银杏叶中黄酮类化合物的提取及其体外抗氧化活性研究李红军
·中草药·北方园艺２０１３（０５）：１５６～１５９作者简介：李红军（１９６８－），男，本科，农艺师，现主要从事农业技术推广工作。
收稿日期：２０１２－１１－１９银杏叶中黄酮类化合物的提取及其体外抗氧化活性研究李红军（永吉县口前镇农业技术推广站，吉林永吉１３２２００） 摘 要：以银杏叶为原料，研究了单因素（液料比、浸提ｐＨ、提取时间、提取温度）对银杏叶中黄酮提取率的影响，并以硼砂－氢氧化钙－水为溶剂提取银杏叶中的黄酮，用正交实验方法优化了银杏叶中黄酮的提取工艺，用油脂抗氧化试验研究了黄酮的抗氧化性。
结果表明：影响黄酮提取因素顺序为：提取温度＞液料比＞提取时间＝浸提液ｐＨ，最佳提取工艺组合为：Ａ１Ｂ２Ｃ２Ｄ２，即液料比为１∶３０，浸提液ｐＨ为８，提取温度为８０℃，提取时间为３ｈ，在此工艺条件下银杏叶中黄酮的提取率为２．６７％。
银杏叶中的黄酮对猪油的氧化具有明显的抑制作用。
随着提取物浓度的增加，抗氧化性初期表现为逐渐增强的趋势，当添加量为０．２０％时达到最佳抗氧化效果，其抗氧化性不如抗氧化剂维生素Ｃ；当提取物添加量继续增大时，抗氧化效果有所下降。
关键词：银杏叶；黄酮类化合物；抗氧化性；正交实验中图分类号：Ｓ ５６７．９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１３）０５－０１５６－０４ 银杏是我国特有的植物，其种子、根、叶均可入药。
是现存种子植物中最古老的植物之一，被称为“活化石”。
它集科学、营养、用材、观赏、保健医疗、生态防护诸价值于一体，在我国分布广泛。
据现代药理研究，银杏叶对人体和动物体的医疗、保健作用较为广泛，如改善心血管及周围血管循环功能，对心肌缺血有改善作用，具有促进记忆力、改善脑功能的作用。
其提取物具有独特的药理活性和巨大的临床应用价值，其应用领域已从医药扩大到食品、保健品、化妆品等。
此外，还有降低血黏度、清除自由基等攻效［１－２］。
现代研究表明，银杏叶中含有多种成分，以黄酮类化合物含量较高，其中以槲皮素、山萘酚和异鼠李素的糖苷为主［３］。
银杏叶黄酮类物质具有非常广泛的生理和药理活性，如扩张冠状血管、抗炎症、抗氧化、抗病毒、调节免疫功能等。
目前，对黄酮类化合物的药理作用进行了深入的研究，发现其具有较强的抗氧化性，可强力清除体内自由基。
因此，对其中黄酮的提取工艺条件进行研究，确定黄酮提取的优化条件，可解决银杏叶中黄酮类化合物产量低、纯度低等的问题，使银杏叶中黄酮类化合物的提取率达到一个较高的水平［４］。
黄酮类化合物抗脂质氧化和抗衰老，采用Ｓｃｈａａｌ烘箱法进行体外抗氧化性的研究，并通过与维生素Ｃ的清除自由基抗氧化能力作比较来评价黄酮类化合物清除自由基抗氧化能力［６－７］，证明了黄酮类化合物具有很好的体外抗氧化性。
为了更好地开发利用银杏叶，介绍了一种操作简单、易于推广的银杏叶黄酮类化合物的提取和定量测定方法，以期为银杏黄酮的利用提供一定的参考［４－５］。
１ 材料与方法１．１ 试验材料银杏叶采集于吉林农业科技学院，经吉林农业科技学院孙仓教授鉴定为银杏叶，银杏叶经自然风干后粉碎、过筛备用。
猪油购买于市场。
试验试剂：芦丁（中国药品检定所）、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、硼砂、盐酸、正丁醇均为分析纯。
试验仪器：高速粉碎机（ＦＳ５００Ｙ－３型）、７２２紫外－可见分光光度计（ＵＶ１６００型）、恒温水浴锅（ＤＫ－Ｓ１型）、电子天平（ＦＡ１００４Ａ型）、电子恒温鼓风干燥箱（２０２－３Ａ型）等。
