香菇多糖的研究
香菇菇活性多糖研究的进展
姓名： *** 专业：食品科学与工程
学号：201006250*** 指导老师：刘璘
摘要
香菇多糖是从香菇的子实体或发酵菌丝体中提取的多糖分子．由于分离方法的差异，所得多糖分子的结构及构效关系亦有很大的不同。目前，研究较多的是具有分支的以8(1—3)糖苷键连接的吡喃葡聚糖，作为免疫激活剂已广泛地应用于抗肿瘤临床实践中．香菇(Lentius edodes)为担子菌纲伞形科真菌，是世界上第2大食用菌。香菇是药食两用菌类，作为食用菌，由于其营养丰富，历来受到人们的喜爱；作为药物，由于其含有香菇多糖、香菇嘌呤、氨基酸等多种有效成分而倍受药物研究工作者的关注，特别是其中香菇多糖的抗病毒、抗肿瘤以及调节免疫功能等作用被发现以后，其研究更深入、更多元化。中医理论认为香菇具有多种功效。香菇多糖是香菇中最重要的一种生物活性物质，作为一种免疫促进剂，在20世纪60年代已引起人们广泛的兴趣．现代研究表明：香菇多糖具有抗病毒、抗肿瘤，调节免疫力、降血糖、抗氧化等功能。有关香菇多糖的研究，特别是结构方面的研究已引起国内外学者的高度关注，并有望成为多糖领域的研究热点。一、发展史
-----香菇多糖生物活性研究进展
1 香菇多糖简介及国内外研究概况多糖的来源大致分为植物来源多糖、动物来源多糖、海藻来源多糖和微生物来源多糖即细菌产生的多糖和真菌产生的多糖,这是至今研究得比较详尽的一类多糖。迄今为止,几百种天然多糖的发现,已给人类提供了丰富的生物多聚体宝库。真菌多糖作为药物研究始于50 年代,在60 年代以后成为免疫促进剂而引起人们兴趣。香菇多糖就是研究得较透彻的多糖之一, 香菇(Lentinusedodes(Berk. ) Sing) 是侧耳科
( Pleurotaceae) 的担子菌,世界名贵食用兼药用菌之一,它含有多种有效药用组分,尤其是它含有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能的香菇多糖(lentinan 简称LNT) 增强人体免疫力的水溶性木质素这2 种药用生理活性物质,而引起人们广泛的重视。LNT 的药理作用是它并非直接攻击致病源,而是通过刺激免疫细胞成熟、分化和增殖,改善宿主机体
平衡,达到恢复和提高宿主细胞对淋巴因子、激素及其它生理活性因子的反应性。因此,人们常称LNT 为生物反应修饰剂
( biologicalresponsemodifier ,BRM) 。
1968 年日本千原吴郎首先利用热水从香菇子实体中浸提出6 种胞外
LNT,1970 年Chihard 和Sasaki 用热水浸提结合有机溶剂沉淀从香菇中提取到另外4 种多糖,80 年代以来,LNT 的研究更为深入、多元化。如Schulty 从深层发酵香菇菌丝体中提取到一种胞内多糖KS2 ,是一种相对分子质量在(6. 0～9. 5) ×10^4之间,含α链的甘露糖苷,并伴有少量肽类(由丝氨酸、苏氨酸和丙氨酸构成) 的免疫活性物质。尽管有关LNT 的成分和结构报道甚
多,但已明确结构与免疫活性关系的只有β- 葡聚糖物质。该多糖的一级结构
具有β- D(1 →3) 连接的毗喃葡聚糖主链,在主链中葡萄糖的C6 位上含有支点(每5 个D - 葡萄糖有2 个支点) ,其侧链是由β- D(1 →6) 键和β- D(1 →3) 键相连的D - 葡萄糖聚合体组成,在侧链上也含有少数内部β- D (1→6) 键。现己知道:水溶性β- D 葡聚糖为线状结构,无长分枝。另一些香菇中的多糖物质由D - 葡萄糖、D - 半乳糖、D - 甘露糖、L - 阿拉伯糖、D - 木糖所组成,也有来源于深层发酵香菇菌丝体中的α- 甘露糖苷,这可能因提取方法和原料(包括香菇来源品种及部位) 的不同所致。
蛋白质、核酸和多(寡) 糖为最重要的3 种生物大分子。糖类的研究工作和蛋白质、核酸的研究工作相比,在我国还是一个薄弱环节。现在国际上多糖研究以日本、美国、德国、加拿大处于领先地位,我国多糖的研究起步较晚,经过一个相对寂静的时期以后,自80 年代各地的研究如雨后春笋般掀起。目前,国内外己从高等担子菌中筛选到200 余种有生物活性的多糖物质,我国发现有价值的真菌多糖有28 种。其中化学结构较清楚的15 种。国内外研究的主要目标是:一方面通过对LNT 药理和临床实验的研究进一步寻找活性更高,特别是对肿瘤、艾滋病更有效的多糖:另一方面进行构效关系的研究,通过对LNT 化学修饰的研究,以寻找更有效的多糖药物。这将不仅对发现新多糖起指导作用,而且对药物学、分子生物学的理论作出新贡献。
香菇多糖生物活性机制研究前沿
随着分子生物学的发展和香菇多糖研究的不断深入,科学家们已经开始在基因水平探讨香菇多糖生物活性的机制。香菇多糖在不同品系小鼠中的抗肿瘤活性有较大差异,在DBA/ 2、SWM /MS 和A/J 等小鼠中抗肿瘤活性明显, 而在Balb/ C、C57BL/ 6 和C3H/ HE 等小鼠中则不明显。研究香菇多糖对不同品系小鼠的巨噬细胞分泌细胞毒素及TNF 的影响,也发现香菇多糖的生物活性与基因型有密切关系,巨噬细胞毒素的产生受H2 基因和背景基因的影响,而TNF 的产生则只受H2 基因的影响。交联分析表明, 香菇多糖引起显著的VDH 是由多基因调控的,其中优势基因Ltnr3、次要基因Ltnr4、ltnr5、ltnr6 分别定位于第6、9、15 、16 号染色体上,而DTAPP 反应则是由两个隐型基因调控的,Ltnr1、Ltnr2 分别位于第3、11 号染色体上。香菇多糖免疫调节的基因定位无疑为沟通多糖、蛋白质、核酸间的活性调节关系架起一座新桥梁。多糖生物活性与结构间的关系的研究还落后于核酸与蛋白质的研究。有关香菇多糖的成分和结构的报道甚多,但明确和免疫活性有关的只有β- 1 ,3 葡聚糖物质,该多糖的一级结构具有β- D - 1 ,3 吡喃葡聚糖主链,C6 上带有分支侧链,β- 1 ,3和β- 1 ,6结合的侧链共存是抗肿瘤活性所必不可少的。此外,二、三级结构比一级结构更具免疫活性,X衍射和粘度分析发现,香菇多糖的β三维螺旋一旦破坏,免疫活性随之消失。有关多糖受体的发现对阐明其作用机制有重要意义。多糖具有抗原性,可以推测其分子中也存在活性决定簇。对兔进行亚急性免疫可得到anti - LNT - Ab ,该抗体具有识别LNT 的特异性,不识别其他多糖如淀粉、葡聚糖等[17 ] ,以此可以方便地用ELISA 方法来检测样品中LNT[18 ] 。anti - LNT - Ab 的研究可为探测香菇多糖受体及其活性决定簇的分子结构基础提供根据。
二、作用
1 香菇多糖免疫调节
活性香菇多糖的免疫调节活性是其生物活性的重要基础。香菇多糖是典型的T
