大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定

大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定

大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定

青岛农业大学

兽医微生物学课程论文

题目:大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定

姓名:

学院:动物科技学院

班级:马业科学1201班

学号: 2012 任课教师:温建新

二0一四年四月一日

大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定

马业科学1201

任课教师温建新

摘要:为了鉴别大肠杆菌和沙门氏菌,我们将用过氧化氢试验,甘露醇试验,凝固酶试验等方法进行鉴别,并根据他们的不同性质出现不同的结果,得出菌的种类。

关键词:大肠杆菌沙门氏菌三糖铁糖发酵麦

康凯琼脂

引言:大肠杆菌是肠杆菌中埃希氏菌中的代表种。根据O、H、K抗原的不同,可将大肠杆菌株分为不同的血清型。自然界中大肠杆菌的血清型可分为数万种,但致病性大肠杆菌的数量有限。

沙门氏菌属是有一大群血清学相关的革兰氏阴性、兼性厌氧的无芽孢杆菌组成,系肠杆菌科中重要的病原菌属之一,对任何动物均有致病性,可以欺人的伤寒、副伤寒、肠炎和食物中毒,对动物能致多种临床表现的沙门氏菌病,亦能以继发菌出现在其他疾病中。

大肠杆菌和沙门氏菌作为肠杆菌科的成员具有一些共同的特征,如形态、染色特性等。但一些培养特性和生化特性有差异,可作为鉴别诊断的依据,有时

还需要依靠血清学方法。

I

目录

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关键词...................................... 错误!未定义书签。

引言........................................ 错误!未定义书签。

1 材料 (1)

1.1 菌种 (1)

1.2 培养基 (1)

1.3 生化试剂 (1)

1.4 沙门氏菌诊断血清 (1)

1.5 器材 (1)

2 方法 (1)

2.1 增菌培养 (1)

2.2 直接分离培养 (1)

2.3 形态观察 (1)

2.4 培养特性观察 (1)

2.5 生化试验 (2)

2.5.1糖发酵管接种 (2)

2.5.2 蛋白胨水接种 (2)

2.5.3 葡萄糖蛋白胨水接种 (2)

2.5.4 尿素琼脂接种 (2)

2.5.5 枸橼酸盐琼脂接种 (2)

2.6 生化特性的观察 (2)

2.6.1 糖发酵实验 (2)

2.6.2 MR实验 (2)

2.6.3 VP实验 (2)

2.6.4 吲哚实验 (3)

2.6.5 枸橼酸盐利用实验 (3)

2.6.6硫化氢实验 (3)

2.7 药物敏感试验-扩散法 (3)

3 结果观察 (3)

3.1 大肠杆菌和沙门氏菌在三糖铁琼脂培养基上的生长状况错误!未定义书签。

3.2 细菌的染色、镜检 (4)

3.3 生化管的接种培养 (4)

3.4 吲哚、MR、V-P实验................. 错误!未定义书签。

3.5 药物敏感试验 (6)

实验1 大肠杆菌的培养与分离

实验1:大肠杆菌的培养和分离 一、教学要求 二、基本内容 培养 无菌技配制培养基的原 的培养基的配制计算→称量→溶化→调pH 实配制培养基的方法→分装→加棉塞→灭菌→倒验平板 室平板划线法培分离、纯化大肠杆菌 养稀释涂布法系列稀释平板涂布 1.培养基的种类和化学成份 培养基的种类有很多划分标准,按物理性质分:固体培养基和液体培养基(加入琼脂多少)。液体培养基用于扩大培养和工业生产,固体培养基用于菌种分离,鉴定,计数(菌落数量)。 培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。按照微生物的同化作用类型是自养还是异养,碳源不同,自养微生物为无机碳源,如硝化细菌是二氧化碳或碳酸盐,异养微生物为有机碳源,如大肠杆菌是葡萄糖等有机物。 2.常见微生物类群 原核生物(如细菌大肠杆菌――二分裂、革兰氏阴性、异养兼性厌氧性肠道杆菌、蓝藻、支原体、衣原体、放线菌等)、原生生物(草履虫、变形虫等)、真菌(酵母菌――出芽生殖.异养兼性厌氧性微生物、霉菌、食用菌)、病毒等。 细菌是单细胞的原核生物,有细胞壁(肽聚糖)、细胞膜、细胞质,无成型的细胞核,只有一环状DNA分子(拟核)。以分裂(二分裂)的方式繁殖,分裂速度很快。用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌(革兰氏染液染色后,再脱色处理,细菌仍保留染色液的颜色)和革兰氏阴性菌两大类,区别在细胞壁的成分不同。大肠杆菌是革兰氏阴性(细胞壁薄,有荚膜)、兼性厌氧的肠道杆菌。 3.无菌技术 对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒;将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌;为避免周围微生物污染,实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行;避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 灭菌方法: 。灼烧灭菌法①接种环、接种针、试管口等使用