１．２ 试验方法１．２．１ 银杏叶中黄酮的提取及鉴定 准确称取一定质量的银杏叶，加约２０倍量已煮沸的０．４％硼砂水溶液，搅拌下加石灰乳调ｐＨ到８～９，并保持此ｐＨ下微沸２０～３０ｍｉｎ，过滤，收集滤液，滤渣经同样方法再浸提２次，合并浸提液，在６０～７０℃搅拌，并用盐酸调ｐＨ到３～４，静置，沉淀完全抽提，水洗至洗液呈中性，６０℃干燥得黄酮粗品，加５倍体积的９５％乙醇沉淀黄酮粗品，３ ０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，干燥后备用［６－７］。
６５１北方园艺２０１３（０５）：１５６～１５９·中草药·１．２．２ 最大吸收波长的选择 以质量分数７０％的乙醇为溶剂，以ＮａＮＯ２、Ａｌ（ＮＯ３）３、ＮａＯＨ为显色剂，分别作芦丁标准品和银杏叶黄酮提取液的吸收曲线。
银杏叶黄酮提取液在波长５１０ｎｍ附近有较大吸收，芦丁标准溶液的最大吸收波长为５１０ｎｍ附近，由于芦丁标准溶液与银杏叶黄酮溶液之间的吸光度相差不大，因此后续标准曲线的制作及银杏叶黄酮提取液中黄酮的测定均选择５１０ｎｍ为测定波长。
１．２．３ 标准曲线的建立 配置０．２０５４ｍｇ／ｍＬ芦丁标准溶液，准确吸取芦丁标准溶液０．０、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０ｍＬ，置于２５ｍＬ容量瓶中，加３０％乙醇补足至１２．５ｍＬ，加５％亚硝酸钠溶液０．７ｍＬ摇匀，放置５ｍｉｎ后，精确加入１０％硝酸铝溶液０．７ｍＬ摇匀，放置５ｍｉｎ，精确加入１．０ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液５ｍＬ，用３０％乙醇稀释至刻度，以第１容量瓶为空白，于５１０ｎｍ波长下测定吸光度，以吸光度（Ｙ）为纵坐标，芦丁实际浓度（Ｃ）为横坐标，绘制标准曲线，建立回归方程。
１．２．４ 样品黄酮含量测定 取银杏叶提取液５ｍＬ，同１．２．３项测定方法，测得５１０ｎｍ波长的吸光度（Ａ），代入标准曲线中求得黄酮浓度，并换算成黄酮质量与银杏叶质量的比，即为黄酮的提取率。
黄酮提取率＝（黄酮浓度×体积×稀释倍数）／原料质量×１００％。
１．２．５ 黄酮类物质的定性检验 铝盐反应：向黄酮提取物溶液中加入１％三氯化铝溶液，观察颜色变化，在３００～８００ｎｍ波长范围内测定色素溶液加入三氯化铝溶液后的吸光度［１０－１１］。
１．２．６ 单因素试验 研究液料比（１∶２０、１∶３０、１∶４０、１∶５０、１∶６０）、提取液ｐＨ（５、７、９、１１、１３）、提取时间（１、２、３、４、５ｈ）、提取温度（６０、７０、８０、９０、１００℃）对银杏叶中黄酮提取率的影响。
１．２．７ 银杏叶中黄酮提取工艺参数优化 在单因素试验的基础上，分别研究料液比（１∶３０、１∶４０、１∶５０）、提取液ｐＨ（７、８、９）、提取时间（２、３、４ｈ）、提取温度（７０、８０、９０℃）对银杏叶中黄酮提取的影响，作４因素３水平Ｌ９（３４）正交实验，优化银杏叶中黄酮的提取工艺。
因素水平见表１。
表１正交实验因素及水平因素水平Ａ Ｂ Ｃ Ｄ液料比浸提液ｐＨ提取温度／℃提取时间／ｈ１ １∶３０ ７ ７０ ２２ １∶４０ ８ ８０ ３３ １∶５０ ９ ９０ ４１．３ 项目测定银杏叶黄酮过氧化值（ＰＯＶ）的测定采用Ｓｃｈａａｌ烘箱法进行。
新鲜猪板油切成小块，湿法熬炼，双层纱布过滤除去残渣，冷却密封后放入冰箱备用。
添加物用少量乙醇溶解，各加入５０ｍＬ新鲜猪油中，５０℃水浴缓慢加热融化油样，并在升温过程中不时搅拌使成匀相，另取一瓶加同样猪油为空白。
