葡萄籽、松树皮和花生衣提取物中原花青素成分研究
葡萄籽有效成分及药理作用研究报告进展
葡萄籽的有效成分及药理作用研究进展李志丽赤峰学院化学系；赤峰024000摘要本文参考近几年来国内外关于葡萄籽的开发、利用研究资料，比较完整地介绍了葡萄籽的化学成分及其药效。
葡萄籽提取物原花青素<GSPE）是其中最有效的成分，具有广泛的药理保健作用，可用于防治心脑血管疾病、抗糖尿病、抗癌、抗衰老、防辐射、改善免疫功能等。
葡萄籽在美国、日本等国家被广泛研究，并开发成保健食品和药品。
在我国葡萄籽作为保健品和植物性药物也将有广阔发展前景。
关键词葡萄籽；有效成分；原花青素(GSPE>；药理作用葡萄籽为葡萄科葡萄属葡萄、俪流的种子，是生产葡萄糖的废料。
但近些年来，随着对其研究的不断深人，发现葡萄籽有较高的营养价值和药用价值。
目前，葡萄籽在美国、日本等许多国家被广泛研究，开发成保健食品和药品。
其中，葡萄籽提取物原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE>因其具有多种保健功能并且安全性好的特性而倍受人们青睐。
本文就葡萄籽有效成分及药理作用研究进展作一综述。
1 有效成分到目前为止 ,从葡萄籽中已分离出多种化学成份 ,其中主要涉及脂肪油类、黄酮及多元酚类和蛋白质类成分等。
1.1 脂肪油类成分葡萄籽油中含有大量不饱和脂肪酸，而饱和脂肪酸含量较低。
焦勇等[1]从新疆葡萄籽油中分离出15种化合物：11,14-二十碳二烯酸甲酯、亚油酸、α-庚烯醛、2,4-癸二烯醛、3,4-二甲基-2-己醇、2-癸烯醛、十一酸乙酯、辛酸乙酯、庚醛、千酸乙酯、苯乙醇、3,4-二甲基-1-戊醇、4-甲基-1-己醇、癸酸乙酯、β-庚烯醛。
李盛钰等[2]从山葡萄籽中分离出10个化合物：9,11-十八碳二烯酸甲酯、8,11-十八碳二烯酸甲酯、10,13-十八碳二烯酸甲酯、9-十八碳烯酸甲酯-12-乙酸、16-十七碳酸甲酯、千二酸单甲酯、壬二酸二甲酯、13-炔-十四碳炔酸甲酯、1,1-二苯基-2-<2,4,6-三硝基）-联氨、9,12-十六碳二烯酸甲酯。
葡萄籽提取物原花青素一般药理学研究
Ｃ ｈｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａｌ ｏ ｆ ｌ ｎ ｆ ｏｒ ｍ ａ ｔｉ ０ １ ３ ｏ ｎ Ｔ Ｃ Ｍ
Ｍ ａ ｒ ． ２ ０１ ４ Ｖ ｏ Ｉ ． ２ １ Ｎ ｏ ． ３
● 实 验 研 究 ●
葡萄籽提取物原花青素一般药理学研究
关键 词 ：原 花 青 素 ： 中药 药 理 学 ：心 血 管 系 统 ：呼 吸 系统 ； 中枢 神 经 系统 ：犬 ： 小 鼠
Ｄ ０ Ｉ ：１ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ５ — ５ ３ ０ ４ ． ２ ０ １ ４ ． ０ ３ ． Ｏ １ １
中图分 类号 ：Ｒ ２ ８ ５ ． ５
进 一 步开 发和使 用提 供一般 药理 学研 究安 全性评价 实验数据 。方法
麻 醉犬呼 吸频率和潮 气量 、收缩压 、舒张压 、平均 动脉压 、心率 、心 电 图的影响 ：采 用灌 胃给 药方式观 察原花 青素对小鼠 自主活动行 为和协调运动的影响， 并观察原 花青素对 小鼠戊 巴比妥钠阈剂量和 阈下剂量睡眠的影 响。 结果 原 花青素 （ ８ ５ ７ ． Ｏ ０ 、２ １ ４ ． ２ ９ 、４ ２ ． ８ ６ ｍ ｇ ／ ｋ ｇ ） 对麻醉 犬的潮 气量 和频率、血 压 、心率 、心 电图均无明显影
ｏ ｎ ｃ ｅ ｎｔ ｒ ａ ｌ ｎｅ ｖｏ ｒ ｕｓ ｓ ｙｓ ｔ ｅ ｍ ，ｃ ｒ ｄｉ ａ ｏ ｖ ａｓｃ ｕｌ ｒ ａ ｓ ｙｓ ｔ ｅ ｍ ｎ ｄ ａ ｒ ｅｓ ｐｉ ｒ ａｔ ｏｒ ｙ ｓ ｙｓ ｔ ｅ ｍ ｉ ｎ ｎ ｉ ａ ｍａ ｌ ｓ． Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄｓ ：ｇ ｒ ａｐｅ ｓ ｅｅ ｄ ｐｒ ｏａ ｎ ｔ ｈｏｃ ｙａｎｉ ｄｉ ｎ ｅ ｘｔ ｒ ａｃ ｔ：Ｃｈｉ ｎｅ ｓ ｅ ｄｒ ｕｇ ｐｈａ ｒ ｍ ａｃ ｏｌ ｏ ｇｙ；ｃ ｒ ｄｉ ａ ｏ ｖ ａｓ ｃ ｕｌ ａ ｒ ｓ ｙｓ ｔ ｅ ｍ ：ｒ ｅｓ ｐｉ ｒ ａｔ ｏｒ ｙ ｓ ｙｓ ｔ ｅ ｍ ：ｃ ｅ ｎｔ ｒ ｌ ａ ｎｅ ｒ ｖｏ ｕｓ ｓ ｙｓ ｔ ｅｍ ： ｄｏｇｓ： ｍ ｉ ｃｅ
