醇的含量及其稳定性研究
HPLC法测定虎杖白藜芦醇的含量及其稳定性研究Ξ
CAOY曹 庸1,2,于华忠2,张 敏2,李国章2,萧浪涛1
(1.湖南农业大学省教委植物激素重点实验室,湖南长沙410128;
2.吉首大学湖南省林产化工工程重点实验室,湖南张家界427000)
摘 要: 白藜芦醇已被列为抗心血管、抗癌最有前途的药物之一。由于白藜芦醇对光、热不稳定,本研究建立了一套简单而提取率高的从虎杖中提取白藜芦醇的样品处理方法,研究了高效液相色谱法测定虎杖白藜芦醇的条件。采用色谱柱:岛津Shim2parkCLC2ODS(150mm×6.0mm,i.d.5μm),以乙腈∶水(体积比为41∶59)溶液为流动相,流速1.0mL/min,检测波长306nm。在此条件下,样品溶液进样质量浓度范围在500～1000μg/mL时,白藜芦醇含量与峰面积呈良好的线性关系。检出限为10ng/mL,且回收率高。关键词: 虎杖;白藜芦醇;高效液相色谱法
中图分类号:TQ91;S789 文献标识码:A 文章编号:0253-2417(2004)02-0061-04
HPLCDETERMINATIONOFRESVERATROLCONTENTINPOLYGONUM
CUSPIDATUMANDTHESTABILITYOFRESVERATROL
CAOYong1,2,YUHua2zhong2,ZHANGMin2,LIGuo2zhang2,XIAOLang2tao1
(1.HunanProvincialKeyLaboratoryofPhytohormones,HunanAgricultureUniversity,
Changsha410128,China;2.KeylaboratoryofHunanForestProduct&Chemical
IndustryEngineering,JishouUniversity,Zhangjiajie427000,China)
Abstract:Resveratrolisoneofthemostfeasiblemedicineforpreventinghumancancer.Itisunstableagainstlightandheat.Anextractingmethodwasestablishedinthisstudy,whichissimple,andofhighyield.Studyontheconditionsofhighperfor2manceliquidchromatographyforthedeterminationofresveratrolcontentwasinvestigatedtobeasfollow:Shim2parkCLC2ODScolumn(150mm×6.0mm,i.d.5μm),mobilphaseCH3CH2CN∶H2O(14∶59),flowrate1.0mL/min,wavelength306nm.Thelinealcorrelationbetweencontentofresveratrolandpeakareaisgood.Thelowerdetectionlimitwas10ng/mL.
Keywords:Polygonumcuspidatum;resveratrol;HPLC
虎杖(PolygonumcuspidatumSieb.etZucc)为蓼科蓼属小灌木,为传统中药。其根茎有祛风利湿,散痰
定痛,止咳化痰的作用[1]。白藜芦醇的化学名称为反-3,4′,5-三羟基二苯乙烯,分子式C14H12O3,分子质
量228.25[2]。存在于虎杖、
葡萄等植物中,虎杖中白藜芦醇含量远远高于葡萄等其他植物[3]。现代药
理学试验表明白藜芦醇对人体具有许多医药保健作用。主要包括降低血脂[4],抑制血小板活性[5],对动
脉粥样硬化、冠心病具有保护作用[6],对癌症具有预防作用[7～8],实验证明它对5种人体肿瘤细胞模型
均有抑制作用[9],并具有雌激素样作用[10]。20世纪90年代以来,国外对葡萄酒中白藜芦醇的保健作
Ξ收稿日期:2003-09-28 基金项目:湖南省科技厅重点科技攻关资助项目(03JZY3020) 作者简介:曹庸(1966-),男,湖南泸溪人,副教授,博士生,从事天然产物开发及生物化学的研究。第24卷第2期2004年6月林 产 化 学 与 工 业ChemistryandIndustryofForestProductsVol.24No.2June2004用、测定方法进行了大量研究[11～12]。国内尚未见到对白藜芦醇稳定性及虎杖中白藜芦醇含量测定报
道。摸索一套虎杖白藜芦醇提取工艺,建立HPLC分析的稳定方法,是检测虎杖中白藜芦醇含量的关