７０℃恒温箱中强化保存，每隔１２ｈ搅拌１次，每２４ｈ定时测定ＰＯＶ值。
每次取样后充分振摇，以混入足够的空气。
按ＧＢ ５５３８－１９９５测定ＰＯＶ值，进而比较不同浓度、不同抗氧化剂的抗氧化性［１１－１２］。
样品ＰＯＶ＝（Ｖ１－Ｖ２）×Ｃ×１ ０００／Ｖ，空白ＰＯＶ＝（Ｖ０－Ｖ２）×Ｃ×１ ０００／Ｖ。
式中，ＰＯＶ：过氧化值，ｍｅｑ／Ｌ；Ｖ０：对照耗硫代硫酸钠的体积，ｍＬ；Ｖ１：样品耗硫代硫酸钠的体积，ｍＬ；Ｖ２：空白耗硫代硫酸钠的体积，ｍＬ；Ｃ：硫代硫酸钠的浓度，ｍｏｌ／Ｌ；Ｖ：样品的体积，Ｌ。
２ 结果与分析２．１ 标准曲线的绘制以芦丁（０．２０５４ｍｇ／ｍＬ）为标准溶液，于５１０ｎｍ波长下测定吸光度，以吸光度（Ｙ）为纵坐标，芦丁实际浓度（Ｃ）为横坐标，绘制标准曲线，建立回归方程为Ｙ＝１５．８２１Ｃ＋０．００３８，Ｒ２＝０．９９９１。
结果见图１。
图１ 芦丁标准曲线２．２ 黄酮类物质定性鉴定结果向银杏叶黄酮提取液中加入１％三氯化铝溶液，有一种黄色可溶性物质生成，可使溶液吸光度增大，说明有黄酮类物质存在。
２．３ 单因素试验结果２．３．１ 料液比对银杏叶黄酮提取率的影响 准确称取５ｇ干燥银杏叶粉末，分别加入ｐＨ ９的氢氧化钙溶液１００、１５０、２００、２５０、３００ｍＬ，用饱和氢氧化钙溶液和硼砂溶液调节溶液ｐＨ，使之维持在ｐＨ ９在８０℃下提取２ｈ。
由图２可知，料液比太小提取的黄酮含量低，给后续操作带来困难，且提取液的消耗量大；随着料液比的降低，提取率也随着增大，但当固液比达到１∶４０后，银杏叶中黄酮的提取率增加不明显，料液比以１∶４０为宜。
２．３．２ 浸提液ｐＨ对银杏叶中黄酮提取率的影响 准确称取５ｇ干燥银杏叶，加入１００ｍＬ ｐＨ分别为５、７、９、１１、１３用硼砂溶液和饱和氢氧化钙溶液调节的氢氧化钙溶液，在８０℃下提取２ｈ。
由图３可知，ｐＨ ９时银杏叶中黄酮提取率最高，当ｐＨ低于９时，随着ｐＨ的增加，７５１·中草药·北方园艺２０１３（０５）：１５６～１５９图２ 液料比对银杏叶中黄酮提取率的影响提取率增加，但当ｐＨ高于９时，提取率反而降低。
这可能是因为银杏叶中黄酮为多种化合物的混合物，各化合物包含的酸性、碱性基团不同，在不同ｐＨ溶剂中的溶解度也不同，该试验结果表明，ｐＨ为７～９的溶液能更好地提取出银杏叶中的黄酮。
图３ 浸提液ｐＨ对银杏叶中黄酮提取率的影响２．３．３ 提取温度对银杏叶中黄酮提取率的影响 准确称取５ｇ干燥银杏叶，加入１００ｍＬ ｐＨ ９的氢氧化钙溶液，用饱和氢氧化钙溶液和硼砂溶液调节ｐＨ，使之维持在ｐＨ ９，分别在６０、７０、８０、９０、１００℃下提取２ｈ。
图４表明，随着提取温度的升高，黄酮提取率增加，在７０～８０℃之间，增加较显著；当温度超过８０℃后提取率增加缓慢。
综合考虑温度太高可能会使黄酮发生氧化，且杂质溶出较多，不利于黄酮的纯化，因此提取温度选择８０℃。
图４ 提取温度对银杏叶中黄酮提取率的影响２．３．４ 提取时间对银杏叶中黄酮提取率的影响 准确称取５ｇ干燥银杏叶，加入１００ｍＬ ｐＨ ９的氢氧化钙溶液，用饱和氢氧化钙溶液和硼砂溶液调节溶液ｐＨ，使之维持在ｐＨ ９，在８０℃的条件下分别提取１、２、３、４、５ｈ。
从图５可知，提取时间在３ｈ之前黄酮含量随时间延长而增加，之后随时间延长反而降低，可能是由于高温度下黄酮类化合物与其它物质发生了反应使提取物中黄酮含量降低。
综合考虑３ｈ可达到较好的提取效果，提取时间以３ｈ为宜。
图５ 提取时间对银杏叶中黄酮提取率的影响２．４ 银杏叶中黄酮提取工艺参数的正交实验以料液比（１∶３０、１∶４０、１∶５０）、提取液ｐＨ（７、８、９）、提取温度（７０、８０、９０℃）和提取时间（２、３、４ｈ）对银杏叶中黄酮提取的影响进行正交实验。
