发酵液中提取胞外多糖
白灵菇胞外多糖的分离纯化及其抗氧化活性的研究
Ａｂ ｔａ ｔ Ｉ ｈｓｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ｈ ｘ ｐ ｌｓｃ ｈ ｒ ｅｗａ ｘｒｃｅ ｒｍ ｅ ｒｔｓｎ ｂｏ ｅ ｓ Ｚ Ｆ ６，ｔｅｔｃ — ｓｒ ｃ ： ｎｔｉ ｘ ｅｉ ｎ ，ｔｅ ｅｏ ｏｙａ ｃ ａｉ ｓｅ ｔａｔｄ ｆｏ Ｐｌｕｏｕ ｅｒｄ ｎｉ Ｊ － Ｈ１ ｄ ｓ ｈ ｅｈ
（ ．Ｓｈｏ Ｆ ｏ ｃ ｎｅ ｎ ｅｈ ｏ ｇ ，Ｊ ｎ ｎ ｎＵ ｉ ｒｔ，Ｗ ｘ １１２， ｈｎ ； ． ｅａｔｅｔ Ｆ ｏ ｃ ｎｅ，ｉｏｈｎ ｎｖ ｓｙＬａｃｅｇ １ ｃｏｌ ｏｄＳｉ ｃ ｄＴｃｎｌ ｙ ｉ ｇ ａ ｎｖ ｓｙ ｕ ｉ ４ ２ Ｃ ｉａ ２ Ｄｐ ｒ ｎ ｏｄＳｉ ｅ ａ ｏ ａ ｅｉ ２ ｍ ｅ ｃ Ｌａ ｅｅｇＵ ｉｒｉ ，ｉｏｈｎ ｅｔ
ａ ｎ ｕ ｒｌｐ ｌ ｓ ｃ ｈ ｒ ｅｃ ｎ ａｎ ｎ ｎ ｏ ｅａ ｄ 一 ｇｕ ｏ ｅ ｅｃ ＮＥ － ａ ｅ ｒ ａ ｌ ｎ ｉ ｘｄ ｔ ｅ ａ ｔ ｉ ｎ ｓ ａ — ｅ ｔａ ｏｙ ａ ｃ ａ ｉ ｏ ｔ ｉ ｉｇ ｍａ ｎ ｓ ｎ Ｄ ｌ ｃ ｓ ｔ ．Ｐ Ｐ Ｉａ ｈ ｄ ｒ ｍａ ｋ ｂ ｅ ａ ｔ ｏ ｉ ａｉ ｃｉ ｔ ｉ ｃ Ｖ ｄ — ｖ ｖｙ
沈 阳 １０ ６ ） １ １１
摘要 ： 从 白灵菇菌株 Ｊ —Ｈ ６发酵液 中提取胞外多糖 ， ＺＦ １ 并对该多糖的分离纯化技术 、 构和抗氧化 活性 进行 结 了研究。结 果表明 ， 白灵菇胞外粗多糖经 Ｄ Ａ —ｅ ｕ ｓ５ Ｅ Ｅ Ｃ ｌ ｌ ｅ２和 Ｓｐ ａｅ 一 ０柱层析 后得 到主要组 成成 分 Ｐ Ｅ ｌｏ ｅｈ ｄｘＧ２ ０ Ｎ ＰＩ － ａ采用 ＨＰ Ｃ、ｅｈｄｘＧ２ ０柱层 析 、 ； Ｌ Ｓｐ ａｅ ． ０ 琼脂糖凝胶 电泳 、 红外光 谱 以及 化学反应 等方 法证 明 Ｐ Ｅ － Ｎ ＰＩ ａ是一种 含有 Ｑ Ｄ葡萄糖 、 ． 甘露糖 等特征基 团的中性 纯多糖 ， 对 ・ Ｈ和 ０ 一 其 Ｏ ；清除率 分别 为 ４ ．０ ９ ５ ％和 ４ ．４ ， 有显著 的抗 ７２ ％ 具
产胞外多糖的乳酸菌的简便筛选与鉴定
取１ｍＬ稀释样品，分别浇注于ＭＲＳ培养基、Ｅｌｌｉｋｅｒ培养基和Ｍ１７培养基，在适宜条件下培养，用于样品中乳酸菌的分离［１１．２．２分离菌株的分离和保存将１．２．１得到的菌落在相应的平板培养基上划线纯化得到纯培养物，进行革兰氏染色，接触酶实验。
纯化菌株在ＭＲＳ斜面上４℃短期保存，置于３０％（Ｗ／Ｗ）无菌甘油中在一７０℃超低温冰箱中长期保存‘１１．２．３利用茵落拉丝法初步筛选产胞外多糖的乳酸菌将分离纯化菌株在ＭＲｓ筛选培养基上进行划线分离，在２５℃厌氧培养４８ｈ，观察并记录菌落特征。
用无菌牙签接触菌落，轻轻地向外拉，然后在２ｓ内垂直离开以在培养基表面形成连续的拉丝，重复操作５—６个菌落，每个菌落平行做２次，测量菌落拉丝的最大长度（伽ｎ），结果以“平均值士标准方差”表示。
１．２．４乳酸茵胞外多糖的提取将１．２．３得到的菌株接种于筛选ＭＲＳ液体培养基中，３０℃发酵２４ｈ，取１０ｍＬ培养物，沸水浴１０ｍｉｎ，冷却至室温，加质量分数为８０％的三氯乙酸至终浓度为４％，４℃静置过夜，１２ｏｏｏｇ离心２０ｍｉｎ，轻倾上清液于透析袋中，对流水透析２４ｈ，再对双蒸水透析３６ｈ，４次换水，定容，待用。
