大鼠膝关节软骨不同染色方法的差异
三种染色方法观察骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态学特征
三种染色方法观察骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态学特征
潘源城;张信照;陈顺有
【摘 要】背景:国内外的研究表明,多种染色法联合应用有利于探究骨与软骨组织疾病的形态学表现.目前对于多种染色法探究骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态学表现研究较少.目的:通过苏木精-伊红染色、番红O-固绿染色、Masson染色3种染色方法观察骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态表现.方法:SD大鼠40只由福建中医药大学实验动物中心提供,实验方案经福建中医药大学动物实验伦理委员会批准.随机将40只SD大鼠分为2组:对照组不做处理;模型组建立胫骨近端骨骺损伤模型.分别于造模后1,7,28 d拍摄X射线片和7,28 d行MRI扫描;于造模后1,7,14,28 d麻醉大鼠后取胫骨损伤区组织,行苏木精-伊红染色、番红O-固绿染色、Masson染色,观察术后不同时间点生长板损伤区的组织形态表现.结果与结论:①X射线片显示:造模后1 d,胫骨干骺端骨骺损伤,软骨膜周围生长板间隙增宽;第7天,骨骺损伤处骨膜反应明显;第28天,骨膜反应消失,干骺端与生长板间隙关系基本恢复正常;MRI显示:造模后第28天MRI T2WI示骺板模糊,并可见一黑色线条形低信号影,提示骨桥形成;②造模后第1天,3种染色均可显示入侵的血管,Masson染色更为清晰;第7天:苏木精-伊红染色较番红固绿染色及Masson染色显示了损伤区软骨细胞的形态变化更加明显;第14天,番红O-固绿染色生长板与骨桥对比鲜明,Masson染色可观察到骨桥内尚未骨化的纤维血管组织;第28天,苏木精-伊红染色软骨细胞的周期性形态变化较明显,番红O-固绿染色骨桥和生长板形态分明,可清晰的表现损伤区生长板的压缩性改变;③结果说明,3种染色方法的联合应用能够全面、客观地探究骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态学表现.
【期刊名称】《中国组织工程研究》 【年(卷),期】2019(023)023
【总页数】5页(P3649-3653)
独活寄生汤治疗大鼠膝骨关节炎的作用机制研究
·基础研究·
独活寄生汤治疗大鼠膝骨关节炎的作用机制研究
陈俊１，郑若曦２，叶锦霞３，郑春松２，张婷２，戴雨婷２，洪江从４，李民４，吴广文２
（１．福建中医药大学中西医结合学院，福建 福州 ３５０１２２；
２．福建中医药大学中西医结合研究院，福建 福州 ３５０１２２；
３．福建省中西医结合老年性疾病重点实验室，福建 福州 ３５０１２２；
４．福建中医药大学附属康复医院，福建 福州 ３５０００３）
摘 要 目的：探讨独活寄生汤治疗大鼠膝骨关节炎（ｋｎｅｅｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＫＯＡ）的作用机制。方法：从６６只大鼠中随机选取４８只，采用改良Ｈｕｌｔｈ法建立大鼠ＫＯＡ模型，随机选择３只正常大鼠和３只建模大鼠进行鉴定。证实建模成功后，将剩余的１５只正常大鼠纳入正常对照组，采用随机数字表将剩余的４５只ＫＯＡ模型大鼠分为ＫＯＡ模型组、独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组，每组１５只。正常对照组、ＫＯＡ模型组、独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠均按每天１０ｍＬ·ｋｇ－１分别以０．９％生理盐水、０．９％生理盐水、独活寄生汤（浓度为０．９３ｇ·ｍＬ－１）、盐酸氨基葡萄糖溶液（浓度为０．０１５ｇ·ｍＬ－１）灌胃，连续干预１２周。１２周后，切取大鼠双侧胫骨近端和股骨下端的软骨组织。