银杏外种皮黄酮类化合物的提取纯化和分析
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3.2黄酮的提取（球磨法辅助溶剂提取法）
3.2.1电子显微镜扫描
图3.2原料干粉电镜扫描图
图3.3球磨后残渣电镜扫描图
从图3.2和图3.3可以看出，球磨前原料具有比较完整的细胞结构，球磨 后残渣中细胞破碎情况严重，并且出现粒径较小的细胞碎片。扫描电镜 结果表明球磨辅助溶剂提取法可以达到有效的破除细胞壁的目的。
超声波提取
微波提取 酶解提取法
1.07%~1.2%
0.65%~0.7% 1.78%~2.01%
目前只是处于小规模研究
理论研究不足 酶的活性易被破坏，试验成功 率不及其他方法高。
目前国内外已报道的黄酮类化合物纯化方法主要有溶剂萃取法[19,20]、大 孔树脂法[21,22]、超临界流体CO2萃取法[23]和金属络合法[24,25]。欧美国家多 采用有机溶剂法，产品纯度可达28.8% [20]。国内目前主要使用大孔树脂进 行纯化，纯度为24.54%~48.03%[21,22]。
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银杏叶片中总黄酮醇苷的含量测定
银杏叶片中总黄酮醇苷的含量测定银杏叶是一种重要的中药材，具有清热解毒、活血化瘀、增强免疫力等多种功效。
其中，银杏叶中的总黄酮醇苷是一种重要的活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，测定银杏叶中总黄酮醇苷的含量对于评价银杏叶的质量和药效具有重要意义。
一、实验原理总黄酮醇苷是一类多酚化合物，可以被还原成黄色产物。
在碱性条件下，总黄酮醇苷与钾醇溶液反应，生成黄色产物，其吸光度与总黄酮醇苷的含量成正比。
因此，可以通过比色法测定银杏叶中总黄酮醇苷的含量。
二、实验步骤1. 样品制备取适量银杏叶样品，粉碎成细粉，并过筛备用。
2. 提取取适量银杏叶粉末，加入80%的乙醇，浸泡24小时。
然后，将混合物过滤，并将滤液收集。
重复以上步骤2次，将收集到的滤液混合。
3. 蒸发将混合滤液在水浴中蒸发至干燥，得到银杏叶提取物。
4. 溶解将银杏叶提取物用甲醇溶解，并经过滤。
5. 反应取适量银杏叶提取物溶液，加入2%的钾醇溶液和3%的氢氧化钠溶液，混合均匀。
然后，将混合液在60℃水浴中反应30分钟。
6. 比色将反应液冷却至室温，用甲醇稀释至适当浓度。
然后，用紫外分光光度计测定其吸光度，得到总黄酮醇苷的含量。
三、实验结果通过上述实验步骤，测定了不同银杏叶样品中总黄酮醇苷的含量。
结果显示，样品A中总黄酮醇苷的含量为20.3mg/g，样品B中总黄酮醇苷的含量为18.7mg/g，样品C中总黄酮醇苷的含量为19.8mg/g。
四、实验分析通过上述实验结果可以看出，不同的银杏叶样品中总黄酮醇苷的含量有所差异。
这可能是由于银杏叶的生长环境、生长年限、收获季节等因素的影响。
因此，在评价银杏叶的质量和药效时，需要对其总黄酮醇苷含量进行测定。
本实验采用的是比色法测定总黄酮醇苷的含量。
这种方法简单、快速、准确，可以用于大规模的样品检测。
但是，在实际应用中需要注意的是，不同的总黄酮醇苷化合物具有不同的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等生物活性，因此需要对不同种类的总黄酮醇苷进行分析和测定。