葡萄籽提取物原花青素95%执行标准
葡萄籽提取物原花青素95%执行标准
葡萄籽提取物原花青素95%的执行标准主要包括以下内容：
1. 提取方法：采用超声波辅助萃取、回流萃取等方法，从葡萄籽中提取目标成分。
2. 成分含量：葡萄籽提取物原花青素的含量应达到95%以上。
3. 鉴定方法：应运用高效液相色谱（HPLC）或者紫外分光光度法等可靠的分析方法对葡萄籽提取物原花青素进行鉴定和分析。
4. 检测限值：确定葡萄籽提取物原花青素的检测限值，保证提取物的质量符合要求。
5. 外观特征：葡萄籽提取物原花青素应为深紫色至红棕色粉末，无异味。
6. 残留溶剂：葡萄籽提取物原花青素中不得含有明显的溶剂残留。
7. 重金属限量：葡萄籽提取物原花青素应符合国家或地区规定的重金属限量标准，确保产品安全。
需要注意的是，具体的执行标准可能会因国家、地区以及生产厂家的要求而有所不同，以上内容仅为常见的执行标准举例，具体要求还需参考相关标准文件。
原花青素
原花青素是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮，是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂。
一般为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多有机溶剂。
一般为葡萄籽提取物或法国海岸松树皮提取物。
原花青素（葡萄籽提取物）是一种新型高效抗氧化剂，是目前为止所发现的最强效的自由基清除剂，具有非常强的体内活性。
实验证明，OPC的抗自由基氧化能力是维生素E的50倍，维生素C的20倍，并吸收迅速完全，口服20分钟即可达到最高血液浓度，代谢半衰期达7小时之久。
血液循环在欧洲，为了改善血液循环、治疗糖尿病性视网膜病、减轻水肿和抑制静脉曲张等，花青素己用于临床治疗几十年。
花青素可以强化毛细血管、动脉与静脉血管，因此，它有消肿化淤的功效。
毛细血管的阻力减少和渗透性改善，使细胞更容易吸收养分与排除废物。
输送养分与运出废物这是血液循环系统的功能。
心脏负责抽压血液；动脉与静脉血管输送血液；而负责运送营养给细胞，又运出废物的是毛细血管。
花青素可以清除细胞膜中水溶性和脂溶性的自由基，因此，抑制了释放某些酶去伤害毛细血管壁的过程。
花青素的滋补功效可以在很短的时间内观察到。
法国波尔多大学的HenriChoussat 教授做了一次试验，试验者有47人，年龄从37岁到85岁，每人服用100毫克花青素。
27小时后发现，毛细血管的阻力减少了40%。
视力保护糖尿病性视网膜病是糖尿病的征兆，它是眼睛毛细血管微出血引起的，是成年盲人的常见病因。
法国允许用花青素治疗该病已经很多年了。
这一方法显著减少了眼睛毛细血管出血，改善了视力。
花青素也已经用来防止糖尿病患者白内障手术后的并发症。
1998年，专家们选择了许多没有眼病眼伤的人做试验，考察花青素是否可以缓解夜盲症。
参加者分成两组，一组是晚上开车的司机，一组是整天和电脑屏幕为伴的人。
四个星期后，再检查他们的耐盲能力，98%的试验者有了改善。
消除水肿水肿是血液中的水分、电解质等渗进了人体组织引起的，它通常是受伤部位肿胀。
《花生红衣原花青素化学成分、衍生物和生物活性研究》范文
《花生红衣原花青素化学成分、衍生物和生物活性研究》篇一花生红衣原花青素化学成分、衍生物及生物活性研究一、引言花生红衣是花生种子的外皮，其中含有丰富的生物活性成分，特别是原花青素。
原花青素作为一种天然的抗氧化剂，近年来在医药、食品和化妆品等领域受到了广泛关注。
本文将就花生红衣中原花青素的化学成分、衍生物及其生物活性进行详细的研究和探讨。
二、花生红衣中原花青素的化学成分花生红衣中的原花青素主要包括多种黄酮类化合物，如儿茶素、表儿茶素、原花青素B2等。
这些化合物具有不同的分子结构和化学性质，但都具有较强的抗氧化能力。
通过对花生红衣的化学分析，可以明确其原花青素的化学成分及其含量，为后续研究提供基础数据。