采用实时定量ＰＣＲ检测大鼠胫骨近端软骨组织中ｍｉＲ－６７５－３ｐ、长链非编码ＲＮＡ（ｌｏｎｇｎｏｎｃｏｄｉｎｇＲＮＡ，ｌｎｃＲＮＡ）Ｈ１９及聚集蛋白聚糖（Ａｇｇｒｅｃａｎ）ｍＲＮＡ、Ⅱ型胶原蛋白（ＣｏｌｌａｇｅｎⅡ）ｍＲＮＡ的表达量，采用蛋白印迹法检测大鼠股骨远端软骨组织中Ａｇｇｒｅｃａｎ、ＣｏｌｌａｇｅｎⅡ的蛋白表达量。结果：①大鼠饲养结果。ＫＯＡ模型组大鼠因肺栓塞死亡２只，独活寄生汤治疗组大鼠因腹泻死亡１只，盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠因肺栓塞死亡１只。②大鼠胫骨近端软骨组织中ＫＯＡ相关基因的ＲＮＡ表达结果。正常对照组、ＫＯＡ模型组、独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠胫骨近端软骨组织中ｍｉＲ－６７５－３ｐ、ｌｎｃＲＮＡＨ１９、ＡｇｇｒｅｃａｎｍＲＮＡ、ＣｏｌｌａｇｅｎⅡｍＲＮＡ的表达量比较，组间差异均有统计学意义（Ｆ＝８３．０５０，Ｐ＝０．０００；Ｆ＝４３６．００３，Ｐ＝０．０００；Ｆ＝１２９．２１２，Ｐ＝０．０００；Ｆ＝１３５．８４４，Ｐ＝０．０００）。ＫＯＡ模型组、独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠胫骨近端软骨组织中ｍｉＲ－６７５－３ｐ、ＡｇｇｒｅｃａｎｍＲＮＡ、ＣｏｌｌａｇｅｎⅡｍＲＮＡ的表达量均低于正常对照组（ｍｉＲ－６７５－３ｐ：Ｐ＝０．０００；Ｐ＝０．００３；Ｐ＝０．００２；ＡｇｇｒｅｃａｎｍＲＮＡ：Ｐ＝０．０００；Ｐ＝０．０００；Ｐ＝０．０００；ＣｏｌｌａｇｅｎⅡｍＲＮＡ：Ｐ＝０．０００；Ｐ＝０．０００；Ｐ＝０．０００）；ＫＯＡ模型组大鼠胫骨近端软骨组织中ｌｎｃＲＮＡＨ１９的表达量低于正常对照组（Ｐ＝０．００２），独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠胫骨近端软骨组织中ｌｎｃＲＮＡＨ１９的表达量与正常对照组比较，差异无统计学意义（Ｐ＝０．０５８，Ｐ＝０．０６９）；独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠胫骨近端软骨组织中ｍｉＲ－６７５－３ｐ、ＡｇｇｒｅｃａｎｍＲＮＡ、ＣｏｌｌａｇｅｎⅡｍＲＮＡ的表达量均高于ＫＯＡ模型组（ｍｉＲ－６７５－３ｐ：Ｐ＝０．０００；Ｐ＝０．０００；ＡｇｇｒｅｃａｎｍＲＮＡ：Ｐ＝０．０００；Ｐ＝０．０００；ＣｏｌｌａｇｅｎⅡｍＲＮＡ：Ｐ＝０．０００；Ｐ＝０．０００）；独活寄生汤治疗组大鼠胫骨近端软骨组织中ｍｉＲ－６７５－３ｐ、ｌｎｃＲＮＡＨ１９、ＡｇｇｒｅｃａｎｍＲＮＡ、ＣｏｌｌａｇｅｎⅡｍＲＮＡ的表达量与盐酸氨基葡萄糖治疗组比较，组间差异均无统计学意义（Ｐ＝０．９２２；Ｐ＝０．７７８；Ｐ＝０．８５７；Ｐ＝０．９０４）。③大鼠股骨远端软骨组织中软骨组成相关基因的蛋白表达结果。正常对照组、ＫＯＡ模型组、独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组的大鼠股骨远端软骨组织中Ａｇｇｒｅｃａｎ和ＣｏｌｌａｇｅｎⅡ的蛋白表达量比较，组间差异均有统计学意义（Ｆ＝５８．１１８，Ｐ＝０．００２；Ｆ＝１６．６２５，Ｐ＝０．００１）。ＫＯＡ模型组、独活寄生汤治疗组大鼠股骨远端软骨组织中Ａｇｇｒｅｃａｎ的蛋白表达量均低于正常对照组（Ｐ＝０．００３；Ｐ＝０．００４），盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠股骨远端软骨组织中Ａｇｇｒｅｃａｎ的蛋白表达量与正常对照组相比，差异无统计学意义（Ｐ＝０．０７８），ＫＯＡ模型组、独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠股骨远端软骨组织中ＣｏｌｌａｇｅｎⅡ的蛋白表达量均低于正常对照组（Ｐ＝０．０００；Ｐ＝０．０２８；Ｐ＝０．０１８），独活寄生汤治疗组、盐酸氨基葡萄糖治疗组大鼠股骨远端软骨组织中Ａｇｇｒｅｃａｎ和ＣｏｌｌａｇｅｎⅡ的蛋白表达量均高于ＫＯＡ模型组（Ａｇｇｒｅｃａｎ：Ｐ＝０．０２５；Ｐ＝０．０３４；ＣｏｌｌａｇｅｎⅡ：Ｐ＝０．００３；Ｐ＝０．００４），独活寄生汤治疗组大鼠股骨远端软骨组织中Ａｇｇｒｅｃａｎ和ＣｏｌｌａｇｅｎⅡ的蛋白表达量与盐酸氨基葡萄糖治疗组比较，组间差异均无统计学意义（Ｐ＝０．９９９；Ｐ＝０．７７５）。结论：独活寄生汤治疗大鼠ＫＯＡ的作用机制，可能与其能够上调ｍｉＲ－６７５－３ｐ、ｌｎｃＲＮＡＨ１９的表达进而促进Ａｇｇｒｅｃａｎ、ＣｏｌｌａｇｅｎⅡ的表达有关。关键词 骨关节炎，膝；软骨组织；独活寄生汤；大鼠，Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ；ＲＮＡ；ＲＮＡ，长链非编码；聚集蛋白聚