银杏叶提取黄酮类物质工艺
银杏叶提取黄酮类物质工艺
银杏叶中的黄酮类物质是主要有效成分之一，银杏黄酮有强烈的清除细胞内自由基的作用，能降低细胞的氧化代谢，对脑和四肢动脉血流失调引起的一系列心脑血管疾病有明显和独特的疗效。
银杏叶中的黄酮类物质含量占干叶的0.8%～3.5%,随品种、地理分布和季节变化而异。
传统的提取工艺比较成熟，工艺路线如下：
原料预处理—浸提—过滤—抽滤—浓缩—沉降离心—色谱分离—浓缩—干燥—银杏叶提取物成品
改进后的提取工艺过程如下：
原料—预处理—浸提—过滤—膜过滤—色谱分离—膜浓缩—减压浓缩—干燥—银杏叶提取物成品
改进后的提取工艺过程描述：
原料：以采摘的银杏叶为原料。
预处理：将原料放入烘箱于60~65℃温度下烘干，然后用高速组织捣拌机粉碎。
浸提、过滤：以1:5(W/V)加入纯净水，煮沸4小时，经纱布过滤，滤渣再同法提取二次，三次浸提液直接经陶瓷膜过滤后合并。
膜过滤：在高温下用直接陶瓷膜系统逐遍过滤处理，并用纯净水采用水赶料法洗滤浓缩液，收集澄清透明滤液，弃去浓缩液。
色谱分离：按树脂体积的4倍量取离心液过聚酰胺柱，然后用蒸馏水过柱洗涤，至流出液清亮为止，再加入与树脂等体积的25%乙醇洗涤，流干后用80%乙醇洗脱，收集颜色较深部分，因洗脱液浓度较低，可进一步用卷式膜系统浓缩。
膜浓缩、减压浓缩、干燥：洗脱液先经膜浓缩，浓缩3-4倍后再进行减压浓缩，真空低温干燥，即得到淡黄色的银杏叶提取物成品。
采用膜分离技术和膜浓缩技术与传统分离浓缩技术相结合，可大大降低生产成本，提高收率和品质。
银杏黄酮提取工艺及纯化研究
银杏黄酮提取工艺及纯化研究一、引言银杏黄酮作为一种天然的活性成分，具有广泛的生物活性和药用价值。
由于其在保健品和医药领域的广泛应用，银杏黄酮的提取工艺及纯化研究备受关注。
本文将对银杏黄酮的提取工艺以及纯化过程进行探讨。
二、银杏黄酮的提取工艺2.1 原料准备在进行银杏黄酮的提取前，首先需要准备好优质的银杏叶。
选取新鲜的银杏叶，通过去杂、洗净等处理方法，获得干燥均匀的原材料。
2.2 提取方法2.2.1 传统提取方法传统的银杏黄酮提取方法通常采用溶剂提取的方式。
具体步骤如下： 1. 将粉碎后的银杏叶与适量的有机溶剂（如乙醇）进行浸提。
2. 在适当的温度下，反复搅拌并浸提一定时间。
3. 过滤提取液，获得含有银杏黄酮的溶液。
4. 通过浓缩、脱色等步骤，得到纯化的银杏黄酮。
2.2.2 新型提取方法近年来，一些新型的银杏黄酮提取方法也得到了广泛应用。
如超声波辅助提取、微波辅助提取等。
这些新型提取方法具有高效、省时等特点，在提取工艺中发挥着重要的作用。
三、银杏黄酮的纯化研究3.1 纯化方法3.1.1 水相反萃取法水相反萃取法是一种常用的纯化方法，其步骤如下： 1. 将含有银杏黄酮的提取液与适量的水进行充分混合。
2. 静置一段时间，使得银杏黄酮被水相萃取。
3. 分离水相和有机相，得到含有高纯度银杏黄酮的水相。
3.1.2 分子筛吸附法分子筛吸附法是一种利用分子筛材料对银杏黄酮进行吸附的方法。
具体步骤如下：1. 将含有银杏黄酮的溶液与分子筛进行接触。
2. 利用分子筛对银杏黄酮进行吸附。
3. 通过适当的溶剂洗脱等步骤，得到高纯度的银杏黄酮。
3.2 精制技术3.2.1 重结晶技术重结晶技术是一种常用的精制技术，通过溶解和结晶的过程，使得杂质与银杏黄酮分离。
其步骤如下： 1. 将纯化后的银杏黄酮溶解于适量的溶剂中。
2. 加热溶液，使银杏黄酮充分溶解。
3. 慢慢降低温度，促使银杏黄酮结晶。
4. 过滤结晶物，获得重结晶的银杏黄酮。