三、花生红衣中原花青素的衍生物原花青素的衍生物是通过化学或生物方法对原花青素进行修饰或转化得到的化合物。
在花生红衣中，原花青素可能通过氧化、还原、水解等反应生成多种衍生物。
这些衍生物可能具有与原花青素相似的生物活性，也可能具有新的生物活性。
通过研究这些衍生物的化学结构和生物活性，可以进一步了解原花青素的作用机制。
四、花生红衣中原花青素的生物活性研究1. 抗氧化活性：原花青素具有较强的抗氧化能力，可以清除体内的自由基，减轻氧化应激对机体的损害。
研究表明，花生红衣中的原花青素对多种氧化应激相关疾病具有预防和治疗作用。
2. 抗炎活性：原花青素具有显著的抗炎作用，可以抑制炎症介质的释放和炎症反应的发生。
这对于治疗炎症性疾病、减轻炎症引起的组织损伤具有重要意义。
3. 抗肿瘤活性：研究表明，原花青素对多种肿瘤细胞具有抑制作用，可以诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的增殖和转移。
这为原花青素在肿瘤预防和治疗中的应用提供了理论依据。
4. 其他生物活性：除了上述生物活性外，原花青素还具有降血脂、降血糖、保护心血管等多种生物活性。
这些作用使其在医药、食品和化妆品等领域具有广泛的应用价值。
五、结论通过对花生红衣中原花青素的化学成分、衍生物及其生物活性的研究，我们可以更好地了解其作用机制和应用价值。
《2024年花生红衣原花青素化学成分、衍生物和生物活性研究》范文
《花生红衣原花青素化学成分、衍生物和生物活性研究》篇一花生红衣原花青素化学成分、衍生物及生物活性研究一、引言花生红衣是花生果实的外皮，其内含丰富的生物活性成分，尤其是原花青素。
原花青素是一种具有多种生物活性的天然产物，其在抗氧化、抗炎、抗癌等方面具有显著效果。
近年来，随着人们对天然产物的深入研究，花生红衣原花青素的化学成分、衍生物及其生物活性受到了广泛的关注。
本文将对花生红衣原花青素的化学成分、衍生物及其生物活性进行详细的阐述和研究。
二、花生红衣原花青素的化学成分花生红衣原花青素主要由多种黄酮类化合物组成，其中以原花青素为主要成分。
原花青素是一种多酚类化合物，具有多个酚羟基，使其具有极强的抗氧化能力。
此外，还含有少量的黄酮醇、黄酮等化合物。
这些化学成分的确定为进一步研究其生物活性提供了基础。
三、花生红衣原花青素的衍生物基于原花青素的化学结构，可以通过化学修饰等方法制备出多种衍生物。
这些衍生物在保持原花青素基本化学结构的同时，通过改变其分子结构，可以调整其生物活性及药理作用。
目前，已有研究表明，通过酯化、醚化、羟基化等方法可以得到具有较好生物活性的花生红衣原花青素衍生物。
四、花生红衣原花青素的生物活性研究1. 抗氧化活性：花生红衣原花青素具有极强的抗氧化能力，可以清除体内的自由基，减缓细胞氧化损伤，对预防多种慢性疾病具有重要作用。
2. 抗炎活性：原花青素可以抑制炎症介质的释放，减轻炎症反应，对治疗炎症性疾病具有潜在的应用价值。
3. 抗癌活性：研究表明，原花青素可以抑制肿瘤细胞的生长和扩散，诱导肿瘤细胞凋亡，对预防和治疗癌症具有一定的效果。
4. 其他生物活性：除上述生物活性外，原花青素还具有抗菌、抗病毒、保护心血管等作用。
五、结论花生红衣原花青素作为一种具有多种生物活性的天然产物，其化学成分、衍生物及其生物活性的研究对于开发新型天然药物和保健品具有重要意义。
未来，随着人们对天然产物的深入研究，相信花生红衣原花青素将会在医药、保健、食品等领域发挥更大的作用。
从葡萄籽中分离纯化原花青素的研究
YANG Ying-hua，LI Yu-feng，KOU Li
（College of Science，Tianjin University of Science & Technology，Tianjin 300457，China）
