第二章 试管苗快速繁殖
高中生物选修3(浙科版)知识点总结
第一章 基因工程
一、工具酶的发觉和基因工程的诞生
1、基因工程的概念：
（1）广义的遗传工程：泛指把一种生物的遗传物质（细胞核、染色体脱氧核糖核酸等）移到另一种生物的细胞中去，并使这种遗传物质所带的遗传信息在受体细胞中表达。
（2）基因工程：
就是把一种生物的基因转入另一种生物体中，使其产生我们须要的基因产物，或者让它获得新的遗传性状。基因工程的核心是构建重组DNA分子。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。
（3）基因工程诞生的理论基础：
DNA是遗传物质的发觉过程、DNA双螺旋结构的确立、遗传信息传递方式的认定。
2、基因工程的基本工具
（1）“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）
① 来源：主要是从原核生物中分别纯化出来的。
② 功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并能切割（使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开），因此具有专一性。
例如：某种限制性核酸内切酶能识别的序列是GAATTC,能在G和A之间切割DNA，如下图所示。
黏性末端黏性末端
③ 结果：能将DNA分子切割成很多不同的片段。
备注：不同DNA分子用同一种限制性核酸内切酶切割形成的黏性末端都相同；同一个
DNA分子用不同限制性核酸内切酶切割，产生的黏性末端一般不相同。
（2）“分子缝合针”——DNA连接酶
① 作用：将具有末端碱基互补的2个DNA片段连接在一起（缝合磷酸二酯键）形成的DNA分子称为重组DNA分子。
因此，DNA连接酶具有缝合DNA片段的作用，可以将外源基因和载体DNA连接在一起。
（3）“分子运输车”——载体——质粒
① 载体具备的条件：
1）能在受体细胞中复制并稳定保存。
2）具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。
3）具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
② 最常用的载体——质粒：
质粒在细菌中以独立于拟核之外的方式存在，是一种特殊的遗传物质，并具有自我复制实力的双链环状DNA分子。
影响试管苗生根的因素
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1 / 2'. 影响试管苗生根的因素
试管苗生根是组织培养快速繁殖的重要环节。只有当组培苗有了很好的根系时才能保证移栽成活。试管苗的生根受很多因素的影响，在实际生根时可以通过调节很多因素来使其容易生根。影响试管苗生根的因素主要有：
（1）植物材料
各种植物种植成活的难易程度不同。同样的，不同的植物、不同的品种、同一植物的不同部位和不同年龄对生根都有决定性的影响。生根难易还与母株所处的生理状态有关，因为取材季节和所处环境条件均有影响。
一般的，试管苗生根和扦插苗生根是一样的，即扦插生根容易的植物，试管苗生根也容易；扦插生根困难的植物，试管苗生根也困难。比如，月季等扦插生根比较容易，试管苗也比较容易。
不同植物生根的规律是：成年的比幼年的生根难，木本植物比草本植物生根难。试管苗一般都比较幼嫩，但是有些试管苗在培养瓶中生长时间长，茎木化程度比较高，这类苗不容易生根。生长旺盛幼嫩的试管苗容易诱导生根。
（2）基本培养基 试管苗生根是一个从异养状态进入自养状态的一个变化。利用根系来吸收营
养和水分是植物体的一种本能。
在培养基中有高浓度的营养元素，特别是糖能满足的情况下，试管苗产生依赖性而不易生根，所以减少培养基中的营养成分和糖的含量即可刺激生根。试管苗生根大多数使用低浓度的MS培养基，其中经常使用1/2MS和1/3MS培养基。不同植物对培养基的要求也不同。在无籽西瓜生根中，降低无机盐浓度，有利于生根，而且根多而粗壮，发根也快，加铁盐则更好。糖的浓度一般用2%,有些植物在无糖培养基上也能生根。
培养基中的其他成分也和生根有关，有机成分中的维生素B1，维生素B6，维生素B12都有利于生根。培养基的pH 值对试管苗的生根也有一定的影响。因此需要求一定的 pH值范围，一般在 5.0—6.0。据报道，pH值显著影响小萝卜幼苗切后侧根的形成，pH为 3.8时，侧根原基为为每平方厘米 60条，pH为 5.8时则降为每平方厘米 18 条。水稻离体种子根生长，随 pH值由 3.3 升高至5.8而加快。
欧李绿枝组织培养与快速繁殖研究
欧李绿枝组织培养与快速繁殖研究
焦淑华;林丽华;李宝江
【期刊名称】《北方园艺》
【年(卷),期】2006(000)003
【摘 要】以钙果三号嫩茎为外植体、MS为基本培养基,初步建立了欧李试管苗的快速繁殖体系.结果表明,诱导嫩茎分化生长较适宜的培养基为MS+BA1.0
mg/L+IAA1.0 mg/L;MS培养基较B5、改良White培养基更有利于试管苗的嫩茎增殖,试管苗增殖的适宜的蔗糖浓度30g/L～40 g/L;培养基中BA和NAA浓度,以及pH值对欧李组培苗的增殖系数影响较大,3因素的影响次序为BA＞pH值＞NAA,最佳增殖培养基为BA0.2 mg/L,NAA0.05 mg/L,pH值6.2;最佳壮苗培养基MS+NAA0.07 mg/L;最佳生根培养基为1/2MS+NAA0.4 mg/L.