细胞激活剂,体内外均能促进细胞毒T 淋巴细胞(CTL) 的产生,提高CTL 的杀伤活力,增强正常或免疫功能低下小鼠的迟发型超敏反应(DTH) ,提高抗体依赖性细胞毒细胞(ADDC) 活性。香菇多糖在体内首先诱导巨噬细胞产生急相蛋自诱导因子(APPIF) ,随后血清中出现血管膨胀出血诱导因子(VDHIF) 、白细胞介素1 诱导因子( IL1PF) 、IL3 (CSF) 等。这些因子再作用于淋巴细胞、肝细胞、血管内皮细胞等,导致与免疫和炎症有关的许多免疫应答的产生。香菇多糖的抗肿瘤活性能被巨噬细胞拮抗剂所阻抑,因此认为,香菇多糖是一种胸腺依赖型T 细胞导向,并有巨噬细胞参与的免疫调节剂。香菇多糖在体内能激活NK细胞,而体外不能;其激活NK细胞与促进干扰素( IFN) 的分泌有关。香菇多糖受体内给药12 小时后IFN 分泌量可达到高峰。另外,香菇多糖还能激活补体系统,促进抗体生成,使巨噬细胞溶酶体酶和IL1 分泌量增加,而抑制巨噬细胞释放PGE、PGF。PGs 是免疫系统抑制剂,这是香菇多糖提高机体免疫功能的重要原因。免疫系统是由各种免疫细胞和免疫因子互相促进或抑制组成的复杂网络系统。为研究香菇多糖免疫调节活性的触发机制,Oka 等[1 ]设想香菇多糖必须首先结合到宿主细胞上,通过体外香菇多糖与宿主细胞共培养,流式细胞仪免疫荧光检测,发现多数香菇多糖能结合到人单核细胞上,这种结合作用受antiCR3mAb抑制,能被antiCR1mAb 强烈抑制,而被
antiCR1mAb+ antiCR3mAb 完全抑制。体内注射香菇多糖3～4小时,外周血中结合香菇多糖的单核细胞数明显上升,5 小时后又降到低水平。这一过程中未发现结合香菇多糖的中性粒细胞和淋巴细胞。因此认为香菇多糖结合到人单核细胞上可能是其影响免疫系统的首要因素。
2 香菇多糖抗感染作用
据报道香菇多糖可用于治疗结核杆菌感染,能使耐药性结核病人痰菌转阴,病人外周血嗜中性粒细胞吞噬活性增加。香菇多糖还能延长李司忒氏菌感染小鼠的生存时间,这与其提高巨噬细胞功能有关。香菇多糖对泡状口炎病毒感染引起的小鼠脑炎有显著的治疗和预防作用,治疗组100 %存活而对照组全部死亡。香菇多糖对Abelson 病毒、A2(H2N2) 病毒、12 型腺病毒及流感病毒感染均有抑制作用,是治疗各种肝炎特别是慢性迁移型肝炎的良好药物。香菇多糖抗病毒作用与其诱生IFN 和提高NK细胞活性有关。香菇多糖抗感染的机制与多糖本身的特性有关。病原体表面的糖蛋白识别正常细胞表面的糖分子并发生粘附作用,是引起感染的必要前提。体液中游离的糖分子可以与病毒结合起到屏蔽作用,因此糖分子的干扰也是其抗感染的机制之一。HIV 是日前最难对付的病毒之一。硫酸化香菇多糖具有显著抗HIV 作用,体外10mg/ L 就完全抑制HIV 抗原的表达,干扰HIV 对MT4 细胞的侵染,抑制合胞体形成;临床使用能协同叠氮胸苷(AZT) 更好地抑制HIV 抗原的表达。
3 香菇多糖的抗肿瘤作用
香菇多糖能有效预防化学性或病毒性肿瘤的发生, 对小鼠S180 实体瘤的抑制率可达70 %～100 % ,其中90 %小鼠的肿瘤完全消退; 还能抑制化学致癌剂3 甲葱酮的致癌作用,防止小鼠肠溃疡恶化导致的结肠癌的发生。香菇多糖是通过CTL 、MΦ、NK、ADDC、LAK 等细胞发挥抗肿瘤作用的。这与免疫监视学说观点一致,后者认为,机体免疫系统可以通过细胞免疫机制杀灭肿瘤,CTL 、MΦ、NK、ADDC、LAK等细胞组成防治肿瘤的强大细胞免疫体系。香菇多糖在治疗胃癌、结肠癌、肺癌等方面具有良好疗效。作为免疫辅助药物,香菇多糖主要用来抑制肿瘤的发生、发展与转移,提高肿瘤对化疗药物的敏感性,改善
患者的身体状况,延长其寿命。香菇多糖与化疗剂联合使用有减毒增效的作用,它能通过免疫调节作用或影响一些关键酶的活性,来提高肿瘤对化疗药的敏感性。如谷胱甘肽转移酶( GST) 是帮助肿瘤产生耐药性的关键酶,在顺铂(CDDP) 抑制小鼠结肠26 肿瘤的实验中,LNT + CDDP 组的抑瘤率显著高于单独用CDDP 组或对照组,而GST酶活显著低于对照组,说明香菇多糖提高肿瘤对CDDP 的敏感性,与影响GST 活性有关。嘧啶核苷磷酸酶能催化5DFU R 生成
5FU ,该酶可被肿瘤细胞中多种细胞因子诱导。香菇多糖与5DFU R 联合用药能显著提高后者对AH66肿瘤的抑制率;香菇多糖组的该酶活性显著高于对照组;联合用药组肿瘤产生的肿瘤坏死因子(TNF) 和肿瘤生长因子(TGF) 显著少于对照组。表明香菇多糖能特异性诱导肿瘤中嘧啶核苷磷酸酶活性, 提高肿瘤对5DFU R 的敏感性。
三、提取与分离。
1 材料与方法
材料实验材料: 干香菇。实验试剂; 氯仿、正丁醇、乙醇、甲醇、NaCl 、葡萄糖甘露糖、木糖、乙醚等均为分析纯。
原料的处理: 粉碎法。具体分三种情况,一是将原料粉碎成可过80 目的筛子; 二是将原料粉碎成直径为2 - 3mm的颗粒; 三是不粉碎。
加水量的选择: 设加水量分别为: 原料/ 无离子水(W/ W) = 1∶10 , 1∶15 , 1∶20 , 1∶25 , 1∶30。按上述比例分别进行蒸煮。
蒸煮温度的选择: 设蒸煮温度分别为85 ,96 , 105 , 120 ℃。其中, 前两个温度蒸煮3 - 5hrs ,后两温度个蒸煮40 -80Mins。
蒸煮物的过滤: 采用压滤法。
滤液的浓缩: 采用热浓法。将滤液倒入浓缩锅中, 在92 - 94 ℃条件下加热, 直至滤液的体积降为原来的1/ 4 —1/ 5 为止。
多糖的沉淀与脱色: 采用乙醇法。向浓缩液中加入95 - 99 %的乙醇至50 , 60 , 70 , 80 %饱和度。
多糖中的蛋白质杂质的去除: 采用BECM法。即将正丁醇、乙醇、氯仿、甲醇、NaCl 按一定比例混制成一种特殊的试剂, 然后加到多糖溶液中。搅拌20 - 30Mins 后静置6 - 10hrs。
多糖的分级纯化: 用甲醇分级沉淀法。向多糖溶液中分别加入一定比例的甲醇, 3 000rpm 离心15mins。将分级的样品分别测其比旋, 并用酸完全水解, 作纸层析。
多糖的干燥: 分别采用自然干燥法, 高温烘干法和冻干法三种方法。自然干燥法的条件是25 ℃96hrs ; 高温烘干法采用70 ℃48hrs 和105 ℃16hrs ; 冻干法为真空度20 - 50pa 下干燥18 - 22hrs。
多糖总量测定: 采用苯酚———硫酸法
(9) 。以葡萄糖为标准品。
工艺流程: 原料→烘干→粉碎→称重→调配→热水抽提→过滤→滤液→脱色→醇析→复溶→去除杂蛋白→分级沉淀→香菇多糖→干燥。
2 结果与讨论
较佳的粉碎度不同粉碎度的试验结果表明,以粒径为2 - 3mm的香菇颗粒为好。较细的颗粒虽然有利于多糖的浸出, 但给后面的分离过滤造成困难, 使
粗多糖溶液大量流失, 因此最后得率并不高; 整块香菇子实体不经粉碎直接进行蒸煮抽提,虽然不存在过滤问题, 但是香菇子实体体积太大,不利于多糖的浸出, 因此效果不及粒径为2 - 3mm的香菇颗粒子.
较适的加水量不同加水量的试验结果表明,原料/ 无离子水(W/ W) = 1∶20～1∶25 为好。若加水过少, 在没有达到最佳蒸煮时间之前, 浸出液已经变得很少, 甚至糊锅, 从而影响多糖得率; 若加水过多, 则浸出液过多, 不利于以后的分离浓缩。
适宜的蒸煮温度不同蒸煮温度的试验结果表明, 在96 ℃条件下蒸煮3～
4hrs , 可以达到较高的多糖得率。温度过低(85 ℃) , 溶剂的渗透能力和溶解能力降低, 使多糖不能有效的溶出; 温度过高(100 ℃以上) 导致多糖的
裂解, 使多糖得率大大降低。.