大鼠膝关节结构-概述说明以及解释
大鼠膝关节结构-概述说明以及解释
1.引言
1.1 概述
大鼠是一种常见的实验动物，在医学研究中具有广泛的应用价值。膝关节作为大鼠身体重要的关节之一，在动物模型研究中也扮演着重要的角色。了解大鼠膝关节的结构和功能特点，对于深入研究相关疾病的发生机制和治疗方法具有重要的意义。
本文将从大鼠膝关节的解剖结构、功能特点以及相关疾病与治疗等方面进行探讨，旨在为读者提供一份全面且系统的了解大鼠膝关节的基础知识，为未来的研究和应用奠定基础。
1.2 文章结构
文章结构部分将主要介绍本文的组织形式和内容安排。本文将首先介绍大鼠膝关节的解剖结构，包括关节的各组成部分和其功能。随后将探讨大鼠膝关节的功能特点，包括其在生理活动中的作用和特殊性。最后，将介绍大鼠膝关节可能出现的疾病，以及常见的治疗方法。通过这些内容的阐述，读者将对大鼠膝关节的结构、功能和疾病有一个全面的了解。
1.3 目的
本文旨在深入探讨大鼠膝关节的结构和功能特点，探讨大鼠膝关节常见疾病及治疗方法，旨在为读者提供全面了解大鼠膝关节的知识。通过对大鼠膝关节的解剖学结构和生理功能的详细介绍，有助于研究人员更好地了解大鼠的生物学特征和行为习性，为相关研究提供参考和借鉴。同时，深入了解大鼠膝关节的疾病和治疗方法，有助于提高大鼠的健康水平，为大鼠模型的研究和应用提供支持和指导。希望本文能够为读者提供有益的知识和启发，引起对大鼠膝关节及相关领域的更多关注和研究。
2.正文
2.1 大鼠膝关节解剖结构
大鼠膝关节是由多个骨骼、软骨、肌肉、韧带和滑囊等组成的复杂结构。在解剖上，大鼠膝关节由股骨、胫骨和髌骨组成。股骨上端的半月板与髌骨下端相互配合，形成能够顺畅运动的关节面。胫骨上端与股骨形成髌股骨关节，髌骨通过髌韧带与胫骨连接，起到增加稳定性的作用。
在大鼠膝关节中，韧带的作用尤为重要。关节囊内有前、后交叉韧带，它们起到维持骨头位置、稳定关节和限制关节活动范围的作用。此外，滑囊的存在也对膝关节的正常功能发挥起到重要作用，它在关节内活动时起到减少摩擦和吸收冲击的作用。
维药买朱尼对骨性关节炎Caspase-3的调节作用
６２ 中国民族医药杂志 ２００７年１２月第１２期
维药买朱尼对骨性关节炎Ｃａｓｐａｓｅ一３的调节作用
上海中医药大学龙华医院（２ｏ０ｏ３２） 孟庆才 方锐 新疆医科大学附属中医医院（８３０００【｝） 吕 刚
摘要：探讨维药买朱尼对骨性关节炎大鼠模型膝关节软骨的Ｃａｓｐａｓｅ一３表达的调节作用。将３０只雄性ｓＤ大鼠造模后．
随机分为正常组，０Ａ模型组，维药买朱尼组。给药４天后，免疫组化法（ＳＰ）检测关节软骨Ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白表达，ＲＴ—ＰＣＲ法
检测Ｃａｓｐａｓｅ一３ＲＮＡ的表达强度。结果：两种方法均显示正常组的Ｃａｓｐａｓｅ一３弱表达，模型组的Ｃａｓｌｃ．ａｓｅ一３强表达。维药
买朱尼可以下调Ｃａｓｐａｓｅ～３表达，与模型组相比有非常显著差异（Ｐ＜０，０１）。结论：维药买朱尼能够下调膝骨性关节炎
Ｃａｓｐａｓｅ一３的表达。
关键词：骨性关节炎；Ｃａｓｐａｓｅ一３；维药：买朱尼
中图分类号：Ｒ２９１．５文献标识码：Ｂ文章编号：１００６—６８１０（２００７）１２—００６２—０３
骨关节炎（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ，简称ＯＡ）是以慢性关节软骨变
性和丢失，及骨赘形成为特征的关节疾病，可以继发于创伤
性关节炎、畸形性关节炎等影响关节软骨或造成关节负重
不平衡的其他骨关节疾病，多见于中老年。
维吾尔族医学简称维医。有悠久的历史和独特完整的