键。本文报道用HPLC法测定虎杖白藜芦醇含量及其稳定性研究结果。
1 实验部分
1.1 实验仪器、试剂及材料
1.1.1 实验仪器及实验试剂 高效液相色谱(日本岛津LC-9A),组织匀浆机(日本YAMATO),超声波(日本YAMATO),旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂),微波炉(格兰仕),十万分之一天平(日本岛津AEL
-40SM),紫外分光光度计(日本岛津UV-160A),乙腈(色谱纯),甲醇(色谱纯、AR),乙酸乙脂(AR),超纯水。
1.1.2 实验材料 虎杖样品2001年7月采于吉首大学张家界校区后山。武陵大学植物教研室鉴定;白藜芦醇对照品为SIGMA公司生产。
1.2 实验方法
1.2.1
白藜芦醇不同放置时间及温度条件下的稳定性 取含量为
15μg/mL的白藜芦醇对照品甲醇溶解液,在常温下分别放置0、2、4、6、8、16、48和120h后,利用紫外可见分光光度计测定306nm处吸光值
的大小。再取同样含量的样品分别在30、40、50、60、70和80℃的恒温水浴锅中密封加热30min后取
出,补充甲醇液,测306nm处吸光值的变化及200～1100nm范围内全波长扫描。
1.2.2 白藜芦醇对光稳定性 取含白藜芦醇对照品10μg/mL的甲醇溶解液各3mL加入烧杯,各重复
2次。分别在紫外照射灯下、直射太阳光下以及室内各放置20min,在200～11000nm下进行全波长扫描,同时准确测出306nm处吸光值(A)。
1.2.3 样品液的准备及标样的配制 在十万分之一天平上准确称取白藜芦醇标准品0.00554g,然后用1mL甲醇溶解,定容至5mL,配成白藜芦醇标样。将准确称取的样品置入匀浆机内并加入适量的乙
酸乙脂进行匀浆捣碎,然后定容至50mL,超声波提取30min后,放入微波炉中处理5次,每次30s,最后
置入4℃冰箱中,浸提48h后,用砂心漏斗过滤,滤液在45℃条件下减压浓缩至干,称其干物质重,将粗
提物用甲醇溶解,置入10mL容量瓶中,定容。将上述样品经0.45μm脂溶性微孔滤膜过滤,样品经稀释3倍后用HPLC进行检测。
1.2.4 HPLC测定条件 日本岛津Shim-parkCLC-ODS柱(150mm×6.0mm,i.d.5μm),柱温35℃,流动相为41.6%的乙腈,流速为1mL/min,进样量:1～20μL,检测波长306nm。采用外标法进行定量测定。
2 结果与讨论
图1 白藜芦醇室内放置不同时间吸光度的变化Fig.1 Absorbancechangesofresveratrolafterdifferentstoragetimeinroom
图2 白藜芦醇在不同温度下吸光度变化Fig.2 Absorbancechangesofresveratrolatdifferenttemperatures2.1 白藜芦醇稳定性实验
2.1.1 白藜芦醇对热稳定性 图1是白藜芦醇在常温下放置时间对含
量的影响。结果表明在无直射光照
射的室内,常温放置16h,对白藜芦
醇影响不大。若超过48h,会发生
部分分解,故制备白藜芦醇应尽可
能避光。
关于白藜芦醇对热的稳定性,图2显示在30～60℃范围内,加温
30min,吸光度变化不大,即对白藜芦醇的影响不大,但在较高温度时,
如60℃以上,加温30min后,A值下降,白藜芦醇发生部分分解。故提取、纯化、保存过程应尽可能在较62 林 产 化 学 与 工 业第24卷低温度下进行。
2.1.2 白藜芦醇对光稳定性 通过紫外灯和太阳光直接照射20min后,进行全波长扫描,发现白藜芦醇紫外图谱变化很大,最大吸收峰已不在306nm,说明白藜芦醇受到严重破坏,导致分解。而在室内无
直射太阳光下,20min内白藜芦醇A值几乎不变。故在虎杖提取纯化过程中严格避免直射太阳光,包
括阴干等方法都是非常必要和关键的。否则将损失较多的白藜芦醇。
2.1.3 提取方法的改进 根据以上实验,白藜芦醇对光热较敏感易分解,用常规法提取时活性受影响而且提取率低,故采用微波提取法。微波提取是近年才发展起来的一项新技术,与常规提取相比,其最表1 提取方法对虎杖鲜根茎白藜芦醇提取率的影响Table1 Effectsofextractionmethodontheyieldofresveratrol
提取方法extractionmethods提取时间/minextractiontime提取温度/℃extractiontemp.白藜芦醇含量/%resvratrolcontent得率/%yield常规法conventional30500.13180.8微波法microwave3.0400.15495.1大特点是作用时间短、速度快、提取效