１．２．５硫酸－苯酚法测定乳酸茵胞外多糖（ＥＰＳ）的含量将１．２．４得到的胞外多糖样品用Ｄｕｂｏｉｓ推荐的硫酸一苯酚法［１５］测定，用葡萄糖做标准曲线（如图１），从曲线上求得ＥＰＳ的含量。
以空白培养基为对照，扣除背景干扰。
’１．２。
６·显微镜观察产胞外多糖乳酸茵细茵形态对分离菌株进行革兰氏染色，用ＭｏｔｉｃＰＭＢ５—２２３２—５摄影显微镜观察细胞形态。
１．２．７产胞外多糖乳酸茵的鉴定产胞外多糖乳酸菌的鉴定采用法国梅里埃公司鲁奎、蠢棺益图１硫酸一苯酚法测定胞外多糖含量的标准曲线的ＡＰＩ细菌鉴定系统进行，将纯菌株在ＭＲＳ琼脂培养基上３７℃微厌氧培养４８ｈ，用无菌棉拭子收集细菌，在ＡＰＩ５０ＣＨ试剂条凹槽中加ＡＰＩ５０ＣＨＬ培养基并接种，用石蜡油封好，３７℃培养２４～２８ｈ，记录菌株对碳水化合物的发酵结果，将其输入梅里埃公司的鉴定软件ＡＰＩＬＡＢＰｌｕｓ进行鉴定。
金针菇胞外多糖液体发酵培养基的优化
ｍｅ ｉ ｍ ｓ ｔ ｅ ｃ ｎ ｕ ａ ． ％， ｅ ｔｂ ａ ．％ ， ｍｍｏ ｉ ｍ ｉ ａｅ Ｏ ５ ，Ｍｇ ０ ￣ Ｈ２ ．５ ， ｄ ｕ ｗａ ｈ ａ ｅ ｓ ｇ ｒ ２０ ｗｈ ａ ｒ ｎ １５ ａ ｎｕ ｎ ｔ ｔ ．％ ｒ Ｓ ４ ７ ０ ０ ０ ％ ＫＨ２ Ｏ４ ２ ， １ ．０ ％ ａ ｄ Ｐ ％ ＶＢ ０ ０ ５ ０． ｎ
摘
要： 以金针菇胞外 多糖 、 生物量和还原糖 为参数 ， 采用正交试验设计对金针菇胞外多糖液体发酵培养基碳源 、 氮源 、 无机盐
和生长因子进 行优化。结果表明 ，金针菇 多糖的最佳培养基 为 ：麸皮 １ ％，蔗糖 ２ ． ５ ％、硝酸铵 Ｏ５ Ｍｇ Ｏ ＂Ｈ０ ００ ％， ．％、 Ｓ ４７ ５ ． ５ Ｋ ２００ ％， Ｂ０ ０ ％、 Ｂ００５ ＨＰ ４． Ｖ ． ５ Ｖ ２． ％。试验表明采用正交试 验设计对金针菇胞外多糖液体发酵培养基进行优化是可行的。 ２ ０ ０
关键词 ： 金针菇 ； 多糖 ； 优化
Ｉ（ ｌｒ ｌ￣ ｔ
： ５９ Ｑ １ Ｑ ３ ；８５
文献标识码 ： Ａ
Ｏｐｔｍ ａ ａ ｉ ｎ ｏ ｈ ｑｕ ｄ ｒ ｎ ａ ｉ ｎ Ｍ ｅ ｉ ｍ ｏ ｔ ａ ｅｌ ｒ ｉ ｚ ｔｏ ｆｔ ｅ Ｌｉ ｉ Ｆｅ ｍｅ ｔ ｔｏ ｄ ｕ ｆ ｒ Ｅｘ ｒ ｃ ｌａ ＰＯ ｙ ａ ｃ ｒｄｅ ｆ ｏ Ｆｌ ｍｍ ｕ ｉ ａ ｌ ｓ ｃ ｈａ ｉ ｒ ｍ ａ ｌｎ ａ ｓ ｐｅ
ＶＢ ００ ５ ２ ．０ ％． ｔ ｓｆａｂ ｅ ｔ ａ ｒ ｏ ｏ ａ ｅ ｉｎ ａ ｐ ｉｄ ｔ ｐ ｉ ｚ ｔ ｎ ｏ ｅ ｍｅ ｉ ｍ． Ｉ ｉ ｅ ｉ ｌ ｔ ｔ ｇ ｎ ｌ ｓ ｐ ｌ ｏｏ ｔ ｈ ｏｈ ｄ ｇ ｅ ｍｉａｉ ｆｔ ｄ ｕ ｏ ｈ
胞外多糖
胞外多糖(EPS extracellular polysaccharide)早在50年代人们就认为胞外多糖可能是青枯菌的致病因子，随后围绕青枯菌胞外多糖的病理学意义进行了大量研究。
H u sain和Kelman比较了青枯菌自发无毒突变株和野生型菌株的特点，发现自发无毒突变株不产生胞外多糖，致病力丧失，因此认为胞外多糖在致病过程中可能具有重要作用l 5l。
青枯菌的胞外多糖是由多种化学物质组成的复合物，其中主要的组成成分是氮乙酞半乳糖醛酰胺。
研究发现，不同青枯菌小种的胞外多糖的组分有所不同，同一小种也存在不同类型的胞外多糖。
一些研究显示，一个称为EPS I的胞外多糖，可能与Ralstonia solanacearum的致病性最为相关I6J EPS I合成的特异突变研究显示，即使直接注入大量的突变菌细胞进入植物茎组织，与非突变菌比较，其植株的萎蔫和死亡程度也很低。