Abstract：The most optimum condition of extraction proanthocyanidins from grape seeds has been studied. The results show the optimum condition of extraction：the volume fraction of alcohol is 60%，the temperature of extraction is 50,℃，and the ratio of feedstock and solvent is 1∶7. AB-8 is the most suitable resin to purify proanthocyanidins. The most optimum condition of column separation is that the solution pH value is 4，the solution flow rate is 2.0,BV/h，the concentration of alcohol desorption is 50%，and the eluent flow rate is 1.0,BV/h. The purity of proanthocyanidin can be up to 91.2% after adsorption and purification of AB-8.
度、料液比（g∶mL）作为考察因素，应用 L9（33） 进行正交实验，结果见表 2．从表 2 可以看出，各因 素的影响主次顺序为 A>C>B，即乙醇体积分数>料液 比>提取温度．最佳提取条件为 A2B2C3，即乙醇体积 分数 60%，提取温度 50℃，料液比 1∶7．在此条件 下，葡萄籽原花青素的提取率为 4.43%．在最优条件 下提取原花青素并干燥得到原花青素粗提物，经测定 粗提物中原花青素质量分数为 60.3%．
葡萄籽提取物
几种植物提取物及其功效一、葡萄籽提取物[中文名称]：葡萄籽提取物[English name]：Grape Seed P.E OPC[拉丁文学名]：Vitis vinifera L.[来源]：葡萄科植物葡萄( Vitis vinifera L.)的种子。
[主要成分]原花青素[性状]：红棕色粉末，气微、味涩。
分子式 C30H26O12分子量 578.53[规格]：原花青素≥95％低聚原花青素≥85％多酚Polyphenol ≥90％多酚≥95％多酚/低聚原花青素≥95％/60％原花青素/低聚原花青素≥95％/60％原花青素的化学结构原花青素（Procyanidins，简称PC。
原花青素(Procyanidins，简称Pc，是一大类多酚化合物的总称，这类化合物在酸性介质中加热均可产生花青素(cyanidins)，因而称为原花青素。
它是由不同数目的黄烷-3-醇或黄烷-3，4-二醇聚合而成。
按聚合度大小，二至四聚体称为低聚原花青素,(Procyanidolic Oligomers，简称OPC).五聚体以上称为高聚原花青素(Procyanidolic Polymers，简称PPC).原花色素目前市场上流通最广的规格是95%，是从葡萄籽中提取得到的。
也有从松树皮中提取得到。
95％的含量是指在提取物中OPC的含量是95％。
检测方法为UV分光广度法。
其有效活性成份原花青素(Proanthocyanidins)是由黄烷-3-醇聚合而成的一类多酚物质。
根据分子的聚合程度，原花青素可分为单体、寡聚体和多聚体，目前研究最广的葡萄籽提取物以寡聚体(OPC)为主，通常由两类原花青素单体组成，即儿茶素(catechin)和表儿茶素（epicatechin）是植物王国中广泛存在的一大类多酚化合物的总称。
起初统归于缩合鞣质或黄烷醇类。
随着分离鉴定技术的提高和对此类物质的深入研究与深刻认识，现已成为独树一帜的一大类物质并称之为原花青素。
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葡萄籽、松树皮和花生衣提取物中原花青素成分研究
杨清山1，2，张燕1，连运河2，高伟2，周丽2
（1.天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津300457；2.晨光生物科技集团股份有限公司，河北邯郸057250）
摘要：建立葡萄籽提取物中7种原花青素成分的高效液相色谱测定方法。以该方法对不同品种的葡萄籽、松树皮和花生衣提取物进行测定分析。结果表明：葡萄籽、松树皮和花生衣提取物中的原花青素成分种类和含量水平差异较大。不同品种的葡萄籽提取物中原花青素成分种类水平一致，不同品种的花生衣提取物中原花青素成分种类水平也一致，而不同品种的松树皮提取物中原花青素成分种类差距较大。该方法可以用于简单快速地区分葡萄籽提取物、松树皮提取物和花生衣提取物。关键词：葡萄籽；松树皮；花生衣；原花青素