率高、提取温度低(<45℃)。微波用
于虎杖白藜芦醇的提取,可最大限度
地避免提取过程中受光、热影响而分
解,提取率大大提高。表1为微波提
取白藜芦醇的提取情况。
2.2 虎杖白藜芦醇含量测定方法
图3 白藜芦醇标准品的色谱图Fig.3 Chromatogramofresveratrolstandard2.2.1 固定相、流动相及色谱条件选择 首先选用80%乙腈以12%CH3CN/min浓度递增,作为流动相,洗脱时虽能出现白藜芦酸的峰,但分离效果差。然后选
用Shim-packCLC-ODS150mm×6.0mm,i.d.5μm色谱柱,流动相:CH3CN分别为0.46、0.48和0.50mL/min,水0.54、0.52和0.50mL/min,最后选择出峰
最好的CH3CN0.52mL/min、水0.48mL/min作为流动相,保留时间为5.2min。若选用甲醇作流动相,也可作为检测用,但考虑其出峰时间太长,故选择了本
文所提色谱柱。流动相:重蒸水∶80%乙腈为0.52mg/min∶0.48mL/min,总流速
1mL/min,检测器为紫外306nm检测,灵敏度0.32AUFS(吸光度单位满刻度),柱温25℃,进样量1～20μL。按以上条件白藜芦醇标准品的HPLC图见图3。
2.2.2 线性关系的测定 样品溶液质量浓度在50～1000μg/mL时,以白藜芦醇不同浓度标准溶液进样,得到相应峰面积,进行线性回归,得浓度与峰面
积的线性关系,线性方程为:
Y=9.538×10-5S+0.144式中:Y—白藜芦酸质量浓度,μg/mL;S—色谱峰面积,mm2,相关系数r=0.9999,最小检出限为10ng/mL。
2.2.3 回收率与重复性 根据以上确定的色谱条件,进行了白藜芦醇回收实验,数据列入表2,平均回收率达98.19%。在此基础上又做了虎杖根茎样品中白藜芦醇含量的检测(见表3),表现出较好的重复
虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究
虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究
虎杖中白藜芦醇苷是一种具有抗氧化、抗炎症、抗肿瘤等多种生物活性的天然产物。本文通过对虎杖中白藜芦醇苷的提取分离工艺进行研究，旨在寻找一种高效、经济、环保的提取方法，为进一步开发利用虎杖资源提供科学依据。
我们需要选择适宜的提取溶剂。根据文献报道，乙醇是一种常用的提取溶剂，具有良好的溶解性和萃取效果。因此，我们选择乙醇作为虎杖中白藜芦醇苷的提取溶剂。
我们需要确定合适的提取方法。常用的提取方法有浸提法、超声波提取法、微波提取法等。经过比较，我们选择了浸提法进行实验。具体操作步骤如下：取一定量的虎杖粉末，加入适量的乙醇溶液中，与溶剂充分接触，反复搅拌一段时间，使白藜芦醇苷充分溶解于乙醇中。然后，用滤纸过滤得到提取液。
提取液中的乙醇可以通过旋转蒸发或冷冻浓缩等方法进行回收利用，以提高经济效益。同时，为了进一步提高提取效果，可尝试不同浓度的乙醇溶剂、不同提取时间和不同提取温度等条件进行优化。
接下来，我们需要对提取液进行分离纯化。常用的分离纯化方法有固相萃取、薄层色谱、高效液相色谱等。根据白藜芦醇苷的理化性质，我们选择了高效液相色谱进行分离纯化。通过调整流动相组成、流速和检测波长等参数，可以实现白藜芦醇苷的有效分离。
我们对提取得到的白藜芦醇苷进行结构鉴定和质量分析。常用的鉴定方法有紫外-可见光谱、红外光谱、质谱等。这些方法可以帮助我们确定白藜芦醇苷的化学结构和相对分子质量，从而确保提取分离的物质具有一定的纯度和活性。
虎杖中白藜芦醇苷的提取分离工艺研究是一项重要的科研课题。通过选择合适的提取溶剂、优化提取条件，以及采用适当的分离纯化方法，可以获得高纯度、高活性的白藜芦醇苷制剂。这对于虎杖资源的开发利用具有重要的意义，也为相关药物的研发提供了有力支持。希望本研究能为虎杖资源的深度开发与利用提供一定的参考和指导。
内蒙古3种野生藜芦化学成分的定性定量分析
内蒙古3种野生藜芦化学成分的定性定量分析
韩文杰;张屏;常福厚;梁雨娜;赵红梅;包保全
【期刊名称】《中国药房》
【年(卷),期】2022(33)8