大肠杆菌分离鉴定及药敏实验方案

鸡致病性大肠杆菌的分离培养及药敏实验 实验基本步骤:样品→肝、脾触片革兰氏染色镜检→普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板分离培养→革兰氏染色镜检、生化实验鉴定→普通肉汤培养基增殖培养→药敏实验。 1 病料采集 1.1 准备材料:试管、载玻片、手术刀、手术剪、结扎绳、记号笔、冰块、泡沫箱、口罩、手套(该灭菌的都进行高压蒸汽灭菌)、冰箱。 1.2 取材部位:血液、肝脏、脾脏、肠内容物,若有鸡胚感染则去鸡胚及卵黄物。 1.3 操作方法:将病死鸡浸泡在消毒剂溶液中,打开腹腔,无菌采集肝脏、脾脏放于事先准备好的灭菌试管内,将带有肠内容物的肠管两端结扎放于灭菌是试管内。将有明显病变的脏器入肝、脾进行触片,做好标记。都贴上标签,标示采集样品,来源地,采集时间,采集人。将装有病料的试管放在放有冰袋的泡沫箱中,及时返回实验室,置于4℃冰箱待检。 2 菌的分离培养及鉴定 2.1 准备材料:光学显微镜、革兰氏染色液、载玻片、手术刀、接种环、平皿、恒温箱、高压锅、摇床、酒精灯、葡萄糖、甘露醇、乳糖、蔗糖等微量生化发酵管,蛋白胨水(蛋白胨(或胰蛋白胨)20g、氯化钠5g、蒸馏水1000mL pH7.4),葡萄糖蛋白胨水溶液(每100 mL蛋白胨水中加入葡萄糖1g)、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、VP指示剂、超净台。 培养基: A. 普通琼脂培养基(牛肉粉 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、琼脂 20g、蒸馏水1000ml,ph7.3±0.1), B. 麦康凯琼脂培养基(蛋白胨20g、牛胆盐5g、氯化钠5g、琼脂15g,乳糖10g、结晶紫0.001g、中性红0.025g,ph7.2±0.2。), C. 营养肉汤培养基(牛肉粉 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、蒸馏水1000ml,ph7.2±0.2)。 2.2 样品触片镜检 涂片镜检:取触片,进行革兰氏染色镜检。 2.2.1在玻片上滴加草酸铵结晶紫染色液,作用1min,水洗。 2.2.2 加革兰氏碘液于玻片上媒染,作用1min,水洗。

高中生物大肠杆菌的培养和分离(学案)

大肠杆菌的培养和分离 ——基础知识和操作过程梳理 一、大肠杆菌 细菌是单细胞的原核生物。细菌细胞的结构有细胞壁、细胞膜、细胞质等。细菌无成型的细胞核,细胞壁由肽聚糖组成。由于细菌细胞壁结构不同,细菌可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。革兰氏阳性菌细胞壁厚,无荚膜,多产生外毒素;革兰氏阴性菌细胞壁薄,有荚膜,多产生内毒素。革兰氏阳性菌对青霉素更为敏感。 大肠杆菌是革兰氏阴性、异养兼性厌氧型肠道杆菌。在肠道中一般对人无害,但任何大肠杆菌进入人的泌尿系统,都会对人体产生危害。大肠杆菌在基因工程技术中被广泛的应用,它的质粒是最常用的运载体,它也是基因工程中常用的受体细胞。 二、培养基配置 微生物生命活动过程中需要的化合物有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水。有的化合物既是碳源又是氮源、能源。生长因子是微生物生长不可缺少的微量有机物,但不一定需要外界补充,有的微生物可以自身合成。在提供上述几种主要营养物质的基础上,培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌,培养后可在LB固体培养基上划线分离。以下为本实验中培养基配置步骤: 1.称量:准确称取各成分。蛋白胨0.5g,酵母提取物0.25g,氯化钠0.5g,加水50ml。配置LB固体培养基时还需加1g琼脂。 2.溶化:加热熔化,用蒸馏水定容到50mL。配置LB固体培养基时还需加琼脂,整个过程不断用玻棒搅拌,目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。 3.调pH:用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。 4.灭菌:在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基,加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好,放入灭菌锅内,1kg压力灭菌15min。 5.倒平板:灭菌后,待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是:①将灭过菌的培养皿放在火焰旁,右手拿装有培养基的三角瓶,左手拔出棉塞;②右手拿三角瓶,使三角瓶的瓶口迅速通过火焰;③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙,右手将培养基倒入培养皿,立刻盖上皿盖;④待平板冷却凝固后,将平板倒过来放置。

大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案

大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案 实验原理: 1、大肠杆菌的性质: 大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌,在大多数培养基上表现出不同的特性。在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落,革兰氏染色镜检为红色短杆菌。三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄,产气,不产生硫化氢。生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖,不发酵蔗糖。MR试验,吲哚试验为阳性,VP试验为阴性,不产生H2S,不能利用枸椽酸盐。半固体中沿穿刺线向四周生长。 2、沙门氏杆菌的性质: 沙门氏杆菌是G-直杆菌。在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落,三糖铁斜面下层变黄色,上层仍为红色,穿刺处为变黑产生H2S。能发酵葡萄糖产酸产气,能利用枸椽酸盐,不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇,MR阳性,VP阴性,不产吲哚,不分解尿素。 实验材料: 含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基(琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC)、器械(剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿)、药品(消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油) 实验内容及操作程序: 一、培养基制备: 制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基,制备方法见附1.二、标本制备: (1)取新鲜猪肝脏一小块,火焰表面消毒。 (2)用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。 (3)用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液,分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中,37°C恒温培养24小时。 三、细菌分离培养: (1)取出培养了24小时的麦康凯平板。挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检,看是否为红色短杆菌,若是,即疑似为大肠杆菌,则取其接种于另一麦康凯平板,37°C 恒温培养24小时。 (2)取出培养了24小时的SC增菌培养基,染色镜检,看是否有疑似沙门氏菌,有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上,37°C恒温培养24小时。 四、细菌的鉴定纯化: (1)检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落,染色镜检。并取其分别接种于生化培养基上(葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、肌醇、枸椽酸盐、尿素、MR、VP、H2S),并做穿刺实验于三糖铁上。37°C恒温培养24小时后观察结果。若实验结果满足预期效果,则可判定为大肠杆菌,则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。 (2)检查疑似沙门氏菌的平板上是否长满细菌,染色镜检,看是否满足于沙门氏菌的染色特性。并取其接种于生化培养基上,并作穿刺实验于三糖铁上,37°C恒温培养24小时后观察结果,若结果满足于沙门氏菌的生化特性,则可判定为沙门氏菌,则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。

