【微生物检验】链球菌属及其检验
球菌
球菌（二）一、链球菌属（Streptococcus）链球菌属是一大类G＋、排列呈双或长短不一的链状球菌。
1. 分类1)溶血现象分类链球菌在血琼脂平板培养基上生长繁殖后，按产生溶血与否及其溶血现象分为3类：①甲(α)型溶血链球菌；②乙(β)型溶血链球菌；③丙(γ)型链球菌。
2）抗原结构分类：据链球菌细胞壁中抗原结构（C多糖抗原）不同,运用血清学方法分成A～V 20群。
对人致病的链球菌菌株，90%左右属A群，其他群少见。
同一群的链球菌又分若干型。
A群根据其M抗原不同，可分成约100个型。
3）生化反应分类：对一些不具有群特异性的链球菌（如肺炎链球菌和草绿色链球菌等），需用生化反应、药物敏感和对氧的需要分类。
对氧的需要分类分为：需氧、厌氧和微需氧链球菌。
2. 医学常见链球菌二、A群（化脓性）链球菌：本属细菌的代表种，主要成员有化脓性链球菌或β-溶血性链球菌，致病性强，对人致病的链球菌有90%属此种。
1. 形态与染色：球形或椭圆形，链状排列，长短不一，革兰染色阳性（G＋），无芽胞，无鞭毛，透明质酸的荚膜。
2. 培养特性：（1）营养要求高：血平板或含血清培养基；（2）液体培养为沉淀生长；（3）血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同菌株溶血不一，多数有透明溶血环（β溶血现象）。
3. 生化反应：（1）分解葡萄糖，产酸不产气。
（2）分解葡萄糖。
（3）不分解菊糖，不被胆汁溶解（可鉴别甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌）。
（4）链球菌不产生触酶，与葡萄球菌不同。
4.抗原结构：（1）多糖抗原（C抗原）：为群特异性抗原，细胞壁的多糖组分，可用稀盐酸等提取。
为链球菌的分群依据。
（2）表面抗原或称蛋白质抗原：壁外的菌毛样结构含M蛋白，位于C抗原外层，具型特异性，有近100种血清型。
M抗原与致病性有关。
（3）P抗原或称核蛋白抗原：无特异性。
5. 抵抗力：一般链球菌均可在60℃被杀死，对常用消毒剂敏感。
在干燥尘埃中生存数月。
乙型链球菌对青霉素、红霉素，四环素、杆菌肽和磺胺药都很敏感。
(完整版)猪链球菌的检测和鉴定技术
ATCC43765
+ + + + + + + + + + 4641427 （92%）
HA9801
+ + + + + + + + + + + 4651427 (80%)
ATCC35246
+ + + + + + + + + 0461607 (99.9%)
32210 化脓链球菌
0161415 (99.9%)
读数仪
比浊仪 电子加样枪
计算机 打印机
19
试条组成
试条种类：
24h常规鉴定试条
Ref.32400，ID32 E Ref.32100，ID32 GN Ref.32500，ID32 Staph Ref.32200，ID32 C
4h快速鉴定试条
Ref.32700，rapid ID32 E Ref.32300，rapid ID32 A Ref.32600，rapid ID32 Strep
粪肠球菌
7143711 （98.7%）
猪链球菌的API鉴定结果
TRE（海藻糖）、RAF（棉子糖）等几个的试验与API 菌种库有些不符，但 都属于SS2型或1型，数值分类
相对于双歧分类的优点
ATCC43765
HA9801
ATCC35246
32210 化脓链球菌
粪肠球菌
编码 4641427（92%） 4651427(80%) 0461607(99.9%)0161415(99.9%)7143711（98.7%）
链球菌属
需氧或兼性厌氧。营养要求较高，在含血液、血清、葡萄糖的培养基中才能生长。最适生长温度为35℃，最 适pH为7.4~7.6。在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状沉淀。在血琼脂平板上形成灰白色、表面光滑、凸起、边 缘整齐、直径0.5~0. 75 mm的小菌落。不同菌株有不同的溶血现象。