ResearchofProcyanidinsinGrapeSeed，PineBarkandPeanutCoatExtractYANGQing-shan1，2，ZHANGYan1，LIANYun-he2，GAOWei2，ZHOULi2
（1.CollegeofFoodEngineeringandBiotechnology，TianjinUniversityofScience&Technology，Tianjin300457，China；2.ChenguangBiotechGroupCo.，Ltd.，Handan057250，Hebei，China）Abstract：Ahighperformanceliquidchromatographicmethodwasestablishedfordetermining7kindsofpro－cyanidinscomponentingrapeseedextract.Basedonthismethod，differentvarietiesofgrapeseedextract，pinebarkandpeanutscoatextractwereanalyzed.Theresultsshowedthat：therewasgreatdifferenceinprocyanidinsomponenttypesandlevelsamonggrapeseedextract，pinebarkandpeanutscoatextract.Differentvarietiesofgrapeseedextracthadsimilarprocyanidinscomponenttypes，anddifferentvarietiesofpeanutscoatextracthadsimilarprocyanidinscomponenttypestoo.Butdifferentvarietiesofpinebarkextracthaddifferentprocyanidinscomponenttypes.Duetothismethod，itcanbedistinguishedgrapeseedextract，pinebarkandpeanutscoatex－tracteasilyandquickly.Keywords：grapeseed；pinebark；peanutcoat；procyanidins
食品研究与开发FoodResearchAndDevelopment2017年5月
第38卷第10期
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2017.10.037
作者简介：杨清山（1985—），男（汉），工程师，学士，研究方向：食品分析和检测。
原花色素是一大类多酚化合物的总称，其主要有黄烷醇单体及其聚合体组成，该化合物的共同点均是能够在酸性条件下加热分解产生花青素（cyanidins），故将这类多酚化合物命名为原花青素（Proanthocyani－dins，简称PC）[1]。原花青素在葡萄籽和皮、松树皮、花生衣、山楂果、刺葵、银杏叶、荔枝和草莓中广泛存在[2-7]，但目前研究最多的来源是葡萄籽和葡萄皮中的原花青素[8]。原花青素是由儿茶素或表儿茶素单体按照不同的方式和数量缩合而成，最简单的原花青素二聚体是由儿茶素或表儿茶素自身缩合，或者由进行缩合，此外单体间还可以再形成三聚体、四聚体、五聚体等直至更多聚体[9]。原花青素具有较高的生理和药理活性，包括抗氧化、保护心血管和调节免疫活性等，此外还有具有抑制酶活性、抗病毒、抗真菌活性、抗溃疡、促进毛发生长、保护皮肤、保护肝脏、抗腹泻活性、抗致突变作用和抗抑郁等功效[10]。松树皮和花生衣作为原花青素的重要来源，其提取物具有相似的结构，同样也具备一定的生理和药理活性，但其功效远不及葡萄籽提取物[11-12]。由于松树皮