【总页数】3页(P117-119)
【作 者】焦淑华;林丽华;李宝江
【作者单位】沈阳农业大学园艺学院,110161;沈阳农业大学园艺学院,110161;沈阳农业大学园艺学院,110161
【正文语种】中 文
【中图分类】S6
【相关文献】
1.欧李茎尖分生组织培养与快速繁殖技术研究 [J], 王正德;庞发虎
2.欧李组织培养技术的研究 [J], 黄立华;龙忠伟;张平 3.欧李组织培养技术试验研究 [J], 张秀丽;张毅功
4.欧李的组织培养与快速繁殖技术 [J], 庄丽娟;苏福才
5.钙果4号欧李组织培养技术研究 [J], 孙新政;申顺先;李庆伟;陈世昌
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植物组织培养实习报告
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植物组织培养实习报告
篇一：植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告
一、实验目的
1．掌握无菌操作的植物组织培养方法；
2．通过配置ms培养基母液，掌握母液的配置和保存方法；3．通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；
4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；5．了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育,最终长成完整再生植株的过程,加深对植物细胞的全能性的理解。
二、实验原理（一）植物组织培养
植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。（二）植物细胞的全能性
植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一竭诚为您提供优质文档/双击可除
样的植株。（三）组织的分化与器官建成
外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。
（四）培养基的组成
培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。
三、实验器材
高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻
璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。
第二章植物组织培养基本操作
第⼆章植物组织培养基本操作
教学⽬的：
了解植物组织培养培养的培养基种类、成分及其特点，学习植物组织培养基本操作，了解离体培养环境条件，以及炼苗移栽基本⽅法。
职业技能教学点：
具有植物组织培养基本操作程序的认知。能够识别各类培养基特点，熟悉MS培养基成分；具有制作培养基能⼒，具有选择外植体、表⾯灭菌、⽆菌接种等基本能⼒；具有植物组织培养条件控制基本能⼒；有进⾏组培苗驯化练苗的基本能⼒。
教学时间：10学时
教学重点：
各类培养基特点，固体培养基制作，外植体的选择及表⾯灭菌，外植体培养条件，组培苗驯化原则及常规移栽⽅法。
教学难点：
各类培养基特点，培养基制作及⾼压灭菌操作，外植体的表⾯灭菌，外植体培养中易出现的问题及其解决办法，试管苗的特点。
教学内容：
第⼀节培养基成分、种类及特点
植物⽣长必需16种基本元素：N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、Mn、B、Cu、Zn、Mo、Cl、C、H、O。离体培养条件下，各种元素主要从培养基中获得：H 和O来源于⽔，C来源于添加的糖类，其它矿质元素来源于组成培养基的⽆机盐。
培养基是根据植物⽣长所需营养成分，配制成的供植物⽣长的⼈⼯制作的营养物质。
⼀、培养基的成分
不同植物组织器官所需要的营养条件不完全⼀样，培养基营养成分也有差异，但总的来说，培养基⼀般包括⽆机盐、有机化合物和⽣长调节剂三⼤基本组