理论体系。维药买朱尼属维药二级干热、为蜜膏制剂。临
床上治疗关节痹痛取得良好的疗效。本研究拟从关节软骨
凋亡的角度探讨维药买朱尼对骨性关节炎的作用机理。 １材料与方法
１．１实验材料
１．１．１实验动物：清洁级雄性１月龄ＳＤ（Ｓｐｒａｇａ￣ｅ—Ｄａｗｌｅｙ）
大鼠３０只，体重：１００±１０ｇ．由上海中医药大学动物中心提
供。
１．１．２维药买朱尼药物组成ｉ巴旦杏仁、Ｑ／／ｈｏｚａ、阿月浑
子、肉豆蔻、胡椒、荜茇、姜、桂皮、诃子皮、毛诃子、余甘子、
Ｘｅｔｉｒｅｎｊｉｎｄｉ等各１５ｇ，蜂蜜两倍量。由新疆自治区中医院提
骨髓间充质干细胞通过抑制破骨细胞相关因子改善膝关节骨性关节炎
基金项目：青海省科技厅自然科学基金项目（２０１８－ＺＪ－７６３） 作者简介：冯唱，男，１９９１－１１生，在读硕士，Ｅｍａｉｌ：ｆｃ１５８３７００６０６０＠１６３．ｃｏｍ 收稿日期：２０２１－０６－０８骨髓间充质干细胞通过抑制破骨细胞相关因子改善膝关节骨性关节炎
冯 唱，李克文，扎西达娃，张斌斌，季健坤，赵宏涛，陆 川，杨森林（青海大学附属医院关节外科，西宁
８１００００；通讯作者，Ｅｍａｉｌ：ＱＤＦＹｋｗｌ＠１２６．ｃｏｍ）
摘要： 目的 探讨骨髓间充质干细胞是否通过抑制破骨相关因子改善膝关节骨性关节炎。 方法 将４０只健康ＳＰＦ级ＳＤ
大鼠随机分为空白组、模型组、甲氨蝶呤组和骨髓间充质干细胞组，每组８只，剩余８只用于骨髓间充质干细胞的分离。除空
白组外，其余组采用木瓜蛋白酶关节腔注射建立膝关节骨性关节炎大鼠模型。造模成功后第２天起空白组和模型组大鼠膝
关节腔注射生理盐水０３ｍｌ；甲氨蝶呤组大鼠腹腔注射甲氨蝶呤（０５ｍｇ／ｋｇ）；骨髓间充质干细胞组大鼠膝关节腔内一次性注
射骨髓间充质干细胞０３ｍｌ，同时每周１次膝关节腔内注射生理盐水０３ｍｌ，每周１次，共４次。４次干预结束后各组大鼠进
行关节指数（ＡＩ）评分；苏木素－伊红（ＨＥ）染色观察软骨组织病理学变化；酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测血清ＲＡＮＫＬ、ＯＰＧ、
ＣＸＣＬ１０含量；实时荧光定量（ｑＲＴＰＣＲ）检测软骨组织ＲＡＮＫＬ、ＯＰＧ、ＴＲＡＦ６、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＲ３ｍＲＮＡ表达；蛋白质印迹法
（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）检测软骨组织ＲＡＮＫＬ、ＯＰＧ、ＴＲＡＦ６、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＲ３蛋白表达。 结果 与空白组比较，模型组大鼠ＡＩ评分，
血清ＲＡＮＫＬ、ＯＰＧ、ＣＸＣＬ１０含量，软骨组织ＲＡＮＫＬ、ＯＰＧ、ＴＲＡＦ６、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＲ３ｍＲＮＡ和蛋白表达明显升高（Ｐ＜００５）。
与模型组比较，甲氨蝶呤组大鼠ＡＩ评分、血清ＯＰＧ、ＣＸＣＬ１０含量及软骨组织ＴＲＡＦ６、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＲ３蛋白表达明显降低（Ｐ＜
SD大鼠甲苯胺蓝染色步骤
SD大鼠甲苯胺蓝染色步骤
1、甲苯胺蓝染色法鉴定软骨细胞表型
ⅱ代软骨细胞以2x105／ml的密度接种到铺有多聚赖氨酸盖玻片的24孔细胞培养板中，与原代培养条件相同，制作细胞爬片，常规培养48h后行甲苯胺蓝染色。具体操作步骤如下：
(1)倾去培养液，pbs充份冲洗3次，重新加入10％的中性甲醛常温下紧固30min。(2)倾去10％的中性甲醛，pbs充份冲洗3次，重新加入70％的乙醇紧固30min除去四价铵离子，以免影响染色。
(3)倾去70％的乙醇溶液，pbs充分漂洗3次，晾干，加入甲苯胺蓝乙醇液(甲苯胺蓝0.2g溶于30％乙醇100m1)染色_20min。
(4)pbs充份冲洗3次，快速用无水乙醇再冲洗1次。
(5)取出爬片，干燥后中性树脂封片，电子显微镜下观察、摄片。2、型胶原免疫细胞化染色法鉴定软骨细胞表型