醇析作用对多糖得率的影响取一定量的多糖浸提液分装于4支试管中, 并
依次加入无水乙醇,直至乙醇浓度分别为50 %、60 %、70 %、80 % , 放置一定时间后, 离心收集沉淀并烘干称重, 乙醇终浓度在70 %左右时效果最佳, 经醇析后沉淀即为多糖粗品。
215 多糖粗品中的蛋白质杂质的去除BECM法脱蛋白的结果表明, 杂蛋白的去除率为99.198%。BECM法不仅杂蛋白的去除率高, 而且工艺简单,无需大的动力和设备, 大大降低了运转成本。
216 多糖的分级纯化用甲醇分级沉淀法可将去除杂蛋白的多糖分为L1 , L2 , L3 三个级分, 分别测其比旋, 并用酸完全水解L1 , L2 , L3 , 作纸层析结合苯酚———硫酸法的测定结果表明, L1 , L2 ,L3 的葡聚糖含量分别为68.109%，79.125%, 100 %。
217 多糖的干燥多糖的干燥方法虽有多种, 如自然干燥法, 高温烘干法, 真空低温冷冻干燥法等, 但自然干燥法耗时太长且干燥不彻底。而高温烘干法中70 ℃48hrs 的条件下, 不仅耗时仍较长,而且有部分多糖被降解;
105 ℃16hrs 这样的条件下, 虽然干燥很彻底, 但多糖降解严重。真空低温冷冻干燥法虽然能耗较多, 但条件温和, 应是制备有活性生化制品的有效方法。
四、结论
香菇素以色、香、味俱佳而著称, 堪称食用菌中的上品。近几十年来的研究发现, 香菇中含有一种能治疗癌症, 抗恶性肿瘤, 抗病毒, 抗感染, 提高人体免疫力等多种生理功能的物质———香菇多糖。医学研究证明, 它是通过刺激机体的免疫系统使机体的免疫功能得到恢复和提高, 由机体本身的抵抗力去杀死肿瘤细胞。它的作用是间接的, 所以毒副作用小, 在各类抗癌药物中, 它被认为是毒副作用可以忽略不计, 剂量低, 疗效好的天然的理想药物。香菇多糖1969 年在日本首先发现, 关于其抗恶性肿瘤, 抗病毒, 抗感染等生理功能的报道已不少, 关于利用多种原料发酵法生产香菇多糖的研究也时有报道, 至于如何获得纯净的香菇多糖则所见报道不多。由于文献所介绍的方法因工艺复杂, 收率低, 而使成本高, 售价高达60 美元/ mg , 普通肿瘤病人无法接受。
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香菇多糖提取工艺的研究进展
香菇多糖提取工艺的研究进展 香菇多糖提取工艺的研究进展 香菇Lentinusedodes 为担子菌纲伞形科真菌，是世界上第二大食用菌。香菇多糖是香菇中最重要的一种生物活性物质，具有抑制肿瘤、调节免疫、抗病毒和抗氧化等多方面的药理活性，且毒副作用小。香菇多糖的提取常用水提醇沉法、酸碱提取法，但存在提取工艺复杂、溶剂使用量大、时间长等缺点，而且容易造成多糖降解，生物活性降低。本文主要对近年来香菇多糖提取工艺优化研究方面的进展进行阐述。 1.超声波提取 超声波提取法是利用超声波特殊的物理性质，加速介质质点运动、空化作用、振动匀化等以增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而使药效物质加速融人溶剂提高有效成分的得率。 王恒等用超声波辅助法从香菇中提取香菇多糖，通过实验优化确定出香菇多糖最佳提取工艺为超声功率200W ，料液比 35：1，超声时间40min ，香菇多糖提取率为6.72 ％。王俊颖等采用超声法浸提香菇多糖通过正交试验设计确定的最佳工艺为料水比1 : 25，超声温度60° C超声时间30min , 超声功率300W ，多糖得率为8.72 ％。李宏睿等采用正交试验设计，对香菇多糖的提取条件进行优化，并与单纯的热水浸提进行比较。结果表明，在料水比 l：25 ，超声时间35min ，超声功率105W ，热水浸提温度 90 ％，浸提时间20min 的条件下，提取效果最好，多糖提取率为13.75 ％，比单纯热水浸提法提高6.22％。 2.微波提取 微波辅助提取技术主要是通过调节微波加热的参数，有效地加热物料中的目标成分，对目标成分进行选择性提取。刘小丽等研究微波辅助法提取香菇多糖采用单因素试验对固液比、微波辐射功率、辐射时
国内食用菌公司集锦
国内食用菌公司集锦 国内食用菌公司集锦 1、川乐公司?四川省红岩镇梨花村?现已发展成为成都最大的 食用菌批发市场——百家批发市场的重要供应基地?每天平均出菇量 达到1.5吨。 2、星河生物?广东省、深圳、河南?主营业务为鲜品食用菌的 研发、生产和销售?主要产品包括金针菇、真姬菇和白玉菇等鲜品食用菌。经中国食用菌协会统计?截至2009年12月31日?公司日产 鲜品食用菌36吨?生产规模在全国食用菌工厂化生产企业中高居榜首。2009年2月?公司被中国食用菌协会评为“全国食用菌行业十 大龙头企业”。 3、湖南省安仁县坪上食用菌开发有限公司创建于2002年4月? 现有资产5268万元?注册资金500万元?是集食用菌科研、开发、 加工、生产销售为一体的湖南省农业产业龙头企业、131工程?公司承担的安仁县食用菌专业技术及服务体系建设列为国家星火计划项目。公司采取“公司+基地+农户”为基本特征的农业产业生产经营方 式?生产的“天扶”牌食用菌系列产品有姬菇、秀针菇、香菇、雪菇、 小平菇、鸡腿菇等?主要销往广州、深圳、武昌、长沙、杭州、上海、香港等大中城市和地区?产销率100%?产品供不应求。2009年2月被评为全国食用菌行业“十大”龙头企业?同时评为“AA”信用企业。2010 年被中国食用菌协会、中国烹饪协会、世界蘑菇学会、国际烹 饪联合会评为第六届中国国际食用菌烹饪大赛指定产品单位?这次被授予“全国食用菌行业优秀龙头企业”称号。 4、浙江省景宁县大自然食品、中信实业、博士园科技3家食用 菌龙头企业?景宁县是食用菌生产大县?全县有从事食用菌行业的企业38家?景宁绿色市场食用菌产品年交易量1万多吨?产值达6亿 多元。景宁县食用菌企业发展潜力巨大?有较好的经济基础?有多项政策措施的优惠?有大多数勤劳好学的从业人员?食用菌产业化、企业化应该说大有可为。但目前食用菌企业的发展处于起步阶段?企业人才只有消费没有培养?只有流失没有进入?人才资源溃乏已成为制约食用菌企业快速发展的重要因素。食用菌企业让员工参加知识更新培训班?对于促进食用菌企业技术骨干的技术知识更新?让技术骨干了解食用菌技术与市场发展趋势?拓展企业生产经营思路?进一步提升食用菌企业的生产管理技术水平?促进规模化生产经营主体的健康发展具有极其重要的意义。 5、天津华大绿色食品有限公司创立于2000年?是天津市重点龙 头企业?是天津市目前规模最大的食用菌种植、生产及加工基地。专门生产、加工、销售各种无公害食用菌、山野菜的一所企业?也是优质农产品精深加工出口创汇的外向型企业?产品远销加拿大、韩国、日本等。 公司注册资金1000万元人民币?目前总资产6500万元人民币?2006年销售收入1400万?创造利税69万?位于中国天津滨海新区
香菇多糖提取工艺
香菇多糖提取工艺的研究 1引言 多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分，广泛存在于动物、植物和微生物细胞壁中,是生物体内除核酸和蛋白质以外的又一类重要的生物分子,尤其是一类重要的信息分子[1]。到目前为止，已有近300种的多糖化合物从天然产物中分离出来，其中植物提取水溶性多糖最为重要。从植物中提取多糖主要根据不同溶解度来选择溶剂进行。香菇多糖的提取一般有热水提取法、酸提取法、碱提取法、酶提取法和微波助提法等方法[2]，本文进行了浸提香菇多糖的工艺条件研究，以期获得香菇多糖的最佳提取条件，为其产业化生产提供有效的方法和技术参数。本实验采用各种溶剂和酶的处理,提取香菇多糖,保持多糖的生物活性，效果是明显的。 1.1香菇多糖的组成与药理价值 香菇多糖(LentinanLNT) 是一种β—1,3—葡聚糖，系从担子菌纲伞菌科真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的均一组分的多糖。多糖以甘露糖为主，含少量的葡萄糖、微量的岩藻糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖等；肽链由天冬氨酸、组氨酸、丝氨酸、赖氨酸、谷氨酸等18种氨基酸组成。LNT的化学结构是一种以β—D—[1~3]葡萄糖残基为主链，侧链为(1—6)葡萄糖残基的葡聚糖，平均分子量约为50万道尔顿[3]。 香菇多糖1969年在日本首先发现，自此，国内外学者对LNT作了许多深人的研究。近年来，LNT广泛药理作用研究取得了很大进展。主要的药理价值有：免疫调节作用；抗肿瘤作用[4]；抗病毒作用；对寄生虫、霉菌、细菌等感染均有治疗作用；有抗衰老、抗辐射作用，还具有预防实验性高脂血症和高血糖作用。在临床上LNT还用于治疗小儿反复呼吸道感染，糖尿病，寻常型银屑病，硬皮病，面部扁平，尖锐湿疹等。此外，硫酸化香菇多糖具有显著抗HIV作用，香菇多糖在治疗胃