沙门氏菌检验

沙门氏菌的检验 1.目的 规范沙门氏菌检测方法,使产品检验有据可依。 2.消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等,必须经灭菌后方能使用。 注:本实验采用湿热灭菌法,吸管、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求的温度和压力灭菌,一般是121℃()下灭菌20min。 3.原理 沙门氏菌的检验分四个连续阶段: 4.操作步骤 准备工作 配制实验所需的缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培养基(无需灭菌)、HE培养基、三糖铁培养基等,并将准备好的均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。 前增菌 在无菌环境下,称取25g待检样品放入盛有225ml灭菌好的缓冲蛋白胨水中,然后放到36±1℃的恒温培养箱内进行前增菌4-6h; 增菌 在无菌环境下,用灭菌好的吸管吸取10ml前增菌液接种与100ml亚硒酸盐胱氨酸培养基中进行二次增菌,恒温培养箱36±1℃,培养18-24h; 分离培养 将增菌培养液摇匀,以无菌操作,用直径3mm的接种环挑取一环,划线于表面无凝结水的BS和SS琼脂平板各一个,于36±1℃培养18-24h。观察各个平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落。如无典型或可疑菌落,应再继续培养24±2h。然后观察培养的平板(黄色的菌落是大肠杆菌;蓝绿色或蓝色,产硫化氢,菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门氏菌)。 沙门氏菌属各亚属在其他选择性琼脂平板的菌落特征 生化实验 用灭菌好的接种针在培养平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落,接种到三糖铁培养基上,恒温培养箱36±1℃,培养18-24h; 典型沙门氏菌培养物斜面显红色(碱性),底端显黄色(酸性),有气体产生,形成硫化氢(琼脂变黑)。 三糖铁培养基变化表 肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果

大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案

实验原理: 1、大肠杆菌的性质: 大肠杆菌是G无芽抱直杆菌,在大多数培养基上表现出不同的特性。在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落,革兰氏染色镜检为红色短杆菌。三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄,产气,不产生硫化氢。生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖,不发酵蔗糖。MR试验,口引噪试验为阳性,VP试验为阴性,不产生H 2S,不能利用xx酸盐。 半固体中沿穿刺线向四周生长。 2、沙门氏杆菌的性质: -沙门氏杆菌是G直杆菌。在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落,三糖铁斜面下层变黄色,上层仍为红色,穿刺处为变黑产生H 2S。能发酵葡萄糖产酸产气,能利用枸椽酸盐,不发酵乳糖不利用蔗糖肌 醇,MR阳性,VP阴性,不产呵噪,不分解尿素。 实验材料: 含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基(琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SQ、器械(剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿)、药品(消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油) 实验内容及操作程序: 一、培养基制备: 制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基,制备方法

见附 1. 二、标本制备: (1) 取新鲜猪肝脏一小块,火焰表面消毒。 (2) 用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。 (3) 用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液,分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中,37 C恒温培养24小时。 三、细菌分离培养: (1) 取出培养了24小时的麦康凯平板。挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检,看是否为红色短杆菌,若是,即疑似为大肠杆菌,则取其接种于另一麦康凯平板,37 C恒温培养24小时。 (2) 取出培养了24小时的SC增菌培养基,染色镜检,看是否有疑似沙门 氏菌,有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上,37 C恒温培养24小时。 四、细菌的鉴定纯化: (1) 检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落,染色镜检。并取其分别接种于生化培养基上(葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、肌醇、枸椽酸盐、尿素、MR、VP、H 2S),并做穿刺实验于三糖铁上。37 C恒温培养24小时后观察结果。若实验结果满足预期效果,则可判定为大肠杆菌,则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。 (2) 检查疑似沙门氏菌的平板上是否长满细菌,染色镜检,看是否满足于沙门氏菌的染色特性。并取其接种于生化培养基上,并作穿刺实验于三糖铁 上,37 C恒温培养24小时后观察结果,若结果满足于沙门氏菌的生化特性,则可判定为沙门氏菌,则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。

