酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定
实验六酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定
一、目的要求
1. 通过观察了解酵母细胞的形态结构及出芽繁殖。
2. 掌握鉴别酵母细胞死活的染色技术。
二、基本原理
酵母菌细胞较大，不必染色即可用显微镜观察其形态。
用美蓝染色液可对酵母细胞进行死活染色鉴别。
美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。
活的酵母细胞，因新陈代谢的不断进行，具有一定的还原能力，能将进入细胞的美蓝还原，而细胞呈无色；而死细胞已失去还原能力，则被染料染成蓝色。
需要注意的是，一个活酵母菌的还原能力是有限的，必须严格控制染料的浓度和染色时间。
三、材料及器材
1. 菌种：酵母菌。
2. 溶液和试剂：0.05%和0.1%吕氏美蓝染色液。
3. 仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片，滴管，试管，蒸馏水等。
四、方法与步骤
1. 在干净载玻片上加一滴吕氏美蓝染色液，以无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在美蓝液中，混合均匀。
2. 取一块盖玻片，先将一边与染液接触，然后慢慢将盖玻片放下，避免产生气泡，将多余染液用吸水纸吸干。
3. 将载玻片置于载物台上，先用低倍镜，然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
4. 染色约0.5h后再进行观察，注意死细胞数量是否增加。
5. 用0.05%吕氏美蓝染色液重复上述操作。
五、实验作业及实验报告
1. 绘图说明你所观察到的酵母形态特征。
2. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌?
3. 酵母水浸片制作时应注意什么?
4. 吕氏美蓝染色液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。
六、实验结束、检查试验仪器破损情况，清理实验室。
酵母菌形态PPT课件
美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是
无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈
代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝
色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而
对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或
还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝
土曲霉菌落
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青霉
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感谢您的阅读收藏，谢谢！
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观察霉菌的形态有多种方法：直接制片观 察法，载玻片培养观察法和玻璃纸培养观 察法。
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三、器材
菌种：曲霉（Aspergillussp.），青霉 （Penicillium sp.），根霉（Rhizopus sp.）， 毛霉（Mucor sp．） 试剂与仪器：乳酸石炭酸棉蓝染色液，20 ％甘油，查氏培养基平板，马铃薯培养基； 显微镜，载玻片，盖玻片，解剖针，尖头 镊子等。
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五、实验报告
1、结果
绘图说明你 所观察到的酵母菌的形态特征。
2、思考题
吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母 菌死细胞数量有何影响？试分析其原因？
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实验 放线菌的形态观察
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实验目的：
❖学习丝状微生物制片和染色技术； ❖观察和掌握典型放线菌的形态结构特征
水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。但
美蓝的浓度、作用时间等均有影响，应加注意。
酵母菌形态观察及活性鉴别
微生物及应用技术
酵母菌形态观察及活性鉴别
1.熟练掌握显微镜的使用技术，通过高倍镜观察了解酵母菌的形态结构。
2.掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色方法
酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核和细胞质有明显分化，个体比细菌大得多。
酵母菌的形态通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。
酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖;酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。
酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不
分离，就会形成藕节状的假菌丝。
普通光学镜下的酵母菌细胞电子显微镜下的酵
母菌细胞
1.菌种：酵母菌标准片、酵母菌菌悬液
2.染色液或试剂：革兰氏染色用碘液、0.1％氏碱性美蓝染色液
3.仪器和其他用品：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子等。
（一）酵母菌细胞的形态观察
1.酵母菌样片制作：取一洁净的载玻片，用滴管取一小滴革兰氏染色用碘液，将其滴于载玻片中央，然后滴加酵母菌悬液放入其中混匀，盖上盖玻片，小心将其一端与菌液接触，然后缓慢放下，避免产生气泡；
2.镜检：先用低倍镜观察，再用高倍镜观察。
观察时注意酵母菌细胞的形状和出芽情况，并绘制视野中看到的酵母菌形态结构图。
用同样的方法观察其他酵母菌标本片。
（二）死活酵母菌细胞的染色鉴别
1.涂片：视频
2. 染色：视频
3.镜检：视频
课程思政
生产中区分酵母菌活性的方法大家要多多练习，你会有许多不同感受与发现，科学的精神只有通过反复实验，不断的探索才能缔造，希望在微生物世界的探索者中有你们在座的身影。
谢谢观看。
实验七八酵母菌形态观察
四、操作步骤
1、装目镜测微尺 2、校正目镜测微尺 （1）放镜台测微尺 将镜台测微尺刻度面朝上放在 显微镜载物台上。 （2）先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分 移至视野中央，调节焦距，当清晰的看到镜台测微尺 的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微 尺的刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺，使两尺 在某一区域内两线完全重合，然后分别数出两重合线 之间镜台测微尺和目镜测微尺所占格数。用同样的方 法换成高倍镜和油镜进行校正，分别测出在高倍镜和 油镜下，两重合线之间两尺分别所占格数。
实验七
酵母菌形态观察与死活细胞的鉴定
实验目的
• 1、了解自然界的酵母菌及其形态结构； • 2、掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法； • 3、学会计算成活率。
实验器材
1、菌种：酵母菌 2、仪器或其它用具： 0.05％美蓝染液和0.1%美蓝染液， 载玻片，盖玻片，显微镜。
酵母菌的形状观察
1、不运动的单细胞真核微生物，通常比 常见细菌大几倍甚至十几倍。因此用高倍 镜观察即可。
三、美蓝染色步骤
1、在载玻片中央加一滴0．1％和0.05％吕氏碱性美蓝染液， 液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。 然后取酵母菌少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染 液均匀混合。 2、用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。盖片时应注 意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接 触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。 3、将制好的片子放置3分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后 换用高倍镜观察酵母菌的形态，同时可以根据是否染上颜色 来区别死、活细胞。 4、30分钟后再观察，注意死细胞数量是否增加。