链球菌不产生触酶，可与葡萄球菌相区别。链球菌不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两个特性常被用来鉴别甲 型溶血性链球菌和肺炎链球菌。
实验室检查
病原检查
血清学实验
1．标本采集根据不同的疾病采取不同标本。如化脓性感染的脓汁、咽喉及鼻腔等病灶的棉拭、败血症取血液、 免疫学检查取血液等。
2．病原检查直接涂片染色镜检，发现有典型的革兰阳性球菌链状排列可做出初步诊断。
3．分离培养与鉴定脓汁或棉拭直接接种于血琼脂平板上。血液标本应先在肉汤中增菌后再做分离培养。细菌 鉴定主要根据菌落形态、溶血现象、染色镜检、生化反应等进行。
(3)致热外毒素(pyrogenic exotoxin)又称红疹毒素或猩红热毒素，是人类猩红热的主要毒性物质，致热外 毒素抗原性强，具有超抗原作用，对兔有致热性和致死性。
(4)侵袭性酶类 A群链球菌可产生多种侵袭性酶，均是扩散因子，主要有三种。
肺炎链球菌属链球菌属。广泛分布于自然界，经常寄居于正常人的鼻咽腔中，多数不致病，少数引起大叶性 肺炎等疾病。
2．致病物质本菌的致病物质主要是荚膜荚膜有抗吞噬作用，失去荚膜，细菌就失去致病力。此外，肺炎链球 菌溶血素O、脂磷壁酸、神经氨酸酶是肺炎链球菌较重要的致病物质。
3．所致疾病该菌寄生在正常人的口腔及鼻咽腔，一般不致病，当机体免疫力下降时才致病。肺炎链球菌主要 引起大叶性肺炎，其次是支气管炎肺炎后可继发脓胸、胸膜炎，也可引起乳突炎、中耳炎、败血症和脑膜炎 等。
链球菌的分离鉴定及药敏试验
链球菌的分离鉴定及药敏试验摘要为分离和鉴定疑似链球菌感染病料，该试验采用革兰氏阳性菌选择性培养基进行分离培养，并进行生化试验鉴定及药敏试验。
结果表明：6份病料中分离出6株链球菌菌株，根据生化试验鉴定表推断出，有4株为C群，1株为D 群，1株为E群。
药敏试验结果表明，先锋必和青霉素对链球菌有较好的抑制作用，此结果为链球菌病的研究和防治提供一定的理论依据。
关键词链球菌；分离鉴定；药敏试验链球菌（Streptococcus）广泛存在于自然界，水、尘埃、动物体表、消化道、呼吸道、泌尿生殖道黏膜、乳汁等都有存在，大多数不致病。
医学上重要的链球菌主要有化脓性链球菌、肺炎链球菌、无乳链球菌、羊链球菌等，有些可致人和动物各种化脓性疾病、肺炎、乳腺炎、败血症等。
近段时间，楚雄州部分羊场发生羊急性死亡病例，该试验通过对部分羊场送检的7份病料进行分离鉴定与药敏试验，了解各地羊发病的原因，从而为该病的预防和用药提供一定的理论基础。
1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 病料来源。
各地送检的疑似链球菌病引起的病变组织，共7份，保存于4 ℃冰箱。
1.1.2 试验试剂。
牛心浸液、兔子全血、牛肉浸膏、琼脂粉、血清、蛋白胨、磷酸二氢钠、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蒸馏水、乙醇、氢氧化钠、盐酸、磷酸氢二钾、酵母金粉、胰胨、L-精氨酸盐盐酸、柠檬酸铁、0.5%酸性复红、精氨酸、马尿酸钠、七叶苷、淀粉酶、甘露醇、乳糖、棉子糖、山梨醇、菊糖、水杨苷、海藻糖、伯胶糖等，均来自于传染病实验室。
1.1.3 培养基。
叠氮钠血琼脂、营养琼脂、牛心浸液培养基、马丁肉汤培养基、6.5% NaCl生长培养基、血清糖发酵培养基、精氨酸培养基、3-羟基丁酮培养基、马尿酸盐培养基、七叶苷培养基、葡萄糖培养基、蔗糖培养基、海藻糖培养基等培养基均按照陈天寿《微生物培养基的制造与应用》[1]中的方法配制。
1.1.4 药敏片。
青霉素、红霉素、万古霉素、卡那霉素、氟哌酸、先锋必、复方新诺明。
链球菌属
兰氏分群法
• 兰氏(Lancefield)用温热的稀盐酸浸出C抗原，与特异性血清作沉淀 反应，将链球菌分为20个血清群(A-V, 缺I和J)。同群链球菌间，因 表面蛋白质抗原不同，又分不同型。