大肠杆菌的培养和分离

一、大肠杆菌的培养和分离 用__________扩大培养,再用__________分离,形成一个个单独的菌落。 __________培养基是细菌通用培养基;__________培养基是植物组织培养通用培养基2.细菌分离方法比较 __________分离法---方法简单; __________分离法—单菌落易分离,操作复杂 3.灭菌操作 ①灭菌操作的首要条件是各种器皿必须是无菌的 ②各种培养基必须是无菌 4.培养和分离步骤 __________→__________→__________培养__________分离→培养保存 5.灭菌与消毒 二、分离以尿素为唯一氮源的微生物 1.实验原理 (1)利用尿素的细菌含有__________,通过降解_______作为其生长的氮源,其反应式如下:(NH2)2C=O+H2O----脲酶→____________________2 (2)利用指示剂(______)颜色变化检验脲酶所催化的反应,若酚红由__________色变为__________色,证明尿素以被脲酶水解产生__________ 2实验步骤 制备__________培养基和以______为唯一氮源固体培养基→制备细菌__________,并稀释至10-3、10-4、10-5、10-6→__________分离→培养保存 注意:在恒温箱中培养时,培养皿要__________—防止凝结的蒸馏水滴到培养基上 3预测结果: ①LB全素固体培养基上__________; ②以尿素为唯一氮源固体培养基__________; ③一定时间内,菌落周围出现__________区域; ④用浓度为10-4和10-5土壤稀释液接种,__________土壤稀释液更容易形成单菌落。 高考及高考模拟题

大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验

河南农业大学 本科生毕业论文(设计) 题目鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验学院牧医工程学院 专业班级2011届动物医学专升本3班学生姓名王张凡 指导教师许兰菊(教授) 撰写日期:2011年5月10 日

鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验 王张凡 (2011届动物医学专升本3班) 摘要:为了对巩义某鸡场疑似鸡大肠杆菌病的鸡群进行确诊,并为有效防治提供依据,本研究利用细菌学检验方法对采集的典型病料进行细菌分离鉴定和细菌药敏试验。通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验、动物试验和血清学试验。结果表明:该鸡群中分离到的病原菌为鸡大肠杆菌。动物攻毒试验结果表明:分离的鸡大肠杆菌具有明显的致病作用,雏鸡发病率为100%(5/5),死亡率达60%(3/5)。血清学鉴定结果显示,该分离菌血清型为O1。药敏试验结果表明:该细菌对头孢曲松、头孢唑林、阿米卡星、复方新诺明(磺胺甲恶唑)、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、氨苄西林、米诺环素和庆大霉素均敏感,对阿莫西林和阿奇霉素为中度敏感;但对罗红霉素和四环素耐药。本研究结果对准确诊断和有效防治该病提供了依据和条件。 关键词:鸡;大肠杆菌;分离鉴定;药敏试验 Isolation, Identification and Antibiotic Sensitivity Test of Chicken Escherichia Coli wang zhangfan (Class 3 of Veterinary Medicine, Graduated in 2011) Abstract:In order to make a definite diagnosis for the suspend Chicken Escherichia Coli about chicken house from Gongyi and provide a reference for effective prevention and treatment. The bacteria was isolated and identified from typical samples and antibiotic sensitivity test was also adopted. By bacterial separate cultures, morphological observation, biochemical tests, animal experiment and serological tests, the pathogen of this chickens is pathogenic E.coli bacteria. The result of animal experiment showed: this Escherichia coli had obviously pathogenic; the morbidity of chicklings was 100%(5/5) and the mortality was 60%(3/5).Serological testing results indicated: the serotype of this strain was O1. The antibiotic sensitivity test results illuminated: the sensitivity of the strain to ceftriaxone、cefazolin and other 8 kinds of drug were sensitive; and the drug sensitivity to amoxicillin and azithromycin are intermediate;but the strain were drug resistant to roxithromycin and acheomycin. This research provided a scientific basis and qualification for exact diagnosis and effective prevention and treatment to Escherichia coli. Key word:Chicken,Escherichia Coli, Isolation and Identification, Antibiotic Sensitivity Test 鸡大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(avian pathgenicity E.coli,APEC)引起的急性或慢性细菌性传染病,各种日龄的鸡均可发病,但雏鸡和产蛋鸡更易发病,其常与其他疾病混合

沙门氏菌的检验

沙门氏菌的检验 食品学院14食品质量与安全1班 刘文敏柳基炜卫杰恒温紫君 摘要:本实验采用GB/的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术,了解沙门氏菌的一些生化特性;本实验先用显色培养基找出可疑菌落,再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌,再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。 关键词:沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定 前言 沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一,其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。沙门氏菌是一个统称,泛指 2000 多种有紧密连系的细菌,包括引起食物中毒,导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。虽然只有少数人因沙门氏菌而患病,但是,在世界范围内的细菌性食物中毒事件中,由沙门氏菌引起的占大多数。因此,采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌,已经成为了人们最关心的问题之一[1]。国标法是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行[2]。 1材料与方法 实验材料 均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒 恒温培养箱:36℃±1℃,42℃±1℃ 吸管:1 mL(具 mL刻度)、10mL(具刻度或微量移液器及吸头 电子天平PL602-S,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司; 手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B,上海申安医疗器械厂 试剂药品 鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和H诊断血清、API20E生化试剂盒或VITEKGNI生化鉴定卡