成成分。1、⽆机盐类离体组织⽣长发育的基本成分，根据植物对必需元素需要的量，可以分为以下两类：
⼤量元素—植物所需元素的使⽤量⼀般在每升⼏⼗-⼏千毫克，有C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S。
微量元素—植物所需元素的浓度⼩于10-5～10-7mol/L，Fe、Cu、Zn、Mn、Mo、B、Cl。
除C、H、O外，其它矿质元素通常以⼀定浓度的⽆机化合物形式，按⼀定⽐例配
制⽽成，溶于⽔中以离⼦态被吸收，N有硝态氮KNO3和铵态氮（NH
4
）2
SO
4两类提
供。2、有机化合物
培养基中只有⽆机盐叫做基本培养基，为使培养物更好的⽣长，还需添加有机成分，常⽤有糖类、维⽣素、醇类、嘌呤、氨基酸等。
植物快速繁殖技术
1 第一节 植物快速繁殖技术
科目：生物 备案人： 学生： 时间：
课题：植物快速繁殖 课型：新授课 课时：2课时
三维目标
知识与技能 说明植物组织培养的基本原理；
列举影响植物组织培养的各种因素。
过程与方法 尝试利用植物组织培养完成植物的快速繁殖。
情感态度与价值观 尝试植物的组织培养，即学生仿照教师的示范性动作完成对实验对象的操作。
教 学 重 点 植物组织培养所需的培养基的配制；
外植体的接种和培养；
植物组织培养过程中的无菌操作。
教 学 难 点 植物组织培养过程中的无菌技术。
[知识梳理]
一．背景知识
植物组织培养———植物快速繁殖技术
1．原理：植物细胞的全能性
概念：高度分化的植物细胞仍然有 的潜能。
基础：生物体的每一个细胞都含有本物种的 ，都有发育成完整个体的潜能。
实现条件： 、 、 和其他适宜条件。
2．过程：
3．应用：快速繁殖，培育无病毒植物，人工种子，生产药物等。
二．实践案例——月季快速繁殖
1．材料用具：略。
2．活动程序：
（1）配置培养基，并灭菌。
母 液 植物激素比例 作 用
脱分化培养基
生芽培养基
生根培养基
（2）外植体消毒 2 （3）接种（无菌、酒精灯火焰旁）
（4）培养（注意温度、光照、更换培养基）
（5）驯化试管苗
（6）移栽
3．结果分析
（1）统计移栽试管苗的成活率
（2）各过程经历多长时间，采取了怎样的无菌操作
注意：无菌条件对组织培养的成功至关重要 培养基灭菌要彻底
外植体消毒要充分
接种时无菌操作要严格
三．探究活动
1．选取一种植物进行快速繁殖 （选取 植物）
2．探究组织培养过程中植物激素的作用 （设计对照实验 自变量是 ）
试管苗的增殖和生根培养
专业班级：12级生物2班 学号：20120322239
姓 名： 王雪娇 组 ：第三组
组长：卢晓燕
同组人：杨佳梅 蒋薇 袁蓉 莽斌 林星龙 刘显号 李玉胜 关德红
实验日期:2014年6月16日 室 温：25.4 ℃ 大 气 压：82.3Kpa
实验序号： 五 实验名称：试管苗的增殖和生根培养
一、实验目的
1. 了解不同植物及不同繁殖体材料的增殖繁殖方式；
2. 掌握不同增殖扩繁方式试管苗的转接技术；
3. 掌握生根培养阶段培养基类型的选择及配置方法；
4. 掌握试管苗生根培养的转接技术；
5. 掌握试管苗生根培养的环境条件控制技术；
6. 掌握移栽基质的配制、消毒方法；
7. 掌握生根试管苗的炼苗、常规移栽及移栽后的养护管理技术。
二、实验原理
组培中通过外植体的初代培养以及试管苗的继代增殖培养，诱导产生了大量的丛生芽、丛生茎或原球茎，离体繁殖产生的芽、嫩梢和原球茎，一般都需进一步诱导生根，才能得到完整的植株，当培养材料增殖到一定数量后，就要使部分培养物分流到生根培养阶段，并进行进一步的驯化移栽，使其适应外界的栽培环境，以获得高质量的商品苗。若不能及时将培养物转移到生根培养基上去，就会使久不转移的试管苗发黄老化，或者因过分拥挤而使无效苗增多造成抛弃浪费。试管苗的生根与移栽是植物组培快繁的第三个阶段，也是植物组培快繁的最后一道工序，是能否进行大量生产和实际应用的重要问题，也是商品化生产出售产品、取得效益的最终环节。
试管苗的增殖