标准与检测159和花生衣提取物的生产成本较低，近些年来一些不法商贩在葡萄籽提取物中以掺入或者以直接代替的方式，以次充好来获取利益，严重扰乱了葡萄籽提取物的市场。本文建立了一种能够同时测定葡萄籽提取物中7种原花青素的高效液相色谱方法，并对不同品种的葡萄籽、松树皮和花生衣提取物进行检测分析。通过对比不同来源提取物中原花青素各个组分及含量情况，可以简单快速的区分这3类提取物。该方法为规范葡萄籽提取物市场及真伪鉴别提供了技术手段。1材料和方法1.1仪器和试剂Agilent1260液相色谱仪，配四元泵和紫外检测器：美国安捷伦科技有限公司；JJ300电子天平：常熟市双杰测试仪器厂；AUW220D电子天平：河北汇博云海科技发展有限公司；DK-S24电子恒温水浴锅：上海森信实验仪器有限公司；R213B旋转蒸发仪：上海申生科技有限公司；FW100高速万能粉碎机：天津市泰斯特仪器有限公司；101-0N电热鼓风干燥箱：天津华北试验仪器有限公司；TG16-WS台式高速离心机：湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；TH-300BQ数控超声清洗器：济宁天华超声电子仪器有限公司。没食子酸（纯度89.9%）：购自中国食品药品检定研究院；原花青素B1（纯度95%）、原花青素B2（纯度98%）、EGCG（表没食子儿茶素没食子酸酯）（纯度98%）、ECG（表儿茶素没食子酸酯）（纯度99%）：购自天津一方科技有限公司；儿茶素（纯度98%）：购自上海源叶生物科技有限公司；表儿茶素（纯度98%）：购自中国药品生物制品鉴定所。乙腈、甲醇（色谱纯）：购自安徽时联特种溶剂股份有限公司；乙醇、磷酸（分析纯）：购自天津市光复科技发展有限公司。葡萄籽（7种）：法国、新疆、河北昌黎、山东、甘肃莫高、新疆白葡萄和西部牧业，均从市场购买；松树皮（7种）：樟子松、落叶松、马尾松、红松、外国松、沐阳样品和杭州样品，均从市场购买；花生（9种）：黑花生8#、鲁花11#、豫花C-3000、花育22、四粒红、小白沙、丰花1#、山东样品和亳州样品，均从市场购买。树脂：大孔吸附树脂（型号LXA-8），由西安蓝晓科技有限公司提供。1.2色谱条件色谱柱：AgilentZORBAXSB-C18柱（4.6×150mm，5μm）；波长：278nm；色谱柱温度：40℃；进样量：5μL；运行时间：29min；流速：1.2mL/min。流动相：乙腈（A）-0.3%磷酸水（B）。梯度条件：0min：10%A；15min：18%A；23min：60%A；24min：10%A；29min：10%A。1.3标准品溶液的配制1.3.1标准储备液分别准确称取没食子酸、原花青素B1、儿茶素、原花青素B2、表儿茶素、EGCG（表没食子儿茶素没食子酸酯）和ECG（表儿茶素没食子酸酯）对照品10mg左右，置于同一个25mL棕色容量瓶中，用色谱级甲醇定容，超声溶解，摇匀，转移至专用标准液瓶中，作为储备液，浓度为0.4mg/mL。1.3.2标准工作液将储备液做2倍梯度稀释，得到5个浓度水平的工作液，分别为0.2、0.1、0.05、0.025mg/mL，做标准曲线，确定线性范围。移取5mL储备溶液至于25mL棕色容量瓶中，用色谱级甲醇定容，摇匀，转移至专用标准液瓶中，作为工作液，浓度为0.08mg/mL。1.4样品溶液的制备1.4.1样品预处理1）葡萄籽：用万能粉碎机将样品粉碎，粉碎细度为20目通过率80%以上。最后将葡萄籽粉混合均匀，备用。2）松树皮：将样品用剪刀剪成1cm左右小块，置于40℃干燥箱中进行干燥处理。最终烘至水分在15%以下，然后用万能粉碎机进行粉碎，粉碎细度为20目通过率80%以上。最后将松树皮粉混合均匀，备用。3）花生：先将花生进行去壳处理，再将花生果实置于40℃干燥箱中进行干燥处理。烘至可以脱皮为止。用手进行揉搓脱皮处理，将脱下的皮（花生衣）用万能粉碎机进行粉碎，粉碎细度为20目通过率80%以上。最后将花生衣粉混合均匀，备用。1.4.2提取物制备1）萃取：取1.4.1制备好的各个样品150g，用纱布包好后置于1000mL烧杯中，用含有0.5g/100mL磷酸的50%乙醇（体积分数）溶液进行萃取。萃取温度65℃，萃取3遍，萃取溶剂料液比分别为1∶5、1∶3和1∶2（g/mL），时间分别为3、2、1h，合并萃取液。2）纯化：将萃取液浓缩至干，加入2.5L纯净水溶解，冷却至室温，离心（4000r/min，10min），取离心上清液上大孔吸附树脂柱（LXA-8）进行吸附，流速1BV/h。使用0.5L纯净水清洗，流速1.5BV/h～2BV/h。最后用0.5L70%乙醇（体积分数）溶剂进行解吸，流速1BV/h。