通过土壤接种试验也显示，尽管突变菌在维管组织中繁殖，但植株的发病很轻。
近年来的研究发现，胞外多糖的合成受l6 kI1的eps操纵子调控，涉及l0个调控基因产物和3个不同的调控信号，这种严谨的调控也从另一个角度说明EPS I对病原菌本身的重要性以及在病原菌对植物的致病性中的重要作用『青枯假单胞菌(pseudomonassolanacearu‘)或称青枯菌引起许多重要经济作物如烟草、花生、番茄等植物的萎焉病。
主要通过土壤传染病害，它的寄主范围很广泛，有33科100多个种，危害茄科植物为最多“。
青枯菌毒力株能产生胞外多糖，用特殊固体培养基培养时形成两种菌落形态即易变的和固定的，前者产生胞外多糖有毒力，后者很少产生这种多糖。
为此，日本科学工作者研究了这种胞外多糖的组成以及它与致病性的关系。
发现这种多糖是一种混合物一主要由N一乙酸半乳糖胺(2一氨基2半乳糖)和少量鼠李糖、葡萄糖以及某些简单肤所组成。
事实上，这是同型一N一乙酞半乳糖胺葡聚糖的一个例证。
其化学性质还不清楚，但认为这种胞外多糖与毒力有关系‘，这是因为它阻滞寄主植物维管束组织，导致水分输导的困难。
乳酸杆菌胞外多糖高纯度提取工艺的优化
@AB! 实验方法
!*+*!% &’( 提取流程及参数设定 % 保加利亚乳杆菌 /+
发酵液"!##Q 下 !#K58 灭酶 " 离心除菌体 " 浓缩为原体积 ! R " "加 A?L " 离心除蛋白 " 加乙醇沉淀多糖 " 离心去上清 "丙酮清洗沉淀"温水溶解"加乙醇沉淀多糖"透析"定容 "多糖合成量的测定"冻干
， 并且安全无毒， 使其倍受青睐。目前国内对
乳酸菌 &’( 分离、 提纯条件研究报道较少， 而国外研
［" ］ 究相对较 多 。 &’( 的 分 离、 纯 化 受 到 &’( 的 性 质
和共存的组成成分的影响。目前研究中常先用离心 然后用乙醇或丙 法去除 &’( 中的蛋白质和细菌体， 酮分级沉淀 &’( ， 并用透析法去除沉淀的无机盐。本 实验采用三氯乙酸法除去乳酸菌胞外多糖提取物中 的蛋白质， 不但可以除去提取物中的游离蛋白， 还可 以除去 &’( 中的结合蛋白， 效果较好， 同时还可以得 到较高的 &’( 得率。本文通过从除 &’( 中蛋白条件 优化、 乙醇沉淀 &’( 条件优化、 不同的离心力及离心 时间对多糖获得量的影响等方面研究， 获得了乳酸 菌胞外多糖的最佳提取工艺。
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表 !" 除蛋白结果 实验号 ! , 1 6 0 5 / 3 # 离心力 （ $ %） （ !0... ） ! ! ! （ !/... ） , , , （ ,!... ） 1 1 1 & 三氯乙酸浓度 （’ ） ! （ 1. ） , （ 6. ） 1 （ 0. ） ! , 1 ! , 1 ( 离心时间 （ )*+） ! （ ,. ） , （ 1. ） 1 （ 6. ） 1 ! , , 1 ! #! ,-. .230! 4 .2.0. .2033 4 .2.!5 .201. 4 .2.5 .2/-, 4 .2.,! .21.- 4 .2.!. .2,1- 4 .2.0/ !2!6- 4 .2.11 .2-3! 4 .2.6! .21,/ 4 .2..6 #! ,/. .2-5. 4 .2...26.3 4 .2.!1 .2151 4 .2.,, .2-03 4 .2.0. .2,15 4 .2.,1 .2!3, 4 .2.13 .250/ 4 .2..6 .201, 4 .2.!1 .2,0- 4 .2..6