ⅱ代软骨细胞以2×105／ml的密度注射至砌存有多聚赖氨酸盖玻片的24孔细胞培养板中，与原代培育条件相同，制作细胞爬片，常规培育48h后行免疫细胞化学法染色。实验过程严苛遵从免疫细胞化学染色试剂盒说明书展开操作方式，pbs缓冲液替代一抗炎做为阴性对照组。具体内容操作步骤如下：
(1)倾去培养液，冰冷的pbs漂洗3x3min，加入4%多聚甲醛1ml室温固定15min。(2)pbs清洗标本3x3min，每张标本滴加1滴新鲜配制的3％h202，室温下孵育10min。(3)pbs清洗标本3x3min，每张标本滴加穿膜液0.5m](0.1％timton+o.1mglycine)冰上孵育30min。
(4)pbs冲洗标本3x3min，每张标本碱液5mg／ml的动物非免疫系统半封闭血清(bsa)0.5ml，室温下半封闭1h。
(5)滴加1：150稀释的兔抗大鼠ii型胶原多克隆抗体50ul于封口膜上，使标本与一抗充分接触，置于湿盒中4℃过夜。pbs缓冲液代替一抗作为阴性对照组。(6)pbs清洗标本3x3min，加入二抗工作液，37℃孵育20min。(7)pbs清洗标本3x3min，每张标本滴加1滴sabc试剂，37℃孵育20min后pbs(ph7．2~7．6)清洗标本4x5min。
大运动量跑步对大鼠膝关节软骨蛋白多糖的影响
大运动量跑步对大鼠膝关节软骨蛋白
多糖的影响
李凯王少伟侯志超陈晋斌卫小春・１０８１・
・骨科基础研究・
【摘要】目的观察平板跑步运动对大鼠关节软骨蛋白多糖的影响。方法将Ｗｉｓｔａｒ大鼠１０只随机分为对照组和跑步组。对照组笼养，跑步组每天以２０ｍ／ｒａｉｎ速度，连续跑步１０００ｍ，每天１次。连续训练４５ｄ后，处死大鼠，切取双膝关节，固定，脱钙，包埋，沿矢状面整体切片，苏木素咿
红（ＨＥ）及番红Ｏ染色。观察股骨内侧髁负重区和胫骨内侧平台负重区软骨形态结构和基质染色差异，利用图像分析系统，测量胫骨平台软骨厚度，并对软骨各层染色深浅进行吸光度定量。结果对照组软骨结构正常，跑步组软骨表面完整，胫骨内侧平台负重区非钙化层厚度较对照组显著下降（Ｐ＜０．０５）；番红Ｏ染色，负重区软骨非钙化层平均吸光度较对照组明显下降（Ｐ＜０．０５），其中表层下降６６％（Ｐ＜Ｏ．０１），中层下降５６％（Ｐ＜０．０１），深层与对照组差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），而钙化层吸光度较对照组上升３８％（Ｐ＜０．０５）。结论大鼠连续平板运动４５ｄ后，膝关节负重区软骨虽然结构完整，但已经出现退行性改变。【关键词】膝；关节软骨；跑步运动；蛋白多糖
Ａｒｔｉｃｕｌａｒｃａｒｔｉｌａｇｅｇｌｙ蛐ｏｇｌｙｃａｎ
ｉｎｔｈｅｒａｔｋｎｅｅｊｏｉｎｔ羽橱ｓｔｒｅｎｕｏｕｓｎｍｎｉｎｇｅｘｅｒｃｉｓｅ廿Ｋａｉ，ＷＡＮＧＳｈａｏ．ｗｅｉ，ＨＯＵＺｈｉ—ｃｈａｏ，ＣＨＥＮＪｉｎ—ｂｉｎ，髓，Ｘｉａｏ—ｃｈｕｎ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｎｈｏｐａｅｄｉｃｓ，ｔｈｅＳｅｃｏｎｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈａｎｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｔａｉｙｕａｎ０３０００１．ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＷＥＩＸｉａｏ—ｃｈｕｎ。Ｅｍａｉｌ：ｗｅｉｘｉａｏｃｈｕｎ０６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｒｋｃｎ【Ａｂｓｔｎｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅｓｔｒｅｎｕｏｕｓｒｕｎｎｉｎｇｔｒａｉｎｉｎｇｐｒｏｇｒａｍｏｎｔｈｅｋｎｅｅｉｏｉｎｔａｒｔｉｃｕｌａｒｃａｒｔｉｌａｇｅ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｔｔＩｌｅａｇｅｏｆ１６ｗｅｅｋｓ。５ｍａｌｅＷｉｓｔａｒｒａｔｓｓｔａｒｔｅｄｒｕｎｎｉｎｇｏｎａｈｏｒｉｚｏｎｔａｌｔｒｅａｄｍｉｌｌ．Ｔｈｅｒｅａｆｔｅｒ．