【摘 要】目的 对内蒙古3种野生藜芦(藜芦、毛穗藜芦、兴安藜芦)的化学成分进行定性和定量分析。方法 运用高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱技术,通过查阅SciFinder、ChemSpider数据库和相关文献以及与对照品比对,鉴别藜芦、毛穗藜芦、兴安藜芦的化学成分。运用高效液相色谱法测定3种野生藜芦中虎杖苷、氧化白藜芦醇和白藜芦醇的含量。结果 共鉴定出31个化合物,包括13个茋类、11个黄酮类、4个有机酸类、2个糖苷类、1个巴西苏木素类化合物;绝大多数化合物为其中2种或3种野生藜芦所共有,仅有2个黄酮类化合物山柰酚和木犀草素为兴安藜芦所特有。3种野生藜芦中虎杖苷、氧化白藜芦醇、白藜芦醇的总含量为6.618~11.292 mg/g,总含量由高到低依次为藜芦、毛穗藜芦、兴安藜芦;虎杖苷、白藜芦醇含量最高的是毛穗藜芦,氧化白藜芦醇含量最高的是藜芦。结论 3种野生藜芦中大部分成分相似,仅山柰酚和木犀草素为兴安藜芦所特有。虎杖苷、氧化白藜芦醇和白藜芦醇的含量在3种野生藜芦中存在较大差异。
【总页数】7页(P937-942)
【作 者】韩文杰;张屏;常福厚;梁雨娜;赵红梅;包保全
【作者单位】内蒙古医科大学药学院
【正文语种】中 文 【中图分类】R917
【相关文献】
1.长白山松江河林区野生藜芦化学成分的研究2.超高效液相色谱(UHPLC)对大黄饮片炮制前后化学成分定性定量分析3.天然野生和种植药用蔓荆子化学成分研究──Ⅰ．天然野生和种植药用蔓荆子挥发油成分定性研究4.虎杖提取物中白藜芦醇的定性定量分析及其与β-乳球蛋白相互作用的质谱研究
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RP-HPLC法测定护肤品中白藜芦醇的含量
RP-HPLC法测定护肤品中白藜芦醇的含量
史先敏;严泽民;何宏轩;段明星
【期刊名称】《香料香精化妆品》
【年(卷),期】2011(000)002
【摘 要】建立RP-HPLC测定化妆品中白藜芦醇含量的方法.色谱柱为shimadzu
ODS C18柱(4.6 mm x 150 mm,5m),流动相为甲醇:0.05%磷酸水溶液(50:50),等度洗脱,检测波长306 nm,流速1 mL/min,上样量10μL,柱温为室温.结果表明白藜芦醇在O～200 mg/L呈良好的线性关系,相关系数为0.9997,护肤品样品平均加标回收率为98.8%,相对标准偏差为2.06%.本方法操作简便,结果准确可靠,适于化妆品中白藜芦醇的含量测定.%An RP-HPLC method for determination of
resveratrol in cosmetics was reported. Separation was achieved on a
Shimadzu ODS C18 column (4. 6 mm× 150 mm,5 m) with methanol/0. 05％
phosphoric acid (50/50, V/V). The detection wavelength is 306 nm and the
flow rate is 1. 0 mL/min. It was found that resveratrol had good linear
relationship in the range of 0 -200 mg/L and the correlation coefficients of
linear calibration curves was 0. 999 7. The average recovery of resveratrol is
98. 8％ and the relative standard deviation is 2. 06 ％.
综述白藜芦醇
不同砧木葡萄组织中白藜芦醇含量的差异
摘 要：用HPLC 法测定由不同砧木嫁接的葡萄果肉、叶柄、种籽、叶片、果皮及果穗轴中
白藜芦醇的含量, 发现葡萄各组织中白藜芦醇含量的差异很大。 其中葡萄果穗轴和果皮中的
含量较高，其次是叶片、种子和叶柄，葡萄果肉中白藜芦醇含量最低，这一发现从而为应用
优选砧木制作高白藜芦醇含量的葡萄酒, 进行为葡萄皮渣的综合利用提供了依据。
关键字: 白藜芦醇、葡萄皮渣、果穗轴、高效液相色谱法、毛细管电泳法、气质联用法、薄
层扫描法、示波分析法
一、 白藜芦醇的简介：
目前，已知白藜芦醇及其衍生物存在于葡萄属、蓼属、桑树、花生、买麻藤、朝鲜槐等
12科、31个属的72种植物中，然而就其含量而言，葡萄属、蓼属最高，并且人类日常生活中
摄入白藜芦醇的方式主要有两种：一是饮用红葡萄酒、服药片和保健品等药用方式，二是来
自于葡萄皮和葡萄籽以及中药虎杖等。
白藜芦醇（resveratrol, 3,4’,5-三羟基二苯乙烯），存在于葡萄、虎杖、花生、桑葚
等许多植物中，其中葡萄，尤其是葡萄皮中含量较高，分子式为C14H12O3，相对分子量为228.25 。
它是葡萄属植物在抵御真菌侵染、机械、紫外线和臭氧等伤害时产生的植保素次生代谢产物，