胞外多糖
由假单胞杆菌发酵产生的胞外多糖，又称结冷胶，在食品工业上可作为增稠剂、稳定剂。
由野油菜黄单胞杆菌发酵产生的胞外多糖，又称黄原胶，是性能优越的生物胶，同样也在食品工业中作为增 稠、稳定剂。谢谢观看特性和用途乳酸菌
其他
1982年日本学者Shio mi等人报道乳酸菌胞外多糖具有抗肿瘤作用。乳酸菌胞外多糖抗肿瘤的机理有以下几 个方面：
1、影响血液供应，鉴于细胞素引起肿瘤细胞组织缺血性坏死； 2、刺激某种器官或组织，分泌一种物质攻击肿瘤细胞； 3、细胞膜接触抑制作用，肿瘤细胞表面具有很强的负电荷，而有些多糖可以结合这些电荷，使细胞表面被 “中和”，从而有利于细胞接受信号终止分裂。 乳酸菌胞外多糖可能由于其作为生命物质前体，具有激活动物免疫功能的作用。其增强免疫力机理有以下几 个方面： 1、促进免疫器官的增重，达到促进非特异性免疫功能的作用； 2、引起迟发型变态反应，促进细胞免疫； 3、提高巨噬细胞清除异物的能力，提高机体的非特异性免疫力； 4、体液免疫功能的促进作用；
基本介绍
胞外多糖(exopolysaccharides, EPS)：是一些特殊微生物在生长代谢过程中分泌到细胞壁外、易与菌体分 离、分泌到环境中的水溶性多糖，属于微生物的次级代谢产物。对微生物的生长有重要意义。
胞外多糖主要分为两个类别：由一种单糖构成的同多糖和由两种以上的单糖构成的杂多糖。因为其安全无毒， 理化性质独特，特异性优良而备受人们的。早在19世纪后半期就已确定微生物合成胞外多糖的事实，人们已经测 定胞外多糖组分的菌种达79属168种以上。与其对应的还有胞壁多糖和胞内多糖。
胞外多糖
生物学科术语
目录
01 基本介绍
02 特性和用途
乳酸菌胞外多糖(Exopoly Saccharides，EPS)是乳酸菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外常渗于培养基的 一类糖类化合物，有的依附于微生物细胞壁形成荚膜，称为荚膜多糖；有的进入培养基形成粘液，称为粘液多糖， 它们都是微生物适应环境的产物。近几十年来，由于微生物胞外多糖在产品结构、性能及生产方面所具有的特别 优势而得到大力研究和开发，新的微生物胞外多糖的开发已成为工业微生物研究的热点之一。由于乳酸菌是食品 级工业生产菌，与其他菌相比安全性高，所以近年来对乳酸菌胞外多糖的研究逐渐增多。但产量低，菌株稳定性 差，仍是制约其大规模生产的主导因素。各国科学家试图用基因工程的手段构建高产菌株，但仍没成功。乳酸菌 胞外多糖可赋予发酵乳制品特殊的质构和风味，起到安全的食品添加剂的作用，它还有可能成为食品级多糖的一 个良好来源而广泛用于各种食品的增稠、稳定、乳化、胶凝及持水。胞外多糖还具有生物活性如免疫活性、抗肿 瘤和抗溃疡，可应用于医药领域。
冠突散囊菌胞外多糖含量测定及提取工艺研究
ｔｅ ｏ ｔ ｌ ｏ ｄｔ ｎ ｆｒ ｔｅ ｅ ｔａ ｔ ｎ ｔｃ ｎｑ ｅ ｗ ｒ ５ ％ ｅｈ ｏ ｅ ｏ ｉ ｏ ｒ ０ ｈ ａ ｌ ｈ ｐｉ ｍａ ｃ ｎ ｉ ｏ ｈ ｘｒｃｉ ｅ ｈ ｉｕ ｅｅ ９ ｉ ｏ ｏ ｔａ ｌｄ ｐ ｓｔ ｎ ｆ １ ｓ ｗｅｌ ｎ ｉ ｏ
液体深层发酵 ， 并对其产生 的胞外 多糖提取条件进行 了正 交试验 。 试验 结果表 明， 最优 的多糖提取条件为 ： 突散 囊 冠
茵液体发酵液浓缩至原体 积的 １ ， ／ 乙醇浓度 ９ ４ ５％， 乙醇沉淀时间 １ 。 ０ ｈ 关键词 ： 冠突散 囊茵； 茯砖 茶； 液体发 酵； 胞外 多糖