香菇多糖的研究进展
食品研究与开发 ２００７．Ｖｏｌ．２８．ＮＯ．０５ 作者简介：林楠（１９８１－），女（汉），在读硕士研究生，主要从事功能性食品的研究与开发。 ＊通讯作者：钟耀广，教授，主要从事功能性食品及食品安全方面的研究。 香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａｅｄｏｄｅｓ）是全球第二大人工种植最为普遍的食用菌［１］，由于香菇多糖具有抗肿瘤、抗病毒、提高免疫和刺激干扰素形成等功能，已成为当前研究的热点。香菇多糖作为一种辅助药物，其毒副作用小，疗效高，具有重要的研究和开发价值。本文试图对香菇多糖的提取、分离方法及其结构、生物活性等方面的研究进展进行概括和综述，为其进一步开发利用提供参考。 １香菇多糖的制备 １．１香菇的预处理 一般用于多糖提取的香菇子实体通常是干品，将 无霉变和虫蛀的优质香菇子实体置于６０℃左右的条件下干燥，以利于粉碎［２］，粉碎后过２０～８０目筛。由于香菇的脂肪含量约为干重的２％～４％［３］，因此一般不考虑脂肪对香菇提取的影响，但也有研究采用石油醚、乙醇等除去原料中的脂肪成分［４￣５］。 １．２香菇多糖的提取 多糖的提取可以采用热水、稀酸、稀碱作为浸提剂。在提取过程中，不仅要考虑到粗多糖的得率，还要保证不破坏多糖的结构。由于酸对多糖的糖苷键有破坏作用，故一般采用热水和稀碱作为浸提剂。热水浸提的温度一般为９０℃～１００℃，浸提时间１ｈ～３ｈ，浸提次数为２次～３次，合并浸提液，离心，收集上清液，减压浓缩到适当体积，加入一定量的乙醇静置过夜，离心，收集沉淀物，干燥得粗多糖。碱浸提通常采用ＮａＯＨ作为浸提液，浓度为０．１ｍｏｌ／Ｌ～１ｍｏｌ／Ｌ。 为了提高香菇多糖的提取率，减少能源消耗，缩短提取时间，研究者们尝试了一些其它的提取方法。张海容等［６］以香菇多糖为研究对象，对微波法及热水浸提法进行了比较，发现微波法的提取率高于传统热水法，且提取时间可以缩短１００倍。念保义等［７］利用超声波辅助热水法从香菇中浸提香菇多糖，不仅可以缩短提取时间，减小料液比，而且提高了提取率，降低了生产成本。董彩霞［８］利用纤维素酶作用于香菇细胞的细胞壁，使之破裂，多糖易从细胞内释放出来，以提高多糖的提取 率。也有研究先采用中性蛋白酶处理香菇粗粉，蛋白酶将与多糖结合的蛋白质酶解，使多糖释放出来，此法与传统工艺相比，提取率提高了４０％以上，多糖中杂蛋白 林楠１，钟耀广２，３，＊，王淑琴３，刘长江３ （１． 大连轻工业学院生物与食品工程学院，辽宁大连１１６０３４；２．上海水产大学食品学院，上海２０００９０；３．沈阳农业大学食品学院，辽宁沈阳１１０１６１） 香菇多糖的研究进展 摘 要：香菇多糖是真菌多糖中的一类，是目前最有开发前途的功能食品和药品资源之一。综述了香菇多糖的提取、 分离纯化、结构分析、生物活性等方面的研究概况。关键词：香菇多糖；提取；分离纯化；结构；活性 ＲＥＶＩＥＷＯＮＡＤＶＡＮＣＥＭＥＮＴＯＦＰＯＬＹＳＡＣＣＨＡＲＩＤＥＦＲＯＭＬＥＮＴＩＮＵＬＡＥＤＯＤＥＳ ＬＩＮＮａｎ１，ＺＨＯＮＧＹａｏ－ｇｕａｎｇ２，３，＊，ＷＡＮＧＳｈｕ－ｑｉｎ３，ＬＩＵＣｈａｎｇ－ｊｉａｎｇ３ （１．Ｃｏｌ ｌｅｇｅｏｆＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＦｏｏｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＤａｌｉａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＬｉｇｈｔＩｎｄｕｓｔｒｙ，Ｄａｌｉａｎ１１６０３４，Ｌｉａｏｎｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＳｈａｎｇｈａｉＦｉｓｈｅｒｉｅｓＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００９０，Ｃｈｉｎａ；３．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｈｅｎｙａｎｇＡｇｒｉｃｕｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１０１６１，Ｌｉａｏｎｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｐｏｌ ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍＬｅｎｔｉｎｕｌａｅｄｏｄｅｓｉｓｏｎｅｏｆｆｕｎｇｕｓｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ．Ｉｔｉｓｒｅｇａｒｄｅｄａｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｐｒｏｍｉｓｉｎｇｒｅｓｏｕｒｃｅｓｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｆｏｏｄａｎｄｄｒｕｇｓ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｉｔｉｓｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｔｕｄｉｅｓｏｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎａｌｙｓｉｓ，ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍＬｅｎｔｉｎｕｌａｅｄｏｄｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｌｅｎｔｉｎｕｌａｅｄｏｄｅｓｐｏｌ ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ；ａｃｔｉｖｉｔｙ综述 １７４
绿色食品农药使用准则.docx
绿色食品农药使用准则 1、范围。本标准规定了绿色食品生产和仓储中有害生物防治原则、农药选用、农药使用规范和绿色 食品农药残留要求。 2、规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 ,仅注日期的版本适用于本文件。 GB 2763 GB/T 8321食品安全国家标准 （所有部分） 食品中农药最大残留限量 农药合理使用准则 GB 12475农药贮运、销售和使用的防毒规程 NY/T 391绿色食品产地环境质量 NY/T 1667（所有部分）农药登记管理术语 3、术语和定义 NY/T 1667 界定的及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 AA 级绿色食品。产地环境质量符合NY/T 391 的要求 , 遵照绿色食品生产标准生产，生产过程中 遵循自然规律和生态学原理，协调种植业和养殖业的平衡，不使用化学合成的肥料、农药、兽药、渔药、 添加剂等物质，产品质量符合绿色食品产品标准，经专门机构许可使用绿色食品标志的产品。 3.2 A 级绿色食品。产地环境质量符合NY/T 391的要求,遵照绿色食品生产标准生产，生产过程中遵 循自然规律和生态学原理，协调种植业和养殖业的平衡，限量使用限定的化学合成生产资料，产品质 量符合绿色食品产品标准，经专门机构许可使用绿色食品标志的产品。 4、有害生物防治原则 绿色食品生产中有害生物的防治应遵循以下原则： ——以保持和优化农业生态系统为基础：建立有利于各类天敌繁衍和不利于病虫草害孳生的环境条 件，提高生物多样性，维持农业生态系统的平衡； ——优先采用农业措施：如抗病虫品种、种子种苗检疫、培育壮苗、加强栽培管理、中耕除草、耕 翻晒垡、清洁田园、轮作倒茬、间作套种等； ——尽量利用物理和生物措施：如用灯光、色彩诱杀害虫，机械捕捉害虫，释放害虫天敌，机械或 人工除草等； ——必要时合理使用低风险农药：如没有足够有效的农业、物理和生物措施，在确保人员、产品和 环境安全的前提下按照第 5、 6 章的规定，配合使用低风险的农药。 5、农药选用 5.1 所选用的农药应符合相关的法律法规，并获得国家农药登记许可。 5.2 应选择对主要防治对象有效的低风险农药品种，提倡兼治和不同作用机理农药交替使用。 5.3 农药剂型宜选用悬浮剂、微囊悬浮剂、水剂、水乳剂、微乳剂、颗粒剂、水分散粒剂和可溶性 粒剂等环境友好型剂型。 5.4AA级绿色食品生产应按照附录 A 第 A.1章的规定选用农药及其他植物保护产品。 5.5A 级绿色食品生产应按照附录有害生物防治需要时，还可适量使用第A 的规定，优先从表 A.2 章所列的农药。 A.1中选用农药。在表 A.1所列农药不能满足 6、农药使用规范 6.1 应在主要防治对象的防治适期，根据有害生物的发生特点和农药特性，选择适当的施药方式， 但不宜采用喷粉等风险较大的施药方式。 6.2 应按照农药产品标签或GB/T 8321 和 GB 12475 的规定使用农药，控制施药剂量（或浓度）、施