培养基 蛋白胨水(BPW)、四硫磺酸钠煌绿(TTB)、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液、亚硫酸铋(BS)琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β-D半乳糖苷(ONPG)培养基 实验方法 培养基的制备 培养基的配制步骤 蛋白胨水(BPW):称取蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠、蒸馏水1000ml,将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约 10 min,煮沸溶解,调节 pH,高压灭菌 121 ℃,15 min。分装10瓶,每瓶90ml 四硫磺酸钠煌绿(TTB):高压灭菌 121 ℃,15 min灭菌冷却后至30℃,每100ml基础培养液加碘液2ml,煌绿液1ml 配制培养基的注意事项 (1)按照说明书上的用量进行换算,称取准确分量的合成培养基粉末; (2)加热煮沸溶解培养基时,留意锅内水位的变化,水位下降可再添加适量的水,以免水分蒸发过多,导致后面分装不够量; (3)往试管中放小导管时,注意处理气泡。 沙门氏菌群检测 2沙门氏菌检测操作步骤 前增菌 称取 10 g(mL)样品放入盛有 90 mL BPW的无菌均质杯中,以 8 000 r/min~10 000 r/min 均质1 min~2 min,或置于盛有90 mL BPW的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1 min~2 min。使用均质袋,可直接进行培养,于 36 ℃±1 ℃培养8 h~18h。 増菌 轻轻摇动培养过的样品混合物,移取 1 mL,转种于10mL TTB 内,于42℃±1℃培养18h~24h。同时,另取1mL,转种于10mL SC内,于36℃±1℃培养18 h~24h。 分离

仔猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定

仔猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定 仔猪黄痢病是出生仔猪常发的急性、致死性肠道传染病,多在仔猪出生后几天内发病,发病率高、死亡率高。临床症状主要以腹泻、排黄色稀粪、急性死亡为主要特征,剖检有肠炎和败血症变化,是危害哺乳仔猪的重要传染病之一,严重影响仔猪的生长发育,对养猪业危害极大。2015年3月,北京顺义某猪场突发仔猪腹泻,排黄白色或黄色水样稀便,根据流行病学、临床症状和病理剖检,并结合细菌病原分离、生化鉴定,致病性试验,药敏试验,确诊为仔猪黄痢大肠杆菌病。对分离的菌株进行了药敏试验,筛选出了3种敏感药物,根据诊断及药敏试验结果采取了相应的控制措施,效果显著经治疗,病情得到了有效控制。现报告如下。 1 发病情况北京顺义某猪场于2015年3月,5日龄仔猪突然发病,仔猪腹泻不止,患猪粪便呈黄白色或黄色水样,仔猪迅速消瘦、全身衰弱,很快死亡。 2 临诊症状患猪腹泻黄色水样、顺肛门流下。精神沉郁,停止吃乳,脱水,迅速消瘦。 3 病理变化心包增厚,心包膜外面覆盖纤维素性渗出物,心外膜小点出血。肝表面覆盖一层灰黄色纤维素膜,肝肿大呈土黄色,表面有细小的灰白色坏死点。脾肿大出血。十二指肠出血。 4 实验室诊断 4.1 细菌分离培养将采集的2份肝脏组织分别接种马丁琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基,37℃培养18~24h,观察菌落形态。挑取可疑菌落涂片、革兰氏染色、镜检、纯培养。 4.2 生化试验参照BioMerieux VITEK32全自动细菌鉴定及药敏仪鉴定操作说明进行。取纯化的单菌落接于0.45% NaCL基物安培管,用比浊仪制备混浊度相当于1个麦氏单位的菌悬液,接种于VITEK革兰氏阴性菌鉴定卡(GNI+),放入读数器中鉴定读取结果。 4.3致病性试验 将上述生化试验鉴定为大肠杆菌阳性的菌株,分别取纯化的单菌落接种普通营养肉汤,37℃培养24h,将每个菌株的营养肉汤培养物分别经腹腔接种小白鼠

沙门氏菌基本知识及检测方法

沙门氏菌基本知识及检测方法 沙门氏菌属(Salmonella)是肠杆菌科的一个大属,有2000多个血清型,我国发现的约有100个。沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中。1880年Eberth首先发现伤寒杆菌,1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌,由于Salmon发现本属细菌的时间较早,在研究中的贡献较大,遂定名为沙门氏菌属Salmonella 。本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性,能引起人和动物的败血症与胃肠炎,甚至流产,并能引起人类食物中毒,是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一。 根据沙门氏菌的致病范围,可将其分为三大类群。第一类群:专门对人致病。如伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌(甲型、乙型、丙型)。第二类群:能引起人类食物中毒——食物中毒沙门氏菌群,如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等。第三类群:专门对动物致病,很少感染人,如马流产沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌。致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholerae),其次是鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)。 一、沙门氏菌属的生物学特征: 1.形态染色特性:G-无芽孢杆菌。大小通常为 0.7~1.5μm × 2.0~5.0μm,菌端钝圆,散在,偶有短丝状,无荚膜,除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛,能运动,绝大多数菌株有菌毛。需氧或兼性厌氧菌,生长温度范围为10~42℃,最适生长温度为37℃,适宜pH为6.8~7.8,对营养要求不高,在普通培养基中生长旺盛,胆盐可促进其生长。 2.培养特性:需氧或兼性厌氧菌;生长温度范围为10~42℃,最适生长温度为37℃;适宜pH为6.8~7.8;对营养要求不高,在普通培养基中生长旺盛;胆盐可促进其生长。 §普通琼脂:圆形、光滑、无色半透明、边缘整齐或不太整齐的中等大小(2 ~ 4mm)菌落。鸡白痢、鸡伤寒、猪副伤寒、甲型副伤寒沙门氏菌等只能长成细小菌落。§麦康凯琼脂和伊红美兰琼脂(EMB):菌落无色半透明