作者简介 ： 龚淑俐 （９ ２ ） 汉 ）硕士研究 生， １８一， 女（ ， 研究方 向： 品资源开发与利用 。 食 ・ 通讯作者 ： 明 ， 。 邓放 教授
将其纯化后冻干 ， 提高稳定性和保存期 ， 更有效地提 高方法准确性和灵敏度 。 ‘
３３ 不 同农 药对植 物 酯 酶 的抑制 强 度不 同 ， ． 有 待与 动物 性 的 乙酰胆 碱酯 酶进 行进 一 步 比较研
ａ ｅ ｒ ｔ １４ ｓ ｔ ａｉ ：． ｈ ｏ
Ｋｅ ｒ ｓ Ｅｕ ｏｉ ｍ ｒ ｔｔ ｍ ；Ｆ ｚ ｕ ｒｃ ｅ ；ｌ ｕｄｆｒ ｅ ｔｔ ｎ；ｅ ｔａ ｅｌｌｒ ｏｙａ ｃ ａｉｅ ｙ ｗｏ ｄ ： ｒｔｕ ｃ ｉ ａｕ ｓ ｕ ｈ ａ ｂ ｋｔａ ｉ ｉ ｅ ｎ ｉ ｑ ｍ ｎａｉ ｏ ｘｒ ｃ ｌ ａ ｐ ｌｓｃ ｈ ｒｄ ｕ
性可能有所差异。
【 汪世新． ３ 】 蔬菜农药残 留速测方 法中若干 问题 的操作叨． 业环境 农
与发展，０ ２１（） ３ ２ ０ ．９２： ． ４
３ 本研究主要 以敌百虫为检测对象 ， ． ４ 由于有机磷
响应面法优化红曲霉胞外多糖提取工艺
１２２ 种 子培养 基 ．．
菌多 糖 主 要 有香 菇 多 糖 、 云芝 多 糖 、 云芝 糖 肽 、 芝 灵
胞外多糖提取工艺参数 ， 可为后续红 曲霉胞外方法
１ １ 材料 与 仪器 ．
紫色红 曲霉 （ ｏａ ｕ ｐ ｒ ｒ ｓ Ｍ ６ Ｍ ｎｓ ｓ ｕ ｕ ｕ） Ｐ一 ６分离 ｃ ｐ ｅ
物多糖的提取研究 中应用得较为广泛 但在红 卜Ｈ ， Ｊ 曲霉胞外多糖的提取工艺研究方面鲜有报道 。本研 究在单 因素试验的基础上采用响应面法优化红曲霉
基金项 目： 国家 自 然科学基金 （ １７０ ８ ３ ００ ０ ） 收稿 １期 ： １ — １ １ ３ ２ １ ０ —８ ０ 作者简介 ： 汪鹏荣 ， ，９６年出生 ， 男 １８ 硕士 ， 应用微生物 通讯作者 ： 冬 花 ， ， ６ 蒋 女 １ ４年 出生 ， 授 ， 生 物学 和植 物病 ９ 教 微
得率的影响 ， 并在单因素试验基础上， 设计三 因素三水平的 Ｂｘ Ｂ ｈｋｎ中心组合试验及响应面法分析对红 ｏ — ｅｎｅ
曲霉胞 外 多糖 的提 取 工 艺进 行 优 化 ， 立 了二 次 多项 式 回 归 方程 的预 测 模 型 ， 果表 明 ： 建 结 乙醇 沉 淀 时 间 为
ｌ ． ｈ 乙醇体积分数为 ８ ％ ， ６５ ， ０ 发酵滤液 ｐ Ｈ为 ８０ ， ．５ 在此条件下红曲霉胞外多糖得率可达 ７４ ／ 。 ．ＯｇＬ 关键 词 胞 外 多糖 提取 工 艺 单 因素 试验 响应 面分析 法
微生物胞外多糖及其生物合成途径研究现状
Advances in Microbiology 微生物前沿, 2017, 6(2), 27-34Published Online June 2017 in Hans. /journal/ambhttps:///10.12677/amb.2017.62004Research Status of MicrobialExopolysaccharide and ItsMetabolic PathwayNing Pang1,2, Jiaqi Zhang1, Jin Qi3, Binhui Jiang1*1School of Resources and Civil Engineering, Northeastern University, Shenyang