香菇多糖提取作业
香菇多糖提取 提取法： 用物理提取的方法生产精细化学品，即通过将某一种物质按一定的要求从混合物中提取出来从而获得产品的方法。 张杨杨 精化1122 1、认识香菇多糖 (1)香菇多糖结构式 分子式：〔C42H72O36〕n 分子量：〔1152.9995〕n
(2)香菇多糖性质 香菇多糖（l e n t i n a n;L N T）是从香菇中分离纯化的一种葡聚糖，是以增强T细胞和巨噬细胞功能为主的免疫增强剂。 密度：1.88g/c m3；沸点：1472℃a t760m m H g。 溶于碱溶液或甲酸，微溶于热水或二甲亚砜，不溶于冷水、醇、乙醚、氯仿、吡啶或六甲基磷酰胺。对硫酸和盐酸稳定。 (3)香菇多糖的功能 香菇多糖具有激活细胞免疫、调节多种体液免疫因子、诱导α-干扰素生成，调节机体免疫应答反应，诱导白细胞对肿瘤浸润，导致肿瘤部位血管扩张、出血、坏死，阻止病毒与宿主细胞的结合，提高S O D〔超氧化物歧化酶〕活性，抑制M D A〔丙二醛〕生成，抗脂质氧化，降低胆固醇，调节糖代谢、改善糖耐量、扩张胃肠道产生饱腹感而减轻食欲，降低血糖等功能。 【丙二醛】 英文名：M a l o n d i a l d e h y d e;m a l o n i c d i a l d e h y d e;P r o p a n e d i a l 简称：M D A 分子式O H C-C H2-C H O 分子量72.0634 无色针状晶体，熔点72～74℃，一般含两个结晶水，60℃下真空干燥可得无水物，易潮解，纯的丙二醛在中性条件下稳定，但在酸性条件下不稳定。 由乙醛和甲酸乙酯在碱作用下缩合而得，可在高真空下升华精制，主要用于医药中间体、感光色素的原料。与蛋白质不相容，有潜在的致癌性。
注射用香菇多糖类药物的研究
注射用香菇多糖类药物的研究 摘要：当今社会，治疗恶性肿瘤的辅助治疗类的药物不计其数，而天地欣（注射用香菇多糖）作为新型生物反应调节剂，因其是国内唯一可供静脉注射，并且各种各期肿瘤患者都可以使用（即适用性广），疗效显著，未发生任何明显毒副反应[1]等优点，成为肿瘤患者的优先选择。本文将从香菇多糖的药理，药效，工艺合成及优化等方面，对香菇多糖类药品进行研究，并且对其市场前景和发展方向做出了相应的预测和建议。 关键词：香菇多糖药理药效提取优化市场发展 Abstract:Nowadays, Lentimanfor Injection is becoming more and more popular with its adventages.It Is the only medicine which can be used for intravenous injection and patients with various stages of tumor can be used . Because of this, it has become the preferred choice of tumor patients. This paper will let you know more about the Lentinan. key words:LNT Pharmacy theory Extraction Optimization 1.简单介绍 天地欣是由南京绿叶思科公司生产的一种生物反应调节剂，其主要成分是从香菇的子实体中分离出来的一种葡聚糖 ,又称香菇糖、能难治、瘤能停、LC2 33。香菇糖是上世纪 60年代首先由日本学者千原吴郎从香菇子实体中经热水提取,分离纯化的一种具有抗肿瘤活性的葡聚糖 , 70年代应用于临床[2]。香菇多糖具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫和刺激干扰素形成等药理学活性的特点，经全国近五百家大、中型医院九年临床应用，疗效显著，未发生任何明显毒副反应，因此被广泛使用。 2.香菇多糖的药理及药效。 香菇(Lentinusedodes)属担子菌纲侧耳科(Pleurotaeeae)真菌,是世界著名食用兼药用菌之一。它含有多种有效的药用成分,尤其是含有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能的香菇多糖(Lentinan简称LNT)而引起人们广泛的重视。香菇多糖是从香菇的子实体中分离得到的具β -1,6支链和β-1,3支链的β-1,3葡聚糖,相对分子质量在40～80万之间。LNT是一种良好的免疫增强剂,在中国已被广泛应用于治疗多种肿瘤。其结构式为： 大量临床前体内外实验证明,香菇多糖无直接细胞毒作用, 其主要作用是调节宿主免疫机制,激活各种免疫细胞成熟，分化和增殖，使免疫状态由低下恢复到接近于正常能力，使肿瘤细胞受抑制,进而发挥其抗肿瘤活性[4]。但在体内可通过刺激与分化机制激活巨噬细胞、T细胞和NK细胞的诱导和增强作用[3]，提高淋巴细胞转化率，促进抗体形成，从而提高免疫机制[5],与抗癌药物协同增强抗癌效果,产生抗癌作用。 具体细化，香菇多糖的机理从机制的本体来讲，分间接抑制和间接免疫调节两大药效。 2.1直接抑制 香菇多糖能够改变肿瘤细胞膜的某些成分,从而改变细胞膜的生化特性,影响细胞的新
香菇多糖质量标准
正式名：香菇多糖汉语拼音：Xianggu 标准号：WS-291（X-256）-97 拉丁文或英文：Lentinan 主要活性成分：香菇[Lentinus edodes（Berk）sing]子实体提取、精制的多糖。按干燥品计算，含香菇多糖应不得少于%。 性状：类白色或浅黄色粉末；无味，有引湿性。在水、甲醇、乙醇或丙酮中几乎不溶；在L氢氧化钠中溶解。 比旋度取本品，置五氧化二磷干燥器中，减压干燥至恒重，精密称取适量，加L氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定（中国药典），范围在+2～+15之间。 鉴别：（1）取含量测定项下的溶液2ml，加蒽酮溶液（取蒽酮35mg置100ml量瓶中加硫酸溶解，并用硫酸稀释至刻度，即得，临用配制）5ml，振摇混匀，置水浴中加热，应显蓝绿色。 （2）取本品约10mg，滴加水少许研磨，再加水制成每1ml中含的溶液，置匀浆器中制成匀浆液，取10ml，加高碘酸钠溶液[取高碘酸钠（NaIO4）4.28g，加L硫酸溶液。溶解并稀释至1000ml]1ml，摇匀，立即取反应液4ml，以水为空白对照，照分光光度法（中国药典1995年版二部附录ⅣA），在295nm的波长处测定吸收度（A1），剩余的反应液置避光容器中。于3O℃连续搅拌6小时后，取出，测定吸收度（A2）。两次吸收度之差（A1-A2）应为～。 （3）红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致，在89Ocm-1上附近有弱吸收峰。 检查：酸碱度取本品，加水制成%的匀浆液，依法测定（中国药典1995年版二部附录Ⅵ H），pH值应为～。 特性粘数取本品，置五氧化二磷干燥器中，减压干燥至恒重，精密称取适量，加L 氢氧化钠溶液数滴，使充分溶胀，研磨均匀，在25～30℃放置6～8小时，使完全溶解，制成每1ml中含的溶液，摇匀，依法测定（中国药典1995年版二部附录ⅥG第三法），特
食用菌多糖研究进展