高中生物《大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙教版选修1

高中生物《大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙 教版选修1 一、大肠杆菌细菌是单细胞的原核生物。细菌细胞的结构有细胞壁、细胞膜、细胞质等。细菌无成型的细胞核,细胞壁由肽聚糖组成。由于细菌细胞壁结构不同,细菌可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。革兰氏阳性菌细胞壁厚,无荚膜,多产生外毒素;革兰氏阴性菌细胞壁薄,有荚膜,多产生内毒素。革兰氏阳性菌对青霉素更为敏感。大肠杆菌是革兰氏阴性、异养兼性厌氧型肠道杆菌。在肠道中一般对人无害,但任何大肠杆菌进入人的泌尿系统,都会对人体产生危害。大肠杆菌在基因工程技术中被广泛的应用,它的质粒是最常用的运载体,它也是基因工程中常用的受体细胞。 二、培养基配置微生物生命活动过程中需要的化合物有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水。有的化合物既是碳源又是氮源、能源。生长因子是微生物生长不可缺少的微量有机物,但不一定需要外界补充,有的微生物可以自身合成。在提供上述几种主要营养物质的基础上,培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌,培养后可在LB固体培养基上划线分离。以下为本实验中培养基配置步骤:

1、称量:准确称取各成分。蛋白胨0、5g,酵母提取物0、25g,氯化钠0、5g,加水50ml。配置LB固体培养基时还需加1g 琼脂。 2、溶化:加热熔化,用蒸馏水定容到50mL。配置LB固体培养基时还需加琼脂,整个过程不断用玻棒搅拌,目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。 3、调pH:用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。 4、灭菌:在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基,加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好,放入灭菌锅内,1kg压力灭菌15min。 5、倒平板:灭菌后,待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是:①将灭过菌的培养皿放在火焰旁,右手拿装有培养基的三角瓶,左手拔出棉塞;②右手拿三角瓶,使三角瓶的瓶口迅速通过火焰;③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙,右手将培养基倒入培养皿,立刻盖上皿盖;④待平板冷却凝固后,将平板倒过来放置。倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。向培养皿中转移已灭菌的培养基时,也不要把培养基沾在皿壁上。否则,空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖,并污染皿内培养基。 三、灭菌和消毒

大肠杆菌分离鉴定论文

河南科技学院2010届本科毕业论文(设计) 一起猪源性大肠杆菌病的诊治 学生姓名:汤鹏 所在院(系):动物科学学院 所学专业:动植物检疫 导师姓名:王宪文 完成时间:2014年5月

一起猪源性大肠杆菌病的诊治 摘要 大肠杆菌病是由病原大肠埃希氏菌所引起的一种急性、多型性、肠道型传染病,严重影响仔猪的存活率。主要临床表现有仔猪黄痢、仔猪白痢、猪水肿病。为了弄清养猪场大肠杆菌病的主要血清型、抗药性等特点,以便采取合理的防治措施,采集病料60份,进行大肠杆菌病的分离培养鉴定、生化试验、耐药性试验等,大肠杆菌的分离鉴定包括病原菌的分离培养、生化试验、毒理试验,在伊红美蓝上挑出略带金属光泽、紫黑色的菌落接种在麦康凯上经过培养后,轻摇显云雾状的菌环,在营养琼脂上培养形成菌落,进行试验找出菌落的特性,以及致病力。耐药性实验结果表明(),治疗试验中------,试验结论--。(方法为培养基的制备、琼脂纸片扩散法,氟哌酸、磺胺、四环素对大肠杆菌不太有效,大肠杆菌对头孢类药物较为敏感,对卡那霉素、庆大霉素不敏感)(删除) 关键词:仔猪、大肠杆菌、分离鉴定、药敏试验、中草药制剂

Abstract Escherichia coli disease is an acute, polymorphism, intestinal infectious diseasescaused by pathogenic Escherichia coli, seriously affect the survival rate of piglets. The main clinical manifestations of yellow scour of newborn piglets, white scour of piglets, edema disease of swine. In order to understand the swinecolibacillosis serotype, drug resistance, in order to take reasonable measures of prevention and cure disease, collecting material is 60, separation of Escherichia coli culture identification, biochemical test, resistance test, isolation, isolation and identification of pathogenic bacteria Escherichia coli include biochemical test,toxicity test, in eosin methylene blue was inoculated with metallic luster, pick out the purple black at mark Kang Kai. After training, annulus rocked the explicitcloud like, culture form colonies on nutrient agar, find out the characteristics ofcolony, and pathogenicity. Methods drug sensitivity test for the preparation of culture medium, agar disk diffusion method, norfloxacin, tetracycline andsulfonamide, less effective against Escherichia coli, E. coli sensitive tocephalosporins, not sensitive to kanamycin, gentamicin, Key words: Piglet, Escherichia coli, isolation and identification, drug sensitive test, micro ecological preparation