乳胶凝集 实验
以乳胶颗粒作为载体的一种间接凝 集试验。即吸附可溶性抗原于其表面， 特异性抗体与之结合后，可产生凝集 反应。
组
微生物学诊断
• 病料的采集： 采集适当的渗出液、脓汁、乳液、脑脊髓 液、尿液和感染组织。
•检验方法
•(一)直接检查: 可直接涂片，革兰氏染色镜检。
•(二)分离培养:接种血平板，观察菌落形态和溶血 情况。
•(三)细菌鉴定:菌落形态、溶血特性、细菌形态、 生化特性。如定群、定型，则要作血清学试验。
粘附于扁桃体上 皮的马链球菌
马腺疫-腺疫病马 食槽肿胀
关节腔充满脓汁、血 水或干酪样分泌物
败血型,体表弥 漫性发绀、出血
死亡猪呈败 血症症状
关节腔充满 浓汁
淋巴结出血、 发黑
猪链球菌病 淋巴脓肿型
猪：脑膜充血、 出血
肺炎链球菌感 染后的肺组织
织病 临 的牛 床 病和 乳 理健 腺 组康 炎 织乳 学牛 观乳 察腺
菌溶 血 性
• 从不同的鱼体分离到的
致病性的链球菌生化特
性有比较大的差异
肺 炎
• 与葡萄球菌不同 链球菌
链
不产生触酶
球
菌
链球菌抗原结构模式图
细胞壁
糖成分。C抗原
有群特异性，根据含多糖抗原的不同，可将链球
（C抗原）
菌分为19个血清群。
型特异性抗原 是链球菌细胞壁的蛋白质抗原,位于C抗原的
细菌学诊断
病料
免疫性
微生物链球菌
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10
第二节 链球菌属
链球菌抗原构造模式图
荚膜
蛋白质Ag 多糖Ag
核蛋白Ag
肽聚糖
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11
第二节 链球菌属
•抵抗力
抵抗力不高 不耐热，55℃灭活 对常用消毒剂及抗 生素敏感
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12
第二节 链球菌属
二、致病性
致病物质
1、细菌胞壁成分
第二节·链球菌属
链球菌属（streptococcus）细菌 种类多，致病性强弱不一，主要 引起各种化脓性感染、肺炎、猩 红热、链球菌感染后超敏反应等
对人类致病的主要是A群链球菌 和肺炎链球菌
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1
第二节 链球菌属
链球菌分类
1、根据溶血能力分类（在血平板上生长的菌 落其周围溶血环的情况）
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35
致病物质
第三节 肺炎链球菌
荚膜-- 抗吞噬，是肺炎球菌主要侵袭力。有
荚膜为光滑型“S”型，毒力强
无荚膜
的粗糙型“R”型，毒力降低。
● 其它致病因素-- 肺炎球菌溶血毒素、脂磷壁酸
、神经氨酸酶等，与肺炎球菌致细胞坏死、溶血
、与细胞粘附等作用有关。
所致疾病
● 大叶性肺炎 偶可引起其它部位的化脓性炎症 及败血症、脑膜炎等。
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5
甲链
丙链 乙链
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6
第二节 链球菌属
2、根据抗原结构不同分类
根据C多糖抗原不同分20群（其中致病菌株多 属于A群）
各群之间，又按蛋白质抗原不同，分若干 型。如A群—— 分M、T、R…等约150个型
B群——分 4型 C群——分13型
链球菌
A群
1
生物学性状
2
致病性
3
免疫性
4
微生物学检查
5
防治原则
1．链状排列的革兰阳性圆形或卵圆形球菌。培养早期有荚膜。细胞壁外有菌毛样结构，含M蛋白。培养日久， 老龄菌或被吞噬后，可呈革兰阴性。