微生物专题报告——食用菌多糖功能的研究概况 141201019 微生物学魏华 食用菌作为天然食药资源，营养丰富，含蛋白质、必需氨基酸、多糖、维生素等多种成分。食用菌多糖虽然含量比例仅占0.48-0.87%，却具特异的生物学功能活性。如具有抗肿瘤活性；可显著提高巨噬细胞吞噬量，刺激抗体产生，增强人体免疫功能；可降血糖、降血脂；可显著增加脑和肝脏组织中的过氧化物歧化酶SOD酶活力，抗氧化、抗衰老；保肝、抗辐射等等。 1971 年，Maeda 等从香菇中分离出一种具有抗肿瘤活性的多糖，这个研究发现影响重大，使更多的科学家开始研究真菌中的活性多糖[14]。截至目前，国内外已从食用菌中筛选出200 种有生物活性的多糖。同时，对于多糖的研究不仅只是研究其的生物学活性，更多的是利用生物学手段研究多糖分子的化学结构及结构与功能之间的关系[13]。国内对多糖的研究起步较晚，但在研究糖类的作用机理时，紧密与中医药的理论相结合，进展甚快。70 年代以来，我国在云芝、银耳、灵芝、黑木耳、裂褶菌、冬虫夏草、猴头菌和竹荪等中分离得到具有显著生理活性的、单一成分的多糖物质。目前，我国对药用多糖的研究仍多偏重于提取、分离、纯化、和研究药理活性等方面。虽然已有用于治疗癌症的商业化产品，但积累的临床资料仍很缺乏，大部分多糖产品尚处于实验阶段或仅用于保健品，还需重视新兴的糖生物学及工程学，提高研究水平。 1.食用菌多糖的种类 近年来研究报道的真菌多糖，主要有四类，葡聚糖、甘露聚糖、杂多糖、糖蛋白。 1.1葡聚糖 葡聚糖（Glucan），尤其是β(1-3)连接的葡聚糖具有多种活性[15-20]。如从金顶侧耳（Pleurotus citrinopileatus）子实体中分离的多糖，分子量为1.89×104，可能的结构是主链为β(1-3)连接的葡聚糖，支链为β(1-6)连接的葡萄糖[21]。从黑石耳（Dermatocarpon miniatum）子实体中分离的具有抗氧化功能的多糖，主要结构为α(1-4)(1-6)连接的葡聚糖，分子量为1.80×106[22]。从栓菌（Trametes suareclens）中分离的多糖分子量5.0×10 4，主链为β(1-3)-D-Glucan，支链为β(1—6)连接的葡萄糖。从斜顶菌（Clitopilus caepitosus)）多糖分子量1.32×106，主链为β(1-3)连接的葡聚糖，支链有较多的β(1-6)连接的葡聚糖链和较少的β(1-4)连接的葡聚糖链，分别连在主链的O-6 位和O-4 位。 1.2甘露聚糖
香菇多糖的提取纯化及其理化性质的研究_张欣
香菇多糖的提取纯化及其理化性质的研究3 张 欣 吕作舟 (华中农业大学 武汉 430070) 摘要 本研究以香菇菌盖、菌柄、菌丝体为试材,采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖。并且,从香菇菌盖中提取纯化得到两种新多糖:香菇多糖A(水浸物)和香菇多糖B(碱浸物)。 关键词 香菇 菌盖 多糖 提取 纯化 理化性质 香菇(Lentinula edodes)不仅是一种美味佳肴,也是一种著名的药用菌。我国历代的医药学家对香菇的药性及功能均有著述,如《日用本草》认为香菇“益气、不饥、治风、破血”〔1〕。现代研究结果表明,香菇中含有能降低血浆胆固醇的香菇嘌呤〔2〕,含有诱生干扰素的双链核糖核酸〔3〕,且含有抗肿瘤活性物质———香菇多糖及香菇糖肽〔4,5〕。 1970年G oro Chihara首先从香菇子实体中浸提出6种香菇多糖,并证明其中一种具有明显的抗肿瘤作用,定名为Lentinan〔5〕。自此,世界各地掀起了一股从大型真菌中寻找抗肿瘤药物的热潮。有关香菇多糖的研究尤其活跃,包括提取工艺及分离纯化研究,香菇多糖理化性质及药用价值研究〔6,7,8〕。但对多糖理化性质、结构、药效、药理等方面仍无定论,仍须继续深入研究。 本研究以香菇的菌盖、菌柄、菌丝体为试材,分别采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖,检测分析了粗多糖、多糖、蛋白质与原材料之间量的关系,并且,从香菇菌盖中提纯了两种新多糖,对其理化性质和结构进行了初步研究,为进一步对香菇多糖的结构分析、药效、药理实验提供参考。 本研究主要结果如下: 11以香菇菌盖、菌柄、菌丝体为试材,采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖。粗多糖、多糖得率都以菌盖的水浸物为最高,而以菌丝体的碱浸物为最低。蛋白质得率以菌柄水浸物为最高,以菌丝体的碱浸物为最低。 21氨基酸自动分析仪的分析结果表明:香菇菌盖水浸物、碱浸物中氨基酸含量丰富,其中包括人体必需氨基酸。水浸物主要含天门冬氨酸、谷氨酸;碱浸物主要含天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸。 31采用水浸法、碱浸法从香菇菌盖中提取粗多糖,然后经乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白、CT AB (十六烷基三甲基溴化铵)络合沉淀、氨化钠溶液溶解、透析,得到两种多糖:香菇多糖A(水浸物)和香菇多糖B(碱浸物)〔9〕。这种纯化方法具有简便、经济的特点。 41多糖的纸层析结果表明:多糖A、多糖B均仅为一个斑点,R f值分别为0152,0120。多糖的PAGE电泳结果表明:多糖A,B均为紫红色的单一谱带,R f值分别为0151,0162;它们均从负极向正极移动,表明它们是酸性多糖。紫外光谱分析结果表明:多糖A、多糖B均未发现核酸(260nm)和蛋白质(280nm)特征吸收峰〔10〕。组分含量分析表明:多糖A、多糖B均无含氮物质存在,但含少量灰分和水分。以上对多糖的鉴定结果表明:多糖A、多糖B均一性高,多糖A的纯度为7911%,多糖B的纯度为8312%,符合化学定性定量标准;它们是酸性多糖。 51多糖A,B均为灰白色粉未。多糖B不溶于稀酸。多糖A,B均溶于水、稀碱,尤易溶于热水,不溶于乙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯等有机溶剂,其水溶液透明粘稠状,可被5%CT AB络合沉淀。旋光计测得多糖A的旋光率为〔α〕D25℃+ 4311°(水),多糖B的旋光率为〔α〕D25℃+2513°(水)。采用改良型膜渗透压法测得香菇多糖A的数均分量为8131×104,香菇多糖B为9140×104。 61红外光谱分析结果表明,多糖A、多糖B具类似结构,但不属同一种物质。两种多糖在890cm-1均具吸收峰,在840cm-1均无吸收峰,表明它们为β-糖苷〔11〕;多糖A,B都含有-C OO-基团。因此,香菇多糖A、香菇多糖B均是β-酸性异多糖。 71纸层析结果表明:多糖A,B均由葡萄糖(G lc)、半乳糖(G al)、阿拉伯糖(Ara)、木糖(X yl)、鼠李糖(Rha)构成。用正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)为展开剂,以葡萄糖的R f值为1100,则它们的R f值之比为,G lc∶G al∶Ara∶X yl∶Rha= 1100∶1117∶1152∶1176∶2117。气相色谱检测多糖的单糖组成及摩尔比,多糖A为Ara∶Rha∶X yl∶G al∶G lc= 4136∶2103∶1100∶5164∶13180;多糖B为Ara∶Rha∶X yl∶G al∶G lc=9137∶1100∶1164∶7119∶23136。 3 湖北省重点科技计划项目。收稿日期 1999—07—20 43中国食用菌 E DI BLE FUNGI OF CHI NA V ol118,N o16
香菇多糖提取实验汇报
超声波法提取香菇多糖 研究背景： 香菇多糖的性质：香菇多糖以β~1，3葡聚糖为主，含有少量的木糖和甘露糖，具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能 用途：抗肿瘤药。为化、放疗辅助药。主要用于胃癌、肺癌、乳腺癌。 生产技术状况：因为香菇多糖的用途广泛，提取比较方便，越来越多的人投身于这方面的研究，是的提取技术方面的大幅度提升。状况良好。 操作过程： 方案设计：香菇多糖的提取 香菇预先烘干→称取干香菇15克→粉碎→圆底烧瓶→200ml热水70℃→超声波发生器（水预热在60℃左右）→提取45min（中间停顿2次，每次5min）→过滤→滤渣→等滤液体积热水70℃→提取30min（中间超声波停2次，每次5min）→过滤→合并滤液→抽滤→滤液→量体积标识贮藏备用 香菇多糖的测定：1.首先去掉香菇多糖溶液中的的蛋白质：采用氯化钙法：将溶液PH 调节至8---9，加热到85℃，加入氯化钙使浓度达5% (w/v)，搅拌，冷却至室温，过滤，得脱蛋白多糖液。 2.制作标准曲线：准确吸取1mg/ ml 葡萄糖标准溶液1.0 、2.0 、 3.0 、 4.0 、 5.0ml 置于50ml 容量瓶定容，准确吸取该系列溶液各2ml ，然后加入6%苯酚1.0ml 及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。 3. 样品的测定：取去完蛋白的样液2ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度。将吸光度控制在0.2-0.8 人员分工：我们分成两组来完成实验，因为有两组待测夜要进行测定。然后标准溶液是由第一大组完成。由于操作比较简单，我们就一起完成。1人对溶液进行去蛋白，2人制作待测液，1人对待测液进行测定，并记录数据。 实验现象：配置待测液时，加入浓硫酸后溶液变成橙黄色。从而可来额定吸光度。（附照片）总结分析