对人类健康特别是预防心血管疾病等方面具有显著功效。白藜芦醇是一类在多种植物中存在
的天然有机化合物，多以单体和其糖苷形式存在，每一种形式又存在顺、反两种异构体，故
一般有4 种存在形式：顺式白藜芦醇、反式白藜芦醇、顺式白藜芦醇苷和反式白藜芦醇苷,
在自然界中主要以反式存在，为无色针状结晶，熔点为256℃~257℃，升华温度为261℃ ，易
溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂。
从大量的研究结果发现，白藜芦醇及其糖苷异构体是生物活性物质，对人体具有保健作
用 [1] ，它是一种对人类健康有显著作用的天然活性物质，在国际上已引起了广泛的关注。
由于其特殊的保健功能而备受消费者的青睐。据报道，白黎芦醇除了可以治疗皮炎、癣等过
双波长高效液相色谱法检测虎杖中活性成分
双波长高效液相色谱法检测虎杖中活性成分
冯涛;刘鹏;刘海燕;锁然
【摘 要】The determination of the trans knotweed extract resveratrol was
established , trans resveratrol glucoside , emodin content in high
performance liquid chromatography ( HPLC) at the same time with
acetonitrile and water as mobile phase, flow rate of 1 mL/min, detection
wavelength of 306 nm and 440 nm.The research showed under the
established conditions, linear range of trans-resveratrol and glucoside and
emodin were 0.12 ~20 mg/L, 0.15 ~20 mg/L and 0.10~20 mg/L.Linear
relationship of the matter were good in the rage.The limit of detection
were 0.8 μg/mL, 0.7 μg/mL and 0.75 μg/mL, the average recovery rate
were 100.2%, 100.8% and 103.3%, RSD were 1.197%, 1.466%and 2.469%.%以乙腈和水为流动相，流速1 mL／min，检测波长为306 nm和440 nm，建立了同时测定虎杖提取液中的反式白藜芦醇、反式白藜芦醇苷、大黄素含量的高效液相色谱法。结果表明：在建立的色谱条件下，反式白藜芦醇及苷与大黄素的线性范围为0.12～20 mg／L，0.15～20 mg／L，0.10～20 mg／L。在此范围内各物质的线性关系良好。最低检出限分别为0.8 mg／L、0.7 mg／L、0.75 mg／L，平均回收率分别为100.2％、100.8％、103.3％， RSD分别为1.197％、1.466％、2.469％。
RP—HPLC法测定灵虎片中虎杖苷的含量
・论著・ ２００７年６月第４卷第１８期
ＲＰ—Ｈ ＰＬＣ法测定灵虎片中虎杖苷的含量
许晓峰 。林斌 ，王沛坚
（１．广州中医药大学中药学院，广东广州５１０４０５；２．广东省人民医院药学部，广东广州５１００８０）
【摘要］目的：建立复方制剂灵虎片中的有效成分虎杖苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱条件：
色谱柱：Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ】８（４．６ ｍｍｘ２５０ ｍｍ，５ ｍ）；以乙腈一水（２５：７５）为流动相；检测波长：３０５ ｎｍ；流速：１．０ ｍｌ／ｍｉｎ。柱
温：室温。结果：虎杖苷在３８．９８～３８９．８０ ｇ范围内成良好线性关系，ｒ＝０．９９９８，平均回收率为１００．２３％，ＲＳＤ为
１．６７％ 结论：本测定方法简便可行、重复性好，可用于本制剂中有效成分虎杖苷的含量测定。
【关键词】灵虎片；虎杖苷；ＲＰ—ＨＰＬＣ 【中图分类号】Ｒ０６５７ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７３—７２１０（２００７）０６（ｃ）一０２４—０５
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｄａｔｉｎ ｉｎ Ｌｉｎｇｈｕ ｔａｂｌｅｔｓ ｂｙ ＲＰ－ＨＰＬＣ