银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究
２００６年第１３卷第６期化工生产与技术ＣｈｅｍｉｃａｌＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ!!!!!!"!"!!!!!!"!"研究与开发收稿日期：２００６－１０－１０以银杏叶提取物（ＧＢＥ）为原料制成的药物具有清除自由基，防止脑缺血和脑水肿，改善脑功能等多种作用。
银杏叶制剂还可用于保健食品和化妆品等［１，２］。
银杏叶中黄酮类化合物的提取直接决定着银杏叶的药用价值，因而成为国内外的研究热点。
提取方法最早用水浸提法，此方法具有设备简单、成本低且对环境和人类无毒害的特点，但提取率偏低、杂质含量较高，后处理难度大。
有机溶剂法尤其酮、醇提取法是相当经典的方法，比如用丙酮作为提取剂的方法有：（１）丙酮提取－四氯化碳萃取法；（２）丙酮提取－氢氧化铅沉淀法；（３）丙酮提取－氨水沉淀法；（４）丙酮提取－硅藻土过滤法。
（１）法工艺产品黄酮含量太低，达不到标准，（２）～（４）法工艺虽然能较好地从银杏叶中提取出有效成分含量较高的提取物，但它们存在着很多缺点。
例如，使用了丁酮、四氯化碳等有毒害溶剂等，产品中无法避免这些物质的残留；操作复杂和步骤多，导致ＧＢＥ收率低且最终精制品的质量不够稳定。
随着超临界流体提取技术的迅速发展，应用该技术提取植物中活性成分已越来越广泛，与有机溶剂提取法相比，超临界流体萃取方法具有产品收率高、质量好、有效成分破坏少、无溶剂残留、操作方便等优点。
但是超临界流体萃取法设备规模较大、技术要求高、投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。
乙醇和丙酮对活性成分提取率相近，但考虑到溶剂的成本和操作的安全性，使用乙醇水溶液比丙酮水溶液更合适。
因此采用乙醇－水为提取剂，对影响浸取的主要因素进行了研究。
１实验部分１．１主要材料、试剂及仪器银杏叶：产于连云港花果山，自采；氢氧化钠、无水乙醇、硝酸铝、芦丁、亚硝酸钠、二氯甲烷和甲醇，均为分析纯。
７２３可见分光光度计，ＤＦ－１型集热式磁力搅拌器，ＲＥ－５２８５Ａ型旋转蒸发器，恒温水浴锅，电热鼓风干燥箱，ＳＨＺ－ＣＤ型循环水式真空泵，等。
银杏叶提取黄酮及分离纯化
银杏叶提取黄酮及分离纯化组员：李佳辉、黄埔、赵超武一、实验目的1.掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取2.掌握紫外分光光度计的应用，以及相关溶液的配置3.学会自主设计实验，培养团队合作精神二、实验原理⑴关于黄酮：银杏中最具药用价值的成分，有提高人体免疫力的作用；并且抗衰老、调节内分泌，还具有抗炎、抗真菌的作用；⑵实验需设置空白参比液，由文献资料可知芦丁标准液的最大波长大概为510nm;⑶本实验采用硝酸铝（氯化铝）法测定银杏叶总黄酮的质量浓度，因为黄酮类化合物可以与铝盐发生络合显色反应。
其主要原理为：在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐发生螯合反应，加入氢氧化钠溶液后，溶液显橙红色，在510nm（左右）处有吸收峰，且符合定量分析的朗伯—比尔定律（即A=kbc）一般与芦丁标准溶液比较定量。
先用亚硝酸钠还原黄酮类化合物，再加铝盐络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查尔酮而显色。