Liaoning2Beijing Yingherui Environmental Technology Co. Ltd., Beijing3Fushun Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Fushun LiaoningReceived: May 22rd, 2017; accepted: Jun. 9th, 2017; published: Jun. 12th, 2017AbstractDue to their unique physical and chemical properties, rheological properties and biological safety, microbial polysaccharides have been widely used in many fields, such as industrial production and life. But due to high production costs and less production limit its wide application. The screening, isolating and culturing of microbial strains of extracellular polysaccharides were in-troduced in this paper, and the optimization of production of flocculant conditions and the sepa-ration and purification of extracellular polysaccharides were also discussed. Furthermore, the re-search status of the microbial exopolysaccharide metabolic pathway was focused. The method of improving the production of extracellular polysaccharides can be found by the study of metabolic pathways of microbial exopolysaccharides, which lays the foundation for the industrial applica-tion of microbial extracellular polysaccharide.KeywordsMicrobial Flocculant, Glycobacter, Biosynthetic Pathway微生物胞外多糖及其生物合成途径研究现状庞宁1,2，张佳琪1，齐进3，姜彬慧1*1东北大学，资源与土木工程学院，辽宁沈阳2北京盈和瑞环境科技股份有限公司，北京3抚顺出入境检验检疫局，辽宁抚顺*通讯作者。
产胞外多糖菌株的筛选及胞外多糖性质和结构分析
产胞外多糖菌株的筛选及胞外多糖性质和结构分析多糖具有降血糖、降血脂、免疫调节、抗肿瘤、抗氧化等诸多优良的生物活性,广泛应用于医药、食品、化妆品等领域,其中微生物胞外多糖具有产生量大、生产周期短、成本相对较低等优势,是研究和应用较多的一类多糖。
筛选新的产胞外多糖菌株和具有良好理化性质的胞外多糖具有很大的意义。