2．营养要求较高。 血琼脂平板上形成灰白色，光滑型，小菌落，多数菌株有β溶血现象。 液体培养基中易形成长链，管底呈絮状沉淀。 3．生化反应触酶阴性。一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，据此可区别甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌。 4．抗原构造主要有： ⑴蛋白质抗原有型特异性，有多种，与致病性有关的是M蛋白。 ⑵多糖或C抗原有群特异性。 ⑶核蛋白抗原无特异性，不仅各型链球菌均相同并且与葡萄球菌有交叉。 5．抵抗力较弱，极少有耐药株形成。但耐干燥。
A群链球菌也称化脓性链球菌或溶血性链球菌，是感染常见的病原菌之一。 1．致病物质主要有三大类： ⑴细胞壁成分 1）脂磷壁酸（LTA）：与M蛋白共同组成A群链球菌的菌毛结构，增强对细胞的粘附性。 2)M蛋白：是A群链球菌细胞壁中的表面蛋白质成分，有近100个血清型。 ①有抗吞噬和抵抗杀菌作用；②与心肌，肾小球基底膜有共同抗原，故与某些超敏反应性疾病发生有关。 3）肽聚糖：有致热，溶解血小板等作用。 4）细胞壁受体：有利于细菌粘附宿主细胞。 5)F蛋白：能与上皮细胞表面的纤维粘连蛋白结合，以利于细菌在体内定植。 ⑵外毒素类 1)致热外毒素：是人类猩红热的主要毒性物质。由携带溶原性噬菌体的A群链球菌菌株产生，耐热，有抗原 性
抗链球菌溶血素O试验（Anti-streptolysin O test,ASO test）简称抗O试验。常用于风湿热的辅助诊断。 患者血清中的抗O大多在250单位左右，活动者一般超过400单位。
链球菌检验作业指导书.docx
链球菌检验作业指导书1主题内容与适用范围本作业指导书规定了链球菌的检验方法。
木作业指导书适用于患者的生物样品（如：尿液、脓液、脑脊液、痰等）及医院物体表面涂抹样本及使用中消毒剂链球菌的检验。
2引用标准GB/T 4789. 28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂全国临床检验操作规程（第三版）临床微生物学诊断与图解（第二版）周庭银编著3设备和材料3.1无菌棉拭子。
3.2 无菌5cmX 5cm规格板。
3.3温箱：36±1°C, 42°Co3.4显微镜。
3.5灭菌广口瓶：500mLo3.6灭菌三角烧瓶：500mL, 250mL o3.7 灭菌吸管：10mL、ImLo3.8 天菌平皿：90mmX 15mmo3.9灭菌小试管：内径3n）m,长5cm。
3.10灭菌毛细管。
3.11 无菌注射器：5mL、10mL3.12橡皮乳头。
3. 13载玻片。
3. 14酒精灯。
3. 15灭菌金属匙或玻璃棒。
3. 16接种棒、鎳銘丝。
3.17试管架、试管篓。
4培养基和试剂4.1 1%葡萄糖肉汤：按GB/T 4789. 28中4. 1规定。
4.2血琼脂平板：按GB 4789. 28中4. 6规定。
4.3SCDLP液体培养基：按卫生部《消毒技术规范》附录A.23中规定。
4.4麦康凯琼脂：按GB 4789. 24屮4. 4规定。
4,5 6. 5%氯化钠肉汤：见附录A1。
4.6马尿酸钠培养基：按GB/T 4789. 28'P3. 9规定。
4.7过氧化氢酶试验：按GB 4789. 28中3.21规定。
4.8蛋白月东水、靛基质试剂：按GB 4789. 28中3. 13规定。
4.9氨基酸脱竣酶试验培养基：按GB 4789. 28屮3. 12规定。
4.10糖发酵管：按GB 4789. 28中3. 2规定。
4.11溶血性检查：见附录A1。
4.12杆菌肽敏感试验：见附录A4。
4.13 CAMP试验：见附录A5。
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【微生物检验】链球菌属及其检验
链球菌属(Streptococcus)细菌，呈链状排列的革兰阳性球菌，个别种成双排列。