显色原理发生在黄酮醇类邻位无取代的邻二酚羟基部位，不具有邻位无取代的邻二酚羟基的黄酮类成分加入上述试剂时是不显色的。
（如二氢黄酮类化合物就不发生该显色反应）目前银杏叶黄酮的提取方法主要有：溶剂提取法、超临界流体萃取法（SFE法）、高速逆流色谱技术提取法（HSCCC)微波提取法、超色波提取法、酶提取法、分子烙印技术。
因溶剂提取法操作简单，所需试剂廉价易得，故通常使用此法来进行大规模生产。
其工艺流程如下：银杏叶—→粉碎—→NaOH-60%乙醇回流提取—→离心—→过滤—→滤液收集—→二次醇提—→合并两次滤液—→树脂吸附—→脱吸—→浓缩—→干燥—→提取物由于银杏叶黄酮中的类黄酮主要为芦丁，故用芦丁为对照物绘制标准曲线，并采用分光光度法进行测定。
三．实验材料及器材1.材料酸银杏叶、芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、95％乙醇、磷酸氢二钠、磷二氢钠、D101大孔吸附树脂、盐酸2.相关溶液的配制和树脂预处理0.20mg／mL芦丁标准溶液（500mL）、5％NaNO2（500mL）、10％AI(NO3)3（500mL）、1mol／LNaOH 、0.4mol／LNaOH（500mL）、0.4mol ／L HCl(500mL)、30%乙醇（500mL）30%乙醇（1）D101树脂预处理(500g)：商品树脂均残留惰性溶剂，故使用前根据应用需要，必须进行不同深度的预处理，在提取器内，加入高于树脂层10-20厘米的乙醇浸泡3—4小时，然后放净洗涤液，为一次提取过程。
银杏黄酮的提取、抗氧化活性及构效关系研究
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银杏叶黄酮抗氧化作用的研究
银杏叶黄酮抗氧化作用的研究
陈季武;胡天喜
【期刊名称】《华东师范大学学报：自然科学版》
【年(卷),期】1998(000)003
【摘要】利用化学发光法和分光光度法研究了银杏叶黄酮Ｗ和Ｈ抗氧化作用。
结
果表明，水溶性的黄酮Ｗ和醇溶性的黄酮Ｈ不仅能有效地消除Ｏ２＾－、Ｈ２Ｏ２，而且能抑制脂质过氧化，并提示两者都有可能清除ＬＯ，ＬＯＯ和＾１Ｏ２。
然而，两者清除这些活性氧能力差异显著，且都无清除ＯＨ能力。
【总页数】5页(P86-90)
【作者】陈季武;胡天喜
【作者单位】华东师范大学生物系;华东师范大学生物系
【正文语种】中文
【中图分类】R285
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银杏叶的提取物实验报告
一、实验目的本实验旨在通过提取和分离银杏叶中的有效成分，探讨银杏叶提取物的制备方法，并对其化学成分进行定性定量分析，为银杏叶的进一步开发和应用提供实验依据。
二、实验原理银杏叶中主要有效成分包括黄酮类化合物和萜类化合物，具有扩张血管、调节血脂、拮抗血小板活化因子、保护缺血损伤、抗炎及抗肿瘤等多种药理作用。
本实验采用溶剂提取法提取银杏叶中的黄酮类化合物，并利用高效液相色谱法对其含量进行测定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 银杏叶：干燥、粉碎- 乙醇：分析纯- 水浴锅- 高效液相色谱仪- 色谱柱- 标准品：槲皮素、银杏内酯等- 试剂：甲醇、乙腈等2. 实验仪器：- 电子天平- 粉碎机- 滤纸- 离心机- 恒温水浴锅四、实验方法1. 银杏叶提取液的制备：- 称取一定量干燥、粉碎的银杏叶，加入适量乙醇，浸泡一段时间后，水浴加热回流提取。
- 提取液过滤，滤液浓缩至适量，得银杏叶提取物。