本研究从土壤样品中筛选出一株产胞外多糖的菌株WL113,并对其产生的胞外多糖的性质、结构等作了初步的分析研究。
通过形态特征观察及16SrDNA序列鉴定筛选出的产糖菌株WL113是一种肠杆菌,命名为Enterobacter sp.WL113.向发酵2d的发酵液中加入2-3倍体积95%乙醇提取胞外多糖获得粗多糖,粗多糖中总糖含量为68.33%,蛋白质含量为12.91%。
粗多糖经纯化后通过高效液相色谱、红外光谱和核磁共振进行结构分析表明,此多糖主要由6.46%甘露糖,18.20%葡萄糖,30.90%半乳糖,42.96%岩藻糖,1.47%葡萄糖醛酸组成,摩尔比为0.36：1.00：1.70：2.36：0.08,分子为吡喃糖环,存在a型和p型吡喃糖苷键,分子中存在糖醛酸,是一种酸性杂多糖。
通过单因素实验优化菌株产糖条件,得到最适合菌株产糖的碳源为蔗糖,氮源为酵母粉,且在蔗糖浓度范围为10-30g/L、酵母粉浓度为1-3g/L时,胞外多糖产量逐渐增加,碳氮比为15：1时,产糖量最高；最适培养温度30℃,pH8.0,装液量20mL/100mL(20%).菌株在最适条件下培养后,胞外多糖产量提高至7.67g/L。
流变特性研究表明,胞外多糖溶液粘度随质量浓度升高而增大,浓度为10g/L时粘度比1g/L时提高约33倍；对温度敏感,随着温度升高,粘度下降明显,100℃时粘度比25℃时降低了89.8%;在酸性、中性和弱碱性条件下粘度相对稳定,pHH10以上时粘度下降很快;对Na+、K+、Mg2+、和Ca2+等金属盐离子耐受性能良好,Fe3+会导致多糖沉淀。
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方法1 (桦褐孔菌发酵胞外多糖的提取)
（1）用抽滤方法将发酵液和菌丝体分离
（2）真空浓缩至原来体积的1/ 5
（3）加入4倍体积的95%乙醇，玻璃棒搅拌使多糖充分沉淀
（4）沉淀放置4℃冰箱过夜
（5）为除去掺杂的还原糖和小分子杂质，用95%乙醇和无水丙酮反复冲洗
（6）8000r/min离心6min
（7）冷冻干燥，储存于干燥罐中备用
[1]杜秀菊,徐伟,穆红梅,彭向前,冯玮. 桦褐孔菌多糖的药理活性与化学结构研究进展[J]. 食用菌学报,2012,01:100-104.
方法2（金花茶粗多糖的初步分离）
（1）乙醇沉淀
150mL 浓缩液，缓慢加入3倍体积的95％乙醇溶液（边加边搅拌），4℃静置24h，4000r/min 离心10min，得到粗多糖沉淀
（2）透析
少量蒸馏水溶解沉淀，透析（可截留分子量6000～8000）48h；透析内液冷冻干燥得到粗多糖。
[1]林华娟,田晓春,秦小明,路垚,杨基柱. 金花茶多糖单一成分的化学结构特征解析[J]. 食品科学,2013,03:141-146.
方法大同小异
乙醇的体积选择：单因素测试不同体积乙醇的提取率
乙醇的浓度选择：同体积，但一般看到都是95%
单因素测试的还有沉淀时间，浸提温度、时间、次数，料液比
然后在单因素测试的前提下正交实验，选择最佳条件
以水提液中水溶性多糖的产量为标准，选择影响提取菌丝体多糖产量的三个
主要因素：水提时间、提取次数、浸提比（质量比）。
每个因素设3 个水平，选
用L9(33)正交表（见表 3.1）。
每次取脱脂后的菌丝体25g，提取温度100℃，按
照试验设计进行，提取后过滤，合并滤液，浓缩，醇沉，常规干燥。
[1]李霞. 黑盖木层孔菌多糖化学结构和生物活性研究[D].东北师范大学,2008.
透析袋（d = 44, 32, 24mm，可截留分子量6000～8000，U.S.A）。