ｔｈｅｒａｔｓｗｅｒｅｔｒａｉｎｅｄｆｏｒ４５ｄａｙｓｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌｙ．Ｔｈｅｒａｔｓｒａｎｌｋｍ／ｄａｙａｔｔｈｅｓｐｅｅｄｏｆ２０ｍ／ｒａｉｎ．Ｆｉｖｅｍａｔｃｈｅｄｍａｌｅｒａｔｓｓｅｒｖｅｄａｓｃｏｎｔｒｏｌｓ．Ｋｎｅｅｓｏｆｔｈｅｒａｔｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｗｈｏｌｅ．ｍｏｕｎｔｅｄｓｅｃｔｉｏｎ．ＨｅｍａｔｏｘｙｌｉｎａｎｄＥｏｓｉｎ（ＨＥ）ｓｔａｉｎ．ｓａｆｒａｎｉｎ０ｓｔａｉｎ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｃａｒｔｉｌａｇｅｓｔｉｒ－ｆａｐ＿Ｍｅｓｗｅｒｅｉｎｔａｃｔａｆｔｅｒｔｈｅｒｕｎｎｉｎｇｅｘｅｒｃｉｓｅ．Ｔｈｅｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｗａｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｂｙａｎａｖｅｒ－ａｇｅｏｆ６６％ｉｎｔｈｅｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌｚｏｎｅ．５６％ｏｎｔｈｅｍｉｄｇｅｚｏｎｅ．ｂｕｔｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅＷａｓｆｏｕｎｄｉｎｔｈｅｄｅ印ｚｏｎｅ．ｎｅｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ３８％ｉｎｔｈｅｃａｌｃｉｆｉｅｄｃａｒｔｉｌａｇｅ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＳｔｒｅｎｕｏｕｓｒｕｎｎｉｎｇｉｎｄｕｃｅｄｍａｒｋｅｄｄｅｃｒｅａｓｅｏｆｐｍｔｅｏｇｌｙｃａｎｉｎｔｈｅｕｎｅａｌｃｉｆｉｅｄｃａｒｔｉｌａｇｅ．ｂｕｔｉｎｄｕｃｅｄｎｏ０８一ｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓｉｎｔｈｉｓｒａｔｓｔｒｅｎｕｏｕｓｍｎｎｉｎｇｍｏｄｅｌ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｋｎｅｅ；Ａｒｔｉｃｕｌａｒｃａｒｔｉｌａｇｅ；Ｒｕｎｎｉｎｇｅｘｅｒｃｉｓｅ；Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ
基于RAP1信号通路探讨右归丸延缓膝骨关节炎的软骨退变
基于RAP1信号通路探讨右归丸延缓膝骨关节炎的软骨退变
范元赫;杨永菊;马贤德;张宇;关雪峰
【期刊名称】《中华中医药学刊》
【年(卷),期】2024(42)4
【摘 要】目的通过右归丸治疗膝骨关节炎(KOA)模型大鼠,观察大鼠关节软骨形态及检测右归丸对RAP1信号通路表达和大鼠血清中的炎性因子表达,探讨右归丸对RAP1信号通路的表达及防治KOA的作用机制,为治疗提供理论基础。方法72只SPF级SD大鼠(雌雄各半)随机数字表法分为假手术组12只和造模组60只。造模组采用改良Hulth法建立膝关节OA模型,假手术组接受假手术。将造模成功的大鼠分为模型组(n=11)、右归丸低剂量组(n=12)、右归丸中剂量组(n=12)、右归丸高剂量组(n=12)及塞来昔布组(n=12)。给药阶段模型组、假手术组给予0.9%氯化钠溶液;右归丸低剂量组为等效浓度的1/2为0.5 g/d、右归丸中剂量组等效浓度为1 g/d、右归丸高剂量组为等效浓度2倍为2 g/d,塞来昔布组配置成悬浮(等效浓度为0.0072 g/d)。驱赶7周后检测并比较各组大鼠软骨病理,血清TNF-α、IL-1β和IL-18含量,以及大鼠软骨组织中RAP1、RAF、MEK1/2、ERK1/2、CREB、MMP3、MMP13、ADAMTS、C-fos、C-myc和C-Jun的表达水平。结果各组大鼠软骨病理检测结果显示:假手术组大鼠软骨组织未见异常,模型组大鼠关节软骨部分区域出现明显缺损,右归丸低剂量组大鼠关节软骨表面磨损较模型组有所减轻,而中、高剂量组及塞来昔布组大鼠软骨表面可见侵蚀现象明显改善。