2. 高效液相色谱法测定银杏叶提取物中的槲皮素含量：- 标准品溶液的制备：准确称取一定量的槲皮素标准品，用甲醇溶解并定容，得标准品溶液。
- 样品溶液的制备：准确称取一定量的银杏叶提取物，用甲醇溶解并定容，得样品溶液。
- 色谱条件：流动相：甲醇-水（体积比80:20）；流速：1.0ml/min；检测波长：254nm。
- 样品溶液和标准品溶液分别进样，记录色谱图，根据标准品溶液的峰面积计算样品溶液中槲皮素含量。
五、实验结果与分析1. 银杏叶提取液的制备：- 经过提取、过滤、浓缩等步骤，成功制备了银杏叶提取物。
2. 高效液相色谱法测定银杏叶提取物中的槲皮素含量：- 样品溶液色谱图显示，在254nm波长下，银杏叶提取物中存在一个与槲皮素标准品峰相似的峰，说明提取物中含有槲皮素。
- 根据标准品溶液的峰面积计算，银杏叶提取物中槲皮素含量为2.5%。
六、结论本实验采用溶剂提取法提取银杏叶中的黄酮类化合物，并利用高效液相色谱法对其含量进行测定，成功制备了银杏叶提取物，并确定了其中槲皮素含量。
银杏黄酮微波萃取及其对油脂的抗氧化论文开题报告
银杏叶黄酮的微波醇提及其对油脂的抗氧化研究报告人：朱宗帅学号：131516133申请学位：学士学科专业：食品科学与工程所在学院：食品学院指导教师：何亚荟(博士）桑大席（副教授）报告时间：信阳农林学院食品学院论文选题理由或意义（400字）：一、银杏叶的介绍银杏叶，是银杏科植物银杏的叶，又名白果叶。
据《食疗本草》记载，银杏叶可用于心悸怔忡、肺虚咳喘等病症。
本世纪60年代，西德即开始了银杏叶的研究。
他们发现，银杏叶中以黄酮为主的有效成份，具有保护毛细血管通透性、扩张冠状动脉、恢复动脉血管弹性、营养脑细胞及其它器官的作用，而且还有使动脉、末梢血管、毛细血管中的血质与胆固醇维持正常水平的奇特功效。
随着现代药理研究的不断深入，发现银杏中不但含有黄酮类物质，而且还有萜内酯类、酚类等化合物，它们卓越的药理作用已被人们逐渐认识。
二、银杏叶的功效1、降低人体血液中胆固醇水平，防止动脉硬化。
2、通过增加血管通透性和弹性而降低血压，有较好的降压功效。
3、消除血管壁上的沉积成份，改善血液流变性，增进红细胞的变形能力，降低血液粘稠度，使血流通畅，可预防和治疗脑出血和脑梗塞。
对动脉硬化引起的老年性痴呆症亦有一定疗效。
4、银杏叶制剂与降糖西药合用治疗糖尿病有较好疗效，可用于糖尿病的辅助药。
5、能明显减轻经期腹痛及腰酸背痛等症状。
6、用于支气管哮喘的治疗，也有较好疗效。
7、降低脂质过氧化水平，减少雀斑，润泽肌肤，美丽容颜。
8、预防冠心病心绞痛9、预防高脂血症10、预防脑血管疾病11、抗癌作用三、黄酮类简介黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类多苯环化合物。
根据其基本结构可以分为 10 多个类别 , 如黄酮、黄酮醇、二氢黄酮 ( 醇 ) 、异黄酮、双黄酮、查尔酮、黄烷酮等。
其中黄酮和黄酮醇是植物界分布最广的黄酮类化合物 , 广泛存在于蔬菜、水果以及中草药中。
大量研究证明 , 黄酮类化合物具有多种生理活性与药理作用。
如金丝桃苷 (hyperfine) 可促使血管扩张 , 冠状动脉血流量增加 ,对人体可以起到降血压、降血脂、增大心脏血流量、增强心脏收缩、减少心脏搏动数等作用 ; 槲皮素 (quercetin) 、芸香苷 (rutoside) 有抗自由基和镇痛作用 ; 水飞蓟宾 (silygin)有肝保护作用 ; 黄芩苷元、槲皮素有抗肿瘤的作用 , 芦丁(rutin) 又称芸香苷 , 临床可以用来防治脑溢血、高血压等心脑血管疾病。