实验1 大肠杆菌的培养和分离.doc

实验1 大肠杆菌的培养和分离 ——基础知识和操作过程梳理一、大肠杆菌细菌是单细胞的原核生物。细菌细胞的结构有细胞壁、细胞膜、细胞质等。细菌无成型的细胞核,细胞壁由肽聚糖组成。由于细菌细胞壁结构不同,细菌可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。革兰氏阳性菌细胞壁厚,无荚膜,多产生外毒素;革兰氏阴性菌细胞壁薄,有荚膜,多产生内毒素。革兰氏阳性菌对青霉素更为敏感。大肠杆菌是革兰氏阴性、异养兼性厌氧型肠道杆菌。在肠道中一般对人无害,但任何大肠杆菌进入人的泌尿系统,都会对人体产生危害。大肠杆菌在基因工程技术中被广泛的应用,它的质粒是最常用的运载体,它也是基因工程中常用的受体细胞。二、培养基配置微生物生命活动过程中需要的化合物有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水。有的化合物既是碳源又是氮源、能源。生长因子是微生物生长不可缺少的微量有机物,但不一定需要外界补充,有的微生物可以自身合成。在提供上述几种主要营养物质的基础上,培养基还需要满足微生物生长对ph、特殊营养物质以及氧气的要求。我们一般用lb液体培养基来扩大培养大肠杆菌,培养后可在lb固体培养基上划线分离。以下为本实验中培养基配置步骤: 1.称量:准确称取各成分。蛋白胨0.5g,酵母提取物0.25g,氯化钠0.5g,加水50ml。配置lb固体培养基时还需加1g 琼脂。 2.溶化:加热熔化,用蒸馏水定容到50ml。配置lb固体培养基时还需加琼脂,整个过程不断用玻棒搅拌,目的是防止琼脂糊

底而导致烧杯破裂。 3.调ph:用1mol/l naoh溶液调节ph至偏碱性。 4.灭菌:在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml lb液体培养基和50ml lb固体培养基,加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好,放入灭菌锅内,1kg压力灭菌15min。 5.倒平板:灭菌后,待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是:①将灭过菌的培养皿放在火焰旁,右手拿装有培养基的三角瓶,左手拔出棉塞;②右手拿三角瓶,使三角瓶的瓶口迅速通过火焰;③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙,右手将培养基倒入培养皿,立刻盖上皿盖;④待平板冷却凝固后,将平板倒过来放置。倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。向培养皿中转移已灭菌的培养基时,也不要把培养基沾在皿壁上。否则,空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖,并污染皿内培养基。 三、灭菌和消毒 1.无菌技术:①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒;②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌;③为避免周围微生物污染,实验操作应在酒精灯火焰旁进行; ④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 2.消毒方法:①日常生活经常用到的是煮沸消毒法;②对一些不耐高温的液体,则使用巴氏消毒法;③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果,然后使用紫外线进行物理消毒;④实验操作者的双手使用酒精进行消毒。 3.灭菌方法:①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法;②培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅;③表面灭菌和空气灭菌等使

仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验 程子兵1 董春霞2石国界3沙里塔那4 马长丽1 (1. 塔城地区动物疾控与诊断中心新疆塔城834700;2. 重庆市武隆县畜牧兽医局重庆市武隆县408500;3. 塔城市畜牧兽医工作站新疆塔城834700;4. 额敏县兽医工作站新疆额敏县834600) 摘要:对塔城地区一农户饲养猪群中仔猪发生的临床症状以水肿病、白痢、黄痢为特征的病例进行了样品采集,后经麦康凯、伊红美蓝分离培养,糖发酵生化试验、动物试验等结果显示均为大肠杆菌,同时通过药敏试验筛选出敏感抗生素。 关键词:仔猪;大肠杆菌;分离鉴定;药敏试验 Abstract:Specimens with dropsy and dysentery clinical symptoms were isolated from one household raises pig group in Tacheng area. By bacteria culture, biochemical test and animal test, the results indicate the bacterium is pathogenic Escherichia Coli. Meanwhile, we ascertain sensitive antibiotics to this E coli by medicine test. Key words:pig; Escherichia Coli; isolate indentify; medicine test 仔猪大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的肠道传染病,主要表现为仔猪白痢、黄痢和水肿病,其中黄痢多发生于1周内哺乳仔猪,病猪主要表现为排黄色糊状粪便;白痢多发于10~30日龄,病猪主要表现为排乳白色或灰白色腥臭糊状粪便;水肿病多发于断奶仔猪,主要有神经症状、胃壁、肠黏膜等组织水肿,四季均可发生,发病率和致死率