广泛分布于自然界、人及动物肠道和健康人鼻咽部，大多数不致病，致病菌可引起各种化脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病。
下面是yjbys店铺为大家带来的关于链球菌属及其检验的知识，欢迎阅读。
⒈分类
链球菌的分类方法尚未统一。
常用下列两种方法。
⑴根据溶血现象：分为3类。
①甲型溶血性链球菌(α-hemolytic streptococcus)：菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血，该类菌又称草绿色链球菌，为条件致病菌。
②乙型溶血性链球菌(β-hemolytic streptococcus)：菌落周围有2～4mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或β溶血，该类菌又称溶血性链球菌，致病性强，常引起人和动物多种疾病。
③丙型链球菌(γ-streptococcus)：菌落周围无溶血环，因而又称不溶血性链球菌，一般不致病。
⑵根据抗原结构：按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、
C、D …等20个群。
同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同又分若干型。
如A群根据其M抗原不同，可分成约100个型;B群分4个型。
对人致病的链球菌菌株，主要是 A群，多数呈现乙型溶血。
⒉细菌特性
⑴链球菌
① 形态染色球形或椭圆形，直径0.5～1.0μm，链状排列，链的长短与细菌的种类和生长环境有关，在液体培养基中形成的链较长。
无芽胞，无鞭毛。
多数菌株在培养早期(2～4h)形成透明质酸的荚膜。
革兰染色阳性。
②分离培养要求较高，培养基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质。
多数菌株兼性厌氧，少数为专性厌氧。
在液体
培养基中呈沉淀生长，在血平板上，37℃18～24h后可形成灰白色、圆形、凸起、光滑、直径为0.5mm～0.75mm的细小菌落，菌落周围出现不同类型的溶血环。
③生化反应触酶阴性、一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。
④抗原构造主要有三种：
蛋白质抗原：或称表面抗原。
具型特异性有M、T、R、S 4种，位于C抗原外层。
与致病性有关的是M抗原。
多糖抗原：或称C抗原。
为群特异性抗原，位于细胞壁。
根据C 抗原的不同，将链球菌分为20群。
对人致病的90%属A群。
核蛋白抗原：或称P抗原。
无特异性，为各种链球菌所共有，并与葡萄球菌有交叉。
⑤抵抗力不强，60℃30min即被杀死。
对常用消毒剂敏感。
乙型链球菌对青霉素、红霉素、四环素及磺胺类敏感。
⑵ 肺炎链球菌
① 形态染色革兰阳性球菌，菌体呈矛头状、成双排列，宽端相对，尖端向外，在脓液、痰液及肺组织病变中亦可呈短链状，无鞭毛，无芽胞，在机体内或含血清的培养基中可形成荚膜。
②分离培养营养要求高，在血平板上形成灰白色、圆形、直径为
0.5mm～1.0mm的扁平菌落，周围有草绿色溶血环。
培养时间长时可产生自溶酶。
③生化反应多数菌株分解菊糖，胆盐溶解试验阳性和optochin敏感试验阳性，籍此可与草绿色链球菌相区别。
④抗原结构
荚膜多糖抗原可将肺炎链球菌分为85个血清型。
肺炎链球菌14型与人类A血型抗原有交叉反应。
多糖抗原为各型菌株所共有。
可被血清中一种C反应蛋白(C reactive protein,CRP)所沉淀。
正常人血清中只含微量CRP，急性炎症者含量增高，故常以测定CRP作为诊断的依据。
检验地带网M蛋白：为型特异抗原，与A群链球菌M蛋白类似，但抗原性不
同，与毒力无关。
⑤抵抗力本菌抵抗力弱，对一般消毒剂敏感。
有荚膜菌株抗干燥力较强，在干痰中可存活1～2月。
对青霉素、红霉素、洁霉素敏感。
⑥ 变异性有荚膜的肺炎链球菌经人工培养后可发生菌落由光滑型向粗糙型，即S-R变异，同时随着荚膜的消失，毒力亦随之减弱。