目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板 上的圆形小玻片，其中央刻有精确的刻度， 有等分50小格或100小格两种，每5小格间 有一长线相隔。由于所用接目镜放大倍数 和接物镜放大倍数的不同，目镜测微尺每 小格所代表的实际长度也就不同，因此， 目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大 小，在使用前必须用镜台测微尺进行校正， 以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜 下该目镜测微尺每小格的相对值，然后才 可用来测量微生物的大小。
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别
南京林业大学实验报告实验四酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别（一）实验目的1、观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式；2、学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法；3、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。
（二）实验原理酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物。
无性繁殖主要是出芽生殖。
本实验通过用美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。
美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色。
三）实验器材1、菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）培养约2d的麦芽汁斜面培养物；2、染色液和试剂：0.1% 吕氏碱性美蓝染液；3、器材：载玻片、盖玻片、酒精灯、擦镜纸、显微镜等。
(四）实验方法（美蓝浸片）在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌苔放入上述液滴里，混合均匀；用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上；将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并根据颜色区别死活细胞。
（五）注意事项1、加染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察；2、盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。
酵母菌死活细胞区别图（10×40倍下观察）死细胞（呈蓝色或淡蓝色）活细胞（无色）（六）心得体会：在制片的时候，先将盖玻片一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上，并且要避免产生气泡。
在用美篮染色的时候，注意染色液和菌液不宜过多或过少，并且应该尽量等量而且要混匀。
实验6-酵母菌形态观察
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、目的要求：1、观察酵母菌的形态特征及出芽生殖。
2、掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法。
3、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。
二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，具有典型的细胞核，个体比细菌大得多。
酵母菌的形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。
酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖和产生掷孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。
酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就会形成藕节状的假菌丝。
美蓝是一种无毒性染料，氧化型为蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。
但美蓝的浓度、作用时间等均有影响，应加注意。
三、实验器材1、酿酒酵母或卡尔酵母（Saccharomyces calsbergensis）；2、0.05％、0.1％吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用的碘液；3、显微镜，载玻片，盖玻片等。
四、操作步骤1、美蓝浸片观察1）在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。
然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜面上培养48小时的酿酒酵母少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。
2）用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。
盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。
3）将制好的水浸片放置3分钟后镜检。
先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。
4）染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加。
实验四、放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别
精选ppt课件
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六、思考与讨论
1、镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生 菌丝。 2、在显微镜下，酵母菌与细菌有何异同？（从形 态、大小、繁殖方式分析比较）
下次实验项目：霉菌的形态观察
注意：带上镊子和解剖针
精选ppt课件
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基内菌丝
孢子丝
链 霉 菌
气生菌丝
精选ppt课件
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芽细胞
酿酒酵母
裂殖
精选ppt课件
精Hale Waihona Puke ppt课件2二、基本原理
1、放线菌形态
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳 性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝，紧贴培养基表面或深 入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌丝生长到一定阶段向 空中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。
插片法是将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片 后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生 长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片 上直接镜检，这种方法可观察到放线菌自然生长状态下特征， 而且便于观察不同生长期的形态。
假丝酵母
子囊 子囊孢子
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操作要点： • 宜用略暗光线观察。 • 先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。
精选ppt课件
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四、操作步骤
1、酵母菌形态观察和死活细胞鉴别
在载玻片上滴加0.05%吕氏碱性美蓝染色液
挑取少许酵
母菌，与染液混匀，盖上盖玻片
立刻镜检
放置
3min后镜检
放置10min后再次镜检，观察颜色变化(观
察酿酒酵母、裂殖酵母、假丝酵母）
实验四 放线菌的形态观察和酵母菌的形
态观察及死活细胞的鉴别
主 讲:徐尔尼 生命科学学院生物技术系
酵母菌死活细胞的鉴定
细
菌菌液放入染液里，混合均匀；
胞
鉴
（2）用镊子取一块盖玻片，先将
定
一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻
片放下。
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• 酵母菌死活细胞鉴定的基本程序
酵
母
2.镜检
菌 死 活
（1）将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态 根据颜色区别死活细胞；
细
（2）染色30min后再次观察，注意死活细胞数量的变化。
细
细胞较少；染色时间长，活细胞数量也会减少。
胞 鉴 定
（2）浓度低老龄细胞与活细胞不易区分，代谢微弱的细胞也能还原 美蓝，不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多；染色时 间短，活细胞还没从蓝变无色，观察到的活细胞数量会比预计的少。
— 1—
• 酵母菌死活细胞鉴定关键控制点