右归丸对KOA大鼠血清中的IL-1β、TNF-α、IL-18含量与模型组相比,右归丸高、中、低剂量组和塞来昔布组在大鼠血清中表达显著降低,差异具有统计学意义。与软骨组织中RAP1-RAF-MEKl/2-ERKl/2-CREB信号通路活化水平检测结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织中RAP1、RAF、MEK1/2、ERK1/2、CREB、MMP3、MMP13、ADAMTS、C-fos、C-myc和C-Jun的表达水平均显著升高,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结果提示,在KOA发生时,RAP1-RAF-MEKl/2-ERKl/2-CREB信号转导通路激活,介导软骨组织中炎症反应及细胞凋亡的发生,这与以往研究结果一致。右归丸干预后,软骨组织中RAP1、RAF、MEK1/2、ERK1/2、CREB、MMP3、MMP13、ADAMTS、C-fos、C-myc和C-Jun蛋白表达水平均显著降低,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论右归丸能够抑制KOA大鼠软骨组织中RAP1-RAF-MEKl/2-ERKl/2-CREB信号通路的活化,降低炎性因子表达,从而延缓软骨退变。
不同强度的主动运动对大鼠膝关节软骨的影响
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＲｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊａｎ．２０１２，Ｖｏ１．２７，Ｎｏ．ｉ
・基础研究・
不同强度的主动运动对大鼠膝关节软骨的影响
梁军 钱洁 王惠芳 王予彬
摘要
目的：研究不同强度的主动运动对大鼠膝关节软骨的作用。
方法：８周龄雄性ｓＤ大鼠４０只，随机分为对照组、低强度运动组、中强度运动组、高强度运动组。对照组自由活动，
实验组每天按照不同的运动强度进行跑步训练。８周后处死大鼠，切取膝关节关节软骨，以苏木素伊红（ＨＥ）及甲苯
胺蓝染色、透射电镜等观察不同强度的主动运动对关节软骨形态结构、细胞代谢的影响。
结果：运动８周后，低、中强度运动组软骨表面完整，软骨层的厚度较对照组显著增厚（Ｐ＜Ｏ．０５）；高强度运动组软骨
表面部分缺损，表面粗糙，软骨层的厚度较对照组显著降低（Ｐ＜０．０５）。ＨＥ染色显示低、中强度运动组软骨负重区
蛋白多糖分泌较对照组明显增加，而高强度运动组负重区蛋白多糖分泌较对照组明显减少。透射电镜显示：低、中
强度组软骨表面可见明显的圆形突起，膜样胶原纤维连续，而高强度运动组软骨表面圆形突起减少，部分表层胶原
纤维暴露。 结论：不同强度的主动运动对大鼠膝关节软骨具有不同的作用。低、中强度的主动运动可以增加软骨表面厚度、明
显改善关节软骨的代谢，尤以中等强度的作用更明显；高强度的主动运动可能对关节软骨产生破坏效应。
关键词 大鼠；膝关节；关节软骨；主动运动
中图分类号：￥８５４．５，Ｒ４９３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１—１２４２（２０１２）一０１—０００８—０４
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｃｔｉｖｅ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ－ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｏｎ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｏｆ ｋｎｅｅ ｉｎ ｒａｔｓ／ＬＩＡＮＧ Ｊｕｎ，ＱＩＡＮ
Ｊｉｅ，ＷＡＮＧ Ｈｕｉｆａｎｇ，ｅｔ ａ１．／／Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１２，２７（１）：８＿一ｌｌ
不同方法提取SD大鼠膝关节软骨组织的总RNA.