Ｘ￣Ｘｉａｏ－ｆｅ ，ＬＩＮ Ｂｉｎ。，ＷＡＮＧ Ｐｅｉ￣ｉａｎ （１．ＧｕａｎｇＺｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＧｕａｎｇＺｈｏｕ ５ １０４０５，Ｃｈｉｎａ；２．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＧｕａｎｇＺｈｏｕ ５ １００８０，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｓ ｏｆ ｂａｉｃａｌｉｎ ｉｎ ｐｏｌｙｄａｔｉｎ ｉｎ Ｌｉｎｇｈｕ ｔａｂｌｅｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｄａｔｉｎ ｉｎ Ｌｉｎｇｈｕ ｔａｂｌｅｔｓ．Ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｓ Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ １ ８（４．６ ｍｍ ｘ２５０ ｍｍ，５ ｍ），ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ ａｃｅｔ０ｎｉｔｒｉｌｅ—ｗａｔｅｒ（２５：７５），ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｒｅｔｕｒｅ ｒｏｏｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ａｎｄ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｒｅ ｗａｓ １．０ ｍｌ／ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｉｓ ３０５ ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａ ｂｅｔｔｅｒ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｏｒｍ ３８．９８ ｇ ｔｏ ３９８．８０ ｇ ｏｆ ｐｏｌｙ— ｄａｔｉｎ ｆｏｒ ｐｌａｓｍａ ｗｉｔｈ ａ ｇｏｏｄ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｅｐｈｅｄｒｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｗａｓ １００．２３％。ＲＳＤ ｗａｓ １．６７％，Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｈａｓ ｇｏｏｄ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ．ｒｅｃｏｃｒｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ，ａｎｄ ｑｕｉｃｋ．ｉｔ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｑｕａｌｉｔｙ
电化学发光法测定虎杖中白藜芦醇苷含量的研究
西北药学杂卷２００２年２月第ｌ７眷第１期 电化学发光法测定虎杖中白藜芦醇苷含量的研究 唐玉海，靳菊情，划 芸，郑晓晖，刘宏浪（西安交通大学理学斑直甩化学系，陕西西安７１００６１） 摘要：基于发现的白蘩芦醇苷对Ｌｕｍｉｎｏｌ电化学发光强烈的抑制作用，建立了电化学发光法洲定白藜芦醇苷 含量的新方法。白藜芦醇苷浓度在０．０５～１２．６ｍｇ・Ｌ。范围内与发光减少值分段呈盎好的线性关束。检出限 为０．０５ｍｇ・Ｌ～。对０．２５ｍｇ・Ｌ 白鏊芦醇苷平行测定ｌ１次，其相对标准偏差为２．２５ 。该法具有简便、快 速、灵敏的特点，应用于中药虎杖中的白藜芦醇苷的测定，结果满意。 关键词：电化学发光分析法；虎杖，白藜芦醇苷 中囝分类号｛Ｒ９２７．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４—２４０７（２００２）０１—０００６—０３ 白藜芦醇（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏ１）存在于多种植物中。目前 报道的从葡萄等植物中提取分离较多。我们从中药虎 杖（Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ．Ｃ．ｓｐ，￣ｄ口￡ ｍ Ｓｉｅｂ．