酵
母
菌
2.酵母菌死活细胞鉴定注意事项
死
（1）加染液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会
活 细 胞
溢出或出现大量气泡而影响观察； （2）盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。
鉴
定
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食品微生物检验技术
胞
鉴
定
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酵母菌死活细胞鉴定的关键控制点
1.酵母菌死活细胞鉴定的成败关键 2.酵母菌死活细胞鉴定的注意事项
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• 酵母菌死活细胞鉴定关键控制点
酵
母 菌 死
1.酵母菌死活细胞鉴定成败关键 （1）美蓝浓度高和染色时间过长都会增加酵母菌的死亡。美兰有氧
活
化性，浓度太高会使活菌很快致死，从而使视察到的死细胞较多，活
食品微生物检验技术
目录页
酵母菌死活细胞鉴定的原理、意义 酵母菌死活细胞鉴定的基本程序 酵母菌死活细胞鉴定关键控制点
酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微直接计数法
酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微镜直接计数法I 酵母菌的形态观察及死活鉴别一、目的要求观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
二、基本原理酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。
繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。
本实验通过用美蓝染色制成水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。
美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的。
用它采对酵母细胞进行染色。
活细胞内由于新陈代谢作用而具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母活细胞染色后无色。
而死细胞或代谢缓慢的老细胞因无还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。
三、器材酿酒酵母（Saccharomyces cerevissiae）；0.1％吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用的碘液；显微镜，载玻片，盖玻片等。
四、操作步骤（美蓝浸片观察）(1)在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。
然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜面上培养48小时的酿酒酵母少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。
(2)用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。
盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触；然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。
(3)将制好的水浸片放置3分钟后镜检。
先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。
五、实验报告(1) 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。
II 显微镜直接计数法一、目的要求1．明确显微镜计数的原理。
2．学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。
二、基本原理利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。
实验五实验六酵母菌形态观察显微计数法
1、在载玻片上各滴加一滴染色液和酵母菌培养液， 盖上盖玻片，（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻 片） 2、将制好的水浸片放置2分钟后镜检。先用低倍镜 观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽 情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细 胞。 3、染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加。 4、染色一小时后，再观察一下死细胞数是否增加。
酵母菌个体形态观察酵母菌个体形态观察用美兰浸片法观察啤酒酵母个体形态及死活用美兰浸片法观察啤酒酵母个体形态及死活细胞区别细胞区别1在载玻片上各滴加一滴染色液和酵母菌培养液盖上盖玻片勿使产生气泡且不要再移动盖玻2将制好的水浸片放置2分钟后镜检
实验五 实验六
酵母菌的形态观察及死活 细胞鉴定 微生物显微镜直接计数法
血球计数板是一块特制的厚型载玻 片，载玻片上有4条槽构成3个平台. 中间的平台较宽，其中间又被一短 横槽分隔成两半，每个半边上面各 有一个计数区。
血 球 计 数 板
计数区的刻度有两种： 一种是25×16：计数区分为16个大方格 （大方格用三线隔开），而每个大方×25：一个计数区分成25个 大方格（大方格之间用双线分开），而每 个大方格又分成16个小方格。
五、实验结果
1.酵母个体形态，芽体（绘图） 2.计算死活细胞的比率，说明吕氏碱性美 蓝染液浓度和作用时间对死活细胞数的 影响
3.计数结果
酵 母 个 体 形 态
六、思考题
1.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征 区别于一般的细菌？
2.某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌 存活率，请设计1-2种可行的检测方法。
每毫升菌液中的菌数 = A ——×25（16）×10×1000×B 5
A：5个中方格中的酵母菌数 B：稀释倍数
实验七 酵母菌的形态观察及微生物的显微直接计数法
美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝 对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较 强的还原能力，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有 还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞 则呈蓝色，借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。
（二）微生物显微镜直接计数
1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释到 10-2，每个小方格5－10个菌体为宜），以每小格的菌数可数 为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将酵母菌悬液摇匀，用滴管或毛细吸管吸取少许，由盖玻 片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计 数室，使计数室充满菌液。
实验六 酵母菌的形态观察及微生物的显 微直接计数法
一、实验目的
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学习并掌握形态观察及死活细胞的鉴别方法。
了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下微生
物直接计数的方法。 二、实验原理 1 酵母菌形态观察及死活细胞的鉴别 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比细菌大几十倍 甚至十几倍。大多数以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁 殖是通过接合产生子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片或水—碘液 水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式。
2、美蓝镜片的观察 1 ）在载玻片中央加一滴 0.1%吕氏碱性美蓝染色掖，然后按无菌操作
用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。
2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放 下使其盖在菌液上。
3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形
态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。 4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死活细胞数量是否增加。