中国组织工程研究 第18卷 第51期 2014–12–10出版 Chinese Journal of Tissue Engineering Research December 10, 2014 Vol.18, No.51
ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH
孙志涛，男，1978年生，安徽省淮南市人，汉族，2013年广州中医药大学毕业，博士，主要从事脊柱、髋膝关节退行性变研究。 doi:10.3969/j.issn.2095-4344. 2014.51.001 [] 中图分类号:R318 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2014)51-08201-05 稿件接受：2014-10-29 Sun Zhi-tao, M.D., Shenzhen Hospital of Traditional Chinese Medicine, Shenzhen 518000, Guangdong Province, China Accepted: 2014-10-29 不同方法提取SD大鼠膝关节软骨组织的总RNA 孙志涛1，牛 维2，何升华1，林定坤2 (1深圳市中医院，广东省深圳市 518000；2广东省中医院骨三科，广东省广州市 510120) 文章亮点： 1 目前文献报道的软骨RNA提取有多钟方法，常见的有Rneasy Lipid Tissue Kit、RNAout试剂盒和经典Trizol法，国内文献报道多为经典Trizol法。作者在实验中发现该方法提取的RNA并不能满足后续实验的需要，为了解决这个瓶颈，作者尝试了各种方法。 2 比较目前文献报道的常见3种不同方法提取的软骨组织RNA，结果显示Rneasy Lipid Tissue Kit法获得的总RNA纯度高、完整性和稳定性好，并能成功反转录合成双链cDNA。 关键词： 组织构建；软骨组织构建；软骨；RNA提取；大鼠；国家自然科学基金 主题词： 软骨；RNA；大鼠 基金资助： 国家自然科学基金项目(81173285) 摘要 背景：目前文献报道的软骨RNA提取有多钟方法，国内文献报道多为经典Trizol法，在实验中发现该方法提取的RNA并不能满足后续实验的需要。 目的：探索不同方法提取SD大鼠软骨组织总RNA的区别。 方法：选取3月龄SD大鼠9只，分别采用Rneasy Lipid Tissue Kit、RNAout试剂盒和经典Trizol法对软骨组织进行总RNA提取，并通过RNA琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性，以探寻软骨总RNA最佳提取方案。 结果与结论：Trizol法提取的RNA A260/A280值为1.58，说明纯度不高；RNAout法提取的RNA，由于软骨含有大量的蛋白多糖和胶原，也不能满足后续实验的需要；RNeasy® Mini Kit法和肝(Trizol)法提取RNA的A260/A280值分别为2.00和1.98，说明提取的总RNA或核酸的纯度高。RNA的完整性电泳结果显示，RNeasy® Mini Kit法、RNAout法和肝(Trizol)法可见28 s、18 s及5 s条带，而Trizol法未见任何条带，RNAout法28 s和18 s条带不清楚。结果提示Rneasy Lipid Tissue Kit法获得的总RNA纯度高、完整性和稳定性好，并能成功反转录合成双链cDNA，而RNAout试剂盒和经典Trizol法获得的总RNA不能满足后续实验需要。 孙志涛，牛维，何升华，林定坤.不同方法提取SD大鼠膝关节软骨组织的总RNA [J].中国组织工程研究，2014，18(51):8201-8205. Different methods to extract total RNA from the knee cartilage tissue of Sprague-Dawley rats Sun Zhi-tao1, Niu Wei2, He Sheng-hua1, Lin Ding-kun2 (1Shenzhen Hospital of Traditional Chinese Medicine, Shenzhen 518000, Guangdong Province, China; 2Third Department of Orthopedics, Guangdong Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510120, Guangdong Province, China) Abstract BACKGROUND: Currently, there are many methods to extract cartilage RNA reported in the literature, and classic Trizol method has been mostly reported in China. However, it is discovered that RNA extracted by the Trizol method cannot meet the needs of the follow-up experiments. OBJECTIVE: To explore the difference of different methods to extract total RNA from the cartilage tissues of Sprague-Dawley rats. METHODS: Nine Sprague-Dawley rats of 3 months old were selected to extract total RNA respectively by Rneasy Lipid Tissue Kit, RNAout kit and classic Trizol method. Agarose gel electrophoresis was used to detect RNA integrity in order to explore the best extraction scheme of total RNA. RESULTS AND CONCLUSION: When Trizol method was used to extract RNA, the A260/A280 value was 1.58, indicating that the purity was not high. Due to a large number of proteoglycan and collagen in the cartilage, RNA extracted using RNAout method cannot meet the needs of the follow-up study. When RNeasy® Mini Kit and liver method (Trizol) were used to extract RNA, the A260/A280 values were 2.00 and 1.98, respectively, indicating that the extracted total RNA or nucleic acid had high purity. The RNA electrophoresis results showed that using RNeasy ®Mini Kit, RNAout and liver method (Trizol), 18 s, 28 s and 5 s stripes were visible; but there was no stripe using Trizol method. For RNAout method, 28 s and 18 s stripes were unclear. These results show that the 孙志涛，等. 不同方法提取SD大鼠膝关节软骨组织的总RNA