临床合理用药规范标准
临床合理用药规范 （版本号：HLYY00） 为进一步加强合理用药管理，建立统一、规范的药物临床使用管理机制，推进临床合理用药，保障医疗质量和医疗安全，制定本细则。 一、抗生素使用原则 1. 诊断为细菌性感染者，方有指征应用抗菌药物：根据患者的症状、体征及血、尿常规等实验室检查结果，初步诊断为细菌性感染者以及经病原检查确诊为细菌性感染者方有指征应用抗菌药物；由真菌、结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌、支原体、衣原体、螺旋体、立克次体及部分原虫等病原微生物所致的感染亦有指征应用抗菌药物。缺乏细菌及上述病原微生物感染的证据，诊断不能成立者，以及病毒性感染者，均无指征应用抗菌药物。凡怀疑细菌感染者，必须采集标本作细菌培养且应力争在使用抗菌药物前采集标本作细菌培养 2. 联合使用抗菌药物指征：病因未明的严重感染；单一药物不能控制的严重感染 (败血症、细菌性心内膜炎、化脓性脑膜炎)；多种细菌引起的混合感染 (需氧菌+厌氧菌，G+球菌+G-杆菌)；二重感染 (细菌+真菌)；需长期用药且细菌易产生耐药的感染 (结核病)；以两联为宜，且相互间具协同或相加作用。未经全院讨论，一律不允许使用三联抗菌药物。 3. I类手术围手术期抗菌药物预防应用：对具有预防使用抗菌药物指征的常见手术，要参照《常见手术预防用抗菌药物表》（见附件1）选择抗菌药物。以下手术原则上不允许预防使用抗菌药物：甲
状腺、乳腺、腹股沟疝、关节镜检查、颈动脉内膜剥脱、颅骨肿物切除、白内障手术、冠脉造影等血管介入诊断手术。I类手术预防使用抗菌药物给药方法及时间：在术前～2小时内给药，如果手术时间超过3小时，或失血量大(>1500 ml)，可手术中给予第2剂。总的预防用药时间不超过24小时，个别情况可延长至48小时。 4. 一般感染患者用药72小时，重症感染48小时后，根据临床反应或临床微生物检查结果，决定是否更换所用抗菌药物。感染患者待症状、体征及实验室检查明显好转或恢复正常后可再继续用药3天。 5. 氟喹诺酮类药物的经验性治疗可用于肠道感染、社区获得性呼吸道感染和社区获得性泌尿系统感染。其他感染性疾病治疗要参照致病菌药敏试验结果选用该类药物。 6. 抗生素品种见“常州市中医医院抗菌药物临床应用分级管理目录（2015版）”。 7．常见手术预防用抗菌药物见附件1。 二、神经（含脑细胞、脊髓）营养药、脑细胞保护药、改善颅内血管循环药物（静脉用或肌注用）使用原则 第一诊断为脑血管病或脑神经病变的患者同时使用不超过两种。第一诊断为其他疾病但伴随有脑血管病或神经病变的患者，脊髓及周围神经损伤患者不得同时使用两种或两种以上，必要时结合口服西药、中药汤剂进行调整。超出以上范围使用的需要有临床诊治指南Ⅰ级推荐或循证医学A级证据支持，否则视为不合理用药。
微波辅助法提取香菇多糖的工艺
香菇是我国传统的药食两用食品，含有多种有效药用成分。尤其是香菇多糖,是一种宿主免疫增强剂,具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能。医学研究证明,它是通过刺激机体的免疫系统使机体的免疫功能得到恢复和提高,由机体本身的抵抗力去杀死肿瘤细胞。它的作用是间接的，毒副作用小,在临床上具有很好的应用前景[1-2]。香菇多糖在日本已生产并外销。但因工艺复杂,收率低,成本高,普通肿瘤病人无法接受。为此,我们对香菇多糖的提取工艺进行研究,初步探讨出较为理想的浸提工艺,希望为其工业化生产提供一定的理论参考。 1材料与方法 1.1材料与试剂 香菇：购自西安市农贸市场；D318型阴离子交换树脂,LX-200型阴离子交换树脂，D201×7型阴离子交换树脂，LX-67型阴离子交换树脂：均购自西安蓝深公司;葡萄糖,苯酚,浓硫酸,无水乙醇,考马斯亮蓝G-205等均为分析纯。 1.2主要仪器设备 752型紫外可见分光光度计：上海光谱仪器有限公司；WP700TL23-K5微波炉：格兰仕电器有限公司；电热恒温水浴锅：北京长源实验设备厂；80-2B台式低速离心机：湖南星科科学仪器有限公司；Delta320pH 计：梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司。 1.3提取工艺[3-4] 干香菇→粉碎→加水浸泡20min→微波辐射→热水浸提30min→离心取上清液→浓缩→加乙醇沉淀多糖→离心分离多糖→多糖粗品制成溶液→上树脂柱去除杂蛋白→流出液真空干燥得香菇多糖产物试验中均以1g干香菇粉为提取对象。 1.4检测方法 香菇多糖含量测定：采用苯酚硫酸法[5]。测得标准 微波辅助法提取香菇多糖的工艺 刘小丽，黄晋杰 （长安大学环境科学与工程学院，陕西西安710054） 摘要：研究微波辅助法提取香菇多糖并用离子交换树脂去除杂质蛋白的工艺方法。采用单因素试验对固液比、微波辐射功率、辐射时间、乙醇用量以及杂蛋白的去除条件分别进行了考察。试验结果表明最佳提取工艺条件为:固液比1g∶20mL,微波辐射功率为280W，辐射时间5min，乙醇与多糖提取液体积比为4∶1，香菇多糖提取率可达到9.46%； 采用LX-67阴离子交换树脂在料液pH9时可有效去除蛋白质杂质，多糖纯度可达到85%。 关键词：香菇多糖；微波；离子交换树脂 Study on Microwave-assisted Extraction of Lentinan from Mushroom LIU Xiao-li，HUANG Jin-jie （College of Environmental Science and Engineering，Chang＇an University，Xi'an710054,Sh a anxi，China）Abstract:The methods of extracting lentinan from mushroom with micowave assisting were studied.The ratio of solid to water（g/mL）,microwave power,microwave extraction time,the usage of ethanol,and the remove of protein were studied respectively by the single factor test.The results showed that the optimum conditions of extraction were as follows:the ratio of material to liquid of1g∶20mL,microwave radiation power of280W,the radiation time for5min,the volume ratio of ethanol to liquor of4∶1,under this conditions the extraction rate of polysaccharide can get9.46%.The LX-67negative ion exchange resins were used to remove protein from the rude lentinan with the liquor at pH9,and the purity of lentinan can get85%. Key words:lentinan；microwave；ion exchange resins 作者简介：刘小丽（1975—），女（汉），讲师，在读博士，研究方向：食 品和药物中有用成分提取与分离。
粗多糖含量测定方法学验证