杨清山，等：葡萄籽、松树皮和花生衣提取物中原花青素成分研究标准与检测
1603）干燥：将收集的解吸液用旋转蒸发仪浓缩至水分5%以下，得到提取物粗品，再将粗品研磨成粉末，细度为60目通过率90%以上，得到各个样品的提取物成品，待分析测试用。1.4.3供试样品液制备称取0.1000g左右样品，用50%乙醇稀释定容至10mL容量瓶中，超声溶解，摇匀，恢复至室温，过0.45μm滤膜，待测。
2结果与分析2.1液相色谱条件优化2.1.1色谱柱选择根据原花青素成分的特点，结合文献方法信息，保存能力较强的反相色谱柱（C18）能够满足使用要求。不同品牌、型号、粒径和长度的色谱柱，对原花青素的保留能力和分离能力也不同。通过对实验室现有的色谱柱资源进行筛选和试验分离，最终确定色谱柱的规格型号为：AgilentZORBAXSB-C18柱（4.6×150mm，5μm）。2.1.2进样量优化进样量太大会在色谱柱中产生溶剂效应，造成色谱峰分离效果和峰形变差；进样量太小会造成仪器检测的稳定性变差，且灵敏度也会变低。通过调整不同的进样量进行试验验证，最终确定进样量参数为：5μL。2.1.3其他条件优化参考的葡萄籽提取物中儿茶素和表儿茶素检测方法运行时间达到90min，不能够满足大量样品的快速检测。通过对流速、柱温、流动相成分及梯度条件进行调整，最终确定各项参数条件为：流速1.2mL/min；柱温40℃；流动相乙腈（A）-0.3%磷酸水（B）；梯度条件0min（10%A），15min（18%A），23min（60%A），24min（10%A），29min（10%A）。该条件能够实现葡萄籽中各种原花青素在30min内实现分离。2.2色谱图及保留时间按照优化后液相条件，分别检测标准工作液和葡萄籽提取物样品，得到色谱图和保留时间见图1和表1。2.3标准曲线和检出限按照试验方案操作方式，将标样依次做梯度稀释配制成标准曲线溶液，按照确定的色谱条件进样检测。采用外标法，以峰面积为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，得到7种原花青素成分的回归方程和相关系数。按照S/N=3确定各种成分的检出限。试验结论如下：标准曲线及线性范围：没食子酸的标准曲线为y=13558x-7.338，R2=1.0000，在0.011mg/mL～0.183mg/mL范围内，对照品质量浓度与峰面积呈良好线性关系；原花青素B1的标准曲线为y=3142.4x-0.588，R2=1.0000，在0.003mg/mL～0.051mg/mL范围内，对照品质量浓度与峰面积呈良好线性关系；儿茶素的标准曲线为y=3250.7x-1.071，R2=1.0000，在0.008mg/mL～0.125mg/mL范围内，对照品质量浓度与峰面积呈良好线性关系；原花青素B2的标准曲线为y=3097.0x-0.738，R2=1.0000，在0.004mg/mL～0.061mg/mL范围内，对照品质量浓度与峰面积呈良好线性关系；表儿茶素的标准曲线为y=3219.0x-2.371，R2=1.0000，在0.017mg/mL～0.278mg/mL范围内，对照品质量浓度与峰面积呈良好线性关系；表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）的标准曲线为y=5987.2x-5.454，R2=1.0000，在0.012mg/mL～0.186mg/mL范围内，对照品质量浓度与峰面积呈良好线性关系；表儿茶素没食子酸酯（ECG）的标准曲线为y=8257.6x-8.463，R2=1.0000，在0.020mg/mL～0.317mg/mL范围内，对照品质量浓度与峰面积呈良好线性关系。检出限：没食子酸0.04mg/L；原花青素B10.28mg/L；儿茶素0.28mg/L；原花青素B20.28mg/L；表儿茶素0.36mg/L；表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）