Ｅｔ Ｚｕｃｃ）中提取 分离得到一种白色针状结晶体，经结构测定为白藜芦 醇苷。白藜芦醇苷分子中存在２个酚羟基。从化学结 构上看具有较强的抗氧化性｝文献报道。 ，白藜芦 醇具有抗肿瘤、抗炎和防治心血管疾病等作用。对白 藜芦醇苷的测定，已有ＨＰＬＣ、质谱、气相色谱、毛细 管电泳等方法报道“ ，化学发光法和电化学发光法 测定法还未见报道 白藜芦醇苷在磷酸盐中性介质中，在０．６ Ｖ（ｖｓ Ａｇ／ＡｇＣＩ）左右，白藜芦醇苷对Ｌｕｍｉｎｏｌ在铂电极上 的电化学发光有强烈的抑制作用，基此建立了测定白 藜芦醇苷电化学发光新方法。并成功地测定了中药虎 杖中的白藜芦醇苷含量，该法具有简便、快速、灵敏的 特点。 １仪器与试药 １．１仪器ＭＥｃ一１２Ｂ型多功能电化学分析仪（江苏 电分析仪器厂）ＢＰＣＬ超微弱化学发光测量仪（中国 科学院生物物理研究所）；工作电极为铂片电极（４ ｍｍ×５ ｒａｍ），对极为铂电极（７ ｍｍ×１０ ｍｍ），参比 电极为Ａｇ／ＡｇＣＩ电极。电化学发光系统的构造同文 献“ 。 １．２试药 白藜芦醇苷（美国Ｓｉｇｍａ公司）配成７．２ ×１０ ｇ・ｍＬ 水溶液；ＬｕＩＩｌｉｎｏｌ储备液５．０Ｘ１０ ｔｏｏｌ・Ｌ～，用０．１０ ｍｏｌ・Ｌ 的ＮａＯＨ溶液配制， Ｈ２Ｏ２，０．１ ｔｏｏｌ・Ｌ ＰＢｓ缓冲液均按常规方法配制｝ 试剂均为分析纯。实验所用水均为二次蒸馏水。虎杖 （市售）。 ２实验方法 准确移取一定量白藜芦醇苷溶液于２５ ｍＬ的量 瓶中，分别加入０．５ ｍＬ ０．３０ Ｈ Ｏ２和１．５ ｍＬ ５．０ ×１０～ ｍｏｌ・ＬＩ１的Ｌｕｍｉｎｏｌ，用０．１０ ｍｏｌ・Ｌ一 ＰＢＳ 缓冲液定容Ｉ同法配制空白溶液。取所配制溶液６ ｍＬ 于专用电解池中，再将该电解池置于超微弱化学发光 测量仪暗室中｝用ＭＥＣ一１２Ｂ型多功能电化学分析 仪。控制扫描速度为２０ｍＶ・ｓ～，在０．３～Ｏ．８ Ｖ（ｖｓ． Ａｇ／ＡｇＣＩ）电位范围内进行阳极化扫描，用ＢＰＬＣ超 微弱化学发光测量仪记录电化学发光信号，同时 ＭＥＣ一１２Ｂ型多功能电化学分析仪记录电化学信号。 以Ｌｕｍｉｎｏｌ—Ｈ。Ｏ：体系电化学发光信号的峰高Ｉ。与 Ｌｕｍｉｎｏｌ—Ｈ Ｏ 体系中加入白藜芦醇苷后的电化学发 光信号的峰高Ｉ。的差值△Ｌ进行白藜芦醇苷的定量 分析。 处理电极：每次测量前。工作电极及辅助电极先 在酒精灯上灼烧吸附有机物，然后在０．１０ ｍｏｌ・Ｌ Ｈ２ＳＯ 中，以ｉ００ ｍＶ・ｓ 的扫描速度，在一０．２～＋ １．２ Ｖ电位范围内。循环扫描５ ｒａｉｎ。最后用二次蒸馏 水将电极冲洗干净” 。 ３结果 ３．１测定条件的选择Ｌｕｍｉｎｏｌ在ｐＨ＝７．４ ＰＢＳ－ Ｈ：Ｏ。介质中的电化学发光已有报道。我们发现在 ＰＢＳ（ｐＨ一７．４）介质中，白藜芦醇苷对鲁米诺的电化 学发光有强烈的抑制作用（见图１） 为建立测定白藜 芦醇苷的电化学发光新方法，我们对缓冲介质、Ｌｕ— ｍｉｎｏｌ浓度、Ｈ。Ｏ：浓度、扫描速度、ＫＣＩ浓度和静置时 间等进行了选择。 ６０００ ４ｏ０ｏ ２０００ ０ ０ ５００ １０００ ｌ５ｏ０ 电位／ｍｙ 圈１电化学发光强度一电位曲线圉 ３．１．ｔ扫描速度的选择扫描速度在５～５Ｏ ｍＶ・ ｓ－１扫描时，发现对白藜芦醇苷抑制Ｌｕｍｉｎｏｌ的电化 学发光影响较小，考虑到分析速度。选取扫描速度为 ２０ｍＶ・ｓ～ ３．１．２缓冲介质的选择考察了０．１０ｔｏｏｌ・Ｌ 磷 酸盐（ｐＨ ６．８，７．４，７．８）｝０．１０ ｔｏｏｌ・Ｌ 硼酸盐（ｐＨ ８．０，８．５），０．１０ ｔｏｏｌ・Ｌ 碳酸盐（ｐＨ ９．６。１０．０）缓冲 液中，白藜芦醇苷对Ｌｕｍｉｎｏｌ的电化学发光的抑制 作用。实验表明，
虎杖中白藜芦醇的提取纯化工艺研究
２００８年２月 第ｌ０卷第２期 中国现代中药Ｍｏｄｅｍ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
虎杖中自藜芦醇的提取纯化工艺研究
李胜银 ，孙晓飞
（苏州大学药学院，江苏 苏州 ２１５１２３）
［摘要］目的：考察虎杖中白藜芦醇的最佳提取纯化工艺。方法：利用单因素试验对虎杖中白藜芦醇的提取条 件，即碱的种类、碱料比、纤维素酶种类、酶料比及酶解时间进行了考察，并选取后４种因素设计了正交试验来优 化提取条件；ＨＰＬＣ测定含量；沉淀法纯化白藜芦醇粗品。结果：最佳提取工艺为碱料比（１：１０），用１．５万单位ｇ 固体纤维素酶，酶料比（１：１００），酶解３ｈ；沉淀法的较优工艺：８０％乙醇为溶剂，乙醇与水的比例为８：７。结论：此 法操作简单易行。 ［关键词］虎杖；白藜芦醇；提取；纯化
白藜芦醇化学名为３，５，４’一三羟基一１，２一二
苯基乙烯，为非黄酮类多酚化合物，存在于许多植