粗多糖含量测定方法学研究资料 一、仪器与试药 (1) 二、方法的研究 (2) 1.检测波长的测定 (2) 2.样品及对照制备方法 (2) 三、方法学验证 (3) 1.线性 (3) 2.精密度实验 (4) 3.稳定性实验 (4) 4.重复性试验 (5) 5.中间精密度实验 (5) 6.准确度试验 (6)
芪参颗粒粗多糖含量测定方法起草说明 标志性成分粗多糖含量测定的方法来源于《保健食品功效成分检测方法》白鸿主编（中国中医药出版社)的第二法，该方法的原理是：多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基呋喃糠醛），再与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，其显色强度与溶液中糖的浓度成正比，在625nm波长下比色测定。 主要研究资料如下： 一、仪器与试药 1、仪器 (1) 离心机（湘南湘仪实验室仪器开发有限公司，型号TD25-WS）； (2) 离心管：50ml； (3) 水浴锅（上海精宏实验设备有限公司，型号 DK-S26）； (4) 旋涡混合器（DioCote，SA8）； (5) SHIMADZU UV-1800 紫外可见光分光光度计； (6) JB760-68 石英比色皿（宜兴市伟鑫仪器有限公司）； (7) TU-1901 双光束紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）； 2、试药 (1) 葡萄糖：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1； (2) 无水乙醇：西陇化学股份有限公司，分析纯，批号为160802 1； (3) 蒽酮：国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号为； (4) 硫酸：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1； (5) 葡萄糖标准液：标准称取干燥恒重的分析纯级葡萄糖，加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（ml）。 (6) %蒽酮硫酸溶液（W/V）：准确称取蒽酮置于烧杯中，缓缓加入100ml 80%硫酸溶解，溶解后呈黄色透明溶液。现用现配。 3、试样
食用菌多糖研究进展
第25卷第5期浙江林业科技Vol. 25 No.5 2 0 0 5年9月JOUR. OF ZHEJIANG FOR. SCI. & TECH. Sep., 2 0 0 5 文章编号：1001-3776（2005）05-0049-05 食用菌多糖研究进展 王丽霞1, 2，杜德清2 （1. 中南林学院，湖南长沙 410004；2.丽水职业技术学院，浙江丽水 323000） 摘要：对食用菌多糖的提取、分离纯化、定性定量分析、活性研究和临床应用等研究进展进行了综述，指出了目前存在的不同食用菌多糖较难鉴别、真菌多糖提取纯化工艺需进一步加强、食用菌多糖结构和功能之间的关系问题，提出真菌多糖的提取工艺和构效关系是今后研究的主要方向。 关键词：食用菌；多糖；免疫调节；生理活性；提取纯化技术 中图分类号：S646 文献标识码：A 食用真菌是人类实践活动中最早认识和利用的一类微生物，具有种类繁多、世代短、生物量大、易培养、分布广和营养成分丰富等特点，国内外学者对其营养成分进行了广泛的研究[1]，近年来人们越来越认识到食用真菌中独特的多糖功能成分。据杨革报道[2]，真菌的多糖含量在0.48% ~ 0.87%。食用菌多糖是一种很好的免疫调节增强剂，可从根本上提高人体免疫功能，起到扶正固本、强身保健的作用。20世纪80年代以来，这方面的研究利用进展更为迅速，且正朝抗癌、增寿、强力、益智、美容以及提高免疫力和防止衰老等方向深化。现代医学研究发现，食用菌中能显著增强癌症患者抵抗力的生理活性物质即为食用菌多糖[3]。食用菌多糖的生理功能、化学结构以及构效关系正成为多糖研究的前沿阵地，取得了很大进展，而多糖分离、纯化和结构测定的方法也在不断发展和完善[4]。为此笔者对食用菌多糖的研究现状进行了综述，为食用菌多糖的进一步开发利用提供参考。 1 食用菌多糖提取工艺研究进展 不同食用真菌多糖的鉴别较为困难，这是因为即使同一属真菌中的不同种真菌所产多糖也不一致（包括多糖种类、多糖结构、分子量大小等）。目前也没有一份较为可靠的不同真菌多糖的图谱（例如能表明结构差别的红外图谱等）。从纯种发酵液（即只用一种已知真菌菌种发酵所得液体）或从已知真菌子实体中提取的多糖可以进行结构和定性、定量分析[5]。 食用菌菌丝多糖分胞外多糖和胞内多糖。对于提取深层发酵液中的食用菌多糖，常规提取一般是首先将菌丝从发酵液中分离出来，打浆处理，然后用热水提取法或其他方法从菌丝中提取胞内多糖，从滤液中提取胞外多糖，一般是把滤液先过滤，再浓缩，最后用有机溶剂沉淀而得到。从多糖水溶液中提取多糖，首先可用透析或超滤等方法去掉小分子物质（单糖、寡糖、氨基酸、短肽、无机盐等），然后设法去掉水分（各种合适的干燥方法、超滤以及有机溶剂沉淀法等）[6]。 根据多糖类物质易溶于热水而不溶于高浓度酒精的原理，食用菌多糖的提取通常采用水煮醇沉（热水提取及酒精沉淀法）的常规方法。其提取工艺流程如图1。 食用菌多糖除常规的水提法外还有一些其它提取方式。据王竟等人报道[7]，担子菌的发酵产物中一些具有生理活性的聚合物（主要为多糖类），其分子量一般在1 000 d以上，对于这些发酵多聚物的提取他们采用了超
香菇多糖
香菇香菇多糖发酵生产分离提取生理活性 摘要:香菇是一种营养丰富的食、药用真菌香菇多糖因其具有如降血脂、抗血栓、抗血 小板聚集及抗肿瘤等生理活性而受到广泛的关注本论文通过香菇深层发酵来生产具有 生物活性的多糖为目的，研究了香菇多糖的发酵生产、提取、分离纯化及结构的初步分 析研究了营养性因子对香菇深层发酵的影响，结果表明葡萄糖、玉米粉、豆饼粉有利于 香菇菌体生长和胞外多糖的形成进一步的正交优化实验，确定了香菇深层发酵培养基为 葡萄糖20gL，豆饼粉60目20gL，KH2PO42gL，无机盐MgSO4·7H2O0.5gL优化发 酵工艺条件为初始pH5.5自然、接种量10％、种龄6d，温度28℃、250mL摇瓶装液 量80mL的条件下，香菇深层发酵结果最佳，在此基础上进行摇瓶发酵曲线测定，确定 了香菇适宜发酵周期为144h，胞外粗多糖含量最高可达542mg100mL，菌体生物量达 8.41mg100mL香菇发酵液胞外多糖最佳提取工艺为75％VV的乙醇浓度沉淀，温度为4℃，溶液pH值7.0时胞外粗多糖得率为670mg100mL发酵清液香菇发酵液胞内多糖 最佳提取工艺为组织捣碎法破壁处理、提取温度90℃、料水比14、提取时间4h、提 取次数2次，胞内多糖的最高产率为14.73mg50g湿菌丝体香菇胞外粗多糖经活性炭 脱色，酶法和三氯乙酸正丁醇法脱蛋白，经DEAE-纤维素柱进行组别分离和 Superdex200进行分级分离，经透析脱盐冷冻干燥得到香菇多糖纯品含量最多的胞外 多糖级分LEN1经红外光谱照射，证明其有多糖的特征吸收峰，是α-型吡喃环多糖经 紫外光谱扫描证明其不含蛋白质经HPLC测定，其分子量为6.5×105，是处于这一分 子量范围的单一成分，把提取出的香菇多糖应用于果蔬复合饮料中，无沉淀产生，证明 香菇多糖可用于饮料生产 标题:香菇香菇多糖发酵生产分离提取生理活性 专业:食品科学 学位:硕士 单位:山东轻工业学院@ 关键词:香菇香菇多糖发酵生产分离提取生理活性 论文时间:2007 分类:TS201.5 S646.12 导师:王成忠 语种:中文文摘 香菇多糖提取的原理是什么？ 多糖溶于热水,不溶于60%以上乙醇,也不溶于氯仿正丁醇.所以用热水提取,乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质;因为热水也可以将蛋白类物质提取出来,所以用氯仿正丁醇萃取除去提取液中的蛋白. 香菇子实体粉碎,低温烘干,准确称量,乙醚回流脱脂,乙醚提取物回收处理,香菇子实体粉末加入20倍量水,温度50 ℃,反应时间为80 min提取香菇多糖粗品,活性炭脱色[ 5 ],离心除去沉淀,上清液中加入95%乙醇,使乙醇终体积分数为75% ,离心取沉淀即得香菇多糖粗品。 香菇多糖粗品水溶解后过DEAE2 52层析柱(cm × 60 cm,柱高52 cm) ,DEAE2 52层析柱先用pH518的磷酸盐缓冲液平衡,样品溶于此缓冲液后上柱。