试管苗增殖培养也叫继代培养，是实现植物快速繁殖的重要环节。这一阶段的培养目的是在较短的时间内繁殖大量有效的芽和苗。初代培养的结果，往往可以得到不定芽、再生芽、原球茎或胚状体等，但数量非常有限，还要进行增殖培养。增殖培养时选用的培养基可以和初代培养的一样，也可以略加调整，调整与否取决于增殖率，如果增殖率高，细胞分裂素的浓度可不作调整，加入适量的生长素类激素，以促进生根和防止玻璃化苗的大量发生。如果增殖率低，要调整细胞分裂素的用量，常常是提高细胞分裂素的含量。继代培养周期由分化和生长速度而定，当不定芽长满瓶时，或者培养基的养分消耗快尽时，要及时继代培养，继代周期一般为4-6周。继代培养的次数和规模要根据生产计划来确定。
土豆扦插实验报告
土豆扦插实验报告
学号XX姓名XX
土豆扦插实验
实验时间：
X年X月X日
实验内容
1、马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制。
2、马铃薯试管苗的快速繁殖4马铃薯试管薯的诱导5马铃薯幼苗的移栽一实验目的。
通过本次实验，能熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。
通过本次实验，掌握配制培养基的步骤，能熟练准确配制培养基，并能根据实验目的设计适合的培养基配方。熟悉马铃薯快繁培养基及试管薯诱导培养基的配置方法。通过本次实验，进一步掌握无菌操作技术。了解马铃薯脱毒种薯生产的过程，为马铃薯脱毒种薯的生产提供必要的基础苗。作为植物营养繁殖的一个新手段，植物组织培养技术现正日益普及。利用植物组织培养技术，在无菌条件下对外植体进行离体培养，使其短期内获得遗传性一致的大量再生植株的方法称为植物离体无性繁殖。植物离体无性繁殖又称植物快繁或微繁，它是植物组织培养技术在农业生产中应用最广泛、产生经济效益最大的研究领域，涉及的植物种类繁多，技术日益成熟并程序化，繁殖速度突破了植物自然繁殖的界限，成就了工厂化育苗的梦想。植物快繁与传统营养繁殖相比，其特点表现，繁殖效率高。由于不受季节和灾害性气候的影响，材料可周年繁殖。生长速度快，材料能以几何级数增殖。培养条件可控性强。培养材料完全是在人为提供的培养基质和小气候环境条件下生长，便于对各种环境条件进行调控。占用空间小。土豆试管苗在光照条件下进行自养的程度大于异养。相反，在高浓度的糖类存在的情况下，以及在无光照的限制条件下，土豆向着诱导生成试管薯的过程。这样生长出来的试管薯称之为原种种薯。
对实验现象、实验结果的分析及其结论
1、光照对苗的快繁影响较大。中期观察发现，苗未直立生长，且整体向一个方向倾斜，有较明显的向光生长趋势。后期对培养瓶移位，改变捕光方向和位置后，有明显改善。这是由于培养架内各处光照不均匀，以至偏向角落的苗向光生长。
2、马铃薯试管苗快繁过程中发现，有些同学的苗始终不长高，且不生根。这是由于扦插时，违背了其形态学特性，故不生根。
试管苗移入苗床成活技术
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试管苗移入苗床成活技术
中国科学院亚热带农业生态研究所 莫继荣
摘要
外植体消毒、外植体分化与再分化、 试管苗移栽成活是植物组织培养(克隆)三大技术难点。
试管苗在密闭的瓶内培养基上无菌生长，光照较暗、湿度大、长势不旺，类似母体腹中婴儿；试管苗从瓶中移入苗床(称炼苗或驯化)，就像婴儿降生，开始了从异养(渗透吸收养分)到自养(根毛吸收养分)的转化，必须精心呵护，使其根部长出有吸收功能的根毛，才能顺利成活。本文介绍的是试管苗移入苗床保成活的关键技术。
2 1、苗床设施设计与建造
一般植物，生长最适温度：地下部，2-5℃时根系开始活动，10℃时根系大量形成，最适生长温度是15～20℃；地上部是20～26℃。气温低于5℃进入休眠，高于30℃生长受阻。
光补偿点是8000Lux左右，高温强光高湿不仅生长不好，而且容易发生病害。
试管苗从密闭的瓶内培养基上无菌生长，光照较暗、湿度大、长势不旺的主营异养生长，到适用外界环境的自养生长，存在一个逐步适用的过程，应该尽量避免冬季太冷、夏季太热时期炼苗。
我国北方冬天日光温室配备地热线+塑料小拱棚，南方冬天配备钢架双层膜覆盖塑料大棚+塑料小拱棚；夏天两地避开高温期，以4针遮阳网取代棚膜，遮阳网离地1米高开始覆盖，配备4针遮阳网小拱棚覆盖5-7天保湿(预备农膜防暴雨)，可以延长试管苗炼苗期很多，具体用5厘米地温温度计与小工拱棚内气温温度计量温，指导实行。