将R型菌落的菌株接种动物或在血清肉汤中培养，则又可恢复S型。
⒊临床意义
⑴化脓性链球菌
A群链球菌也称化脓性链球菌(pyogenic streptococcus)，致病力强，占人类链球菌感染的90%，能产生多种外毒素和侵袭性酶，如链球菌溶素O和S、M蛋白、脂磷壁酸、链激酶、链道酶、透明质酸酶等，可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、脓疱病、软组织感染、心内膜炎、脑膜炎及变态反应性疾病如急性肾小球肾炎、风湿热等，产毒株还可引起猩红热。
链球菌型别多，各型间无交叉免疫，故常反复感染。
⑵乳链球菌
B群链球菌学名无乳链球菌(S.agalactiae)是新生儿败血症和脑膜炎的常见菌，对成人主要引起肾盂肾炎、子宫内膜炎等。
⑶ 肺炎链球菌
肺炎链球菌(S.pneumoniae)，俗称肺炎球菌(pneumococcus)，是大叶性肺炎、支气管炎的病原菌，还可引起中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎等。
其荚膜在细菌的侵袭力上有重要作用，此外溶血素、神经氨酸酶是主要致病物质。
感染后机体可产生牢固的型特异性免疫。
但因菌型多，可再感染其他型。
检验地带网
⑷ 草绿色链球菌
草绿色链球菌亦称甲型溶血性链球菌。
是人体口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，可引起亚急性细菌性心内膜炎。
⒋微生物学检验
⑴链球菌
检验程序
链球菌检验程序见图9-2。
⑵标本采集根据不同疾病采集不同标本。
⑶检验方法
显微镜检查标本涂片革兰染色，镜检见链状排列革兰阳性球菌可初报。
分离培养血液标本先增菌培养，脓液、咽拭可接种血琼脂平板并涂片染色镜检，初代分离需5%C02，35℃24h观察菌落性状。
⑵肺炎链球菌
①检验程序
肺炎链球菌检验程序见图9-3。
②标本采集根据病变部位采集不同标本。
检验地带网
③检验方法
显微镜检查：除血液外，痰、脓液等均可直接涂片染色镜检。
如发现革兰阳性矛头状双球菌，周围有较宽的透明区，经荚膜染色确认后可初报“找到肺炎链球菌”。
分离培养：血液、脑脊液先增菌，可呈均匀混浊，有绿色荧光。
痰液、脓液可直接接种血平板，5%～10%CO2培养后，取可疑菌落进一步作optochin敏感实验、胆盐溶菌试验与菊糖发酵试验，以区别于甲型链球菌。
动物试验：小鼠对肺炎链球菌敏感，12～36h死亡。
荚膜肿胀试验：如遇同型免疫血清，则肺炎链球菌荚膜出现肿胀，为阳性。
④鉴定与鉴别
β溶血链球菌鉴定(表9-1)
①Lancefield群特异性抗原鉴定：B群为无乳链球菌，F群为米勒链球菌，A、C、G群抗原不是种特异性抗原，还需根据菌落大小和生化反应进一步鉴定。
②PYR试验：化脓性链球菌为阳性。
③杆菌肽(bacitracin)敏感试验：化脓性链球菌为阳性，有别于其他PYR阳性的β溶血性细菌(猪链球菌、海豚链球菌)和A群小菌落β
溶血性链球菌(米勒链球菌)。
此法可作为筛选试验。
④VP试验：可鉴别A、C、G群β溶血的大、小两种不同菌落。
⑤CAMP试验：无乳链球菌能产生CAMP因子，它可促进金黄色葡萄球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。
试验时先将金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，沿直径划线接种，再沿该线垂直方向接种无乳链球菌，两线不得相接，间隔约3～4mm。
35℃孵育过夜，两种划线交界处出现箭头状溶血，即为阳性反应。
本法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验。
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