一株都柏林沙门氏菌的分离与鉴定

一株都柏林沙门氏菌的分离与鉴定 2011年8月,我市发生一起因宴请引起的食物中毒,中毒人数达30人。根据流行病学调查、临床表现和检验结果,判定是一起由都柏林沙门氏菌引起的食物中毒。 2011年8月10日—12日,先后有30人到医院就诊,其中男性18人,女性12人,年龄最 大的有58岁,年龄最小的7岁。 1、流行病学调查 1.1现场调查:用餐的饭店卫生条件较差,从业人员不按卫生程序进行操作,生熟不分。据 饭店从业人员提供,宴请当天较忙乱,在切生肉的菜板上切了凉拌海蜇皮、黄瓜等。 1.2 临床表现:多数病人首先感到发冷、发热、头痛、头晕、继之恶心、呕吐、腹泻,腹泻 次数多在6-10次,重者达20次,少数患者有里急后重感,四肢无力,体温38℃-40℃。 2、实验室检查 2.1 材料 2.1.1 标本:对中毒现场可疑食物及中毒病人的呕吐物和排泄物进行无菌采样。共采集样品 12份,其中残留食品5份,菜板涂抹物1份,患者排泄物3份,呕吐物2份。 2.1.2 亚硒酸盐胱氨酸增菌液、肠道菌增菌肉汤、SS培养基、EMB培养基,江苏省宜兴市万 石培养基厂生产。 诊断血清:兰州生物制品研究所提供。 2.2 方法:根据中华人民共和国国家标准GB∕T4789.4-2003食品卫生检验方法微生物学部分进行。 2.3 结果:标本经亚硒酸盐胱氨酸增菌液、肠道菌增菌肉汤增菌,再经SS、EMB平板分离后,结果发现:菌落中等大小、圆形边缘整齐,菌落中心黑,周边透明、光滑、湿润,涂片镜检 均为G-无芽胞小杆菌。从12份样品中共检出6株可疑菌株,分别进行生化试验。 2.3.1 生化反应 鉴定沙门氏菌属生化反应结果:硫化氢(+)靛基质(-)氰化钾(-)PH 7.2尿素(-)赖氨 酸脱羧酶(+) 系统生化:精氨酸、枸橼酸盐利用试验、葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、木糖、山梨醇、硝酸盐、动力为阳性; 氧化酶、苯丙氨酸、VP、乳糖、蔗糖、侧金盏花醇、棉籽糖为阴性。 2.3.2 血清学鉴定:AFO(+)盐水对照(-)Vi(+) O1(+) O9(+) O12(+) O2(-) O7(-) O8(-) Ha(-) Hb(-) Hg(+) Hp(+) 根据生物学特征、生化反应和血清学鉴定此菌为都柏林沙门氏菌。

鸡大肠杆菌的分离与鉴定

鸡大肠杆菌的分离与鉴定 摘要:**市某鸡场5600只240日龄罗曼蛋鸡陆续发病,产蛋率迅速下降,病死率约为6%。病鸡多呈精神沉郁、食欲减退,腹部膨大,粪便呈灰绿色或黄色,多经2~3周死亡,初步诊断为大肠杆菌病。采集2只病鸡的肝和卵巢,通过细菌的分离培养,获得2株革兰氏阴性杆菌。糖发酵试验、三糖铁琼脂试验、尿素分解试验、硫化氢产生试验、药敏试验、IMVIC试验确定其为大肠杆菌。玻板凝集 ;选用10种临床常用的抗菌药进行药敏试验,结果表试验鉴定其O抗原型为O 2 明分离菌株对先锋V、多粘菌素、呋喃妥因敏感,而对四环素、林可霉素耐药。关键词:鸡,大肠杆菌病,分离,鉴定 论文试验 鸡大肠杆菌病是由某些血清型的致病性大肠埃希氏菌引起的鸡的非肠道传染性疾病的总称。尽管近几年养鸡业发展迅速,但随着规模养殖的不断增加和产品流通的日益频繁,鸡大肠杆菌病越来越普遍,已经成为影响养鸡业快速发展的主要疫病之一。通过对大肠杆菌的分离、鉴定,对该病有着非常重要的意义。通过药敏试验测定大肠杆菌对药物的敏感,可为合理用药提供指导。本论文通过微生物学方法,对**市某鸡场罗曼蛋鸡的疑似大肠杆菌病进行了确诊。 1 材料 1.1 病料来源 2008年3月17日,**市某鸡场5600只240日龄罗曼蛋鸡陆续发病,产蛋率迅速下降,病死率约为6%。病鸡多呈精神沉郁、食欲减退,腹部膨大,粪便呈灰绿色或黄色,多经2~3周死亡。采集2只病鸡的肝和卵巢作为病料。 1.2 培养基 1.2.1 麦康凯琼脂(Mackonkey agar,蛋白胨20g,乳糖10g,氯化钠5g,牛胆盐5g,中性红0.025g,琼脂粉20g,加蒸馏水1000mL,pH7.3)。 1.2.2 三糖铁琼脂(蛋白胨20g,牛肉浸膏5g,乳糖10g,蔗糖10g,葡萄糖1g,氯化钠5g,硫代硫酸钠0.2g,硫酸亚铁0.2g,琼脂粉20g,0.4%酚红水溶液6.3mL,蒸馏水1000mL,除酚红指示剂外,各成分加热溶解,调至pH7.4,然后加入酚红指示剂,分装于试管;115℃高压蒸气灭菌15min后,制成底层较深的斜面)。 1.2.3 胰蛋白胨水溶液(蛋白胨2.5g,氯化钠1.25g,蒸馏水250mL,溶解后调pH为7.6,分装于试管,每管4~5mL,121℃高压蒸气灭菌15min)。 1.2.4葡萄糖蛋白胨水溶液(每100 mL pH7.6的邓亨氏蛋白胨水中加入葡萄糖1g,溶解后分装于试管,每管1mL,121℃高压蒸气灭菌15min)。

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