完全用电力控制的智能温室作炼苗室，造价与运营成本太高，只适合特别稀有，生产量大的场合，但不能采取高架育苗。
2、苗床整地与施肥
苗床必须选用肥力中等以上沙壤土或壤土，每亩初次使用苗床施1.5吨腐熟生物有机肥(以后减半)，翻耕25厘米深。
开沟作畦：按南北方向，沟宽35厘米，畦宽1.5米整地，畦的四周作宽5-8公分、高5公分框边，框中央整平稍微压实，以利均匀填充炼苗基质。 3
炼苗基质：完全晒透过细河沙(刀口纱)，有条件的地方可以用体积比为1:1的细河沙与草炭(太阳暴晒过)混合物，效果更好。
甘草的试管苗快速繁殖
第２８卷第２期 ２０１３年４月 北京农学院学报
ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＢＥＩＪＩＮＧ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＥ Ｖ０１．２８，Ｎｏ．２ Ａｐｒ．，２０１３
甘草的试管苗快速繁殖
黄玉杰，王 丹，王
（大连大学医学院， 旭，宋 娟，赵东利
辽宁大连１１６６２２）
摘要：以甘草种子萌发的幼苗为材料，进行组织培养快速繁殖研究。结果表明，在幼茎、幼叶、子叶、下胚轴、
胚根等５种外植体中，子叶及下胚轴均适合诱导愈伤组织发生；在６－ＢＡ、ＮＡＡ或２，４一Ｄ不同激素组合中，以
Ｍｓ＋６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ １．５ ｍｇ／Ｌ为最佳的愈伤组织诱导培养基，同时也是以茎尖、腋芽为外植体进行丛生
芽诱导的最佳培养基；在ＩＡＡ、ＩＢＡ和ＮＡＡ ３种激素中，以１／２ Ｍｓ＋ＮＡＡ ０．０５ ｍｇ／Ｌ为最佳的试管苗生根培养
基，生根率可达８Ｏ 。
关键词：甘草；愈伤组织；试管苗；快速繁殖
中图分类号：￥５６７．７网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／１１．２１５６．Ｓ．２０１３０３２５．１５２７．００４．ｈｔｍｌ
文章编号：１００２—３１８６（２０１３）０２—０００５—０３ 文献标志码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２—３１８６．２Ｏ１３．００．００２
Ｒａｐｉｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ Ｆｉｓｃｈ
ＨＵＡＮＧ Ｙｕｊｉｅ，ＷＡＮＧ Ｄａｎ，ＷＡＮＧ Ｘｕ，ＳＯＮＧ Ｊｕａｎ，ＺＨＡＯ Ｄｏｎｇｌｉ
（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｄａｌｉａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ １１６６２２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ ｉｓ ａ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｌａｎｔ ｔｈａｔ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｗｉｄｅｌｙ ｕｓｅｄ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｆｏｌｋ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｆｏｒ ｒｅｌｉｅｖｉｎｇ ｆｅｖｅｒ，ｄｅ— ｔｏｘｉｆｃａｔｉｏｎ，ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｐｈｌｅｇｍ，ｓｔｏｐｐｉｎｇ ｃｏｕｇｈ，ｔｏｎｉｆｙｉｎｇ ｓｐｌｅｅｎ ａｎｄ ｓｔｏｍａｃｈ，ｅｔｃ．Ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