物如葡萄、桑椹、虎杖、花生等植物中。白藜芦醇
具有抗癌、抗氧化、抗自由基、抗细菌和真菌作用、
护肝脏、对心血管的防治作用以及雌激素样作用
等 ］。此外，白藜芦醇还具有美容、减肥等作用，
是一种新型美容保健品，以延缓人的衰老，保持肌
肤水分、祛除疮类、黄褐斑、防紫外辐射等 。开
发与白藜芦醇有关的产品具有良好的市场前景和良
好的经济效益。目前制备白藜芦醇有化学合成法、
溶剂提取法等。白藜芦醇的合成主要包括Ｗｉｔｔｉｎｇ反
应、顺反异构化和脱保护基３步，化学合成步骤复
杂，成本较高 Ｊ。溶剂提取法常采用有机溶剂，如
乙醇、甲醇等。本文所用的酶解法与上述方法相比，
具有简单易行，操作安全，成本低的优点。本文从
虎杖中提取白藜芦醇，并对白藜芦醇粗品进行纯化，
对其提取工艺及纯化方法进行了研究。
１仪器与试药
１．１仪器
ＤＨＧ．９０７０Ａ型电热恒温鼓风干燥箱，Ｒ５０１型旋
转蒸发器，ＰＨＳ－３Ｃ精密酸度计，高效液相色谱仪
（ＳＨＩＭＡＤＺＵＬＣ．１０ＡＶＰ Ｐｌｕｓ），检测器为紫外可见双
不同采收期虎杖中自藜芦醇苷含量比较
１４２８
３讨论
３．１微波干燥是指由微波能转变为热能而使湿物料干燥的
方法。其原理为：中药及炮制品中的极性水分子和脂肪能不
同程度地吸收微波能量，在交流电场中，因电场时间的变化，
使极性分子发生旋转振动，使分子间互相摩擦而产生热量，从
而达到干燥灭菌。从实验结果来看，盐酸小檗碱的含量微波
法＞传统法＞生品，这是由于微波可使植物细胞膜遭到破坏，
有助于盐黄柏中盐酸小檗碱的溶出 。
３．２盐黄柏正交实验结果及方差分析表明，微波火力炮制盐 黄柏的效果具有统计学意义（Ｐ＜０．０５），加热时间和盐水含
盐量对盐黄柏的影响无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。综合分析微
波炮制盐黄柏的工艺较优，参数为微波火力６ｏ％，加热时间
８ ｍｉｎ，含盐量２％，即Ａ３Ｂ３ｃ２。
３．３从薄层色谱分析看微波法、传统法、生品的斑点均有黄 绿萤光，且大小、颜色、位置大致相同，表明３种炮制品化学成
分无明显变化，微波对盐黄柏化学成分影响不大。 目前，盐炙黄柏多采用传统法，在操作中火力难以掌握，
火力太过有焦斑，太小则不能达到炮制要求，质量稳定性差，
特别是我国南方春夏潮湿季节，贮存时间稍长极易发霉，家用
微波炉盐炙黄柏色泽均匀，无焦斑，且干燥速度快，质量稳定
性好，操作方便，无污染，火力和时间可控制。本实验为应用
微波法炮制盐黄柏提供科学依据，值得推广应用。
参考文献 １中华人民共和国药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［Ｓ］．北
京：化学工业出版社。２００５．２１４—２１５，附录２１． ２于定荣，杨梓懿．微波技术在中药制药中的应用［Ｊ］．湖南中医学院
学报。２ＯＯ４。２４（３）：５８—６０． （致谢：本文经潘洪平副主任中药师审核指导，特此致谢） （收稿日期：２００６－０６．１９修回日期：２００６－０７—２８）
不同采收期虎杖中自藜芦醇苷含量比较
、 属 药剂科（柳州５４５００５）梁陈方李锦柒
广西柳州市工人医院 。 ～ …… ……。 。’。‘
一测多评法测定虎杖药材中6种成分的含量
一测多评法测定虎杖药材中6种成分的含量
曹扬;赵昱玮;才源
【期刊名称】《中国当代医药》
【年(卷),期】2024(31)4
【摘 要】目的建立一测多评法测定虎杖药材中6种成分的分析方法,并对其进行方法学考察,验证该方法的可行性与准确性。方法以大黄素为内参物,分别建立虎杖苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚的相对校正因子,计算其他5种成分的含量,用该方法测定不同产地虎杖药材中6种成分含量,同时利用外标法测定各成分含量,测得的结果与外标法测定值进行比较。结果9批不同产地的虎杖中6种有效成分采用一测多评法测得的结果与外标法测定值之间不存在显著性差异,6种成分在测定范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98.1%~101.4%,RSD为1.0%~2.3%。结论一测多评法简单快捷,可用于测定虎杖药材中6种成分的含量,可为虎杖药材的质量控制及提取工艺的评价提供参考。
【总页数】5页(P5-9)
【作 者】曹扬;赵昱玮;才源
【作者单位】吉林省药品检验研究院;长春中医药大学附属医院制剂中心;吉林省生物研究所
【正文语种】中 文
【中图分类】R917 【相关文献】
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